CZ20033222A3

CZ20033222A3 - Použití alkanoyl L-karnitinu k přípravě léčiva k léčbě anhedonie

Info

Publication number: CZ20033222A3
Application number: CZ20033222A
Authority: CZ
Inventors: Menotti Calvani; Luigi Mosconi
Original assignee: Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S. P. A.
Priority date: 2001-05-29
Filing date: 2002-05-24
Publication date: 2004-06-16
Also published as: MXPA03010920A; HUP0400007A2; KR20040003031A; WO2002096411A1; PL367628A1; DE60216090D1; EP1399143B1; ES2275881T3; JP2004532867A; US20040171685A1; CA2448246A1; DE60216090T2; ATE345124T1; EP1399143A1; PT1399143E; SK15862003A3; DK1399143T3; US20060148896A1

Description

Předložený vynález se týká použití alkanoyl-L-karnitinu k přípravě léčiva k léčení anhedonie.

Dosavadní stav techniky

Anhedonie je ta stránka osobnosti, která se obvykle vyskytuje u pacientů se schizofrenií a dalšími patologickými stavy (Can. Psychiatr. Assoc. J., 23, (7), 487 -492, listopad 1978) charakterizovaná sníženou citlivostí na podnět, který pacient již jednou zažil.

J. Clin Pharm. Ther., 25, (5), 363 - 371, říjen 2000 popisuje použití sertralinu k léčbě takovéhoto patologického stavu.

Psychopharmacology (Berl.) 109, (4), 433 - 438, 1992 popisuje použití fluoxetinu a maprolitinu k léčbě anhedonie.

I když se obvykle používají, nejsou ani psychoterapie, ani psychoaktivní léčiva považována za vhodné způsoby léčby takového patologického stavu (Can. Psychiatr. Assoc. J., 23, (7), 487 -492, listopad 1978). Další léčiva, která mohou být vhodná k léčbě anhedonie nejsou známa.

Vzhledem ke skutečnosti, že k léčbě anhedonie je k dispozici pouze několik léčiv, a uvažujíc, že ani psychologická, ani psychoaktivní terapie ·· 0000

0 • 0 0 0 000«

- 2 není účinná, existuje v oblasti medicíny značná potřeba léčiv vhodných k léčbě takových patologických stavů.

Podstata vynálezu

Nyní bylo zjištěno, že alkanoyl-L-karnitiny jsou vhodné látky k léčbě anhedonie.

Předmětem předloženého vynálezu je tedy použití alkanoyl-L-karnitinu, kde je alkanoylovou skupinou lineární nebo rozvětvený řetězec se 2 až 5 uhlíkovými atomy, nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl, k přípravě léčiva k léčbě anhedonie. Alkanoyl-L-karnitin se vybírá ze skupiny skládající se z acetyl-, propionyl-, valeryl-, isovaleryl-, butyryl- a isobutyryl-L-karnitinu; přednost se však dává acetyl-L-karnitinu.

Farmaceuticky přijatelnou solí alkanoyl-L-karnitinu je míněna sůl s kyselinou, která nedává vznik nežádoucím toxickým nebo vedlejším účinkům. Tyto kyseliny jsou farmakologům a odborníkům ve farmacii známy.

Takovými, nijak vynález neomezujícími solemi, jsou například: chlorid, bromid, orotan, kyselý aspartan, kyselý citran, citran hořečnatý, kyselý fosforečnan, fumaran a kyselý fumaran, fumaran hořečnatý, mléčnan, maleinan a kyselý maleinan, slizan, kyselý šťavelan, pamoan, kyselý pamoan, kyselý síran, glukofosfát, vínan, kyselý vínan, vínan hořečnatý, 2-aminoethansulfonan, 2-aminoethansulfonan hořečnatý, vínan cholinu a trichloracetát.

··

- 3 Příklady provedení

Následující příklady předložený vynález lépe objasní. V průběhu pokusných zkoušek uváděných dále, byl studován účinek acetyl-Lkarnitinu podle pokusného typu založeného na anhedonii, model zvláštního symptomu trvalého stresu.

Model anhedonie je založen na pozorování, že událost vystavená opakovanému neodstranitelnému stresu zabraňuje vyvinutí vyvolané chuťové reakce udržované vysoce chutnou potravou (vanilkový cukr) u krys krmených ad libitum (Behav. Pharmacol., 8, 619 - 628, 1997).

Zvířata, na něž se působilo acetyl-L-karnitinem ukazovala, že jsou zcela chráněna proti negativním účinkům stresu na vanilkovým cukrem vyvolané a udržované získávané chuťové reakci (VAB) zabráněním snižování dopaminergické transmise v nucleus accumbens (Nacs) jakožto výsledku stresu.

V průběhu těchto pokusů byla zkoušena společně s acetyl-L-karnitinem i jiná známá antidepresantní léčiva, jako je imipramin (IMI) a fluoxetin (FLX) (Am. J. Psychiatry, 157, (3), 344 - 350, březen 2000).

Neočekávaně bylo zjištěno, že acetyl-L-karnitin je jediným účinným léčivem, které antagonizuje snižování účinku při vystavení opakovanému stresu při dopaminergické transmisi v Nacs. Acetyl-L-karnitin tak umožňuje zvířatům vnímat chutnou potravu jako dostatečnou posilu k podporování motivované chuťové reakce.

- 4 Příklad 1

Vliv dlouho trvajícího působení acetyl-L-karnitinu na získávání chuťové reakce.

Byly provedeny dva pokusy. První pokus byl zaměřen na zkoumání, zda podávání acetyl-L-karnitinu krysám může zabránit negativnímu účinku trvalého stresu na získávání chuťové reakce podporované vanilkovým cukrem (VAB).

V tomto pokusu dostávaly krysy fysiologický roztok (FR) nebo acetyl-Lkarnitin (ALCAR). Podávání začalo 2 týdny před průpravnou zkouškou a pokračovalo během období pokusu, jak to je dále popsáno.

Čtyřicet krys Spraque Dawley o hmotnosti přibližně 250 gramů bylo rozděleno do 4 skupin podle následujícího schématu:

a) VAB (kontrolní skupina - CTR): 10 krys dostávalo fysiologický roztok (1 ml.kg'¹ IP) dvakrát denně (BID) po dobu 14 dní. Potom začala třítýdenní průpravná zkouška v ypsilonovém bludišti (Y maze) (Brain. Res. Protocols, 7, (1), 11 - 20, 2001).

b) acetyl-L-karnitin: 10 krysám byl podáván acetyl-L-karnitin (10 mg.kg'¹IP, BID o objemu 1 ml.kg'¹) po dobu 14 dní. Potom začala průpravná zkouška v ypsilonovém bludišti.

c) stres: 10 krysám byl podáván fysiologický roztok (1 ml.kg'¹ IP, BID) po dobu 14 dní. Potom byla zvířata vystavena sledu výchozích zkoušek (u výchozích zkoušek byla zvířata vystavena jak nepředvídaným stresům (elektrické šoky) minimální intenzity a trvání, schopných vyvolat spolehlivé přizpůsobení reakce. Brain. Res. Protocols, 7, (1), 11 - 20, • · e · ··· · ·

- 5 2001); úniková zkouška (označovaná též jako „zkouška“) provedená 24 hodin po výchozí zkoušce k hodnocení změny vyvolané reakce (Brain. Res. Protocols, 7, (1), 11 - 20, 2001)); průprava pro ypsilonové bludiště a vystavení proceduře trvalého stresu střídavě po dnech (bludiště jeden den a stres následující den) po dobu tří týdnů (Brain. Res. Protocols, 7, (1), 11 - 20, 2001) při pokračujícím podávání fysiologického roztoku;

d) acetyl-L-karnitin + stres: 10 krysám byl podáván fysiologický roztok (10 ml.kg'¹ IP, BID) po dobu 14 dní. Potom byla zvířata vystavena sledu: výchozí zkouška, zkouška, průprava na ypsilonové bludiště a současné vystavení proceduře trvalého stresu ve střídajících se dnech (bludiště jeden den a stres následující den) po dobu tří týdnů, při pokračujícím podávání acetyl-L-karnitinu.

Ypsilonové bludiště tvořilo tři křídla. V jednom ze dvou rozbíhajících se křídel byl vanilkový cukr k získání chuťové reakce (průprava VAB, 3 týdny).

Na konci průpravy VAB všechna zvířata vystavená stresu prošla únikovou zkouškou (Brain. Res. Protocols, 7, (1), 11 -20, 2001).

Druhý pokus sloužil ke stanovení, zda by podávání L-karnitinu krysám antagonizovalo negativní účinek trvalého stresu na získávání VAB.

Čtyřicet krys bylo rozděleno do 4 skupin, z nichž v každé této skupině bylo 10 zvířat:

• « • β ·

- 6 e) VAB: fysiologický roztok (1 ml.kg'¹ IP, BID) byl podáván zvířatům po dobu 8 dní a potom začala průpravná zkouška v ypsilonovém bludišti na získávání VAB, zatímco se po 3 týdny pokračovalo v podávání fysiologického roztoku;

f) stres + VAB: zvířata byla vystavena výchozí zkoušce. Dvacet čtyři hodiny později byla podrobena k únikové zkoušce a potom byla vystavena proceduře s trvalým stresem po dobu 7 dní. V 9. dni začala průprava v ypsilonovém bludišti a stresu byla vystavena ve střídavých dnech;

g) acetyl-L-karnitin + stres + VAB: zvířata byla vystavena výchozí zkoušce. O dvacet čtyři hodin později prošla únikovou zkouškou. Potom byla vystavena po 7 dní protokolu trvalého stresu, přičemž dostávala 10 mg.kg'¹ IP, BID acetyl-L-karnitinu po dobu 8 dní. 9. den se s krysami začala v ypsilonovém bludišti průprava VAB a vystavení stresu ve střídavé dny, přičemž se po dobu 3 týdnů pokračovalo v podávání acetylL-karnitinu;

h) IMI + stres + VAB: zvířata byla vystavena výchozí zkoušce. O dvacet čtyři hodin později prošla únikovou zkouškou a potom byla vystavena po 7 dní protokolu trvalého stresu, přičemž dostávala po dobu 8 dní IP, BID 5 mg.kg'¹ imipraminu. 9. den se s krysami začala v ypsilonovém bludišti průprava VAB a vystavení stresu ve střídavé dny, přičemž se po dobu 3 týdnů pokračovalo v podávání IMI.

Na konci průpravného období prošla všechna zvířata únikovou zkouškou.

• >

• · • · » 0 0 » k · · · k · 0·· k · 0

0 0 0

- 7 O dva dny později byla zvířatům do nucleus accumbens (Nacs) implantována mikrodializační sonda (Brain. Res. Protocols, 5, (1), 16 24, 2000) a následující den byla provedena dialýza.

Jakmile bylo dosaženo základní hladiny dopaminu, byly krysám podávány jednotlivé dávky 5 mg.kg¹ kokainu IP v 0,1 ml objemu vody a dialyzovány dalších 60 minut.

Výsledky uvedené na obrázcích 1 a 2 ukazují hodnoty získávání VAB u kontrolních krys a krys, kterým byl podáván acetyl-L-karnitin a porovnávají je s hodnotami u krys vystavených trvalému stresu.

Je zřejmé, že vystavení trvalému stresu má negativní účinek na získávání motivované chuťové reakce.

denní výchozí podávání acetyl-L-karnitinu následované podáváním acetyl-L-karnitinu během průpravné fáze ve spojení s vystavením trvalému stresu zabránilo dále tomu, aby nastal negativní účinek. Krysy získávající VAB pod působením acetyl-L-karnitinu nakonec zcela zregenerovaly svoji schopnost předcházet negativnímu stimulu. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 1.

• · ·· ·· «·

- 8 • · · ® • · ··· • · · • 4 · · · · · • 4 · ·« · · · · · • i · · · · ·· «··· ·· ·

Tabulka 1

Skupina	počet úniků 24 hodin po výchozí zkoušce	počet úniků po průpravě na VAB a vystavení stresu
prostá^#	26,3±0,4
Stres	1,4±0,7***	2,7±0,9***
ALCAR + stres^§	25,8±2,5	26,4±2,9
^# = skupina uvedená ja	ko prostá byla podrobena únikové zkoušce, ale

nebyla podrobena proceduře trvalého stresu.

^§ = podáváno 10 mg.kg'¹ IP, BID acetyl-L-karnitinu po dobu 14 dní.

Údaje představují střední hodnotu ± standardní odchylku.

*** = p<0,001 porovnání s prostou skupinou a skupinou s acetyl-Lkarnitinem + stresem.

Získané výsledky ukazují, že acetyl-L-karnitin má antianhedonický účinek překrývající známé účinky IMI a FLX (Brain. Res. Protocols, 7, (1), 11 -20, 2001).

Ze souběžného porovnání mezi pokusy s acetyl-L-karnitinem zde popisovanými a známými pokusy s IMI a FLX vyplývá správný závěr, že podávání takových látek krysám po dobu 1 až 3 týdnů před vystavením proceduře trvalého stresu zabraňuje následné reakci vyvolané stresem. Skutečnost, že takové sloučeniny zabraňují vývoji nepříznivých účinků trvalého stresu na získávání VAB neznamená nezbytně, že bude antagonizovat působení stresu na motivovanou chuťovou reakci. K prozkoumání tohoto bodu byl proveden druhý výše popisovaný pokusný protokol.

Výsledky uvedené v následující tabulce 2 ukazují, že:

1) krysy vystavené trvalému stresu (Stres) nezískávají VAB;

* 9

- 9 • · ··· 9 · · 9 9 9· ····

9 9999 999 «9 99 90 9999 99 9

2) trvalé podávání IMI během vystavení stresu a průprava v ypsilonovém bludišti chrání krysy před negativním účinkem trvalého stresu na získávání VAB.

3) trvalé podávání acetyl-L-karnitinu během vystavení stresu a průprava v ypsilonovém bludišti zcela chránila krysy před negativním působením trvalého stresu na získávání VAB.

Tabulka 2

Skupina	Počet správných voleb
VAB	6,6±0,3
stres + VAB	2,4±0,8***
IMI + stres + VAB	2,9±1,2***
ALCAR + stres + VAB	7,6±0,5

ALCAR 10 mg.kg¹ IP, BID nebo IMI 5 mg.kg'¹ BID plus vystavení trvalému stresu po dobu 8 dní; 9. den průprava v ypsilonovém bludišti na VAB, 3 týdenní podávání ALCAR nebo IMI a vystavení stresu ve střídavé dny.

Údaje představují střední hodnotu ± standardní odchylku.

*** = p<0,001 porovnání se skupinou VAB a skupinou ALCAR + stres + VAB.

Výsledky v tabulce 3 ukazují, že krysy náležející do těchto skupin: stres + VAB, IMI + stres a acetyl-L-karnitin + stres mají akutní únikový deficit den před započetím procedury s průpravou VAB. Výsledky dále ukazují, že jak IMI, tak acetyl-L-karnitin zcela obrátil únikový deficit vyvolaný trvalým stresem.

i 119

9 9 11 · · · · • ·· ····· • · · 9

Cl 9 1 9 • » ♦ · • · « · · • · · 1 9

9 199 9 1

9 11

- 10 Tabulka 3

Skupina	počet úniků po 8 dnech	počet úniků po stresu + 3 týdenní průpravě VAB
prostá#	24,7±0,5
stres + VAB	1,6±0,6***
ALCAR + stres + VAB	1,0±0,5***	22,4±2,8
IMI + stres + VAB	2,5±1,1***	24,8±1,0
^# = skupina uvedená ja	ko prostá byla podrobena únikové zkoušce, ale

nebyla podrobena proceduře trvalého stresu.

ALCAR 10 mg.kg'¹ IP, BID nebo IMI 5 mg.kg'¹ BID plus vystavení trvalému stresu po dobu 8 dní; od 9. dne průprava v ypsilonovém bludišti na VAB (3 týdny), zatímco jak u třítýdenního podávání ALCAR nebo IMI, tak vystavení stresu ve střídavých dnech pokračovalo.

Údaje představují střední hodnotu ± standardní odchylku.

*** = p<0,001 porovnání s prostou skupinou, skupinou ALCAR + stres + VAB a skupinou IMI + stres + VAB na konci období průpravy.

Konečné výsledky jsou uvedeny na obrázcích 3 a 4.

a) základní hladiny extraneuronálního dopaminu a dopaminu v Nacs po náhlém podání kokainu byly významně nižší u krys připravovaných v ypsilonovém bludišti během trvalého vystavení stresu, než u kontrolních zvířat;

b) základní hladiny extraneuronálního dopaminu a dopaminu v Nacs po náhlém podání kokainu byly významně vyšší u krys připravovaných v ypsilonovém bludišti během trvalého vystavení stresu a těch, kterým byl podáván acetyl-L-karnitin, než u kontrolních zvířat;

c) základní hladiny extraneuronálního dopaminu a dopaminu v Nacs po náhlém podání kokainu byly významně nižší u krys připravovaných v ypsilonovém bludišti během trvalého vystavení stresu a těch, kterým

000 0 0 0 0 000

00000 0 0 00 00000

0 0 0 0 000

0 00 00 00 0 0 ύ

- 11 byl podáván IMI, než u kontrolních krys a překrýval základní hladinu pozorovanou u zvířat vystavených trvalému stresu;

d) hladina tvorby dopaminu v Nacs těch krys, které byly připravovány v ypsilonovém bludišti během trvalého vystavení stresu, a kterým byl podáván acetyl-L-karnitin, byla oproti těm, které byly v kontrolní skupině překryta.

Podávání IMI převrátilo deficit stresem vyvolaného úniku, ale neochránilo krysy před negativním účinkem trvalého stresu na získávání VAB, ani na dopaminergickou transmisi v Nacs.

Naopak, krysy, kterým byl podáván acetyl-L-karnitin, zregenerovaly svoji schopnost motivované chuťové reakce a vyhnuly se negativním stimulům. Hladina extraneurálního dopaminu v Nacs krys připravovaných na VAB během trvalého vystavení stresu, které dostávaly acetyl-Lkarnitin byly překryty až do úrovně zaznamenané u kontrolních krys, a to ať už v základním stavu, nebo po jediné dávce kokainu.

Model VAB je modelem motivované chuťové reakce podporovaný příjemnou chutí vanilkového cukru.

I když byly krysy krmeny standardní stravou podle libosti, jedly pelety vanilkového cukru dychtivě, a jejich konzumace vyvolávala významný vzrůst tvorby dopaminu v Nacs (Behav. Pharmacol., 8, 619 - 628, 1997).

Pokud jsou krysy vystaveny trvalému stresu, může, nebo nemusí být pro ně pelety s vanilkovým cukrem atraktivní a mohou je konzumovat, nebo nemusí.

9* 9*

99 · 9 · · * 9 · 9

9999 · · · 9999 • 9 99999 9 9 99 99999

9999 99«

99 9 9 9999 99 ·

- 12 Požíráním sladkých pelet však nenastala žádná změna v hladině extraneurálního dopaminu v krysím limbickém systému.

Vzrůst dopaminu v určitých diskrétních zónách mozku, jako například v prefrontálním kortexu a Nacs po vystavení vlivu stimulů prostředí, byl spojen s podmíněnou důležitostí takovými stimuly vyžadované, pokud přetrvávají.

Vzestup tvorby monoamínu prozrazuje, jaká je úroveň důležitosti jistých stimulů na tělo, které je připomíná.

Konzumování pelet s vanilkovým cukrem u kontrolních krys je důležitým stimulem, který zvyšuje uvolňování dopaminu v Nacs, a může podporovat motivovaci chuťové reakce, aby byla opakována.

Na druhé straně konzumace pelet s vanilkovým cukrem není vnímána jako důležitý stimul u krys vystavených stresu. Následně se tvorba dopaminu v Nacs nezvyšuje a nepůsobí jako posilovač motivované chuťové reakce.

Příklad 2

V tomto příkladu se studoval účinek 7 denního podávání acetyl-Lkarnitinu, IMI nebo FLX krysám vystaveným stresu, na serotoninergickou a dopaminergickou mozkovou transmisi.

Cílem tohoto pokusu bylo stanovit, zda 7 denní vystavení stresu změní tvorbu dopaminu a serotoninu v prefrontálním kortexu (CPF) a v pleně • 4 94 ·» • •44 4 ···· 44 4 4444

4 444 4 4 4 4444 4444 • 4 4444 44« •4 44 44 ···· 44 4

- 13 nucleus accumbens (Nacs), rovněž tak jako hodnotit účinky acetyl-Lkarnitinu, IMI nebo FLX na takové změny.

Šedesát krys bylo rozděleno do 6 skupin, v každé po 10 zvířatech takto:

a) kontrolní (Crt): zvířatům byl podáván fysiologický roztok 1 ml.kg'¹ IP, BID po dobu 8 dní;

b) acetyl-L-karnitin: zvířatům byl podáván acetyl-L-karnitin 10 mg.kg'¹ IP, BID po dobu 8 dní;

c) stres: zvířata byla podrobena výchozí zkoušce, 24 hodin poté byla zkoušena na schopnost úniku a potom byla vystavena trvalému stresu podle protokolu po dobu 7 dní, zatímco dostávala fysiologický roztok (po dobu 8 dní);

d) acetyl-L-karnitin + stres: zvířata byla podrobena výchozí zkoušce, 24 hodin poté byla zkoušena na schopnost úniku a potom byla vystavena trvalému stresu podle protokolu po dobu 7 dní, zatímco dostávala acetyl-L-karnitin 10 mg.kg'¹ IP, BID po dobu 8 dní;

e) IMI + stres: zvířata byla podrobena výchozí zkoušce, 24 hodin poté byla zkoušena na schopnost úniku a potom byla vystavena trvalému stresu podle protokolu po dobu 7 dní, zatímco dostávala IMI 5 mg.kg'¹IP, BID po dobu 8 dní;

f) FLX + stres: zvířata byla podrobena výchozí zkoušce, 24 hodin poté byla zkoušena na schopnost úniku a potom byla vystavena trvalému stresu podle protokolu po dobu 7 dní, zatímco dostávala FLX 5 mg.kg'¹IP, denně po dobu 8 dní;

• · · · · · · · 9 · 9 • · · 9· · · · · · · · ··»» • 4» 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9» 9 9 99 9 9 9

- 14 9. den byla všem zvířatům implantována dialyzační sonda do Nacs; 10. den byla zvířata dialyzována.

Základní hladiny dopaminu byly stanovovány během 60 minut.

V tomto okamžiku byly krysám nabídnuto 5 pelet s vanilkovým cukrem (potrava 1); během dalších 60 minut byly odebrány 4 vzorky dialyzační tekutiny.

Krysám byl ještě jednou nabídnut vanilkový cukr (potrava 2) a během 60 minut odebírány vzorky dialyzační tekutiny.

Nakonec dostaly krysy IP injekci 0,1 ml kokainu 5 mg.kg'¹ ve vodě, a během 60 minut jim byly odebírány vzorky dialyzační tekutiny.

Aby bylo možno vysvětlit ochranný účinek na získávání VAB vyvolaný u krys vystavených proceduře trvalého stresu acetyl-L-karnitinem, předpokládalo se, že pelety vanilkového cukru mohou ve značné míře ponechat příjemnou chuť u těch krys, které byly vystaveny trvalému stresu, a které dostávaly acetyl-L-karnitin.

Hypotéza též předpokládala, že IMI takový účinek nevyvolává.

Jinými slovy: zatímco krysy, jednou už vystavené stresu, kterým byl potom podáván acetyl-L-karnitin, konzumovaly pelety s vanilkovým cukrem a vykázaly zvýšenou tvorbu dopaminu v Nacs, krysy nejprve vystavené stresu, a které potom dostávaly IMI nekonsumovaly pelety s vanilkovým cukrem a nevykázaly zvýšenou tvorbu dopaminu v Nacs. Acetyl-L-karnitin je tedy možno označit jako první sloučeninu schopnou antagonizovat anhedonii vyvolanou trvalým stresem.

• * ·· «9 99 «9

99 9 9 «9 9 9 99

9999 99 9 9 999

999999 9 9 99 99999

9999 9 9 φ

9< 99 99 9999 99 9

- 15 Ke sledování tohoto bodu byl proveden pokus ke stanovení účinku 7 denního podávání IMI, FLX nebo acetyl-L-karnitinu krysám vystaveným stresu, na cerebrální dopaminergickou transmisi.

Obrázky 5 a 6 ukazují, že po 7 denním vystavení stresu byly základní hladiny dopaminu v Nacs významně vyšší u krys, které dostávaly acetylL-karnitin, než u kontrolních krys; základní hladiny dopaminu v limbické zóně u skupiny krys se stresem byly významně nižší než u kontrolní skupiny.

Vzestup dopaminu v Nacs po náhlém podání kokainu byl významně vyšší u krys, které dostávaly acetyl-L-karnitin a značně nižší u zvířat náležejících do skupiny se stresem, než u kontrolních krys. Ani podávání IMI, ani podávání FLX nebylo schopno chránit krysy před neurochemickými účinky pocházejícími z opakovaného vystavení stresu.

Pokud byla zvířata na druhé straně vystavena stresu, hladiny extraneuronálního dopaminu v Nacs překryly ty, které byly pozorovány u kontrolní skupiny, a to jak za základních podmínek, tak po podání kokainu.

V souhlasu s výsledky popisovanými v Neuroscience, 89, 637 - 641, 1999 a v Behav. Pharmacol., 8, 619 - 628, 1997, malý, avšak významný vzrůst uvolňování dopaminu v Nacs bylo vyvoláno konzumací pelet s vanilkovým cukrem u kontrolních zvířat a u skupiny s acetyl-Lkarnitinem, a rychle se vyvinula na takový účinek tolerance.

Výsledky jsou uvedeny v tabulce 4.

A* « · ·· A · ♦ A A A · *· ·

A A A A ♦ A A

A · AAA AAA 9

9 9 9 9 9 • A 9 9 9 9 99 9 9

9

9 99 «

- 16 Tabulka 4

skupina	Dopamin (maximální procentní vzrůst)
kontrolní	potrava 1	potrava 2
kontrolní	37,3±1,Γ*	8,5±4,3
stres	5,4±3,3	4,6±3,9
acetyl-L-karnitin	35,7±1,8**	6,8±5,1
IMI + stres	3,3±2,3	4,1±3,5
FLX + stres	4,6±4,2	3,6±4,0
acetyl-L-karnitin + stres	286,4±16,4***	276,7±18,6***

Zvířata podrobená výchozí zkoušce, únikové zkoušce a potom trvalému stresu po dobu 7 dní během podávání ALCAR, IMI nebo FLX;

Údaje představují střední hodnotu ± standardní odchylka z 10 stanovení; ** = p < 0,01 porovnání s jejich vlastními základními hodnotami a s hodnotami pro potravu 2;

*** = p < 0,001 porovnání s jejich vlastními základními hodnotami a s hodnotami pro potravu 1 kontrolní skupiny a skupiny s acetyl-Lkarnitinem + stresem.

Zvířata náležející do skupiny se stresem jedla dvě potravy s vanilkovým cukrem bez vykázání významných změn v tvorbě extraneurálního dopaminu v Nacs.

Jak krysy skupiny IMI + stres, tak skupiny FLX + stres požíraly pelety s vanilkovým cukrem s výsledky obdobnými těm, které byly získány ve skupině stresu.

Zvířata vystavená stresu a potom dostávající acetyl-L-karnitin lačně konzumovala dvě potravy vanilkového cukru a vykazovala značný vzrůst tvorby dopaminu (přibližně 300 %) po dvou za sebou jdoucími potravami vanilkového cukru.

0 0 0 0 0 · 0 0 0 0 » 0 000 · 0 0 0 0 0 0 0000 00 0000 «00 00 0 0 00 00 00 0 0 0

- 17 Analýza výsledků získaných porovnáním účinků antidepresantních léčiv a acetyl-L-karnitinu v údajích pro získávání VAB při vystavení podmínkám stresu vede k následujícím závěrům:

a) jak tradiční antidepresanty, tak acetyl-L-karnitin zcela chrání jak před následky reakce pocházející z trvalého vystavení stresu, tak před následky odpovídajícími účinky na získávání VAB, za předpokladu, že krysy před tím také projdou výchozí zkouškou;

b) denní podávání IMI po za sebou následující výchozí zkoušce a únikové zkoušce a během průpravné fáze, se u krys vystavených proceduře trvalého stresu zcela obrátily podmínky únikového deficitu. To však nechrání zvířata ani proti negativním účinkům stresu na získávání VAB, ani proti snížení tvorby dopaminu v Nacs;

c) denní podávání acetyl-L-karnitinu po za sebou následující výchozí zkoušce a únikové zkoušce a během průpravné fáze, krysám vystaveným proceduře trvalého stresu jsou tato zvířata zcela chráněna od negativních vlivů stresu na získávání VAB. Hladiny dopaminergické transmise v Nacs u krys, které se poučily o chuťové reakci peletami s vanilkovým cukrem byly obnoveny, zatímco ty, které byly vystaveny proceduře stresu a podávání acetyl-L-karnitinu, byly překryty oproti těm krysám, které byly v kontrolní skupině a současně mnohem vyšší, než bylo pozorováno u těch krys, které byly vystaveny trvalému stresu.

- 18 19 9 9 9 9 9 9 99 9 · ♦ · · 9 9 1 1 19

111 11 1 1119

I 1 111 9 1 1 9 11 · »··♦

II 9 19 1 111

19 11 9111 99 ·

Ochranný účinek acetyl-L-karnitinu na získávání VAB během vystavení trvalému stresu je napraven schopností zabránit snížení dopaminergické transmise v Nacs vyvolané stresem.

Takový účinek byl vyvolán pouze acetyl-L-karnitinem. Ani podávání IMI, ani podávání FLX po dobu jednoho týdne neukázalo jakoukoliv ochranu proti reakci a neurochemickému důsledku (Behav. Pharmacol., 6, 562 567, 1995) (J. Neurochem., 72, 2039 - 2046, 1999) vystavení stresu.

Na druhé straně se objevený účinek acetyl-L-karnitinu obnovil při vystavení stresu, protože dopaminergícká odezva v Nacs na konzumaci vanilkového cukru vyústila ve značně vyšší hodnoty ve skupině acetyl-Lkarnitin + stres, než v kontrolní skupině.

Acetyl-L-karnitin je tedy jedinou známou sloučeninou schopnou antagonizovat pokles dopaminergické transmise v Nacs vznikající z opakovaného vystavení stresu.

Mechanismus takového účinku se zdá být úměrný kapacitě zvyšující se tvorby dopaminu ve stejné míře jako u kontrolních krys.

Pokud se podával acetyl-L-karnitin, krysám trvale vystaveným stresu zůstávala jejich schopnost vnímat chutnou potravu, jakožto dostatečná posila k udržování motivované chuťové reakce.

00 00 00 · · 0 0 00 0 · 0* · 0 · · • 000 00 0 0 000 0 0 000 00 0 · · 0 0 0000 • 0 0000 000

00 00 00 00 00 ·

- 19 Podle těchto výsledků se dovozuje, že acetyl-L-karnitin je jedinou známou sloučeninou schopnou antagonizovat negativní účinky vystavení trvalému stresu pro získávání motivované chuťové reakce.

toto ··«·

- 20 to · · « to ···· · to to to·· · · ·· ·· ·♦ ·· • to · • toto • · to · • · ·♦♦♦ ···

Claims

1. Použití alkanoyl-L-karnitinu, kde alkanoylovou skupinou je lineární nebo rozvětvený řetězec se 2 až 5 uhlíkovými atomy, nebo jeho farmaceuticky přijatelné sole, k přípravě léčiva k léčbě anhedonie.

2. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že alkanoylová skupina se vybírá ze skupiny sestávající z acetylu, propionylu, valerylu, isovalerylu, butyrylu a isobutyrylu.

3. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že farmaceuticky přijatelná sůl alkanoyl-L-karnitinu se vybírá ze skupiny obsahující chlorid, bromid, orotan, kyselý aspartan, kyselý citran, citran hořečnatý, kyselý fosforečnan, fumaran a kyselý fumaran, fumaran hořečnatý, mléčnan, maleinan a kyselý maleinan, slizan, kyselý šťavelan, pamoan, kyselý pamoan, kyselý síran, glukofosfát, vínan, kyselý vínan, vínan hořečnatý, 2-aminoethansulfonan, 2-aminoethansulfonan hořečnatý, vínan cholinu a trichloracetát.

4. Použití podle nároku 1 vyznačující se tím, že alkanoyl-L-karnitinem je acetyl-L-karnitin.