CZ2019216A3 - 3ą5ß-Neuroaktivní steroidy pro léčbu epilepsie a záchvatových onemocnění - Google Patents
3ą5ß-Neuroaktivní steroidy pro léčbu epilepsie a záchvatových onemocnění Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2019216A3 CZ2019216A3 CZ2019-216A CZ2019216A CZ2019216A3 CZ 2019216 A3 CZ2019216 A3 CZ 2019216A3 CZ 2019216 A CZ2019216 A CZ 2019216A CZ 2019216 A3 CZ2019216 A3 CZ 2019216A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- cyclopenta
- phenanthren
- dimethylhexadecahydro
- carboxylate
- seizures
- Prior art date
Links
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 title claims abstract description 36
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 title description 25
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 claims abstract description 140
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 78
- -1 (3R, 5R, 8R, 9S, 10S, 13S, 14S, 17S) -17-Acetyl-10,13-dimethylhexadecahydro-1H-cyclopenta [a] phenanthren-3-yl (S) -5-oxopyrrolidine-2-carboxylate Chemical compound 0.000 claims description 79
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 42
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 30
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 claims description 20
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 17
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 13
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 claims description 12
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 9
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 claims description 9
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 claims description 9
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 claims description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 8
- 208000028173 post-traumatic stress disease Diseases 0.000 claims description 8
- 208000019022 Mood disease Diseases 0.000 claims description 7
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 claims description 7
- 206010001497 Agitation Diseases 0.000 claims description 6
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 claims description 6
- 208000030886 Traumatic Brain injury Diseases 0.000 claims description 6
- PSNUSMAGMFGRGA-HXNVYPELSA-N [(3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-acetyl-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] 2-acetamidoacetate Chemical compound C(C)(=O)NCC(=O)O[C@@H]1CC[C@@]2([C@H]3CC[C@@]4([C@H](CC[C@H]4[C@@H]3CC[C@@H]2C1)C(C)=O)C)C PSNUSMAGMFGRGA-HXNVYPELSA-N 0.000 claims description 6
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 6
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 claims description 6
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 claims description 6
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 claims description 6
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 claims description 6
- 230000009529 traumatic brain injury Effects 0.000 claims description 6
- 208000028017 Psychotic disease Diseases 0.000 claims description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 5
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 5
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 claims description 4
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 claims description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 4
- QYJOOVQLTTVTJY-RXMQYKEDSA-N ethyl (2r)-5-oxopyrrolidine-2-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 QYJOOVQLTTVTJY-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 4
- 125000006002 1,1-difluoroethyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000001118 alkylidene group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000004966 cyanoalkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 3
- QZLYKIGBANMMBK-DYKIIFRCSA-N 5β-androstane Chemical compound C([C@H]1CC2)CCC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CCC[C@@]2(C)CC1 QZLYKIGBANMMBK-DYKIIFRCSA-N 0.000 claims description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims description 2
- MNUVAPMABSFWAR-LURJTMIESA-N ethyl (2s)-6-oxopiperidine-2-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)[C@@H]1CCCC(=O)N1 MNUVAPMABSFWAR-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 2
- 208000037906 ischaemic injury Diseases 0.000 claims description 2
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 claims description 2
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 claims 1
- TUHMQDODLHWPCC-UHFFFAOYSA-N formyl cyanide Chemical compound O=CC#N TUHMQDODLHWPCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000001773 anti-convulsant effect Effects 0.000 abstract description 32
- CWRVKFFCRWGWCS-UHFFFAOYSA-N Pentrazole Chemical compound C1CCCCC2=NN=NN21 CWRVKFFCRWGWCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 22
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 abstract description 16
- 229960005152 pentetrazol Drugs 0.000 abstract description 6
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 abstract description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 5
- 230000002920 convulsive effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011552 rat model Methods 0.000 abstract 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 abstract 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 abstract 1
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 87
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 58
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 47
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 34
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 31
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 description 23
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 208000034308 Grand mal convulsion Diseases 0.000 description 16
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 16
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 16
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 16
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 16
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- HOKKHZGPKSLGJE-GSVOUGTGSA-N N-Methyl-D-aspartic acid Chemical compound CN[C@@H](C(O)=O)CC(O)=O HOKKHZGPKSLGJE-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 14
- HOKKHZGPKSLGJE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-D-aspartic acid Natural products CNC(C(O)=O)CC(O)=O HOKKHZGPKSLGJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 230000001037 epileptic effect Effects 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 description 12
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 11
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 11
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 10
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 10
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 10
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 10
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 9
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 8
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000937413 Axia Species 0.000 description 6
- 206010053398 Clonic convulsion Diseases 0.000 description 6
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 6
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010003830 Automatism Diseases 0.000 description 5
- 206010028347 Muscle twitching Diseases 0.000 description 5
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 5
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 description 5
- 231100000318 excitotoxic Toxicity 0.000 description 5
- 230000003492 excitotoxic effect Effects 0.000 description 5
- 208000028326 generalized seizure Diseases 0.000 description 5
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 5
- 230000002151 myoclonic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 4
- 208000002877 Epileptic Syndromes Diseases 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004868 N-Methyl-D-Aspartate Receptors Human genes 0.000 description 4
- 108090001041 N-Methyl-D-Aspartate Receptors Proteins 0.000 description 4
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000001961 anticonvulsive agent Substances 0.000 description 4
- 229960003965 antiepileptics Drugs 0.000 description 4
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 230000001787 epileptiform Effects 0.000 description 4
- 230000006742 locomotor activity Effects 0.000 description 4
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 4
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 4
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical class OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- FZXCPFJMYOQZCA-UHFFFAOYSA-N 6-ketopiperidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCC(=O)N1 FZXCPFJMYOQZCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PGTVWKLGGCQMBR-FLBATMFCSA-N Ganaxolone Chemical compound C([C@@H]1CC2)[C@](C)(O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H](C(=O)C)[C@@]2(C)CC1 PGTVWKLGGCQMBR-FLBATMFCSA-N 0.000 description 3
- AURFZBICLPNKBZ-UHFFFAOYSA-N Pregnanolone Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(=O)C)C1(C)CC2 AURFZBICLPNKBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 3
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 3
- 150000001338 aliphatic hydrocarbons Chemical group 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000004641 brain development Effects 0.000 description 3
- AURFZBICLPNKBZ-SYBPFIFISA-N brexanolone Chemical compound C([C@@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H](C(=O)C)[C@@]2(C)CC1 AURFZBICLPNKBZ-SYBPFIFISA-N 0.000 description 3
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 3
- FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N 0.000 description 3
- 229950006567 ganaxolone Drugs 0.000 description 3
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 3
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 230000003414 procognitive effect Effects 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- 230000009182 swimming Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- AOSZTAHDEDLTLQ-AZKQZHLXSA-N (1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-6-[(3-chlorophenyl)methyl]-12,19-difluoro-11-hydroxy-8-(2-hydroxyacetyl)-9,13-dimethyl-6-azapentacyclo[10.8.0.02,9.04,8.013,18]icosa-14,17-dien-16-one Chemical compound C([C@@H]1C[C@H]2[C@H]3[C@]([C@]4(C=CC(=O)C=C4[C@@H](F)C3)C)(F)[C@@H](O)C[C@@]2([C@@]1(C1)C(=O)CO)C)N1CC1=CC=CC(Cl)=C1 AOSZTAHDEDLTLQ-AZKQZHLXSA-N 0.000 description 2
- SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N (1s,2s,3s,5r)-1-(carboxymethyl)-3,5-bis[(4-phenoxyphenyl)methyl-propylcarbamoyl]cyclopentane-1,2-dicarboxylic acid Chemical compound O=C([C@@H]1[C@@H]([C@](CC(O)=O)([C@H](C(=O)N(CCC)CC=2C=CC(OC=3C=CC=CC=3)=CC=2)C1)C(O)=O)C(O)=O)N(CCC)CC(C=C1)=CC=C1OC1=CC=CC=C1 SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N 0.000 description 2
- GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N (2S,3R)-N-[(2S)-3-(cyclopenten-1-yl)-1-[(2R)-2-methyloxiran-2-yl]-1-oxopropan-2-yl]-3-hydroxy-3-(4-methoxyphenyl)-2-[[(2S)-2-[(2-morpholin-4-ylacetyl)amino]propanoyl]amino]propanamide Chemical compound C1(=CCCC1)C[C@@H](C(=O)[C@@]1(OC1)C)NC([C@H]([C@@H](C1=CC=C(C=C1)OC)O)NC([C@H](C)NC(CN1CCOCC1)=O)=O)=O GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N 0.000 description 2
- QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[5-[(3aS,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-[1-bis(4-chlorophenoxy)phosphorylbutylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CCCC(NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCC1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)C(C)C)P(=O)(Oc1ccc(Cl)cc1)Oc1ccc(Cl)cc1 QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N 0.000 description 2
- DVTDUTYENPZLFP-ULWYFIRJSA-N (3r,5r,8r,9s,10s,13s,14s,17s)-3-hydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthrene-17-carbonitrile Chemical compound C1[C@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)C#N)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@@H]21 DVTDUTYENPZLFP-ULWYFIRJSA-N 0.000 description 2
- ONBQEOIKXPHGMB-VBSBHUPXSA-N 1-[2-[(2s,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-4,6-dihydroxyphenyl]-3-(4-hydroxyphenyl)propan-1-one Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=CC(O)=C1C(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 ONBQEOIKXPHGMB-VBSBHUPXSA-N 0.000 description 2
- PQMQIYHBJLVVTD-UHFFFAOYSA-N 2-oxopiperidin-1-ium-1-carboxylate Chemical compound OC(=O)N1CCCCC1=O PQMQIYHBJLVVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 2
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 2
- 229940126657 Compound 17 Drugs 0.000 description 2
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 2
- 208000032274 Encephalopathy Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N EtOH Substances CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001116 FEMA 4028 Substances 0.000 description 2
- RRSNDVCODIMOFX-MPKOGUQCSA-N Fc1c(Cl)cccc1[C@H]1[C@@H](NC2(CCCCC2)[C@@]11C(=O)Nc2cc(Cl)ccc12)C(=O)Nc1ccc(cc1)C(=O)NCCCCCc1cccc2C(=O)N(Cc12)C1CCC(=O)NC1=O Chemical compound Fc1c(Cl)cccc1[C@H]1[C@@H](NC2(CCCCC2)[C@@]11C(=O)Nc2cc(Cl)ccc12)C(=O)Nc1ccc(cc1)C(=O)NCCCCCc1cccc2C(=O)N(Cc12)C1CCC(=O)NC1=O RRSNDVCODIMOFX-MPKOGUQCSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKJIRPAQVSHGFK-UHFFFAOYSA-N N-acetylglycine Chemical compound CC(=O)NCC(O)=O OKJIRPAQVSHGFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003556 anti-epileptic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000949 anxiolytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 238000009227 behaviour therapy Methods 0.000 description 2
- 229960004853 betadex Drugs 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 208000028502 clonic seizure Diseases 0.000 description 2
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 2
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 2
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 description 2
- 229940125797 compound 12 Drugs 0.000 description 2
- 229940126543 compound 14 Drugs 0.000 description 2
- 229940126142 compound 16 Drugs 0.000 description 2
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 2
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 2
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- LBOJYSIDWZQNJS-CVEARBPZSA-N dizocilpine Chemical compound C12=CC=CC=C2[C@]2(C)C3=CC=CC=C3C[C@H]1N2 LBOJYSIDWZQNJS-CVEARBPZSA-N 0.000 description 2
- 229950004794 dizocilpine Drugs 0.000 description 2
- 210000005110 dorsal hippocampus Anatomy 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 description 2
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 2
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004694 hippocampus damage Effects 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 2
- 206010027175 memory impairment Diseases 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001050 pharmacotherapy Methods 0.000 description 2
- XUWHAWMETYGRKB-UHFFFAOYSA-N piperidin-2-one Chemical compound O=C1CCCCN1 XUWHAWMETYGRKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ORNBQBCIOKFOEO-QGVNFLHTSA-N pregnenolone Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 ORNBQBCIOKFOEO-QGVNFLHTSA-N 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- QCHFTSOMWOSFHM-WPRPVWTQSA-N (+)-Pilocarpine Chemical compound C1OC(=O)[C@@H](CC)[C@H]1CC1=CN=CN1C QCHFTSOMWOSFHM-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RHQQHZQUAMFINJ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,11beta)-3,11,21-Trihydroxypregnan-20-one Natural products C1C(O)CCC2(C)C3C(O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC21 RHQQHZQUAMFINJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DJTOLSNIKJIDFF-DLEIETQISA-N (3r,5r,8s,9s,10s,13s,14s)-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CCC[C@@]2(C)CC1 DJTOLSNIKJIDFF-DLEIETQISA-N 0.000 description 1
- 150000000315 19-norandrostanes Chemical class 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEFXPRVOYXHSLN-UHFFFAOYSA-N 3-(ethyliminomethylideneamino)-n,n-dimethylpropan-1-amine;methylsulfinylmethane;hydrochloride Chemical compound Cl.CS(C)=O.CCN=C=NCCCN(C)C VEFXPRVOYXHSLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DUHUCHOQIDJXAT-OLVMNOGESA-N 3-hydroxy-(3-α,5-α)-Pregnane-11,20-dione Chemical compound C([C@@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H](C(=O)C)[C@@]2(C)CC1=O DUHUCHOQIDJXAT-OLVMNOGESA-N 0.000 description 1
- QGXBDMJGAMFCBF-BNSUEQOYSA-N 3alpha-hydroxy-5beta-androstan-17-one Chemical compound C1[C@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@@H]21 QGXBDMJGAMFCBF-BNSUEQOYSA-N 0.000 description 1
- USPYDUPOCUYHQL-VEVMSBRDSA-N 5beta-dihydrodeoxycorticosterone Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@@H]21 USPYDUPOCUYHQL-VEVMSBRDSA-N 0.000 description 1
- OJRUSAPKCPIVBY-KQYNXXCUSA-N C1=NC2=C(N=C(N=C2N1[C@H]3[C@@H]([C@@H]([C@H](O3)COP(=O)(CP(=O)(O)O)O)O)O)I)N Chemical compound C1=NC2=C(N=C(N=C2N1[C@H]3[C@@H]([C@@H]([C@H](O3)COP(=O)(CP(=O)(O)O)O)O)O)I)N OJRUSAPKCPIVBY-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008674 Cholinergic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000032065 Convulsion neonatal Diseases 0.000 description 1
- 208000020401 Depressive disease Diseases 0.000 description 1
- 102000027484 GABAA receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008681 GABAA receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000573901 Homo sapiens Major prion protein Proteins 0.000 description 1
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229910010082 LiAlH Inorganic materials 0.000 description 1
- 102100025818 Major prion protein Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229910019093 NaOCl Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000001738 Nervous System Trauma Diseases 0.000 description 1
- 208000029726 Neurodevelopmental disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004108 Neurotransmitter Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000590 Neurotransmitter Receptors Proteins 0.000 description 1
- 235000010676 Ocimum basilicum Nutrition 0.000 description 1
- 240000007926 Ocimum gratissimum Species 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- ORNBQBCIOKFOEO-YQUGOWONSA-N Pregnenolone Natural products O=C(C)[C@@H]1[C@@]2(C)[C@H]([C@H]3[C@@H]([C@]4(C)C(=CC3)C[C@@H](O)CC4)CC2)CC1 ORNBQBCIOKFOEO-YQUGOWONSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010037180 Psychiatric symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035977 Rare disease Diseases 0.000 description 1
- QCHFTSOMWOSFHM-UHFFFAOYSA-N SJ000285536 Natural products C1OC(=O)C(CC)C1CC1=CN=CN1C QCHFTSOMWOSFHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010039897 Sedation Diseases 0.000 description 1
- 208000013200 Stress disease Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- RHQQHZQUAMFINJ-DTDWNVJFSA-N Tetrahydrocorticosterone Chemical compound C1[C@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@H](CC4)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@@H]21 RHQQHZQUAMFINJ-DTDWNVJFSA-N 0.000 description 1
- KJADKKWYZYXHBB-XBWDGYHZSA-N Topiramic acid Chemical compound C1O[C@@]2(COS(N)(=O)=O)OC(C)(C)O[C@H]2[C@@H]2OC(C)(C)O[C@@H]21 KJADKKWYZYXHBB-XBWDGYHZSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002015 acyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- 230000036626 alertness Effects 0.000 description 1
- XWYBFXIUISNTQG-VKMGZQQJSA-N alfadolone Chemical compound C1[C@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@H](CC4)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 XWYBFXIUISNTQG-VKMGZQQJSA-N 0.000 description 1
- 229950008709 alfadolone Drugs 0.000 description 1
- 229960003305 alfaxalone Drugs 0.000 description 1
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003281 allosteric effect Effects 0.000 description 1
- VLSMHEGGTFMBBZ-UHFFFAOYSA-N alpha-Kainic acid Natural products CC(=C)C1CNC(C(O)=O)C1CC(O)=O VLSMHEGGTFMBBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000001440 androstane derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001441 androstanes Chemical class 0.000 description 1
- 229940035674 anesthetics Drugs 0.000 description 1
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 description 1
- 229940005513 antidepressants Drugs 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000013528 artificial neural network Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000013475 authorization Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 description 1
- 235000011175 beta-cyclodextrine Nutrition 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000007278 cognition impairment Effects 0.000 description 1
- 229940125758 compound 15 Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- WUTBKMSXHSKWBN-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;n,n-dimethylpyridin-4-amine Chemical compound ClCCl.CN(C)C1=CC=NC=C1 WUTBKMSXHSKWBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KOOGJYYOMPUGCW-UHFFFAOYSA-N diethyl-[2-oxo-2-(2,4,6-trimethylanilino)ethyl]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CC[NH+](CC)CC(=O)NC1=C(C)C=C(C)C=C1C KOOGJYYOMPUGCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N diphosphonate Chemical compound O=P(=O)OP(=O)=O YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 208000028329 epileptic seizure Diseases 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003193 general anesthetic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000001057 ionotropic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- VLSMHEGGTFMBBZ-OOZYFLPDSA-N kainic acid Chemical compound CC(=C)[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)[C@H]1CC(O)=O VLSMHEGGTFMBBZ-OOZYFLPDSA-N 0.000 description 1
- 229950006874 kainic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003137 locomotive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011670 long-evans rat Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 230000004630 mental health Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- NCGLTZSBTFVVAW-KNXRZYMVSA-N minaxolone Chemical compound C1[C@@H](N(C)C)[C@@H]2[C@@]3(C)C[C@H](OCC)[C@@H](O)C[C@@H]3CC[C@H]2[C@@H]2CC[C@H](C(C)=O)[C@]21C NCGLTZSBTFVVAW-KNXRZYMVSA-N 0.000 description 1
- 229960004798 minaxolone Drugs 0.000 description 1
- GINQYTLDMNFGQP-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;methylsulfinylmethane Chemical compound CS(C)=O.CN(C)C=O GINQYTLDMNFGQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 208000028412 nervous system injury Diseases 0.000 description 1
- 230000001123 neurodevelopmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000003557 neuropsychological effect Effects 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004963 pathophysiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N phosphorus pentoxide Inorganic materials O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229960001416 pilocarpine Drugs 0.000 description 1
- 229940126027 positive allosteric modulator Drugs 0.000 description 1
- 230000000270 postfertilization Effects 0.000 description 1
- 150000003126 pregnane derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000003128 pregnanes Chemical class 0.000 description 1
- 229960000249 pregnenolone Drugs 0.000 description 1
- 238000000039 preparative column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000861 pro-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- RJKFOVLPORLFTN-UHFFFAOYSA-N progesterone acetate Natural products C1CC2=CC(=O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(=O)C)C1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000008132 psychomotor development Effects 0.000 description 1
- 230000002385 psychotomimetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036280 sedation Effects 0.000 description 1
- 229940125723 sedative agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000932 sedative agent Substances 0.000 description 1
- 230000001624 sedative effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000006403 short-term memory Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000005062 synaptic transmission Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N tetramethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)C CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004394 topiramate Drugs 0.000 description 1
- 238000010153 Šidák test Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J43/00—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
- C07J43/003—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not condensed
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/22—Anxiolytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/24—Antidepressants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
- C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
- C07J41/0038—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 with an androstane skeleton, including 18- or 19-substituted derivatives, 18-nor derivatives and also derivatives where position 17-beta is substituted by a carbon atom not directly bonded to a further carbon atom and not being part of an amide group
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
- C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
- C07J41/0044—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 with an estrane or gonane skeleton, including 18-substituted derivatives and derivatives where position 17-beta is substituted by a carbon atom not directly bonded to another carbon atom and not being part of an amide group
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
- C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
- C07J41/005—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of only two carbon atoms, e.g. pregnane derivatives
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
3α5β-steroidní sloučeniny vzorce (I), které vykazují významný antikonvulzivní účinek. Při dávkách 1,5 a 10 mg/kg, bylo v modelu epilepsie u potkanů popsáno významné potlačení konvulzivní aktivity v mozku i záchvatů indukovaných elektrickou stimulací 6 Hz. V modelu pentylenetetrazolem indukovaných záchvatů u potkanů došlo v dávce 10 mg/kg k úplné blokaci záchvatů u mláďat a významnému snížení incidence a latence generalizovaných tonicko-klonických záchvatů u dospělých jedinců. V 6Hz-modelu epilepsie dávka 10 mg/kg téměř úplně blokovala výskyt záchvatů po stimulaci 60 mA. Nárokované řešení umožňuje vytvoření nového, bezpečného a vysoce účinného léčivého přípravku pro léčbu epilepsie.
Description
3a5p-Neuroaktivni steroidy pro léčbu epilepsie a záchvatových onemocnění
Oblast techniky
Předkládaný vynález je z oboru farmacie a farmakologie. Předmětem je soubor sloučenin s prokázaným antikonvulzivním účinkem v animálních modelech epileptických záchvatů, chránících tak tkáň centrálního nervového systému (CNS).
Dosavadní stav techniky
Neurosteroidy patří do rodiny látek syntetizovaných z cholesterolu de novo v mozku. Jejich základní charakteristikou je schopnost přímo ovlivňovat řadu transmembránových neurotransmiterových receptorů. Ze strukturního hlediska patří mezi důležité faktory vztahu mezi chemickou strukturou a biologickou aktivitou geometrie mezi kruhem A a B (stereochemie v poloze C-5), typ substituentu v poloze C-3 uspořádání postranního řetězce na C-17. Dalším důležitým strukturním faktorem je lipofilicita molekuly (J. Med. Chem. 2015, 58. 5950), kterou je možno synteticky modifikovat. Mezi nejvíce prozkoumané neurosteroidy patří allopregnanolon (20-oxo-5a-pregnan-3a-ol, ALLO), dehydroepiadrosteron (17-oxo-androst-5-en-3p-ol, DHEA), pregnenolon (20-oxo-pregn-5-en-3p-ol, PREG) a progesteron (pregn-4-ene-3,20-dione, PROG). Syntetické analogy endogenních neurosteroidů jsou tzv. neuroaktivní steroidy. Neuroaktivní steroidy představují molekuly s terapeuticky zajímavými vlastnostmi. Jsou to povětšinou allosterické modulátory receptorů γ-aminobutyrové kyseliny (GABAa) a N-methyl-D-asparagové kyseliny (NMDA), tedy receptory zodpovědné za excitačně-inhibiční rovnováhu CNS. Neurosteroidy i jejich syntetické analogy (neuroaktivní steroidy) mají řadu fúnkcí v centrální nervové soustavě i periferii od vývoje až po řízení komplexního chování. Současné studie ukazují, že jejich účinek může postrádat psychotomimetické i kognitivní vedlejší účinky (J. Neurosci. 2016, 36, 2161). Neuroaktivní steroidy mají nesporný terapeutický potenciál prokázaný při experimentech in vitro i in vivo. Neuroprotektivní účinek neurosteroidů či neuroaktivních steroidů je pravděpodobně zprostředkován na negenomové úrovni, ale zahrnuje i regulaci exprese proapoptotických a antiapoptotických faktorů, zapojení signalizačních kaskád v buňce, neurotransmisi, či oxidativní a zánětlivé procesy (Front. Endocrinol. 2011, 2, 50).
Bylo také prokázáno, že neuroaktivní steroidy mají antikonvulzivní vlastnosti v animálních modelech. Aplikace ALLO a PROG měla signifikantní účinek v animálních modelech epileptických záchvatů, vyvolaných aplikací pentylentetrazolu (Brain Res. 2000, 881, 98), pilokarpinu (Neuropharmacology 1996, 35, 1049), NMDA (J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997, 282, 543) a kyseliny kainové (Psychoneuro-endocrinology 2000, 25. 407). Jelikož ALLO působí potenciačně na GABAa receptory, jeho podání v animálních modelech epilepsie vede ke snížení četnosti záchvatů, mortality a buněčné smrti (Pol. J. Pharmacol. 1997, 49, 411). Ganaxolon, syntetický derivát ALLO, dokonce zabránil vzniku záchvatů u hlodavců (Epilepsia 2010, 51. 84.). Některé syntetické steroidy, jako je ganaxolon, alfaxalon, alfadolon, hydroxydion a minaxolon, vstoupily do klinických studií jako potenciální sedativa a anestetika. Zatím nejvíce úspěšným syntetickým steroidem je ganaxolon, C-3 methylovaný derivát ALLO, vyvinutý firmou Marinus Pharmaceutical. Jedná se o CNS selektivní pozitivní allosterický modulátor GABAa receptorů s prokázaným antiepileptickým účinkem v mnoha animálních modelech. V klinických studiích byl dobře tolerován dospělými i dětmi.
Epilepsie je charakterizována více než 25 syndromy a četnými typy záchvatů, které se mohou lišit jak v závažnosti, tak odpovědi na léčbu (Mental Health Clinician 2017, 7, 235). Vzhledem k různorodosti symptomatiky epilepsie, osoby s touto diagnózou mohou být zatíženy i psychiatrickými symptomy, například kognitivními a behaviorálními změnami chování, které často komplikují vlastní léčbu epilepsie (Expert Opin. Drug Saf. 2011, 10. 913). Mezi běžné psychické komorbidity spojené s epilepsií patří deprese, úzkost, poruchy pozornosti a psychózy v
CZ 2019 - 216 A3 prevalenci od 20% do 30% (Expert Opin. Drug Saf. 2011, 10. 913). Deprese představují jednu z nej častějších psychiatrických komorbidit u pacientů s epilepsií s prevalencí od 20% do 55%, avšak u některých populací může prevalence dosahovat až 80% (Expert Opin. Drug Saf. 2011, 10, 913). Podle řady autorů jsou úzkostné poruchy hned po depresivní poruše druhou nejčastější psychiatrickou komorbiditou u pacientů s epilepsií, jiní uvádějí dokonce častější výskyt poruch úzkostných. Jelikož bylo opakovaně prokázáno, že existuje signifikantní vztah mezi výskytem úzkostných poruch a kvalitou života pacientů s epilepsií, vhodná terapie úzkostí a úzkostných poruch v epileptologické praxi, by tedy měla být jednou z priorit péče o tyto jedince. Tento přístup byl již experimentálně ověřen i pro neurosteroidy. Existuje několik animálních a lidských studií, které naznačují, že PROG, DHEA i PREG se podílejí na mechanismu účinku antidepresiv (Neuroscience 2011, 191 ,55)
Neuroprotektivní účinek steroidních derivátů se substituentem schopným tvořit ion v poloze C-3 nárokují patenty US 8575376, EP 2435463 a US 15/506318. Tyto dokumenty nárokují pregnanové deriváty (polární acetylový substituent v poloze C-20), respektive androstanové deriváty (nepolární substituent v poloze C-17) substituované v poloze C-3 ionizovatelným substituentem. Neuroprotektivní účinek těchto nabitých derivátů je přímo spjat se specifickou kombinací strukturních rysů v poloze C-3 (3a-nabitý substituent) a €’-5β. a se schopností těchto látek inhibovat ionotropní glutamátové NMDA receptory. V dosud uveřejněných článcích a patentové literatuře bylo zároveň vždy uváděno, že inhibice NMDA receptorů, potažmo neuroprotektivní účinek, jsou podmíněny nabitým C-3 substituentem a nenabitá analoga postrádají biologický efekt na modulaci NMDA receptorů (J. Pharmacol. Exp. Ther. 2000, 293. 747; Mol. Pharmacol. 1997, 52, 1113). Deriváty nárokované ve zde předkládané přihlášce vynálezu mají cyklický či acyklický C-3 substituent, který náboj nenese.
Současná odborná a patentová literatura (US 9,527,881; J. Med. Chem. 2009, 52. 6012) uvádí neuroprotektivní účinek C-3 substituovaných steroidních analogů PROG nesoucí prolinový či acyklický substituent sNH2 skupinou. Tyto látky jsou zdánlivě strukturně podobné látkám nárokovaným ve zde přikládané přihlášce. Konkrétně např. 3p-L-proline-progesterone-HCI (PI33) výše uvedeného patentu. Tyto látky jsou popsány jakožto steroidní analogy pro léčbu a prevenci neurodegenerace u pacientů po poranění centrální nervové soustavy. Látka PI-33 byla resyntetizována a testována i v modelu pentylentetrazolu-indukovaných křečí. Po podání 25denním zvířatům v dávce 1 a 10 mg/kg však nezměnila výskyt generalizovaných tonickoklonických záchvatů. Naopak, všechna zvířata ve skupině pro 1 i 10 mg/kg tento typ záchvatu vykázala. Z výše uvedeného vyplývá, že antikonvulzivní účinek látek nesoucí cyklický či acyklický substituent s NH Či NH2 skupinou nelze obecně predikovat a že substituce či modifikace na C-3, případně D-kruhu v kombinaci s velikostí a složením substituentu v poloze C-3 je vždy zcela unikátní a není možně ji předem předvídat a strukturu navrhnout aditivním přístupem.
Neuroprotektivní účinek steroidních derivátů nárokuje také přihláška US 20170246188 Al (Method of treating organophosphate intoxication) s předpokládaným antikonvulzivním účinkem. Nároky této přihlášky lze považovat za spekulativní, neboť nárokované neurosteroidní látky jsou definovány jako pregnany, androstany, 19-norandrostany a norpregnany substituované skupinami obecného vzorce, který nedefinuje žádný typ ani pozici substituentu na steroidním skeletu. Takto definovaný obecný vzorec pokrývá obecně stovky až tisíce endogenních či syntetických látek. Jako příklad můžeme jmenovat žlučové kyseliny, které jsou složkou žluči a hrají významnou roli při trávení lipidů, v metabolismu cholesterolu a jeho odstraňování z organismu nebo endogenní glukokortikoidní hormon tetrahydrokortikosteron. Výše uvedené náhodně jmenované látky sice splňují definici obecného vzorce, nicméně odborník v oboru je jednoznačně schopen předem odhadnout, že tyto látky jsou v léčbě intoxikace organofosfátové intoxikace s následky definovanými jakožto tzv. symptomy cholinergní krize neúčinné. V rámci syntézy námi nárokovaných látek byl připraven i (S)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylátový analog allopregnanolonu (3α5α), jako látka strukturně podobná nárokovaným látkám z přihlášky US 20170246188 Al, potažmo uváděnému ganaxalonu, splňující i strukturní kritéria nárokované v
CZ 2019 - 216 A3 této přihlášce. Její účinek byl testován v modelu pentylentetrazolu-indukovaných křečí u laboratorních potkanů. Bylo zjištěno, že allopregnanolon (S)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylát vykazuje velmi slabou antikonvulsivní účinnost v obou věkových skupinách u 12ti i 25denních potkanů proti generalizovaným tonicko-klonickým křečím, vyvolaným podkožní aplikací pentylentetrazolu (PTZ) v enormní dávce 100 mg/kg. Tyto výsledky opět jednoznačně ukazují, že nelze obecně predikovat terapeutická účinek neurosteroidů a že substituce či modifikace na C-3, případně D-kruhu v kombinaci s velikostí a složením substituentu v poloze C-3 je vždy zcela unikátní, není možně ji předem předvídat a strukturu navrhnout aditivním přístupem.
U sloučenin podle předkládaného vynálezu byla překvapivé zjištěna výrazně zvýšená účinnost u jedinců v P12, tedy v období, které odpovídá novorozeneckému a časně kojeneckému období u dětí. Předkládané sloučeniny lze tedy hodnotit jako mající specifickou účinnost pro epilepsie a epileptické syndromy s věkovou vazbou. Epilepsie a epileptické syndromy během vývoje vykazují výrazně odlišné biologické parametry v porovnání se situací u dospělých. Zvýšenou záchvatovou pohotovost a tím i snadnější vznik epileptických záchvatů způsobuje fakt, že od narození až nejméně do prepubertálního období probíhá rozsáhlý postnatální vývoj mozku. U raných vývojových stádií nejsou plně vyvinuty a stabilizovány přirozené inhibiční mechanismy a probíhá intenzívní vývoj neuronálních sítí se změnami neuromodulátorů a neurotransmiterů. Epilepsie se v raných vývojových stadiích na rozdíl od epilepsie u dospělců rozvíjí na neurobiologickém substrátu měnícího se, vyvíjejícího mozku. V pediatrické epileptologii se vyskytují specifické epileptické syndromy s věkovou vazbou, které se objevují pouze v dětství a adolescenci. V dětství i mládí se ovšem lze rovněž setkat i se stejnými typy epilepsií jako v dospělosti (syndromy bez věkové vazby). Výsledkem je daleko širší spektrum možných epilepsií v dětství než v dospělosti.
Správné diagnostika má v epilepsii klíčový význam pro vhodně zvolenou farmakoterapii. Rada věkově vázaných epilepsií není senzitivní vůči klinicky používaným léčivům, čímž je zdůrazněna medicínská potřeba vývoje věkově specifických antiepileptik, které představují specifickou farmakologickou kategorii. Typ epilepsie je často rovněž determinující pro prognózu onemocnění i celkový vývoj dítěte. Existují syndromy vysloveně benigní, které jen málo ovlivňují behaviorální projevy a neuropsychologické parametry. Na druhé straně se v časném dětství vyskytují závažné syndromy spojené obvykle s encefalopatií, které jsou právem označovány za katastrofické, protože devastují vývoj jedince, vedou ke kognitivnímu deficitu až zvratu v psychomotorickém vývoji a je u nich velmi malá šance na úplnou kompenzaci. Právě věkově specifická účinnost zde předkládaných látek umožňuje jejich využití v těchto specifických diagnózách, včetně vzácných chorob. Využití předkládaných látek bude zvláště důležité v případech současného výskytu psychiatrických a neuro vývojových syndromů a komorbidit během vývoje i dospělosti. Zde předkládané sloučeniny vykazují slibné výsledky už v animálních modelech psychiatrických diagnóz, neboť obdobné stavy vykazují i mláďata laboratorního potkana.
U známých neuroaktivních steroidů se strukturou relativně blízkou zde předkládaným sloučeninám nebyla věkově specifická účinnost dosud pozorována. Z toho je možné vyvodit, že nárokované sloučeniny jsou svým farmakologickým profilem specifické a unikátní. Jejich biologické účinky nelze dovodit na základě veřejně publikovaných znalostí. Zde uvedené údaje jsou výsledkem originální vědecké a vynálezecké činnosti.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I,
CZ 2019 - 216 A3
(I) kde
R1 je methyl a potom R2 jsou buď dva vodíkové atomy, nebo jeden vodíkový atom spolu s Ci- C4 alkylem s přímým nebo rozvětveným uhlíkovým řetězcem, nebo
R1 a R2 dohromady tvoří skupinu -(Clfijn-. kde n=2 nebo 3, která s původními uhlíkovými atomy 1 a 3 v obecném vzorci I vytváří pěti nebo šesti členný cyklus,
R3 je skupina -O-(CH2)n -Om-„ kde n = 0-2 a m = 0 nebo 1,
R4 j e 3 a5 β-androstan 3,11,17,17-tetrayl,
R5 je vodíkový atom nebo hydroxylová skupina,
R6 je atom vodíku a potom R7 je zvolen ze skupiny, zahrnující atom vodíku, acetylovou skupinu, kyano skupinu, C1-C2 kyanoalkylovou skupinu, 1,1-difluoroethylovou skupinu a přímý nebo větvený Ci- C4 alkyl, nebo R6 a R7 společně představují strukturu, zvolenou ze skupiny, zahrnující Ci- C2 alkyliden, kyanomethylenovou skupinu, atom kyslíku, dva atomy fluoru.
Definice skupin jsou použity tak, jak jsou obecně chápány odborníky v oboru.
Alkyl je radikál lineárního nebo rozvětveného Ci až C4, s výhodou Ci až C3, nejvýhodněji Ci až C2 nasyceného alifatického uhlovodíkového řetězce, vytvořený odštěpením jednoho vodíkového atomu. Alkylen je rovný, rozvětvený nebo cyklický, s výhodou rovný nebo rozvětvený, dvojvazný alifatický uhlovodíkový řetězec.
Acetylovou skupinou se rozumí skupina -CO-CH3.
Kyanovou skupinou se rozumí skupina -C^N.
Kyanoalkylovou skupinou se rozumí skupina, sestávající z alkylové skupiny podle výše uvedené definice, na niž je za odštěpení jednoho vodíkového atomu navázána skupina -C^N. Kyanomethylenovou skupinou se rozumí skupina ^CH-C^N.
1,1-Difluoroethylovou skupinou se rozumí skupina -CF2-CH3.
C1-C2 Alkyliden je dvojvazný alifatický uhlovodíkový řetězec, obsahující dvojnou vazbu (=0¾ nebo =CH-CH3).
Výraz „hydroxyl“ označuje skupinu -OH.
Ve výhodném provedení jsou předmětem vynálezu následující sloučeniny obecného vzorce I:
CZ 2019 - 216 A3 (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Acetyl-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl (S)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (1), (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Acetyl-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl (R)-6-oxopiperidin-2-karboxylát (2), (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Kyano-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl (R)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (3), (3R,5R,8R,9S, 10S, 13S, 14S,17S)-17-Acetyl-ll-hydroxy-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcycklopenta[a]fenantren-3-yl (S)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (4), (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S)-10,13-Dimethylhexadekahydro-lH-cyklopenta[a]fenantren-3-yl (S)5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (5), (3R,5R,8R,9S, 1 OS, 13 S, 14S)-10,13 -Dimethyl-17-oxohexadekahydro- lH-cyklopenta[a]fenantren3-yl (R)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (6), (3R,5R,8R,9S, 1 OS, 13 S, 14S)-10,13-Dimethylhexadekahydro-lH-cyklopenta[a]fenantren-3-yl (R)-6-oxopiperidin-2-karboxylát (7), (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Kyano-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl (R)-6-oxopiperidin-2-karboxylát (8), (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Acetyl-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl acetylglycinát (9), (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-acetyl-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl acetylleucinát (10), (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-10.13,17-Trimethylhexadekahydro-lH-cyklopenta[a]fenantren3-yl (S)-5-oxopyrrolidine-2-karboxylát (II).
(3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,Z)-17-Ethyliden-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl (R)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (12),
2-(((3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S)-10,13-Dimethylhexadecahydro-lH-cyclopenta[a]fenantren-3yl)oxy)ethyl (R)-5-oxopyrrolidine-2-karboxylát (13).
2-(((3R,5R,8R,9S, 1 OS, 13 S, 14S)-10,13 -Dimethylhexadekahydro-lH-cyklopenta[a]fenantren-3 yl)oxy)ethyl (S)-6-oxopiperidin-2-karboxylát (14),
2-((3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Acetyl-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl)ethyl (R)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (16),
2-((3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Acetyl-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl)ethyl (R)-6-oxopiperidine-2-karboxylát (17).
Dalším předmětem vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I a jemu odpovídající výše uvedené konkrétní sloučeniny, pro použití jako léčiva.
Význakem vynálezu je použití sloučenin obecného vzorce I a jemu odpovídajících výše uvedených konkrétních sloučenin pro léčení epilepsie či jiných onemocnění spojených s křečemi, jako jsou například záchvaty spojené s hypoxií; záchvaty spojené s traumatickým poškozením mozku; záchvaty spojené s intoxikací; patologické změny způsobené hyperexcitací.
CZ 2019 - 216 A3
Význakem vynálezu je použití sloučenin obecného vzorce I a jemu odpovídajících výše uvedených konkrétních sloučenin pro léčení stavů, které mohou doprovázet epilepsii, jako jsou afektivní poruchy, deprese, post-traumatické stresové poruchy (PTSD) a nemoci související se stresem, anxieta, schizofrenie a psychotické poruchy, související ischemické poškození CNS, neurodegenerativní změny a poruchy, roztroušená skleróza.
Předmětem vynálezu je rovněž použití sloučenin obecného vzorce I a jemu odpovídajících výše uvedených konkrétních sloučenin pro výrobu veterinárního nebo humánního farmaceutického přípravku pro léčení epilepsie a komorbidit s ní spojených či jiných onemocnění spojených s křečemi, jako jsou například záchvaty spojené s hypoxií; záchvaty spojené s traumatickým poškozením mozku; záchvaty spojené s intoxikací; patologické změny způsobené hyperexcitací.
Předmětem vynálezu je rovněž farmaceutický prostředek pro humánní i veterinární použití, vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní složku sloučeninu obecného vzorce I a/nebo odpovídající výše uvedeným konkrétním sloučeninám.
Předmětem vynálezu je dále výše zmíněný farmaceutický prostředek pro použití k léčení epilepsie a komorbidit s ní spojených či jiných onemocnění spojených s křečemi, jako jsou například záchvaty spojené s hypoxií; záchvaty spojené s traumatickým poškozením mozku; záchvaty spojené s intoxikací; patologické změny způsobené hyperexcitací.
Předmětem vynálezu je dále výše zmíněný farmaceutický prostředek pro použití k léčení stavů, které mohou doprovázet epilepsii, jako jsou afektivní poruchy, deprese, post-traumatické stresové poruchy (PTSD) a nemoci související se stresem, anxieta, schizofrenie a psychotické poruchy, související ischemické poškození CNS, neurodegenerativní změny a poruchy, roztroušená skleróza.
Předmětem vynálezu je také použití sloučenin podle obecného vzorce I pro výrobu analytických standardů používaných v experimentálním výzkumu a analytické chemii či jako sloučenin obsažených v potravinových doplňcích či kosmetických přípravcích určených pro zlepšování reakcí jednotlivých částí organismu vůči onemocněním spojených s křečemi.
Objasnění výkresů
Obr. 1. Antikonvulzivní účinek látek z Příkladu 1, z Příkladu 2 a z Příkladu 3 v modelu PTZvyvolaných křečí u rybky dánio pruhované (Danio rerio). Antikonvulzivní efekt látek byl studován v dávkách 1, 3 a 5 mg/kg pro látky (A) látka z Příkladu 1, (B) látka z Příkladu 2 a (C) látka z Příkladu 3. Jednotlivé grafý ukazují účinek látek na spontánní lokomoční aktivitu (levý graf), rychlost plavání (prostřední graf), počet otoček při otáčení (specifické nepředvídatelné pohyby, pravý graf).
Obr. 2. Antikonvulzivní účinek látek z Příkladu 1, z Příkladu 2 a z Příkladu 3 v modelu PTZvyvolaných křečí u rybky dánio pruhované (Danio rerio). Antikonvulzivní efekt látek byl studován v dávkách 1, 3 a 5 mg/kg pro látky (A) látka z Příkladu 1, (B) látka z Příkladu 2 a (C) látka z Příkladu 3. Jednotlivé grafy ukazují efekt látek na přirozené chování zebřičky pruhované ve tmě a při osvětlení (tzv. dark/light test).
Obr. 3. Antikonvulzivní účinek látky z Příkladu I v modelu PTZ-vyvolaných křečí u 15 a 25denních jedinců laboratorního potkana. Byly použity dávky 1,5 a 10 mg/kg i.p. Grafý znázorňují (A) výskyt (osa y; v %) generalizovaných záchvatů kompletních s tonickou fází (GTCS) a nekompletních bez tonické fáze (GCS); (B) latenci (osa y; s) do začátku generalizovaných záchvatů; (C) tíži záchvatů. Na ose x jsou uvedeny dávky. Tíže záchvatů byla stanovena tak, že každému zvířeti bylo přiřazeno skóre (1-5) podle nej závažnějšího epileptického
CZ 2019 - 216 A3 projevu. Skóre: 0 - bez projevu; 1 - myoklonické záškuby; 2 - epileptické automatismy; 3 minimální, klonický záchvat; 4 - nekompletní generalizovaný záchvat (GCS); 5 - kompletní generalizovaný tonicko-klonický záchvat (GTCS). Zkratky: P12 - 12denní zvířata; P25 25denní zvířata; * - signifikantní rozdíl vůči kontrole; 0 nebo 1 - podání látky kompletně zablokovalo vznik záchvatu u všech zvířat, nebo vyjma 1 zvířete.
Obr. 4. Antikonvulzivní účinek látky z Příkladu 2 v modelu PTZ-vyvolaných křečí u 15 a 25denních zvířat jedinců laboratorního potkana. Byly použity dávky 1,5 a 10 mg/kg i.p. Grafý znázorňují (A) výskyt (osa y; v %) generalizovaných záchvatů kompletních s tonickou fází (GTCS) a nekompletních bez tonické fáze (GCS); (B) latenci (osa y; s) do začátku generalizovaných záchvatů; (C) tíži záchvatů. Na ose x jsou uvedeny dávky. Tíže záchvatů byla stanovena tak, že každému zvířeti bylo přiřazeno skóre (1-5) podle nej závažnějšího epileptického projevu. Skóre: 0 - bez projevu; 1 - myoklonické záškuby; 2 - epileptické automatismy; 3 minimální, klonický záchvat; 4 - nekompletní generalizovaný záchvat (GCS); 5 - kompletní generalizovaný tonicko-klonický záchvat (GTCS). Zkratky: P12 - 12denní zvířata; P25 25denní zvířata; * - signifikantní rozdíl vůči kontrole; 0 nebo 1 - podání látky kompletně zablokovalo vznik záchvatu u všech zvířat, nebo vyjma 1 zvířete; nt - netestováno.
Obr. 5. Antikonvulzivní účinek látky z Příkladu 3 v modelu PTZ-vyvolaných křečí u 15 a 25denních zvířat jedinců laboratorního potkana. Byly použity dávky 1, 5 a 10 mg/kg i.p. Grafý znázorňují (A) výskyt (osa y; v %) generalizovaných záchvatů kompletních s tonickou fází (GTCS) a nekompletních bez tonické fáze (GCS); (B) latenci (osa y; s) do začátku generalizovaných záchvatů; (C) tíži záchvatů. Na ose x jsou uvedeny dávky. Tíže záchvatů byla stanovena tak, že každému zvířeti bylo přiřazeno skóre (1-5) podle nej závažnějšího epileptického projevu. Skóre: 0 - bez projevu: 1 - myoklonické záškuby; 2 - epileptické automatismy; 3 minimální, klonický záchvat; 4 - nekompletní generalizovaný záchvat (CCS); 5 - kompletní generalizovaný tonicko-klonický záchvat (GTCS). Zkratky: P12 - 12denní zvířata; P25 25denní zvířata; * - signifikantní rozdíl vůči kontrole; 0 nebo 1 - podání látky kompletně zablokovalo vznik záchvatu u všech zvířat, nebo vyjma 1 zvířete; nt - netestováno.
Obr. 6. Antikonvulzivní účinek látky z Příkladu 1 v modelu záchvatů vyvolaných elektrickou stimulací 6 Hz u dospělých zvířat (óOdenní) laboratorního potkana. Steroidní derivát byl aplikován 20 minut před aplikací PTZ (100 mg/kg, s.c.) a byly použity dávky 1,5 a 10 mg/kg i.p. Grafy znázorňují (A) výskyt (osa y; v %) generalizovaných záchvatů kompletních s tonickou fází (GTCS) a nekompletních bez tonické fáze (GCS); (B) výskyt (osa y; v %) minimálních klonických záchvatů (C) latenci (osay; s) do začátku generalizovaných záchvatů; (D) latenci (osa y; s) do začátku minimálních klonických záchvatů; (E) tíži záchvatů. Na ose x jsou uvedeny dávky. Tíže záchvatů byla stanovena tak, že každému zvířeti bylo přiřazeno skóre (1-5) podle nej závažnějšího epileptického projevu. Skóre: 0 - bez projevu; 1 - myoklonické záškuby; 2 epileptické automatismy; 3 - minimální, klonický záchvat; 4 - nekompletní generalizovaný záchvat (GCS); 5 - kompletní generalizovaný tonicko-klonický záchvat (GTCS). Zkratky: P12 12denní zvířata; P25 - 25denní zvířata; * - signifikantní rozdíl vůči kontrole; 1 nebo 2 - podání látky kompletně zablokovalo vznik záchvatu u všech zvířat vyjma 1 nebo 2; nt - netestováno.
Obr. 7. Antikonvulzivní účinek látky z Příkladu 1 v modelu záchvatů vyvolaných elektrickou stimulací 6 Hz u 15 a 25denních zvířat (samci laboratorního potkana). Na ose x jsou uvedeny intenzity stimulace potřebné pro vyvolání záchvatu (60 a 80 mA u 15-ti denních a 40 a 60 mA u 25denních zvířat). Osy y zobrazují (A) výskyt záchvatů v %, (B) trvání záchvatů v sekundách; (C) tíži záchvatů. Tíže záchvatů byla stanovena tak, že každému zvířeti bylo přiřazeno skóre (1-5) podle nej závažnější ho epileptického projevu. Skóre: 0 - bez projevu; 1 - myoklonické záškuby; 2 - epileptické automatismy; 3 - minimální, klonický záchvat; 4 - nekompletní generalizovaný záchvat (GCS); 5 - kompletní generalizovaný tonicko-klonický záchvat (GTCS). Zkratky: P15 15denní zvířata; P25 - 25denní zvířata; * - signifikantní rozdíl vůči kontrole.
Obr. 8. Antikonvulzivní účinek látky z Příkladu 1 v modelu záchvatů vyvolaných elektrickou
CZ 2019 - 216 A3 stimulací 6 Hz u dospělých jedinců (P60) (samci laboratorního potkana), který je zobrazen formou box plots (medián s 25-75 %) a odchylkami, reprezentujícími maximální a minimální hodnoty (osa y). Osa x zobrazuje dávky v mg/kg. Symboly v jednotlivých boxech ukazují individuální hodnoty pro jednotlivá zvířata.
Obr. 9. Histologické poškození, resp. neuroprotektivní vliv látky z Příkladu 1 v dávce 1 mg/kg po provedení NMDA leze infuzí excitotoxického NMDA (25 mmol.l1) do dorzálního hippocampu u samců laboratorního potkana. Snímky v panelu (A) zobrazují řezy kontrolních zdravých zvířat, v panelu (B) skupinu zvířat, kterým byly provedeny NMDA léze hipokampu a ίο aplikován (2-hydroxypropyl)-(P-cyklodextrin (CDX) a v panelu (C) řezy mozku zvířat, kterým byly provedeny NMDA léze hipokampu a 5 minut po provedení NMDA léze aplikována látka z Příkladu 1 v dávce 1 mg/kg.
Příklady uskutečnění vynálezu
| Seznam zkratek: | ||
| 20 | CHCE CDX | chloroform (2-hydroxypropyl)-P-cyclodextrin |
| 25 | DCM DMAP DMF DMSO EDCI | dichlormethan 4-dimethylaminopyridin (IUPAC: A'.A'-Dimcthylpyridin-4-amin) dimethylformamid (IUPAC: N,N- Dimethyl formám id) dimethylsulfoxid hydrochlorid l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu (EDCI |
| 30 | ESI HPLC HRMS IČ | ionizace elektrosprejem vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii (angl. high-performance liquid chromatography) hmotnostní spektrometrie s vysokým rozlišením infračervená spektroskopie |
| 35 | MS NMDA NMR PBS | hmotnostní spektroskopie N-methyl-D-asparagová kyselina nukleární magnetická rezonance fyziologický roztok pufrovaný fosfátem (angl. (phosphate buffered saline) |
Syntetické postupy
Reakce, pro které bylo nutné vyloučení vodného prostředí, byly vždy prováděny ve vyžíhané 40 aparatuře a pod argonovou atmosférou. Vzorky pro analýzu byly sušeny několik hodin nad oxidem fosforečným při 50 °C a tlaku 100 Pa. Rozpouštědla byla odpařována na vakuové odparce při tlaku 0,25 kPa a teplotě 50 °C. K tenkovrstvé chromatografii (TLC) byly použity desky potažené vrstvou silikagelu (ICN Biochemicals). Pro preparativní sloupcovou chromatografii byl použit silikagel Fluka (60 pm). Body tání byly měřeny na bodotávku Hund 45 Wetzlar H 600 (Helmut Hund, Německo) a nejsou korigovány. Optická rotace byla měřena polarimetrem Autopol IV (Rudolf Research Analytical, Flanders, USA) při 589,3 nm a teplotě 22 °C. Hodnoty |«|d jsou uvedeny v [101 · deg · cm2 · g1], koncentrace c jako [g · 100 ml1]. Infračervená spektra byla měřena na spektrometru Nicolet 6700 (Thermo Scientific, USA), kdy vzorek byl rozpuštěn v chloroformu. NMR spektra byla měřena při 24 °C na spektrometrech so Bruker AVANCE III™ 400 MHz. NMR spektra jsou korigována na tetramethylsilan jako vnitřní standard a jsou vypsána v stupnici ppm (části z milionu), interakční konstanty J jsou udány v Hz. Multiplicity signálů jsou označeny následovně: s - singlet, d - dublet, t - triplet, q - kvartet, dt dublet tripletu, qd - kvartet dubletu, m - multiplet. Hmotnostní spektra byla měřena na spektrometru LTQ Advantage Thermo s ESI nebo El ionizací (10 eV) a to v pozitivním nebo 55 negativním módu.
CZ 2019 - 216 A3
Obecné postupy
Obecný postup A
Suchý dimethylformamid (DME, 10 ml) byl přidán pod inertní atmosférou ke směsi 3-hydroxy steroidu (1,0 mmol), 4-dimethylaminopyridinu (DM AR, 0,25 mmol), hydrochloridu V-(3dimcthylaminopropyl)-A-cthylkarbodiimidu (EDCI, 2,7 mmol) a hydroxybenzotriazolu (HOBt, 2,2 mmol), která byla sušena za sníženého tlaku (0,1 hPA) 1 hodinu při teplotě místnosti. Poté byl přikapán roztok příslušné karboxylové kyseliny (1,5 mmol) v suchém DME (5 ml). Reakční směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc. Po odpaření rozpouštědla byl odparek čištěn chromatografii na sloupci silikagelu.
Obecný postup B
Suchý dichlormethan (DCM, 2 ml) byl přidán pod inertní atmosférou ke směsi 3-hydroxy steroidu (1,0 mmol), 4-dimethylaminopyridinu (DMAP, 0.25 mmol) a příslušné karboxylové kyseliny (1,5 mmol). Tato směs byla sušena za sníženého tlaku (0,1 hPA) 1 hodinu při teplotě místnosti. Poté byl pomalu přikapán roztok hydrochloridu l-ethyl-3-(3dimethylaminopropyl)karbodiimidu (EDCI, 2,7 mmol) v suchém DCM (5 ml).
Reakční směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc, následně nalita do vody, promyta 5% (obj./ob.) vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Po usušení nad bezvodým Na2SC>4 a odpaření rozpouštědel byl odparek čištěn chromatografii na sloupci silikagelu.
Příklad 1: (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Acetyl-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopcnta| a | fenantren-3 -yl (S)-5 -oxopyrrolidin-2-karboxylát (1)
V nadpisu uvedená sloučenina 1 byla připravena dle Obecného postupu A (DMF) z 20-οχο-5βpregnan-3a-olu (318 mg, 1,0 mmol) za použití /.-pyroglutamovc kyseliny (194 mg, 1,5 mmol). Chromatografii na silikagelu (5% obj./obj. aceton v CHCE) byla získána výsledná sloučenina 1 (370 mg, 89% výtěžek): bt 167-168 °C (chloroform, diethyl ether), [α]π20 +105,6 (c 0,3, CHCE): Ή NMR (400 MHz, CD13): δ 0,60 (3H, s, H-18); 0,94 (3H, s, H-19); 2,11 (3H, s, H-21); 4,164,24 (1H, m, H-C2); 4,80 (IHtt, J= 11,4; 4,8 Hz; H-3); 5,86 (1H, s, N-H). 13C NMR (101 MHz, CDCE): δ 209,7; 177,6; 171,5; 75,9; 64,0; 56,8; 55,6; 44,5; 41,9; 40,6; 39,3; 35,9; 35,1; 34,7; 32,2; 31,7; 29,3; 26,9; 26,7; 26,4; 25,1; 24,6; 23,4; 23,1; 21,0; 13,6. IČ spektrum (CHCE): 1734, 1702 (C = 0), 1230 (C-O). MS: ESI m/z 452,3 (100 %, M+Na). HR-MS (ESI) m/z: pro C26H39NO4Na [M+Na] vypočteno, 452,27713; nalezeno, 452,26742. Pro C26H39NO4 (429,6) vypočteno: 72,69 %, C; 9,15 %, H; 3,26 %, N. Nalezeno: 72,29 %, C; 9,15 %, H; 3,11 %, N.
Příklad 2: (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Acetyl-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl (R)-6-oxopiperidin-2-karboxylát (2)
V nadpisu uvedená sloučenina 2 byla připravena dle Obecného postupu B (I)CM) z 20-οχο-5βpregnan-3a-olu (318 mg, 1,0 mmol) za použití 6-oxo-2-piperidinkarboxylové kyseliny (213 mg, 1,5 mmol). Chromatografii na silikagelu (3% aceton/chloroform, obj./obj.) byla získána výsledná sloučenina 2 (142 mg, 32% výtěžek): bt 139-141 °C (aceton/w-heptan), [α]π20 +103,2 (c 0,3, CHCE). 3H NMR (400 MHz, CDCE): δ 0,60 (3H, s, H-18); 0,94 (3H, s, H-19); 4,05 (1H, m, HC2'); 4,81 (1H, m, H-3); 6,14 (1H, s, N-H). 13C NMR (101 MHz, CDCE): δ 209,7; 171,4; 170,5; 76,1; 64,0; 56,8; 55,1; 44,5; 42,0; 41,0; 39,3; 35,9; 35,0; 34,7; 32,2; 31,7; 31,2; 27,0; 26,7; 26,4; 25,6; 24,6; 23,4; 23,1; 21,0; 19,7; 13,6. IČ spektrum (CHCE): 3402 (NH); 1734, 1698, 1663 (C = O). MS: ESI m/z 466,3 (100 %, M+Na). HR-MS (ESI) m/z: pro C27H4iNO4Na [M+Na] vypočteno, 466,29278; nalezeno, 466,29283.
CZ 2019 - 216 A3
Příklad 3: (3R,5S,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Kyano-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl (R)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (3)
V nadpisu uvedená sloučenina 3 byla připravena dle Obecného postupu B (DCM) z 3a-hydroxy5p-androstan-17p-karbonitrilu (250 mg, 0,83 mmol), za použití Z-pyroglutamové kyseliny (139 mg, 1,07 mmol). Chromatografii na silikagelu (20% obj./obj. aceton v CHCE) byla získána výsledná sloučenina 3 (180 mg, 53% výtěžek): bt 188-189 °C (chloroform/diethyl eter), |α|υ2(' +75,5 (c 0,2, CHCh). 'HNMR (400 MHz, CDCh): δ 0,91 (3H, s. H-18); 0,96 (3H, s, H-19); 4,25 (1H, ddd, J= 8,8; 5,1; 0,7 Hz; H-C2'); 4,80 (IHtt, J= 11,3; 4,8 Hz; H-3); 5,92 (1H, s, N-H). 13C NMR (101 MHz, CDCh): δ 177,7; 171,5; 121,4; 75,8; 55,6; 54,5; 44,7; 41,8; 40,5; 40,5; 37,4; 36,3; 35,1; 34,8; 32,2; 29,3; 26,8; 26,8; 26,6; 26,4; 25,0; 24,7; 23,3; 20,6; 14,8. IČ spektrum (CHCh): 2237 (CN). 1735, 1705 (C = O), 1229 (C-O). MS: ESI m/z 435,3 (100 %. M+Na). HRMS (ESI) ni/z: pro CýsHseT^CENa [M+Na] vypočteno, 435,26181; nalezeno, 435,26135. Pro C25H36N2O3 (412,6) vypočteno: 72,78 %, C; 8,80 %, H; 6,79 %, N. Nalezeno: 72,39 %, C; 8,64 %, H; 6,33 %, N.
Příklad 4: (3R,5R,8S,9S,10S,llR,13S,14S,17S)-17-Acetyl-ll-hydroxy-10,13dimethylhexadekahydro-1 H-cycklopenta[a] fenantren-3 -yl (S)-5 -oxopyrrolidin-2-karboxylát (4)
V nadpisu uvedená sloučenina 4 byla připravena dle Obecného postupu A (DMF) z 20-οχο-5βpregnan-3a,lla-diolu (334 mg, 1,0 mmol), za použití Z-pyroglutamové kyseliny (193 mg, 1,5 mmol). Chromatografii na silikagelu (30% obj./obj. aceton v CHCE) byla získána výsledná sloučenina 4 (213 mg, 48% výtěžek): bt 183-185 °C (chloroform/diethyl ether), [α]π20 +86,4 (c 0,2, CHCh). ‘HNMR (400 MHz, CDCh): δ 0,62 (311, s, H-18); 1,06 (3H, s, H-19); 2,13 (1H, s, H-21); 3,91 (1H, s, H-l 1); 4,20 (1H, ddd, J = 8,7; 5,2; 0,7 Hz; H-C2 ); 4,85 (1 H, tt, J= 10,9; 5,1 Hz; 11-3); 5,83 (1H, s, N-H). 13C NMR (101 MHz, CDCh): δ 209,1; 177,7; 171,5; 76,3; 69,1; 63,5; 55,7; 55,6; 50.8; 47,3; 44,3; 43,5; 38,0; 35,9; 34,8; 32,7; 31,6; 29,3; 27,6; 27,4; 26,3; 25,0; 24,5; 23,7; 23,1; 14,6. IČ spektrum (CHCh): 1734, 1702 (C = O). MS: ESI m/z 468,3 (100 %, M+Na). HR-MS (ESI) m/z: pro CYIEgNChNa [M+Na] vypočteno, 468,27219; nalezeno, 468,27204. Pro C26H39NO5 (445,6) vypočteno: 70,08 %. C; 8,82 %, H; 3,14 %, N. Nalezeno: 69,91 %, C; 8,68 %. H; 2,87 %, N.
Příklad 5: (3R,5R,8S,9S,10S,13S,14S)-10,13-Dimethylhexadekahydro-lHcyklopentafa]fenantren-3-yl (S)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (5)
V nadpisu uvedená sloučenina 5 byla připravena dle Obecného postupu A (DMF) z 3a-hydroxy5p-androstranu (300 mg, 0,94 mmol) za použití Z-pyroglutamové kyseliny (190 mg, 1,9 mmol). Chromatografii na silikagelu (5% obj./obj. aceton v CHCE) byla získána výsledná sloučenina 5 (210 mg, 58% výtěžek): bt 136-137 °C (chloroform/diethyl eter), [α]π20 +29,5 (c 0,2, CHCE). Ή NMR (400 MHz, CDCh): δ 0,69 (3H, s, H-18); 0,94 (311, s, H-19); 4,16-4,24 (1H, m, H-C2); 4,79 (1 H tt, J= 11,3; 4,8 Hz; H-3); 5,89 (1H, s, N-H). 13C NMR (101 MHz, CDCh): δ 177,5; 171,4; 76,0; 55,5; 54,5; 41,9; 40,9; 40,7; 40,5; 39,0; 36,2; 35,0; 34,7; 32,1; 29,2; 27,0; 26,7; 26,5; 25,5; 24,9; 23,3; 20,8; 20,6; 17,5. IČ spektrum (CHCh): 1734, 1704 (C = O). MS: ESI m/z 386,3 (100 %, M-H). HR-MS (ESI) m/z: pro C24H36NO3 [M-H] vypočteno, 386,27007; nalezeno, 386,26962. Pro C24H37NO3 (387,3) vypočteno: 74,38%, C; 9,62%, H; 3,61%N. Nalezeno: 74,20%, C; 9,61%, H; 3,26%, N.
Příklad 6: (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S)-10,13-Dimethyl-17-oxohexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl (R)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (6)
V nadpisu uvedená sloučenina 6 byla připravena dle Obecného postupu A (DMF) z 17-οχο-5βandrostan-3a-olu (290 mg, 1,0 mmol), za použití Z-pyroglutamové kyseliny (194 mg, 1,5 mmol). Chromatografii na silikagelu (5% obj./obj. aceton/chloroform) byla získána výsledná sloučenina 6 (197 mg, 49% výtěžek): bt 114-116 °C (aceton/w-heptan), [α]π20 +98,5 (c 0,2, CHCh). Ή NMR (400 MHz, CDCh): δ 0,86 (311, s, H-18); 0,97 (3H, s, H-19); 4,20 (1H, m, H-C2); 4,80
CZ 2019 - 216 A3 (1H, m, H-3); 5,91 (1H, s, N-H). 13C NMR(101 MHz, CHCh): δ 221,3; 177,7; 171,5; 75,8; 55,6; 51,6; 47,9; 41,9; 40,9; 36,1; 35,5; 35,0; 34,9; 32,2; 31,8; 29,3; 26,8; 26,6; 25,4; 25,0; 23,3; 21,9; 20,3; 13,9. IČ spektrum (CHCE): 3439 (NH); 1703, 1706(C = 0); 1060 (C-O). MS: ESI m/z 424,2 (100 %, M+Na). HR-MS (ESI) m/z: pro C^HssNCUNa [M+Na] vypočteno, 424,24583; nalezeno, 424,24548. Pro C24H35NO4 (401,2) vypočteno: 71,79 %, C; 8,79 %, H; 3,49 %, N. Nalezeno: 71.40 %, C; 8,93 %, H, 3,32 %, N.
Příklad 7: (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S)-10,13-Dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl (R)-6-oxopipendin-2-karboxylát (7)
V nadpisu uvedená sloučenina 7 byla připravena dle Obecného postupu A (DMF) z 5βandrostan-3a-olu (276 mg, 1,0 mmol), za použití 6-oxo-piperidinkarboxylové kyseliny (213 mg, 1,5 mmol). Chromatografri na silikagelu (5% obj./obj. aceton/chloroform) byla získána výsledná sloučenina 7 (189 mg, 47% výtěžek): bt 109-111 °C (diethyl ether), [α]π20 +18,3 (c 0,3, CHCI3). Ή NMR (400 MHz, CDCh): δ 0,68 (311, s, 11-18); 0,94 (3H, s, H-19); 4,04 (1H, m, H-C2); 4,81 (1H, m, H-3); 6,13 (1H, s, NH). 13C NMR (101 MHz, CHCh): δ 171,4; 170,6; 76,3; 55,1; 54,7; 42,0; 41,1; 40,9; 40,6; 39,1; 36,3; 35,2; 34,9; 32,3; 31,2; 27,1; 26,8; 26,7; 25,7; 25,6; 25,6; 23,4; 21,0; 20,7; 19,7; 17,6. IČ spektrum (CHCh): 3402 (NH); 1734, 1665 (C = O); 1062 (C-O). MS: ESI m/z 424,3 (100%, M+Na). HR-MS (ESI) m/z: pro C25H39NO3Na [M+Na] vypočteno, 424,28222; nalezeno, 424,28258. Pro C25H39NO3 (401,3) vypočteno: 74,77 %, C; 9,79 %, H; 3,49 %, N. Nalezeno: 74,97 %, C; 9,92 %, H; 3,43 %, N.
Příklad 8: (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Kyano-10,13-dimethylhexadekahydro-ÍHcyklopenta[a]fenantren-3-yl (R)-6-oxopiperidin-2-karboxylát (8)
V nadpisu uvedená sloučenina 8 byla připravena dle Obecného postupu A (DMf) z 3a-hydroxy5p-androstan-17p-karbonitrilu (112 mg, 0,37 mmol), za použití 6-oxo-piperidinkarboxylové kyseliny (80 mg, 0,56 mmol). Chromatografri na silikagelu (3% obj./obj. aceton/chloroform) byla získána výsledná sloučenina 8 (76 mg, 48% výtěžek): bt 69-71 °C (ethyl acetát/w-heptan), |α|υ2(ι +65,4 (c 0,3, CHCh). Ή NMR (400 MHz, CDCh): δ 0,91 (311, s, H-19); 0,95 (3H, s, H-18); 2,29 (1H, t, J= 8,8 Hz; H-I7); 4,04 (1H, m, H-C2 ); 4,81 (1H, m, H-3); 6,12 (1H, s, N-H). 13C NMR (101 MHz, CHCh): δ 171,4; 170,5; 121,4; 75,9; 55,1; 54,5; 44,7; 41,8; 40,5; 40,5; 37,4; 36,3; 35,0; 34,8; 32,2; 31,2; 26,8; 26,8; 26,7; 26,4; 25,6; 24,7; 23,3; 20,7; 19,7; 14,5. IČ spektrum (CHCh): 3403 (NH); 2237 (CN); 1734, 1664, 1418 (C = O); 1062 (C-O). MS: ESI m/z 449,3 (100 %, M+Na). HR-MS (ESI) m/z: pro CzeHssNzOsNa [M+Na] vypočteno, 449,27746; nalezeno, 449,27789. Pro C26H38N2O3 (426,6) vypočteno: 73,20 %, C; 8,98 %, H; 6,57 %, N. Nalezeno: 73,22 %, C; 9,29 %, H; 6,25 %, N.
Příklad 9: (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Acetyl-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl acetylglycinát (9)
V nadpisu uvedená sloučenina 9 byla připravena dle Obecného postupu A (DMF) z 20-oxo-5Bpregnan-3a-olu (318 mg, 1,0 mmol) za použití /V-acetylglycinu (176 mg, 1,5 mmol). Chromatografri na silikagelu (3% aceton/chloroform, obj./obj.) byla získána výsledná sloučenina 9 (338 mg, 81% výtěžek): bt 111-113 °C (ethyl acetát/w-heptan), [α]π20 +92,0 (c 0,3, CHCh). Ή NMR (400 MHz, CDCh): 8 0,60 (3H, s, H-18); 0,93 (3H, s, H-19); 2,04 (3H, s. H-C5); 2,11 (3H, s, 11-21); 2,53 (1H, t, J= 8,8 Hz; H-17); 4,00 (2H, d, J= 5,0 Hz; H-C5'); 4,80 (1H, m, H-3); 6,00 (1H, m, N-H). 13C NMR (101 MHz, CHCh): δ 209,7; 170,2; 169,7; 75,9; 63,9; 56,8; 44,4; 41,9; 41,8; 40,6; 39,3; 35,9; 35,1; 34,8; 32,3; 31,7; 27,0; 26,7; 26,4; 24,6; 23,4; 23,2; 23,0; 21,0; 13,6. IČ spektrum (CHCh): 3463, 1516 (NH); 1734, 1697, 1676 (C = O); 1192, 1063 (C-O). MS: ESI m/z 440,3 (100 %, M+Na). HR-MS (ESI) m/z: pro C25H39NO4Na [M+Na] vypočteno, 440,27713; nalezeno, 440,27753. Pro C25H39NO4 (417,6) vypočteno: 71,91 %, C; 9,41 %, H; 3,35 %, N. Nalezeno: 72,03 %, C; 9,36 %. H; 3,39 %, N.
Příklad 10: (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-acetyl-10,13-dimethylhexadekahydro-lH11
CZ 2019 - 216 A3 cyklopenta[a]fenantren-3-yl acetylleucinát (10)
V nadpisu uvedená sloučenina 10 byla připravena dle Obecného postupu A (DMF) z 20-οχο-5βpregnan-3a-olu (318 mg, 1,0 mmol) za použití Λ'-acctyL/.-lcucinu (260 mg, 1.5 mmol). Chromatografri na silikagelu (15% EtOAc v petroletheru, obj./obj.) byla získána směs diasteromerů. Následnou UPEC chromatografri (20% aceton/hexan, obj./obj.) byla získán C3R/S diastereomer jako výsledná sloučenina 10 (155 mg, 33% výtěžek) olejové konzistence: |α|υ2(' +93,3 (c 0,3, CHCE). Ή NMR (400 MHz, CDCE): δ 0,60 (3H, s, H-18); 0,93 (3H, s, 11-19); 0,95 (6H, dd. J= 6,3; 4,5 Hz; H-C5' a C6 ); 2,02 (3H, s, H-acetyl-L-leucinát); 2,11 (3H, s, H-21); 2,55 (1H, t, J= 8,8 Hz; H-17); 4,58 (1H, m, H-C2 ); 4,76 (1H, m, H-3); 5,83 (1H, 1H, NH). 13C NMR (101 MHz, CHCE): 8 209,8; 173,0; 169,9; 75,6; 64,0; 56,8; 51,1; 44.5; 42,0; 40,6; 39,3; 35.9; 35,1; 34,8; 32,2; 31,7; 27,0; 26,7; 26,5; 25,0; 24,6; 23,4; 23,4; 23,0; 23,0; 22,3; 21.0. IČ spektrum (CHCE): 3436 (NH); 2959, 2872 (CH3); 1727, 1697 (C = O); 1193, 1021 (C-O). MS: ESI m/z 496,3 (100 %. M+Na). HR-MS (ESI) m/z: proC29H48NO4 [M+H] vypočteno, 474,35779; nalezeno, 474,35753. Pro C29H47NO4 (473,7) vypočteno: 73,53 %. C; 10,00 %, H; 2,96 %, N. Nalezeno: 73,37 %, C; 10,35 %, H; 2,69 %, N.
Příklad 11: (3R,5R,8S,9S,10S,13R,14S,17S)-10,13,17-Trimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl (S)-5-oxopyrrolidine-2-karboxylát (11)
V nadpisu uvedená sloučenina 11 byla připravena podle Obecného postupu A z 17B-methyl-5Bandrostan-3a-olu (102 mg, 0,35 mmol) za použití /.-pyroglutamovc kyseliny (112 mg, 0,525 mmol). Chromatografri na silikagelu (aceton/chloroform, 1:50 až 1:6) bylo získána výsledná sloučenina 11 (124 ing, 60% výtěžek) jako bílá amorfní látka: bt 157-158 °C (aceton/w-heptan). [a]D 20+31,0 (c 0,3, CHCE). Ή NMR (400 MHz, CDCE): δ 0,52 (3H, s, H-18); 0,82 (3H, d, J = 6,8 Hz; 17-Me); 0,94 (3H, s, 11-19); 4,19 (dd, J= 8,6; 5,2 Hz; H-C2); 4,78 (lH,tt, J= 11,4; 4,8 Hz; H-3); 6,19 (1H, s, N-H). 13C NMR (101 MHz, CDCE): δ 177,9; 171,6; 76,1; 55,9; 55,7; 45,3; 42,3; 42,2; 40,9; 37,8; 36,2; 35,2; 34,8; 32,3; 30,4; 29,4; 27,2; 26,7; 26,6; 25,0; 24,8; 23,5; 20,7; 13,9; 12,2. IČ spektrum (CHCE): 3206, 3118 (NH), 2951, 2867 (CH2), 1736 (C = O), 1716 (C = O), 1448 (CH2), 1203, 1022 (C-O). MS; ESI m/z 424,3 (100 %, M+Na), 402,3 (24 %, M+H). HR-MS (ESI) m/z: pro CAFEgNOíNa [M+Na] vypočteno, 424,2823, nalezeno, 424,2822; pro G5H40NO3 [M+H] vypočteno, 402,3003, nalezeno, 402,3003. Pro Q5H39NO3 (401,6) vypočteno: 74,77 %, C; 9,79 %, H; 3,49 %, N. Nalezeno: 74,77 %, C; 9,94 % H; 2,94 %, N.
Příklad 12: (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,Z)-17-Ethyliden-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl (R)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (12)
V nadpisu uvedená sloučenina 12 byla připravena dle Obecného postupu A (DMF) z 5p-pregnan17-ethyliden-3a-olu (302 mg, 1,0 mmol), za použití /.-pyroglutamovc kyseliny (194 mg, 1,5 mmol). Produkt byl předčištěn sloupcovou chromatografri na silikagelu (8% aceton/chloroform, obj./obj.). V nadpisu uvedená sloučenina 12 (190 mg, 46% výtěžek) byla získána HPLC chromatografri v následujícím uspořádání: vysokotlaká pumpa (model 361, Gilson), Inject Valve Rheodyne, preparativní ELSD detektor (Gilson) spojený s PC (software Trilution EC, Gilson). Průtok 17 ml/min, aceton/hexan 20/80, eluční čas 48 min. Kolona Luna 5 pm Si(2); Axia Packed 250x21,2 mm. Nástřik: 1 ml dichlormethanu: bt 155-157 °C (aceton/hexan), [α]π20 +57,1 (c 0,3, CHCE): Ή NMR (400 MHz, CDCE): δ 0,86 (311, s, H-18); 0,95 (311, s, 11-19); 4,20 (1H, ddd, J= 8,7; 5,4; 0,7 Hz; H-C2 ); 4,79 (1H, tt, J= 11,4; 4,8 Hz; H-3); 5,11 (1H, qt, J = 7,1; 2.0 Hz; 11-20); 5,86 (1H, s,N-H). 13CNMR(101 MHz, CDCE): δ 177,6; 171,6; 150,4; 113,4; 76,1; 56,4; 55,6; 44,6; 42,0; 40,7; 37,5; 35,5; 35,0; 34,8; 32,3; 31,6; 29,3; 27,1; 26,7; 26,3; 25,0; 24,5; 23,4; 21,2; 17,0; 13,3. IČ spektrum (CHCE): 3438, 1706 (oxopyrrolidin); 1734 (C = 0); 1244, 1022 (C-O); 1678, 828 (C=C). MS: ESI m/z 827,6 (100 %, 2M). 414,3 (65 %, M+H). HR-MS (ESI) m/z: pro C26H40NO3 [M+HJ vypočteno, 414,30027; nalezeno, 414,29987. Pro CVlLgNO’, (413,6) vypočteno: 75,50 %; C; 9,50 %; H; 3,39 %; N. Nalezeno: 75,24 %, C; 9,51 %, H; 3,02 %, N.
Příklad 13: 2-(((3R,5R,8S,9S,10S,13S,14S)-10,13-Dimethylhexadecahydro-lH12
CZ 2019 - 216 A3 cyclopenta[a]fenantren-3-yl)oxy)ethyl (R)-5-oxopyrrolidine-2-carboxylate (13)
V nadpisu uvedená sloučenina 13 byla připravena dle Obecného postupu A (DMF) z 3-(5βandrostan-3a-yl)oxy)ethan-l-olu (320 mg, 1,0 mmol), za použití C-pyroglutamovc kyseliny (194 mg, 1,5 mmol). Produkt byl předčištěn sloupcovou chromatografri na silikagelu (8% aceton/chloroform, obj./obj.). V nadpisu uvedená sloučenina 13 (180 mg, 42% výtěžek) byla získána UPEC chromatografri v následujícím uspořádání: vysokotlaká pumpa (model 361, Gilson), Inject Valve Rheodyne, preparativní EESD detektor (Gilson) spojený s PC (software Trilution EC, Gilson). Průtok 17 ml/min, aceton/hexan 20/80, eluční čas 45 min. Kolona Euna 5 pm Si(2): Axia Packed 250x21,2 mm. Nástřik: 1 ml dichlormethanu: bt 110-111 °C (aceton/hexan), [a]D 20 +11,4 (c 0,3, CHCE). Ή NMR (400 MHz, CDCE): δ 0,67 (3H, s, 11-18); 0,92 (3H, s, 11-19); 3,28 (1H, tt, J = 11,1; 4,6 Hz, H-3); 3,48 (IH, J= 7,0 Hz; H-C2 ); 3,64-3,74 (2H, m, OCH2CH2O-ster); 4,18-4,42 (2H, m, OCEbOLO-ster); 5,92 (1H, s, N-H). I3C NMR (101 MHz, CDCE): δ 177,6; 172,1; 79,9; 65,7; 65,3; 55,4; 54,7; 42,3; 41,1; 40,8; 40,6; 39,2; 36,4; 35,6; 35.2; 33,3; 29,2; 27,4; 27,3; 26.9; 25,7; 25,0; 23,6; 21,0; 20,7; 17,6. IČ spektrum (CHCE): 3437, 1705 (oxopyrrolidin); 1744 (C = O); 1240, 1033 (C-O). MS: ESI m/z 454,3 (87 %, M+Na), 432,3 (58 %, M+H). HR-MS (ESI) m/z: pro C26H42NO4 [M+H] vypočteno, 432,31084; nalezeno, 432,3 1049. Pro C20H41NO4 (431,6) vypočteno: 72,35 %, C; 9,58 %, H; 3,25 %, N. Nalezeno: 71,99 %, C; 9,93 %, H; 3.13 %, N.
Příklad 14: 2-(((3R,5R,8S,9S,10S,13S,14S)-10,13-Dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl)oxy)ethyl (S)-6-oxopiperidin-2-karboxylát (14)
V nadpisu uvedená sloučenina 14 byla připravena dle Obecného postupu A (DMF) z 3-(5βandrostan-3a-yl)oxy)ethan-l-olu (320 mg, 1,0 mmol), za použití 6-oxo-2-piperidinkarboxylové kyseliny (214 mg, 1,5 mmol). Produkt byl předčištěn sloupcovou chromatografri na silikagelu (5% aceton/chloroform, obj./obj.). V nadpisu uvedená sloučenina 14 (170 mg, 38% výtěžek) byla získána HPLC chromatografri v následujícím uspořádání: vysokotlaká pumpa (model 361, Gilson), Inject Valve Rheodyne, preparativní ELSD detektor (Gilson) spojený s PC (software Trilution EC, Gilson). Průtok 17 ml/min, aceton/hexan 20/80, eluční čas 42 min. Kolona Luna 5 pm Si(2); Axia Packed 250x21,2 mm. Nástřik: 1 ml dichlormethanu: bt 117-119 °C (aceton/hexan), [a]D 20 +8,1 (c 0,3, CHCE). Ή NMR (400 MHz, CDCE): δ 0,68 (3H, s, H-18); 0,92 (3H, s, 11-19); 3,27 (1H, tt, J= 11,1; 4,6 Hz; 11-3); 3,69 (211, ddd, J = 5,5; 4,2; 1,3 Hz; OCFECHzO-ster); 4,12 (1H, ddd, J = 8,3; 5,1; 1,6 Hz; H-C2 ); 4,25-4,36 (2H, m. OCH2CH2Oster); 6,11 (1H, s, N-H). I3C NMR (101 MHz, CDCE): δ 171,0; 170,9; 79,6; 65,3; 65,1; 54,6; 54,4; 42,0; 40,8; 40,5; 40,3; 38,9; 36,0; 35,2; 34,8; 33,0; 30,9; 27,1; 26,9; 26,6; 25,4; 25,3; 23,2; 20,7; 20,4; 19,4; 17,3. IČ spektrum (CHCE): 3400, 1666 (oxopiperidin); 1743 (C = O); 1294, 1244 (C-O). MS: ESI m/z 468,3 (100 %, M+Na). 446,3 (88 %, M+H). HR-MS (ESI) m/z: pro C27H44NO4 [M+H] vypočteno, 446,32649; nalezeno, 446,32614. Pro C27H43NO4 (445,6) vypočteno: 72,77 %, C; 9,73 %, H; 3,14 %, N. Nalezeno: 72,63 %, C; 9,65 %, H; 3,03 %, N.
Příklad 15: l-((3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-3-(2-Hydroxyethyl)-10,13dimethylhexadekahydro -1 H-cyklopenta[a] fenantren> 17-yljethan-1 -on (15)
Roztok 20-oxo^-pregnan-3a-octové kyseliny (5,9 g, 16,0 mmol) v THF (20 ml) byl po kapkách přidán k refluxujícímu roztoku LÍAIH4 (1,4 g, 36,8 mmol) v THE (580 ml). Po 2 hodinách refluxu byla reakční směs ochlazena na 0 °C a byl přidán nasycený vodný roztok Na2SC>4. Oddělený filtrát byl zakoncentrován a následně naředěn ethyl acetátem. Organická složka byla promyta vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové (10% obj./obj.; 3 x 40 ml), vodou (3 x 40 ml) a nasyceným roztokem NaHCO; (3 x 40 ml). Rozpouštědla sušena nad bezvodým Na2SO4 a následně odpařena. Sloupcovou chromatografri na silikagelu (4% EtOAc v petroleum etheru, obj./obj.) byla získána látka 1- ((3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-3-(2-hydroxyethyl)-10,13dimethylhexadekahydro-lH-cyklopenta[a]fenantren-17-yl)ethan-l-ol (3,1 g, 54% výtěžek) jako směs 20R a 20S-izomerů, která byla použita v dalším reakčním kroku. Vodný roztok NaOCl (5,5%, 30 ml) byl přidán k roztoku výše uvedené látky (3 g, 8,6 mmol) v kyselině octové (75 ml).
CZ 2019 - 216 A3
Po hodině míchání při teplotě místnosti byl přidán isopropanol (45 ml) a reakční směs byla míchána dalších 30 minut. Reakční směs byla zředěna vodou a extrahována chloroformem (3 x 30 ml). Spojené organické fáze byly promyty solankou, sušeny na bezvodým Na2SC>4 a rozpouštědla odpařena. Odparek byl předčištěn pomocí sloupcové chromatografie (3-5% aceton/hexan). V nadpisu uvedená sloučenina 15 (850 mg, 25% výtěžek) byla získána HPLC chromatografii v následujícím uspořádání: vysokotlaká pumpa (model 361, Gilson), Inject Valve Rheodyne, preparativní ELSD detektor (Gilson) spojený s PC (software Trilution LC, Gilson). Průtok 10 ml/min, aceton/hexan 20/80, eluční čas 36 min. Kolona Luna 5 pm Si(2); Axia Packed 250x21,2 mm. Nástřik: 3 ml dichlormethanu. V nadpisu uvedená sloučenina byla použita do dalšího reakčního kroku. Ή NMR (400 MHz, CDC13): δ 0,59 (3H, s, H-18); 0,92 (3H, s, H-19); 2,11 (311, s. H-21); 2,53 (1H, t, J= 9,0 Hz; H-17); 3,66 (2H, t, J= 6,9 Hz; OCHzCH-ster). 13C NMR (101 MHz, CDC13) δ 209,6; 63,8; 61,7; 56,7; 44,2; 39,9; 39,2; 37,3; 35,6; 35,3; 34,6; 31,4; 31,1; 30,4; 29,5; 27,0; 26,2; 24,6; 24,3; 24,0; 22,7; 20,8; 13,3.
Příklad 16: 2-((3R,5R,8R,9S,10S, 13S,14S,17S)-17-Acetyl-10,13-dimethylhexadekahydro-l Hcyklopenta[a]fenantren-3-yl)ethyl (R)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (16)
V nadpisu uvedená sloučenina 16 byla připravena dle Obecného postupu A (DMF) z 20-οχο-5βpregnan-3a-ethanolu (347 mg, 1 mmol), za použití L-pyroglutamovc kyseliny (194 mg, 1,5 mmol). Produkt byl předčištěn sloupcovou chromatografii na silikagelu (8% aceton/chloroform, obj./obj.). V nadpisu uvedená sloučenina 16 (200 mg, 44% výtěžek) byla získána HPLC chromatografii v následujícím uspořádání: vysokotlaká pumpa (model 361, Gilson), Inject Valve Rheodyne, preparativní ELSD detektor (Gilson) spojený s PC (software Trilution EC, Gilson). Průtok 10 ml/min, aceton/hexan 40/80, eluční čas 42 min. Kolona Luna 5 pm Si(2); Axia Packed 250x21,2 mm. Nástřik: 3 ml dichlormethanu: nízkotající látka, [α]π20 +66,3 (c 0,3, CHC13). Ή NMR (400 MHz, CDC13): δ 0,59 (3H, s, H-18); 0,93 (3H, s, H-19); 2,11 (3H, s, H-21); 4,18 (2H, t, J= 6,9 Hz; OCFLCH-ster); 4,26-4,21 (1H, m, H-C2 ); 5,90 (1 H, s, N-H). 13CNMR(101 MHz, CDC13): δ 209,8; 177,6; 172,1; 65,1; 64,1; 57,0; 55,5; 44,5; 40,2; 39,5; 37,6; 35,9; 35,6; 31,7; 31,3; 30,5; 30,2; 29,3; 27,2; 26,5; 25,0; 25,0; 24,7; 24,6; 24,3; 23,0; 21,1; 13,6. IČ spektrum (CHC13): 3438, 1739, 1702 (oxopyrrolidin); 2924, 2864 (CH2). MS: ESI m/z 480,3 (100 %, M+Na), 458,3 (12 %, M+H). HR-MS (ESI) m/z: pro C28H44NO4 [M+H] vypočteno, 458,32649; nalezeno, 458,32611. Pro C28H43NO4 (457,7) vypočteno: 73,49 %, C; 9,47 %, H; 3,06 %, N. Nalezeno: 73,08 %, C; 9.43 %, H; 2,79 %, N.
Příklad 17: 2-((3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Acetyl-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl)ethyl (R)-6-oxopiperidine-2-karboxylát (17)
V nadpisu uvedená sloučenina 17 byla připravena dle Obecného postupu A (DMF) z 20-οχο-5βpregnan-3a-ethanolu (347 mg, 1 mmol), za použití 6-oxo-2-piperidinkarboxylové kyseliny (214 mg, 1,5 mmol). Produkt byl předčištěn sloupcovou chromatografii na silikagelu (5% aceton/chloroform, obj./obj.). V nadpisu uvedená sloučenina 17 (175 mg, 37% výtěžek byla získána HPLC chromatografii v následujícím uspořádání: vysokotlaká pumpa (model 361, Gilson), Inject Valve Rheodyne, preparativní ELSD detektor (Gilson) spojený s PC (software Trilution LC, Gilson). Průtok 12 ml/min, aceton/hexan 40/60, eluční čas 37 min. Kolona Luna 5 pm Si(2); Axia Packed 250x21.2 mm. Nástřik: 1 ml dichlormethanu: bt olej, [α]π20 +61,5 (c 0,2, CHC13). Ή NMR (400 MHz, CDC13): δ 0,59 (311, s, H-18), 0,93 (3H, s, H-19), 2,11 (3H, s, H21), 4,10-4,03 (2H, m, OCTLCH-stcr). 4,30-4,11 (1H, m, H-C2), 6,11 (1H, s, N-H). 13CNMR (101 MHz, CDC13) δ 209,8; 171,3; 171,2; 164,4; 65,2; 64,1; 57,0; 55,0; 44,5; 40,2; 39,5; 37,5; 35,9; 35,6; 31,7; 31,3; 31,2; 30,5; 30,2; 27,9; 27,2; 26,5; 25,6; 24,6; 24,3; 23,0; 21,1; 19,7; 13,6. IČ spektrum (CHC13): 3102 (oxopiperidin); 1739, 1697 (C = O); 1265, 1011 (C-O). MS: ESI m/z 494,3 (100 %, M+Na). HR-MS (ESI) m/z: pro C29H45NO4Na [M+Na] vypočteno, 494,32408; nalezeno, 494,32371.
Experimenty in vivo
CZ 2019 - 216 A3
Dospělí jedinci (kmen AB) rybky danio pruhované (Danío rerio) byly chovány při 28-29 °C ve světelném cyklu 14 hodin světla/10 hodin tmy (zapnutí světla v 7 hod., vypnutí světla v 21 hodin) v zařízení ZeClinics (Barcelona, Španělsko). Veškeré manipulace se zvířaty a péče o ně byly prováděny v souladu s legislativou CEA-OH/9421/2 vládního nařízení Katalánska. Embrya získaná pářením byla chována v médiu E3 za kontrolované teploty 28,5 °C až do dne 7 po oplodnění - (dpf), kdy byly provedeny experimenty.
Antikonvulzivní účinek látek byl hodnocen ve dvou modelech epileptických záchvatů u laboratorních hlodavců (PTZ model a 6Hz model) s použitím tří věkových skupin samců laboratorních potkanů kmene Wistar. Byla použita dvanáctidenní (P12 - pro PTZ model) nebo patnáctidenní (P15 - pro Hz model) a dvaceti pětidenní (P25) mláďata a rovněž dospělá zvířata (P60). Den porodu byl stanoven jako PO. Experimenty hodnotící prokognitivní účinek byly provedeny s dospělými samci laboratorního potkana kmene Wistar a Long-Evans (3 měsíce, 300-400 g). Všechna zvířata pocházela z chovného zařízení Fyziologického ústavu AV ČR (oprávnění 1396/2014-MZE-17214). Zvířata byla chována ve standartních podmínkách (21 + 1 °C, vlhkost 50-60 %, světelný cyklus 12/12) se stálým přístupem k vodě a potravě. Veškeré manipulace se zvířaty byly provedeny v souladu postupy ht&s.7/www.nc3rs.org.uVaniveguidelines a v souladu se zákonem č. 246/1992 Sb. a mezinárodními zákony a předpisy (EU Directive 2010/63/EU for animal experiments).
Vzhledem k zákonem danému etickému požadavku na redukci počtu laboratorních zvířat použitých v pokusech byla jako modelová molekula ke studiu antikonvulzivních a neuroprotektivních vlastností v animálních modelech hlodavců vybrána z Příkladu 1.
Antikonvulsivní účinky steroidních derivátů v modelu akvarijní rybky dánio pruhované (Danio rerio)
Primárně byl studován antikonvulzivní účinek nárokovaných látek na nervový systém v embryonálním testu s organismem akvarijní rybky dánio pruhované (Danio rerio). Tento test je moderní alternativou k testům na dospělých zvířatech, mající srovnatelnou vypovídací hodnotu. Danio rerio je velmi všestranný organismus, který vykazuje řadu fyziologických podobností se savci včetně člověka (Expert Opin. Drug Metab. Toxicol. 2009, 5, 393). Antikonvulzivní účinek steroidních derivátů byl studován na jedincích o stáří 7 dpf („days post fertilization“ - dny po oplození). Steroidní deriváty byly testovány ve 3 koncentracích (1, 3 a 5 pmol.I1). Jako negativní kontrola byl použit 1% (obj./obj.) roztok DMSO. Epileptiformní aktivita byla vyvolána aplikací pentylentetrazolu (PTZ) v dávce 5 mmol.l1. Topiramát, klinicky používané léčivo pro tuto indikaci, byl použit jako komparátor. Výsledky byly analyzovány softwarem GraphPad Prism a statistická významnost byla stanovena testem One-way ANOVA s následným srovnáním s použitím Turkeyho testu. Spontánní pohyby dánia pruhovaného a jeho reakce na impulsy světla a tmy byly nahrávány na zařízení DanioVision a analyzovány pomocí softwaru EthoVision XT 12 (Noldus Information Technologies, Wageningen, Holandsko). Tento systém obsahuje kameru umístěnou nad nádržkou s cirkulující vodou a s teplotním senzorem nastaveným na 28 °C. Jednotlivé rybky jsou umístěny v 48-jamkové destičce, což umožňuje softwarem specificky kontrolovat a modifikovat podmínky experimentu (např. stimulaci světlem a tmou). Před každým experimentem byla zvířata ponechána 10 minut ve tmě pro aklimatizaci a teprve poté byla vystavena sérii impulzů světla a tmy. Protokol experimentu se skládá z několika fází: (a) 15 minut s osvětlením destičky; (b) série 5 krátkých záblesků světla, které indukují epileptické záchvaty; (c) 25 minut střídání světla a tmy po 5 minutách (tzv. dark/light test). Z každé fáze experimentu se dají získat odlišná experimentální data. V první fázi experimentu se získají informace o spontánním lokomočním pohybu zvířete. Druhá část experimentu umožňuje analyzovat změny chování na světelný stimul vyvolávající epileptiformní aktivitu a vyhodnotit její základní charakteristiky: rychlost plavání a rychlost otáčení (specifické nepředvídatelné pohyby). Poslední část experimentu umožňuje vyhodnotit anomálie či odchylky od přirozeného chování dánia pruhovaného (pohyb ve tmě vs přirozený klidový stav při osvětlení). Tyto údaje charakterizují případný sedativní účinek testovaných látek.
CZ 2019 - 216 A3
Antikonvulzivní efekt látek byl studován v dávkách 1, 3 a 5 mg/kg pro látky uvedené v Příkladu 1, Příkladu 2 a v Příkladu 3. Výsledky (viz Obr. 1 a Obr. 2) ukazují, že všechny látky signifikantně snížily epileptiformní lokomoční aktivitu způsobenou aplikací PTZ ve všech třech hodnocených parametrech - spontánní lokomoční aktivitě, rychlosti plavání a rychlosti otáčení. Všechny látky také snížily epileptiformní lokomoční aktivitu ve fázi dark/ligh testu, aniž by způsobily sedací.
Antikonvulsivní účinky steroidních derivátů 11 laboratorních potkanů
Antikonvulzivní účinek byl studován na dvou věkových skupinách mláďat laboratorního potkana kmene Wistar, 12 či 15denních a 25denních, a na dospělých jedincích (P60). Důvodem dvou věkových skupin mláďat potkanů byla jednak existence novorozeneckých záchvatů (dětských epileptických encefalopatií), které jsou ve většině případů rezistentní k současné farmakoterapii k tomuto účelu jsme testovali mladší skupinu, kde vývoj mozku odpovídá vývoji mozku u lidských kojenců. Zvířata 25denní pak odpovídají dětem školního věku. Byly použity dva modely: konvulsivní generalizované tonicko-klonické záchvaty vyvolané podkožní aplikací pentylentetrazolu (PTZ) v dávce 100 mg/kg a záchvaty vyvolané transkomeální elektrickou stimulací o frekvenci 6 Hz trvající 3 s. Pulsy jsou bifazické a mají trvání 1 ms, stimulátor firmy Ugo Basile generuje pulzy s konstantní intenzitou proudu. Křeče vyvolané PTZ představují model lidských generalizovaných tonicko-klonických záchvatů (GTCS), záchvaty vyvolané 6Hz stimulací jsou obecně považovány za model temporálních (psychomotorických, komplexních parciálních) záchvatů. Výsledky jsou prezentovány jako průměr+SEM. Rozdíly v latencích a tíži záchvatů byly stanoveny testem ANOVA s následným srovnáním s použitím Holm-Sidak testu. Incidence byly porovnány s použitím Fischerova testu. Hodnota p byla stanovena < 0.5.
Účinnost steroidních derivátů v modelu záchvatů vyvolaných PTZ u laboratorních potkanů
Antikonvulzivní efekt látek byl studován na dvou věkových skupinách mláďat laboratorního potkana kmene Wistar - 12denních a 25denních. Steroidní deriváty byly aplikovány v dávkách 1, 5, a 10 mg/kg i.p., 20 minut před aplikací PTZ (100 mg/kg, s.c.).
Antikonvulzivní účinek látky z Příkladu 1 je zobrazen na Obr. 3. U 12denních mláďat byla dávkou 1 mg/kg potlačena tonická fáze záchvatu, dávka 5 mg/kg signifikantně snížila výskyt záchvatů a dávka 10 mg/kg je zcela potlačila. Latence generalizovaných záchvatů byly signifikantně prodlouženy dávkami 1 a 5 mg/kg, index závažnosti záchvatů (tj. tíže záchvatů) klesal v závislosti na dávce. U 25denních mláďat dávky 5 a 10 mg/kg signifikantně snížily výskyt generalizovaných tonicko-klonických v dávce 10 mg/kg záchvatů bez specifického ovlivnění jednotlivých fází. Latence záchvatů po dávce 1 mg/kg se významně nezměnily, po obou vyšších dávkách se však záchvaty vyskytly jen u jednoho zvířete. Index závažnosti záchvatů kopíroval výskyt záchvatů. Antikonvulzivní účinek látky z Příkladu 2 je zobrazen na Obr. 4. Látka v Příkladu 2 v dávkách 5 a 10 mg/kg signifikantně potlačila výskyt generalizovaných záchvatů i tíži epileptických projevů u obou věkových skupin. Antikonvulzivní účinek látky z Příkladu 3 je zobrazen na Obr. 5. Látka z Příkladu 3 v dávkách 5 a 10 mg/kg potlačila výskyt generalizovaných záchvatů u 25denních mláďat. U 12denních zvířat byla účinná dávka 5 mg/kg.
Antikonvulzivní účinek látky z Příkladu 1 u dospělých zvířat je zobrazen na Obr. 6. U dospělých zvířat látka z Příkladu 1 v dávce 10 mg/kg signifikantně snižovala výskyt kompletních generalizovaných záchvatů s tonickou fází (GTCS) bez ovlivnění výskytu minimálních, převážně klonických záchvatů. Latence generalizovaných záchvatů byla významně snížena dávkou 5 mg/kg, po které měla záchvat pouze dvě z osmi zvířat a v případě dávky 10 mg/kg dokonce jen jedno zvíře. Tíže záchvatů byla signifikantně snížena po obou dávkách, 5 i 10 mg/kg.
Účinnost steroidních derivátů v modelu záchvatů vyvolaných elektrickou stimulací 6 Hz u laboratorních potkanů
CZ 2019 - 216 A3
Pro tento test byla použita mláďata 15denní, protože ta již mají rozlepená víčka a není nutné je chirurgicky rozevírat. Jako druhá skupina byla použita zvířata 25denní. Citlivost dvou uvedených věkových skupin na tuto stimulaci je různá, proto jsme použili u 15denních mláďat intenzity proudu 40, 60 a 80 mA, zatímco u 25denních mláďat to byly intenzity 20, 40 a 60 mA. Mezi jednotlivými stimulacemi jsme dodržovali 20ti minutový odstup, 10 minut před každou stimulací byly obě oči znecitlivěny kapkou mesocainu. Steroidní deriváty byly podány v dávce 10 mg/kg, i.p. 20 min před první stimulací. Antikonvulzivní účinek látky z Příkladu 1 u 15 a 25denních zvířat je zobrazen na Obr. 7. U 15denních zvířat látka v testované dávce signifikantně potlačovala záchvaty vyvolané stimulací o intenzitě 60 ale ne 80 Hz. Podání PPG však významně zkrátilo trvání záchvatů u obou intenzit. Intenzita záchvatů nebyla ovlivněna. Starší věková skupina ukázala tendenci k nižšímu výskytu záchvatů, které po obou účinných intenzitách stimulace trvaly signifikantně kratší dobu a měly nižší intenzitu.
Antikonvulzivní účinek látky z Příkladu 1 u dospělých zvířat je zobrazen na Obr. 8. U dospělých potkanů látka ovlivnila práh pro vyvolání křečí v 6Hz modelu epileptických záchvatů pouze nesignifikantně. Tendence ke zvýšení prahu se objevila po podání nejvyšší testované dávky 10 mg/kg i.p. Nicméně, tyto výsledky spolu s výsledky získanými ve stejném modelu na mláďatech jednoznačně prokazují vyšší účinnost a širší spektrum antikonvulzivní účinnosti v pediatrických modelech.
Účinnost látky z Příkladu 1 v modelech afektivních poruch (komorbidit epilepsie)
Behaviorální modely afektivních poruch jsou založeny na vystavení stresové situaci. Provedeny byly dva behaviorální testy: test ve vyvýšeném křížovém bludišti (PPM, Nat. Protoč. 2007, 2, 322) a v modelu „novelty suppressed feeding“ (NSF, Interdiscip. Toxicol. 2017, 10. 40).
V testu LPM byla testovaná sloučenina aplikována v dávkách 1,3 a 10 mg/kg, i.p. 30 minut před samotným testováním v bludišti. Během 10 minut pobytu v bludišti byly sledovanými parametry čas strávený v otevřených ramenech, v uzavřených ramenech a v centrální platformě. Aplikace látky z Příkladu 1 v dávce 10 mg/kg vedla ke snížení všech sledovaných parametrů anxiety. Test EPM průkazně doložil anxiolytické vlastnosti látky z Příkladu 1.
V testu NSF byla sloučenina z Příkladu 1 byla aplikována i.p. 30 min před samotným měřením v dávkách 0,1; 0,3; 1; 3 a 10 mg/kg. Výsledky ukázaly signifikantní pokles latence do zahájení příjmu krmivá u dávky 0,3 mg/kg, tedy anxiolytické vlastnosti. U dávek 1 a 3 mg/kg byl zaznamenán trend ke snížení doby latence příjmu krmivá.
Účinnost látky z Příkladu 1 v modelech schizofrenii podobného chování a prokognitivního účinku
Schizofrenii podobné chování bylo vyvoláno i.p. aplikací dizocilpinu (MK-801) v dávce 0,1 mg/kg. Vliv látky z Příkladu 1 byl testován v behaviorálním testu „pasivní vyhýbání“ (passive avoidance) (Psychopharmacology (Berl). 2016, 233, 2077). Jedná se úlohu, která slouží ke studiu paměti a schopnosti učení.
Látka z Příkladu 1 byla aplikována 30 min i.p. před úlohou v dávkách 0,1; 1 a 3 mg/kg. Výsledky ukazují, že aplikace látky z Příkladu 1 intaktním zvířatům nenarušuje paměť hodinu po aplikaci averzivního podnětu. Vliv na snížení latence vstupu byl zaznamenán u latence měřené 24 h po asociaci již u dávky 0,1 mg/kg. Aplikace dizocilpinu vedla k poškození paměti, měřenému jako latence vstupu po 1 i 24 h po aplikaci averzivního stimulu. Aplikace látky z Příkladu 1 v dávce 0,1 mg/kg zabránila poškození paměti měřeno 1 h po averzivním stimulu. V ostatních dávkách a delším časovém odstupu byl pozorován obdobný trend. Aplikace látky z Příkladu 1 tedy vykazuje prokognitivní vliv, a to spíše u krátkodobé paměti.
CZ 2019 - 216 A3
Neuroprotektivní účinnost látky z Příkladu 1 v modelu excitotoxického poškození CNS
Neuroprotektivní vliv látky z Příkladu 1 byl testován v modelu bilaterální excitotoxické léze dorzálního hipokampu. Postup byl prováděn podle literatury (Neuropharmacology 2011, 61, 61). Tento model simuluje nadměrnou stimulaci NMDA receptorů, která se objevuje u řady patofyziologických stavů, což vede k toku vápníku do nitra neuronu a následně k apoptóze až nekróze. Klinicky se tento stav projevuje neurodegenerací a poškozením CNS.
Potkani byli náhodně rozděleni do tří skupin. Kontrolní zvířata zahrnovala operovaná zvířata, kterým byl do hipokampu aplikován fosfátový pufir o pH 7,4. Druhou skupinu, nazvanou NMDA, tvořila zvířata, kterým byly provedeny NMDA léze hipokampu. Zvířatům ve třetí skupině byl 5 minut po provedení NMDA léze aplikován PPG v dávce 1 mg/kg i.p. NMDA léze byla indukována infúzí excitotoxického NMDA (25 mmol.l1, objem 1 pl) do dorzálního hippocampu. kontrolní zvířata dostala sterilní PBS (10 mmol.l1). Látka z Příkladu 1 (1 mg/kg) nebo vehikulum bylo podáno 5 minut po ukončení infuze NMDA. Za 24 h po indukci excitotoxického poškození hipokampu byla provedena transcardiální perfúze. Mozková tkáň byla následně postfixována přes noc ve 4% PFA a následně v 10%, 20%, 30% (obj./obj.) sacharóze (ke kryoprotekci) pro histologickou evaluaci. Histologické poškození, resp. neuroprotektivní vliv látky z Příkladu 1 byl hodnocen pomocí obarvení degenerujících neuronů látkou Fluoro Jade B (Merck Millipore, katalogové číslo AG310-30MG), vyhodnocené oblasti zahrnuly: hipokampus - DG, hilus, CA3, CA1. Výsledky na Obr. 9 ukazují signifikantní snížení poškození dorsálního hipokampu po aplikaci látky z Příkladu 1. Tyto výsledky jasně dokládají neuroprotektivní účinek látky z Příkladu 1.
Průmyslová využitelnost
Sloučeniny podle předloženého vynálezu budou využitelné pro léčení onemocnění centrálního nervového systému, zejména epilepsie a záchvatových stavů u dětí. Kromě toho mohou být použity i k ovlivnění přidružených komorbidit. Jedná se například o deprese, úzkost, schizofrenii podobné chování, neurovývojové poruchy, afektivní poruchy a stresové poruchy. Nárokované látky lze v terapii použít samostatně, ale i jako adjuvantní léčbu k léčivům, která jsou v současné době schválena k terapii.
Claims (5)
1. sloučeniny obecného vzorce I,
(I) kde
R1 je methyl a potom R2 jsou dva vodíkové atomy, nebo vodíkový atom a Ci- Cý alkyl s přímým nebo rozvětveným uhlíkovým řetězcem, nebo
R1 a R2 dohromady tvoří skupinu -(CThjn-. kde n=2 nebo 3, který s původními uhlíkovými atomy 1 a 3 v obecném vzorci 1 vytváří pěti nebo šesti členný cyklus,
R3 je skupina -O-(CH2)n -Om-„ kde n = 0-2 a m = 0 nebo 1,
R4 j e 3 a5 β-androstan 3,11,17,17-tetrayl,
R5 je vodíkový atom nebo hydroxylová skupina,
R6 je atom vodíku a potom Rje zvolen ze skupiny, zahrnující atom vodíku, acetylovou skupinu, kyano skupinu, C1-C2 kyanoalkylovou skupinu, 1,1-difluoroethylovou skupinu a přímý nebo větvený Ci- C4 alkyl, nebo R6 a R7 společně představují strukturu, zvolenou ze skupiny zahrnující Ci- C2 alkyliden, kyanomethylenovou skupinu, atom kyslíku, dva atomy fluoru.
Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1, zvolené ze skupiny, zahrnující:
(3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Acetyl-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl (S)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (1), (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Acetyl-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl (R)-6-oxopiperidin-2-karboxylát (2), (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Kyano-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl (R)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (3), (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Acetyl-ll-hydroxy-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcycklopenta[a]fenantren-3-yl (S)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (4), (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S)-10,13-Dimethylhexadekahydro-lH-cyklopenta[a]fenantren-3-yl (S)5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (5), (3R,5R,8R,9S, 1 OS, 13 S, 14 S)-10,13 -Dimethyl-17-oxohexadekahydro- lH-cyklopenta[a]fenantren3-yl (R)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (6),
CZ 2019 - 216 A3 (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S)-10,13-Dimethylhexadekahydro-lH-cyklopenta[a]fenantren-3-yl (R)6-oxopiperidin-2-karboxylát (7), (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Kyano-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl (R)-6-oxopiperidin-2-karboxylát (8), (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Acetyl-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl acetylglycinát (9), (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-acetyl-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl acetylleucinát (10), (3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-10.13,17-Trimethylhexadekahydro-lH-cyklopenta[a]fenantren3-yl (S)-5-oxopyrrolidine-2-karboxylát (II).
(3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,Z)-17-Ethyliden-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl (R)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (12),
2. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 a konkrétní sloučeniny podle nároku 2, pro použití jako léčiva.
2-((3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Acetyl-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl)ethyl (R)-6-oxopiperidine-2-karboxylát (17).
2-((3R,5R,8R,9S,10S,13S,14S,17S)-17-Acetyl-10,13-dimethylhexadekahydro-lHcyklopenta[a]fenantren-3-yl)ethyl (R)-5-oxopyrrolidin-2-karboxylát (16),
2-(((3R,5R,8R,9S, 1 OS, 13 S, 14S)-10,13-Dimethylhexadekahydro-lH-cyklopenta[a]fenantren-3yl)oxy)ethyl (S)-6-oxopiperidin-2-karboxylát (14),
2-(((3R,5R,8R,9S, 1 OS, 13 S, 14S)-10,13-Dimethylhexadecahydro-lH-cyclopenta[a]fenantren-3 yl)oxy)ethyl (R)-5-oxopyrrolidine-2-karboxylát (13).
3. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 a konkrétní sloučeniny podle nároku 2 pro použití k léčení epilepsie či onemocnění spojených s křečemi, jako jsou například záchvaty spojené s hypoxií; záchvaty spojené s traumatickým poškozením mozku; záchvaty spojené s intoxikací; patologické změny způsobené hyperexcitací.
4. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 a konkrétní sloučeniny podle nároku 2, pro použití k léčení stavů, které mohou doprovázet epilepsii, jako jsou afektivní poruchy, deprese, posttraumatické stresové poruchy (PTSD) a nemoci související se stresem, anxieta, schizofrenie a psychotické poruchy, související ischemické poškození CNS, neurodegenerativní změny a poruchy, roztroušená skleróza.
5. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 a konkrétní sloučeniny podle nároku 2, pro použití k výrobě veterinárního nebo humánního farmaceutického přípravku k léčení epilepsie či onemocnění spojených s křečemi, jako jsou například záchvaty spojené s hypoxií; záchvaty spojené s traumatickým poškozením mozku; záchvaty spojené s intoxikací; patologické změny způsobené hyperexcitací.
6. Farmaceutický prostředek pro humánní i veterinární použití, vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní složku sloučeninu obecného vzorce I podle nároku 1 a/nebo sloučeninu podle nároku 2.
7. Farmaceutický prostředek podle nároku 6 pro použití k léčení epilepsie či onemocnění
CZ 2019 - 216 A3 spojených s křečemi, jako jsou například záchvaty spojené s hypoxií; záchvaty spojené s traumatickým poškozením mozku; záchvaty spojené s intoxikací; patologické změny způsobené hyperexcitací.
5 8. Farmaceutický prostředek podle nároku 6 pro použití k léčení stavů, které mohou doprovázet epilepsii, jako jsou afektivní poruchy, deprese, post-traumatické stresové poruchy (PTSD) a nemoci související se stresem, anxieta, schizofrenie a psychotické poruchy, související ischemické poškození CNS, neurodegenerativní změny a poruchy, roztroušená skleróza.
ίο 9. Použití sloučenin podle obecného vzorce I podle nároku 1 pro výrobu analytických standardů používaných v experimentálním výzkumu a analytické chemii či jako sloučenin obsažených v potravinových doplňcích či kosmetických přípravcích určených pro zlepšování reakcí jednotlivých částí organismu vůči onemocněním spojených s křečemi.
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2019-216A CZ309617B6 (cs) | 2019-04-05 | 2019-04-05 | 3α5ß-Neuroaktivní steroidy pro léčbu epilepsie a záchvatových onemocnění |
| US17/439,688 US20220162257A1 (en) | 2019-04-05 | 2020-04-02 | 3alpha, 5beta-neuroactive steroids for the treatment of epilepsy and seizure diseases |
| PL20718527.3T PL3947410T3 (pl) | 2019-04-05 | 2020-04-02 | 3alfa, 5beta–neuroaktywne sterydy do leczenia padaczki i chorób napadowych |
| PCT/CZ2020/050017 WO2020200335A1 (en) | 2019-04-05 | 2020-04-02 | 3alpha, 5beta-neuroactive steroids for the treatment of epilepsy and seizure diseases |
| EP20718527.3A EP3947410B1 (en) | 2019-04-05 | 2020-04-02 | 3alpha, 5beta-neuroactive steroids for the treatment of epilepsy and seizure diseases |
| JP2021558713A JP7248819B2 (ja) | 2019-04-05 | 2020-04-02 | てんかんおよび発作疾患の治療のための３α５β－神経活性ステロイド |
| CA3128921A CA3128921C (en) | 2019-04-05 | 2020-04-02 | 3alpha, 5beta-neuroactive steroids for the treatment of epilepsy and seizure diseases |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2019-216A CZ309617B6 (cs) | 2019-04-05 | 2019-04-05 | 3α5ß-Neuroaktivní steroidy pro léčbu epilepsie a záchvatových onemocnění |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2019216A3 true CZ2019216A3 (cs) | 2020-10-14 |
| CZ309617B6 CZ309617B6 (cs) | 2023-05-24 |
Family
ID=70285346
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2019-216A CZ309617B6 (cs) | 2019-04-05 | 2019-04-05 | 3α5ß-Neuroaktivní steroidy pro léčbu epilepsie a záchvatových onemocnění |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20220162257A1 (cs) |
| EP (1) | EP3947410B1 (cs) |
| JP (1) | JP7248819B2 (cs) |
| CA (1) | CA3128921C (cs) |
| CZ (1) | CZ309617B6 (cs) |
| PL (1) | PL3947410T3 (cs) |
| WO (1) | WO2020200335A1 (cs) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114907436A (zh) * | 2021-02-08 | 2022-08-16 | 南京诺瑞特医药科技有限公司 | 3-羟基-5-孕烷-20-酮衍生物的晶型及其制备方法和用途 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2600653B1 (fr) * | 1986-06-24 | 1988-12-16 | Pasteur Strasbourg Universite | Composes de synthese associative d'acides amines soufres ou non soufres avec des derives du d-4 pregnene 3,20-dione ou avec des derives du d-1,4 pregnadiene 3,20-dione aux proprietes glucocorticoides et anti-inflammatoires, procedes d'obtention, compositions pharmaceutiques les contenant. proprietes pharmacologiques et applications |
| FR2607504B1 (fr) * | 1986-12-02 | 1989-01-27 | Rhone Poulenc Sante | Nouveaux derives de l'isoindolinone, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent |
| JP4380508B2 (ja) | 2003-11-28 | 2009-12-09 | 田辺三菱製薬株式会社 | 医薬組成物 |
| US7329763B1 (en) * | 2006-09-11 | 2008-02-12 | New Cell Formulations Ltd | Creatine pyroglutamic acid salts and methods for their production and use in individuals |
| US20080103105A1 (en) * | 2006-09-22 | 2008-05-01 | Braincells, Inc. | HMG CoA REDUCTASE MEDIATED MODULATION OF NEUROGENESIS |
| CA2955684A1 (en) | 2008-02-26 | 2009-09-03 | Emory University | Steroid analogues for neuroprotection |
| CZ303037B6 (cs) | 2009-05-28 | 2012-03-07 | Ústav organické chemie a biochemie, Akademie ved CR, v. v. i. | Deriváty pregnanolonu substituované v poloze 3alfa, zpusob jejich výroby a jejich použití |
| WO2016036724A1 (en) | 2014-09-02 | 2016-03-10 | The Texas A&M University System | Method of treating organophosphate intoxication |
| CN108148106A (zh) * | 2016-12-05 | 2018-06-12 | 江苏恩华络康药物研发有限公司 | 一类水溶性别孕烯醇酮衍生物及其用途 |
| CN108517001A (zh) * | 2018-05-17 | 2018-09-11 | 江苏恩华络康药物研发有限公司 | 水溶性别孕烯醇酮衍生物及其用途 |
-
2019
- 2019-04-05 CZ CZ2019-216A patent/CZ309617B6/cs unknown
-
2020
- 2020-04-02 PL PL20718527.3T patent/PL3947410T3/pl unknown
- 2020-04-02 EP EP20718527.3A patent/EP3947410B1/en active Active
- 2020-04-02 US US17/439,688 patent/US20220162257A1/en not_active Abandoned
- 2020-04-02 CA CA3128921A patent/CA3128921C/en active Active
- 2020-04-02 WO PCT/CZ2020/050017 patent/WO2020200335A1/en not_active Ceased
- 2020-04-02 JP JP2021558713A patent/JP7248819B2/ja active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA3128921C (en) | 2023-08-01 |
| PL3947410T3 (pl) | 2025-06-23 |
| US20220162257A1 (en) | 2022-05-26 |
| CZ309617B6 (cs) | 2023-05-24 |
| JP7248819B2 (ja) | 2023-03-29 |
| JP2022527327A (ja) | 2022-06-01 |
| EP3947410C0 (en) | 2025-02-12 |
| CA3128921A1 (en) | 2020-10-08 |
| EP3947410A1 (en) | 2022-02-09 |
| EP3947410B1 (en) | 2025-02-12 |
| WO2020200335A1 (en) | 2020-10-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7617057B2 (ja) | ３，３－二置換１９－ノルプレグナン化合物およびその使用 | |
| CN105246486B (zh) | 神经活性甾类化合物 | |
| CN113956315B (zh) | 神经活性类固醇、组合物、及其用途 | |
| US8354395B2 (en) | Method for providing neuroprotection from spinal muscular atrophy | |
| US20220267780A1 (en) | Conjugates of bile acids and their derivatives for active molecules delivery | |
| BR112016000975B1 (pt) | Compostos esteróides neuroativos e composições compreendendo os mesmos | |
| BRPI0718945B1 (pt) | novos esteróides apresentando solubilidade em água e resistência contra metabolismo aumentadas, e métodos para sua produção | |
| EP3795578A2 (en) | Hydroxysteroid compounds, their intermediates, process of preparation, composition and uses thereof | |
| CZ2019216A3 (cs) | 3ą5ß-Neuroaktivní steroidy pro léčbu epilepsie a záchvatových onemocnění | |
| JP5731397B2 (ja) | ３，５−セコ−４−ノル−コレスタンの新規オキシム誘導体、それを含む医薬組成物、及びその調製方法 | |
| CN108218945B (zh) | 去氧胆酸衍生物、其制备方法、药物组合物及用途 | |
| CN108218946A (zh) | 一种去氧胆酸类化合物、其制备方法及应用 | |
| WO2017202266A1 (zh) | 一种2-氨基-3-取代巯基丙酸酯衍生物，制备方法及其应用 | |
| RU2808165C2 (ru) | Нейроактивные стероиды, композиции и их применения | |
| HK40001824B (zh) | 3,3-二取代的19-去甲孕甾烷化合物、组合物、及其用途 | |
| Buisson | Bordet et a |