CZ20032762A3

CZ20032762A3 - Cyklické azafosfaderiváty uhlovodíků

Info

Publication number: CZ20032762A3
Application number: CZ20032762A
Authority: CZ
Inventors: Hoyeráthomas; Sorensenámortenádahl
Original assignee: Leoápharmaáa@S
Priority date: 2001-04-11
Filing date: 2002-04-10
Publication date: 2004-05-12
Also published as: EP1379533A2; US6605742B2; WO2002083696A2; US20020177706A1; IL158219A0; HUP0303874A3; KR20030093310A; HUP0303874A2; CN1507450A; JP2004532221A; PL367063A1; CA2443709A1; BR0208757A; MXPA03009195A; WO2002083696A3; RU2003132686A

Description

Vynález se týká neznámé třídy sloučenin, konkrétně cyklických azafosfaderivátů uhlovodíků, které vykazují inhibiční účinky proti matrixové metalloproteáze, farmaceutických kompozic obsahujících uvedené sloučeniny a použití uvedených sloučenin při výrobě léčiv.

Dosavadní stav techniky

Matrixové metalloproteázy (MMP) tvoří rodinu enzymů obsahujících zinek, které jsou schopné štěpit mnoho proteinových sloučenin v extracelulární matricí, jakými jsou například kolagen, želatina, fibronektin, laminin a protein proteoglukanového jádra.

Existuje alespoň 23 různých MMP zatříděných podle preferencí jejich doménové struktury a substrátu [Lauer-Fields, Exp. Opin. Ther. Patents, 10, str. 1873 až 1884, 2000] . MMP Lze zatřídit do čtyř hlavních skupin:

kolagenázy degradují fibrilární kolagen; stromelysin degraduje proteoglukany a glukoproteiny; želatinázy degradují nefibrilární a degradovaný kolagen, tj. želatinu; a konečně na membránu se vážící MMP [0'Brien, J. Med.

Chem. , 43, str. 156 až 166, 2000]. MMP Sdílejí společnou vícedoménovou strukturu, ale jsou glykosylovány v různých místech a různou měrou. Všechny MMP rovněž sdílejí společný motiv navázání zinku, HisGluXaaGlyHis, a rozdíly zahrnují přítomnost nebo absenci strukturních domén kontrolujících

01-2199-03-Ma «· ·· ···· ·· · ·· ·· · · · · • · · » · · · · · • ··· · ··· ···· takové faktory, jakými jsou specificita pro substrát, inhibitor navázání, navázání matrice a povrchová lokalizace buňky. Názvosloví pro MMP je jednoduché, protože jsou označovány jako MMP-n, kde n znamená celé číslo počínaje 1.

MMP Hraje důležitou fyziologickou úlohu při remodelaci tkáně u normální tkáně, např. při angiogenezi, léčbě rány, resorpci kosti, ovulaci a vývoji embrya. U zdravé tkáně je aktivita MMP pečlivě řízena genovou expresí, syntézou enzymů v latentní pro-enzymové formě a koexpresí endogenních tkáňových inhibitorů MMP (TIMP). Nadbytečně nebo slabě regulovaná MMP aktivita byla prokázána u hostitele patologických stavů, a velké úsilí je tedy věnováno vyvinutí účinných látek (léčiv) s MMP inhibičními účinky, které by mohly být použity pro obnovení kontroly MMP aktivity.

Mnoho známých MMP inhibitorů představují peptidové deriváty na bázi přirozeně se vyskytujících aminokyselin se strukturními podobnostmi, pokud jde o místa štěpení v přírodních substrátech MMP. Další známé MMP inhibitory mají méně peptidickou strukturu a mohou být zatříděny jako pseudopeptidy nebo peptidomimetika, například sulfonamidy.

Dosavadní stav techniky pro MMP inhibitory sestává z peptidických struktur [WO 95/19965 a WO 95/19956]; lineárních a cyklických sulfonamidových sloučenin [WO 97/44315, WO 00/09485 a EP 0 979 816] ; a derivátů kyseliny buturové a kyseliny pentanové [WO 97/43237, WO 97/43239 a WO 99/61413].

• · · · • ·

01-2199-03-Ma

Podstata vynálezu

Překvapivě se zjistilo, že nové cyklické azafosfaderiváty uhlovodíků obecného vzorce I jsou účinnými inhibitory MMP.

Vynález se tedy týká sloučeniny obecného vzorce I

kde vazby označené jako a, bac nezávisle reprezentují jednoduchou nebo dvojnou vazbu;

man znamenají nezávisle 0, 1, 2 nebo 3 za předpokladu, že man současně neznamenají 0;

X znamená atom síry nebo atom kyslíku;

Ri znamená

R9-R&

-M.

A—

kde

01-2199-03-Ma

E, pokud je přítomno, reprezentuje vazbu, methylenovou skupinu nebo ethylenovou skupinu případně substituovanou atomem halogenu, hydroxyskupinou, kyanoskupinou, nitroskupinou, alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, halogenalkylovou skupinou, hydroxyalkylovou skupinou, alkoxyskupinou nebo alkylkarbonylovou skupinou;

s a t znamenají nezávisle 0, 1, 2 nebo 3;

A a A' nezávisle reprezentují vazbu nebo nasycený nebo nenasycený případně substituovaný cyklický nebo heterocyklický uhlovodíkový diradikál nebo triradikál;

Y reprezentuje vazbu, atom kyslíku, atom síry, C(O)NR₁₀, NRioC(O) nebo NR_i0, kde Ri₀ znamená atom vodíku, hydroxyskupinů, větvený nebo přímý, nasycený nebo nenasycený uhlovodíkový radikál případně substituovaný atomem halogenu, nitroskupinou, kyanoskupinou, hydroxylovou skupinou, alkoxyskupinou, alkylkarbonylovou skupinou nebo alkylaminoskupinou;

Rg reprezentuje vazbu, atom vodíku, alkandiylový nebo alkendiylový diradikál, jeden nebo více etherdiradikálů (R'-O-R'') nebo aminových diradikálů (R'-N-R''), kde R' a R'' nezávisle reprezentují alkylovou skupinu nebo alkenylovou skupinu s 0 až 3 atomy uhlíku;

R₉ reprezentuje atom vodíku, hydroxyskupinů, atom halogenu, kyanoskupinu, nitroskupinu, větvený nebo přímý, nasycený nebo nenasycený uhlovodíkový radikál případně substituovaný atomem halogenu, kyanoskupinou, hydroxylovou skupinou, alkoxyskupinou, alkylkarbonylovou skupinou nebo alkylaminoskupinou; NRnRi₂,

01-2199-03-Ma « ·· ······ ·· · ···· · · · ··· • ·· ·· · · · · · • · ··« · · · · ·«··· ····» ·· · » · · ·

C(0)NRhRi2, C(O)RiiRi₂, CO(O)RhR₁₂, S(O)₂Rh, kde každý Rn a Ri₂ nezávisle reprezentuje atom vodíku, atom halogenu, větvený nebo přímý, nasycený nebo nenasycený uhlovodíkový radikál případně substituovaný atomem halogenu, kyanoskupinou, hydroxylovou skupinou, alkoxyskupinou, alkylkarbonylovou skupinou nebo alkylaminoskupinou;

R₂ reprezentuje hydroxamovou kyselinu, karboxylovou kyselinu, fosfonovou kyselinu nebo merkaptomethýlovou skupinu;

R₃ a R₄ každý nezávisle reprezentuje atom vodíku, atom halogenu, kyanoskupinu, hydroxyskupinu, nitroskupinu, větvený nebo přímý, nasycený nebo nenasycený uhlovodíkový radikál případně substituovaný atomem halogenu, kyanoskupinou, nitroskupinou, hydroxylovou skupinou, alkoxyskupinou, hydroxyskupinou, alkylkarbonylovou skupinou, alkylaminoskupinou; nebo R₃ a R₄ společně s atomy uhlíku, na které jsou navázány, a s navázaným atomem dusíku tvoří heterocyklický kruh;

každý R₅, R₆, a R₇ nezávisle reprezentuje atom vodíku, hydroxyskupinu, nitroskupinu, kyanoskupinu, atom halogenu, větvený nebo přímý, nasycený nebo nenasycený uhlovodíkový radikál případně substituovaný atomem halogenu, kyanoskupinou, nitroskupinou, hydroxylovou skupinou, alkoxyskupinou, alkylkarbonylovou skupinou nebo alkylaminoskupinou; nebo R₄ a R₅, R₅ a R₆ nebo R₆a R₇ společně s atomem uhlíku, na který jsou navázány, tvoří nasycený nebo nenasycený případně substituovaný cyklický nebo heterocyklický kruh;

a jejích farmaceuticky přijatelných solí.

01-2199-03-Ma

V dalším aspektu se vynález týká farmaceutické kompozice obsahující sloučeninu obecného vzorce I společně s farmaceuticky přijatelným excipientem.

V ještě dalším aspektu se vynález týká způsobu léčení nebo prevence nemocí nebo stavů zahrnujících porušení, zánět nebo proliferační poruchu tkáně, přičemž tento způsob spočívá v podání účinného množství sloučeniny obecného vzorce I pacientovi.

V ještě dalším aspektu se vynález týká použití sloučeniny obecného vzorce I pro výrobu léčiva pro léčbu nebo prevenci nemocí nebo stavů zahrnujících porušení, zánět nebo proliferační poruchu tkáně.

Výraz „halogen, jak je zde použit, označuje členy sedmé hlavní skupiny periodické tabulky prvků, tj. fluor, chlor, brom a jod.

Výraz „alkan označuje přímou, větvenou nebo cyklickou sloučeninu obsahující atomy uhlíku a atomy vodíku, které jsou nasycené. Tento výraz zahrnuje podtřídy primárního, sekundárního a terciálního alkanu, jakým je například methan, ethan, propan, isobutan, terč.butan, cyklohexan a cyklopentan.

Výraz „alken označuje přímou, větvenou nebo cyklickou sloučeninu obsahující atomy uhlíku a atomy vodíku a alespoň jednu dvojnou vazbu. Tento výraz zahrnuje primární, sekundární a terciální alken, například ethen, propen, 1-buten, 2-buten, 3,3-dimethyl-1-buten, cyklopropen a cyklohexen.

01-2199-03-Ma

··>·· ·* · · ·«

Výraz „alkyl označuje jednovazný radikál odvozený od přímého, větveného nebo cyklického alkanu odtržením atomu vodíku z libovolného atomu uhlíku. Tento výraz zahrnuje podskupiny primární, sekundární a terciální alkylové skupiny, například methylovou skupinu, ethylovou skupinu, n-propylovou skupinu, isopropylovou skupinu, n-butylovou skupinu, isobutylovou skupinu, terč.butylovou skupinu, isopentylovou skupinu, isohexylovou skupinu, cykloheptylovou skupinu, cyklohexylovou skupinu, cyklopentylovou skupinu a cyklopropylovou skupinu.

Výraz „halogenalkylová skupina označuje částečně nebo zcela halogenované alkylové radikály, jakým je například trifluormethylová skupina.

Výraz „hydroxyalkylová skupina označuje alkylovou skupinu substituovanou jednou nebo více hydroxyskupinami, jakými jsou například 2-hydroxyethylová skupina, 2-hydroxypropylová skupina a 2,4-dihydroxypentylová skupina.

Výraz „alkoxyskupina označuje radikál obecného vzorce OR', kde R' znamená výše definovanou alkylovou skupinu, například methoxyskupinu, ethoxyskupinu, propoxyskupinu, butoxyskupinu atd.

Výraz „alkoxykarbonylové skupina označuje radikál obecného vzorce -COOR', kde R' znamená výše definovanou alkylovou skupinu, například methoxykarbonylovou skupinu, ethoxykarbonylovou skupinu, n-propoxykarbonylovou skupinu, isopropoxykarbonylovou skupinu atd.

Výraz „nasycený cyklický uhlovodík označuje cyklické sloučeniny, případné kondenzované bicyklické kruhy, obsahující atomy vodíku a uhlíku, které jsou nasycené, < t • · ·

01-2199-03-Ma jakými jsou například cyklopropan, cyklobutan, cyklopentan, cyklohexan, cykloheptan, cyklooktan, hydrindan a dekalin.

Výraz „nenasycený cyklický uhlovodík označuje cyklické sloučeniny, případně kondenzované bicyklické kruhy, obsahující atomy vodíku a uhlíku, ve kterých je jedna nebo více vazeb uhlík-uhlík nenasycená, jakými jsou například cyklopenten, cyklohexen, cyklohexadien, cyklohepten, benzen, naften a 1,4-dihydronaften, indan a inden.

Výraz „heterocyklický uhlovodík označuje nasycené nebo nenasycené cyklické sloučeniny zahrnující atom vodíku, atom uhlíku a jeden nebo více heteroatomu zvolených z atomu kyslíku, atomu síry a atomu dusíku, jakými jsou například pyrrol, furan, thiofen, imidazol, oxazol, thiazol, pyrazol, pyrrolidin, pyridin, pyrimidin, tetrahydrothiofen, tetrahydrofuran, piperidin, piperazin, fosfalan, fosforinan a fosforepan.

Výrazy „monoradikál, „diradikál a „triradikál označují zbytek, ze kterého je odtržen jeden, dva, resp. tři atomy vodíku.

Výraz „farmaceuticky přijatelná sůl označuje soli připravené uvedením sloučeniny obecného vzorce I do reakce s vhodnými anorganickými nebo organickými kyselinami, například s kyselinou chlorovodíkovou, kyselinou bromovodíkovou, kyselinou jodovodíkovou, kyselinou sírovou, kyselinou dusičnou, kyselinou octovou, kyselinou fosforečnou, kyselinou mléčnou, kyselinou maleinovou, kyselinou ftalovou, kyselinou citrónovou, kyselinou propionovou, kyselinou benzoovou, kyselinou glutarovou, kyselinou glukonovou, kyselinou methansulfonovou, kyselinou salicylovou, kyselinou sukcinovou, kyselinou vinnou,

01-2199-03-Ma

kyselinou toluensulfonovou, kyselinou sulfamovou nebo kyselinou fumarovou. Farmaceuticky přijatelné soli sloučenin obecného vzorce I lze připravit reakcí s vhodnou bází, jakou je například hydroxid sodný, hydroxid draselný, amoniak, aminy apod.

Výraz „účinné množství označuje množství, které je zapotřebí pro dosažení požadovaného terapeutického účinku u léčeného pacienta a které se zpravidla zvolí s přihlédnutím ke způsobu podání; věku, tělesné hmotnosti, pohlaví, zdravotnímu stavu a celkovému stavu pacienta; povaze a rozsahu příznaků; druhu souběžné léčby; frekvenci léčby; a požadovanému účinku.

Výraz „excipient označuje všechny látky ve farmaceutickém přípravku, které nepředstavují účinné složky a jakými jsou například nosiče, pojivá, lubrikanty, zahušfovadla, povrchově aktivní činidla, konzervační látky, emulgátory, pufry, ochucovací činidla nebo barviva.

Farmakofor mnoha MMP inhibitorů zaznamenaný v literatuře obsahuje dva prvky nezbytné pro jeho funkci: 1) zinek vážící skupinu, často hydroxamovou kyselinu, reverzní hydroxamovou kyselinu, karboxylovou kyselinu s okysličenými fosforovými skupinami (např. fosfinovou kyselinu a fosfonamidy zahrnující aminofosfonovou kyselinu) nebo merkaptomethyl, který se liguje na zinek v účinném místě MMP; a 2) skupiny, které mohou vzájemně reagovat se specifickými místy v blízkosti účinného místa MMP [O'Bien, J. Med. Chem, 43, str. 156 až 166, 2000; Hajduk, J. Am. Chem. Soc, 119, str. 5818 až 5827, 1997] . Je známo, že různé MMP inhibitory vykazují různou selektivitu ke známým MMP. Rentgenová analýza MMP ukázala, že lze MMP zatřídit do dvou velkých podskupin podle hloubky Sl¹ neboli kapsy, tj.

► * ♦ < « • · » • * · ·

01-2199-03-Ma buď na enzymy hluboké nebo mělké Sl' kapsy. Sl' Kapsa je rovněž označována jako „kapsa selektivity, protože se zdá, že velikost části inhibitoru, která reaguje s Sl¹ kapsou, určuje specificitu inhibitoru [Whitaker, Chem. Rev, 99, str. 2735 až 2776, 1999]. Ukázalo se, že velké substituenty na inhibitoru vedle skupiny vážící zinek zvyšují inhibiční aktivitu směrem k MMP hluboké kapsy, jakými jsou například MMP-2, MMP-9 a MMP-3, na úkor MMP krátké kapsy, jakými jsou například MMP-1 a MMP-7. Nicméně protože všechny MMP sdílejí společné účinné místo, jsou všechny do určité míry inhibovány jakýmkoliv MMP inhibitorem a není pravda, že by bylo dosaženo selektivity pro jedinou MMP [Brown, Exp. Opin. Invest. Drugs, 9, str. 2167 až 2177, 2000] .

Bylo vyvinuto mnoho vysoce účinných MMP inhibitorů, které vykazovaly při testech in vitro nanomolární hodnoty IC₅₀. Tyto sloučeniny bohužel vykazují slabou biologickou dostupnost a jejich využití při terapeutické léčbě je tedy malé [Brown, Breast Cancer Res. Treat. , 52, str. 125 až 136, 1998]. Stále tedy existuje potřeba vyvinout sloučeniny se správnou vyvážeností mezi MMP inhibici, rozpustností ve vodě, orální dostupností, farmakokinetickými vlastnostmi atd., které vyžadují použitelné in vivo MMP inhibitory.

Nyní se překvapivě zjistilo, že nový typ sloučenin, tj. cyklické azafosfaderiváty uhlovodíků obecného vzorce I, vykazují vysokou MMP inhibiční aktivitu.

U výhodného provedení znamená X atom kyslíku.

U dalšího výhodného provedení, a i c znamená jednoduchou vazbu; b znamená dvojnou vazbu; a R₄ a R₇znamenají nezávisle buď atom vodíku, nebo methylovou skupinu.

01-2199-03-Ma

U ještě dalšího výhodného provedení je E nepřítomno; s i t znamená 0; Y znamená atom kyslíku v para poloze na A; a A znamená fenylovou skupinu.

U ještě dalšího výhodného provedení znamená R₂hydroxamovou ky s e1inu.

U ještě dalšího výhodného provedení je sloučenina obecného vzorce I zvolena z množiny sestávající z:

( + )-TY-hydroxy-2-oxo-2-(4-fenoxyfenyl)azafosforin-4-en-l-acetamidu;

( + )-TY-hydroxy-2-oxo-2 -(4-fenoxyfenyl)azafosforinan-1-acetamidu;

( + )-TY-hydroxy-2 - oxo-2 -fenylazaf osf orep-5-en-1-acet amidu ;

(±) -TY-hydroxy-2 -oxo-2 - (4 - f enoxy fenyl) azafosforep-5-en-1-acetamidu;

( + ) -TY-hydroxy-2-oxo-2- (4-f enoxy fenyl) azafosf orepan-l-acetamidu;

( + )- N- hydroxy-2 -(4-(4-chlorfenoxy)fenyl)-2-oxoazafosforin-4-en-l-acetamidu;

( + )- N- hydroxy-2 -(4-methoxyfenyl)-2-oxoazafosforolan-l-acetamidu;

(±) - (R*,R*, S*) -TY-hydroxy-2-oxo-2- (4-f enoxy fenyl) -1,2-azafosfabicyklo[4.3.0]non-4-en-9-karboxamidu;

( + ) - TY-hydroxy-2 - (4-ethoxyfenyl) -2-oxoazafosf oroc-6-en-l-acetamidu;

(±) -TY-hydroxy-2- (4-ethoxyfenyl) -2-oxoazafosforin-4-en-l-acetamidu;

kyseliny (+)-2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforin-4-en-l-octové;

( + ) -TY-hydroxy-2- (4-ethoxyfenyl) -2-oxoazafosforinan-l-acetamidu;

( + ) - TY-hydroxy-2 - (4-ethoxyfenyl) -2-oxoazafosforocan-l-acetamidu;

01-2199-03-Ma kyseliny (+)-2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforep-5-en-1-octové;

(+)-N-hydroxy-2-(4-(2-methylpropoxy)fenyl)-2-oxoazafosforin-4-en-1-acetamidu;

( + )-N-hydroxy-2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforepan-l-acetamidu; a (+)-N-hydroxy-2-(4-(2-methylpropoxy)fenyl)-2-oxoazafosforinan-1-acetamidu.

Sloučeniny obecného vzorce I obsahují asymetrické atomy uhlíku a stejně tak dvojné vazby uhlík-uhlík, které umožňují existenci isomerních forem. Je zřejmé, že do rozsahu vynálezu spadají všechny tautomerní, diastereomerní nebo opticky isomerní formy buď v čisté formě, nebo ve formě směsí reprezentovaných obecným vzorcem I.

Nevyváženost produkce nebo aktivity MMP byla prokázána v souvislosti s celou řadou chorob, a MMP inhibitory mají tedy určitou terapeutickou hodnotu. Předpokládá se, že sloučeniny, které inhibují MMP, budou potenciálně použitelné při léčbě, prevenci a/nebo zmírnění závažnosti choroby, příznaků choroby a/nebo četnosti recidiv choroby nebo stavu souvisejícího s nevyváženosti produkce nebo aktivity MMP. Choroby nebo stavy zahrnují neomezujícím způsobem choroby zahrnující porušení nebo zánět tkáně, jakými jsou například kloubní revmatismus, osteoartritida, osteopenie, jakými jsou například osteoporóza, periodontitida, zánět dásní, korneální, epidermální nebo gastrická ulcerace, stárnutí kůže, nádorové metastázy, nádorová invaze a růst nádoru; choroby související se zánětlivými poruchami nervů včetně degradace míchy, jakými jsou například roztroušená skleróza; choroby související s angiogenezí, které zahrnují artritické stavy a růst solidních nádorů, lupenku, proliferační retinopatie.

01-2199-03-Ma •· ·· ···· ·· · *· ·· · »·· neovaskulární glaukom, okulární tumory, angiofibromy a hemangiomy [Vu v Metalloproteases, Parks a Mecham (vyd.), str. 115 až 148, 1998, Academie Press; Mullins, Biochem. Biophys. Acta, 695, str. 117 až 214, 1983; Henderson, Drugs of the Future, 15, str. 495 až 508, 1990; Reich, Cancer Res, 48, str. 3307 až 3312, 1988; Whitaker, Chem. Rev., 99, str. 2735 až 2776, 1999].

Kromě toho jsou MMP inhibitory potenciálně použitelné při léčbě, prevenci a/nebo zmírnění závažnosti choroby, příznaků choroby a/nebo četnosti recidiv choroby nebo stavů souvisejících s nadbytečnou produkcí nádor nekrotizujícího faktoru a (TNF-a) [Whitaker, Chem. Rev. , 99, str. 2735 až 2776, 1999] . TNF-α Je prozánětlivý cytokin, který byl prokázán u zánětlivých chorob nebo stavů, artritidy, astmatu, septického šoku, horečky, kardiovaskulárních příznaků, hemorag, srážlivosti krve, akutní fázové odezvy a apoptózy. TNF-α Se exprimuje v buňkách jako membránu vážící 26 kDa protein, který se proteolyticky štěpí a uvolňuje 17 kDa účinnou rozpustnou formu. TNF-α Je katalyzován enzymem TNF-α konvertázou (TÁCE), což je metalloproteáza a ukázalo se, že několik MMP inhibitorů inhibuje proces TNF-a [Mohler, Nátuře, 370, str. 218, 1994]. Nadbytečnou TNF-a produkci lze tedy účinně kontrolovat léčbou pomocí MMP inhibitorů.

V dalším aspektu se vynález týká farmaceutického přípravku sloučeniny obecného vzorce I. Přípravky podle vynálezu určené jak pro veterinární, tak pro humánní medicínské použití zahrnují účinné složky společně s farmaceuticky přijatelným nosičem (nosiči) a případně další terapeutickou složkou (složky). Nosič (nosiče) musí být „přijatelný („přijatelné) v tom smyslu, že musí být

01-2199-03-Ma ··*· ·· · · · · • ·» ·· · » · · · • > · · · · * · · ···· «·· · · · · ·· · ····· ·· ·· · · · slučitelný (slučitelné) s ostatními složkami přípravků a nesmí mít škodlivé účinky na příjemce.

Přípravky zahrnuj í například přípravky ve formě vhodné pro orální (včetně přípravků s dlouhodobým nebo načasovaným uvolňováním), rektální, parenterální (včetně subkutánního, intraperitoneálního, intramuskulárního, intraartikulárního a intravenózního), transdermální, oftalmické, topické, nazální nebo bukální podání.

Výraz „jednotková dávka označuje jednotkovou, tj . jednu dávku, která může být podána pacientovi, se kterou lze snadno manipulovat a kterou lze snadno balit, přičemž fyzikálně a chemicky stabilní jednotková dávka obsahuje buď účinný materiál jako takový, nebo jeho směs s pevnými nebo kapalnými farmaceutickými ředidly nebo nosiči.

Přípravky lze běžně prezentovat ve formě jednotkové dávky a lze je připravit libovolným, ve farmacii známým způsobem, např. způsobem popsaným v Remington, The Science a Practise of Pharmacy, 20. vydání, 2000. Všechny metody zahrnují krok uvedení účinné složky do kontaktu s nosičem, který tvoří jednu nebo více složek. Zpravidla jsou přípravky připraveny rovnoměrným a dokonalým promísením účinné složky s kapalným nosičem nebo jemně rozptýleným pevným nosičem nebo oběma těmito nosiči, a v případě potřeby následným tvarováním získaného produktu do požadovaného přípravku.

Přípravky podle vynálezu jsou vhodné pro orální podání a mohou mít formu diskrétních jednotek ve formě kapslí, tobolek, tablet nebo dražé, z nichž každá obsahuje předem stanovené množství účinné složky; formu prášku nebo granulí; formu roztoku nebo suspenze ve vodné kapalině nebo

01-2199-03-Ma • · · · · ·*· ·· · ·« · · · · · · ·· ·· « ···· • » · « · * · · ·«·· ·· · · * · · · · bezvodé kapalině, jakou je například ethanol nebo glycerol; nebo formu emulze olej ve vodě nebo emulze voda v oleji. Takovými oleji mohou být jedlé oleje, jakými jsou například olej ze semen bavlny, sezamový olej, kokosový olej nebo podzemnicový olej. Vhodná disperzní nebo suspendační činidla pro vodné suspenze zahrnují syntetické nebo přírodní gumy, jakými jsou například tragakant, alginát, arabská guma, dextran, nátriumkarboxy-methylcelulóza, želatina, methylcelulóza a polyvinyl-pyrrolidon. Účinné složky mohou být rovněž podány ve formě bolusu, lektvaru nebo pasty.

Tableta může být vyrobena lisováním nebo tvářením účinné složky případně s jednou nebo více složkami ve formě. Lisované tablety lze připravit lisováním účinné složky(ek) ve volně tekoucí formě, jakou je například prášek nebo granule, případně smísené s vazebným činidlem, jakým je například laktóza, glukóza, škrob, želatina, arabská guma, tragakantová guma, alginát sodný, polyethylenglykol karboxymethylcelulózy, vosky apod.; lubrikantem, jakým je například oleát sodný, stearát sodný, stearát hořečnatý, benzoát sodný, octan sodný, chlorid sodný apod.; desintegračním činidlem, jakým je například škrob, methylcelulóza, agar, bentonit, xanthanová guma apod.; nebo dispergačním činidlem, ve vhodném lisovacím stroji. Tvářené tablety mohou být vyrobeny tvářením směsi práškové účinné složky a vhodného nosiče zvlhčeného inertním kapalným ředidlem ve vhodném stroji.

Přípravky pro rektální podání, např. injekce nebo infúze, mohou mít formu čípku obsahujícího účinné složky a nosič nebo mohou mít formu klystýru.

01-2199-03-Ma

Přípravky vhodné pro parenterální podání běžně obsahují sterilní olejový nebo vodný přípravek účinné složky, který je výhodně isotonický s krví příjemce, například isotonický solný roztok, isotonický glukózový roztok nebo roztok pufru. Přípravek může být konvenčně sterilizován například filtrací přes filtr zachycující bakterie, přidáním sterilizačního činidla do přípravku, ozařováním přípravku nebo ohříváním přípravku. Pro parenterální podání jsou rovněž vhodné liposomální přípravky, které jsou popsány například v patentech

US 5 534 499, US 5 762 958 a US 6 007 839.

Alternativně lze sloučeninu obecného vzorce I dodávat ve formě sterilního pevného přípravku, např. lyofilizovaného prášku, který se bezprostředně před použitím snadno rozpouští ve sterilním rozpouštědle.

Transdermální přípravky mohou mít formu náplasti.

Přípravky vhodné pro oftalmické podání mohou mít formu sterilního vodného přípravku účinné složky, které mohou mít mikrokrystalickou formu, například formu vodné mikrokrystalické suspenze. Pro účinnou složku podle vynálezu určenou pro oftalmické podání lze rovněž použít liposomální přípravky nebo biologicky degradovatelné polymerní systémy.

Přípravky vhodné pro topické nebo oftalmické podání zahrnují kapalné nebo polokapalné přípravky, jakými jsou například tekuté mastě, lotiony, gely, emulze olej ve vodě nebo voda v oleji, jakými jsou například krémy, masti nebo pasty; nebo roztoky nebo suspenze, jakými jsou například kapky.

Přípravky vhodné pro nazální nebo bukální podání zahrnují prášek, rozprašovací přípravky s hnací látkou a

01-2199-03-Ma

bez hnací látky, jakými jsou například aerosoly a atomizéry.

Kromě výše popsaných přípravků lze sloučeninu obecného vzorce I formulovat ve formě depotního přípravku. Tyto dlouhodobě působící přípravky lze aplikovat formou implantace (například subkutánně nebo intramuskulárně) nebo intramuskulární injekcí. Sloučeninu obecného vzorce I lze tedy například formulovat s vhodnými polymerními nebo hydrofobními materiály (například jako emulze v přijatelném oleji), s iontoměničovou pryskyřicí nebo se slabě rozpustnými deriváty, například se slabě rozpustnou solí.

U systemického ošetření podle vynálezu se denní dávky pohybují v rozmezí 0,001 mg/kg až 200 mg/kg tělesné hmotnosti, výhodně v rozmezí 0,002 mg/kg až 50 mg/kg tělesné hmotnosti savce, například v rozmezí 0,003 mg/kg až 20 mg/kg sloučeniny obecného vzorce I, v dávkách, které odpovídají denní dávce pro dospělého člověka v rozmezí 0,2 mg až 750 mg. U topického ošetření dermatologických chorob jednotková dávka pro mastě, krémy nebo lotiony obsahuje 0,1 mg/g až 750 mg/g a výhodně 0,1 mg/g až 500 mg/g, například 0,1 mg/g až 200 mg/g, sloučeniny obecného vzorce I. Pro topické použití v oftalmických mastích, kapkách nebo gelech jednotková dávka obsahuje 0,1 mg/g až 750 mg/g a výhodně 0,1 mg/g až 500 mg/g, například 0,1 mg/g až 200 mg/g, sloučeniny obecného Jednotková dávka pro podání orálních kompozic, crmulovaná jako tablety, kapsle nebo dražé, obsahuje 0,05 mg až 250 mg, výhodně 0,1 mg až 125 mg, sloučeniny obecného vzorce I.

vzorce I výhodně

Kromě výše zmíněných přísad mohou přípravky sloučeniny obecného vzorce I zahrnovat jednu nebo více dalších složek,

01-2199-03-Ma jakými jsou například ředidla, pufry, ochucovací činidla, barviva, povrchově aktivní činidla, zahušúovadla, konzervační činidla, například methylhydroxybenzoát (včetně antioxidantů), emulgátory apod.

Do přípravku podle vynálezu lze rovněž zabudovat další farmaceuticky účinné složky, které jsou běžně používané při léčbě. Do přípravku lze bez jakéhokoliv omezení zabudovat další farmaceuticky účinné složky, například léčiva proti rakovině, jakými jsou například chemoterapeutická činidla, hormonální činidla nebo modifikátory biologické odezvy.

Velmi důležitým krokem při syntéze sloučenin obecného vzorce II, které představují podtřídu sloučenin obecného vzorce I

R7

kde Ri, R₂, Re, R7, X, h, c a m mají výše uvedené významy, je Ag⁺ katalyzovaná stereoselektivní (substituenty na pyrrolidinovém kruhu se nacházejí v poloze cis) cyklizace aminofosfaallenů, která je popsaná ve 2. kroku 7. schématu. Huby, J. Chem. Soc, Perkin Trans., 1, str. 145 až 155, 1991 popisuje Ag⁺ katalyzovanou stereoselektivní cyklizaci allenových derivátů, kde je dusík součástí sulfonamidové nebo karbamátové skupiny, přičemž cyklizace selhává, pokud je dusík součástí formamidu nebo sekundárního aminu. Pokud

01-2199-03-Ma je dusík součástí volného aminu, potom se stereoselektivita ztrácí.

Nyní byla překvapivě objevena stereoselektivní cyklizace fosfonamidových allenů katalyzovaná stříbrnými solemi. Sloučeninu obecného vzorce II je tedy možné připravit katalytickým převedením sloučeniny obecného vzorce III

kde R_lz R₂, R₆, R7, X, a m mají výše uvedené významy. Tato Ag⁺ katalyzovaná cyklizace může probíhat za různých podmínek. Výhodně probíhá při teplotě ležící v rozmezí od 0 °C do 40 °C, například v rozmezí od 10 °C do 30 °C. Množství použité Ag⁺ soli se pohybuje od 0,05 ekviv. do 2 ekviv., například od 0,5 ekviv. do 1,5 ekviv., vztaženo k allenu. Cyklizace může běžet libovolně dlouhou dobu potřebnou pro dosažení potřebné transformace a může zahrnovat více než jedno přidání Ag soli. Použitelné Ag soli lze zvolit z množiny sestávající z AgOCOCF₃, AgClO₄, AgOSO₂CF₃, AgNO₃ a AgBF₄ .

V následující části bude vynález podrobněji vysvětlen pomocí příkladů provedení vynálezu. Nicméně je třeba zdůraznit, že tyto příklady mají pouze ilustrativní charakter a nikterak neomezují rozsah vynálezu, který je jednoznačně vymezen přiloženými patentovými nároky.

01-2199-03-Ma

Příklady provedení vynálezu

V příkladech provedení vynálezu byly použity následující standardní zkratky:

DCM: dichlormethan;

THF: tetrahydrofuran;

NH₂0TMS: O-(trimethylsilyl)hydroxylamin;

DMSO: dimethylsulfoxid.

Odpařování rozpouštědel se provádělo přidáním molekulových sít vysušených v peci do komerčních bezvodých rozpouštědel. Všechny teploty tavení jsou uvedeny v neupravené formě. Hodnoty chemického posunu (δ) (v ppm) jsou zaznamenány pro ¹³C NMR (75,6 MHz) ve specifikovaném rozpouštědle a vtaženy k vnitřnímu standardu, jakým je tetramethylsilan (δ = 0,00) nebo deuteriochloroform (δ = 76,81). Hmotové spektrum bylo zaznamenáno na přístroji QUATTRO II (Micromass). Použitý režim je označen jako EI+: náraz elektronů, kladné ionty; ES+: elektrospray, kladný režim. Přesné hmotnosti jsou uvedeny společně s relativními odchylkami od teoretických hodnot v závorkách.

Syntézy

Benzenfosfinyldichlorid obecného vzorce la byl komerčně dostupný. Komerčně dostupné arylethery se dichlorfosfinylovaly (Miles, J. Org. Chem., 40, str. 343 až 347, 1975) trichlorfosfinem a 0,1 mol. ekviv. až 0,2 mol. ekviv. Lewisovy kyseliny (chlorid hlinitý pro diarylethery a chlorid cíničitý pro arylalkylethery) pod refluxem po dobu 3 dnů a následně destilovaly (reakční schéma 1) , čímž se získaly aryldíchlorfosfiny obecných vzorců lb až lf ve středním až slabém výtěžku. Fosfinylchloridy se uvedly do

01-2199-03-Ma • * 9 · 9 · 9 · · ·

9 ·· · 9 · · ·· 9 9 · · » » <

999 9 999 ···· • 9 99 99 99 9 reakce s ω-nenasycenými alkoholy a výsledné fosfináty se podrobily Arbuzovovu přeuspořádání za ohřevu na teplotu 130 °C bud' v čistém stavu (allylallylarylfosfonáty obecného vzorce 2), nebo v přítomnosti katalytického alkylbromidu a

4- brombut-l-enu v případě syntézy butenylarylbutenylfosfonátů obecného vzorce 3 a v přítomnosti katalytického

5- brompent-l-enu v případě syntézy pentenylarylpentenylfosfonátů obecného vzorce 4.

Reakční schéma 1

a, R=H b, R = MeO c, R=EtO . dL,R = iBuÓ e, R«PhO f, R=p-ClPhO a, R = H a,R=H b, R = MeO . c,R=EtO c, R=EtO . e,R=PhO d, R = iBuO e, R==Ph.O f, R=p-OPhO

a): PCl₃/SnCl₄ nebo PCl₃/AlCl₃; b) : i. allylalkohol, pyridin, ether; ii. teplo; c) : i. but-3-en-l-ol, pyridin, ether; ii. 4-brombut-l-en, teplo; d) : i. pent-4-en-l-ol, pyridin, ether; ii. 5-brompent-l-en, teplo.

• · ·

01-2199-03-Ma

Reakční schéma 2

a) : i. PC1₅; ii. allylamin, pyridin, DCM; b) : i. nBuLí, THF; ii. ethyl; c) Grubbův katalyzátor, DCM; d) H₂, Pd/C (10%); e) NH₂OTMS, KOH, MeOH.

Prekurzory azafosforolanů (pětičlenné kruhy) se připravily z fosfonátesterů obecného vzorce 2, které se hladce převedly na fosfonylchloridy pomocí chloridu fosforečného v DCM (reakční schéma 2). Následná fosfonylace allylaminu poskytla fosfonamidy obecného vzorce 5, (Hetherington, Tetrahedron, 56, str. 2053 až 2060, 2000). Při delších reakčních časech a za silně bazických podmínek byla alkylace ethylbromacetátem doprovázena migrací dvojné vazby a následná kruh uzavírající metatéza poskytla azafosforoleny obecného vzorce 7. Katalytická hydrogenace poskytla heterocykly obecného vzorce 8, které se převedly na hydroxamové kyseliny obecného vzorce 9 za použití O-trimethylsilylhydroxylaminu a monohydrátu hydroxidu draselného v methanolu.

01-2199-03-Ma

9 9 · · · · ·· ·*· · v · · •» * · · · « · · · · ·» € 9 9 9 9

Reakční schéma 3

(±) a,R = H c, R=EtO d, R=iBuO e, R-PhO f, R=p-ClPhO

e, R = PhO krok 2

a, R = H e,R=PhO

c, R^eEtO d, R = iBuO. f,R-p-ClPhO a,R = H .

c, R = EtO .

d, R-íBuO e, R = PhÓ f, R = p-ClPhO

Krok 1) i; PC1₅, DCM, ii. allylamin, triethylamin, DCM; krok 2) Grubbův katalyzátor, DCM; krok 3) i. nBuLi, THF; ethylbromacetát; krok 4) i. PC1_5/ DCM; ii. 15, triethylamin, DCM.

Azafosforiny se připravily přes klíčové meziprodukty, jakými byly estery obecného vzorce 11 (reakční schéma 3). Fosfonáty obecného vzorce 2 se chlorovaly chloridem fosforečným a fosfonylováným allylaminem za vzniku fosfonamidů obecného vzorce 5, které se cyklizovaly Grubbovým katalyzátorem a alkylovaly ethylbromacetátem za vzniku klíčových meziproduktů, kterými byly estery obecného vzorce 11. Alternativně bylo možné tyto klíčové meziprodukty získat fosfonylací N-allylglycinethylesteru obecného vzorce 15 fosfonylchloridy, jak je popsáno výše, a následnou kruh uzavírající metatézou.

• · » « • ·

01-2199-03-Ma » · «·· »·«<

• · · · ·« * ·· · · < ·

Reakční schéma 4

krok 3

a,R=H c, R = EtO d, R = iBuO ě,R=PhO f,R=p-C!PhO c, R=EtO d, R = iBuO e, R=Ph.O krok 1 krok 2 krokl

a,R = H c, Rř=EtO d, R = iBuO e, R = PhO .

f, R=p-aPJiO c, R “ EtO c, R=EtO d, R = iBuO e, R=PhO

Krok 1) TMSONH₂, KOH, MeOH; krok 2) NaOH, MeOH; krok 3) H₂, Pd/C (10%).

Estery obecného vzorce 11 se následně podrobily hydroxylaminolýze poskytující hydroxamové kyseliny obecného vzorce 12 nebo zmýdelnění poskytujícímu karboxylové kyseliny obecného vzorce 17 (reakční schéma 4). Závěrečná hydrogenace a hydroxylaminolýza poskytly hydroxamové kyseliny obecného vzorce 14 přes estery obecného vzorce 13.

01-2199-03-Ma

Reakční schéma 5

a,R=H e,R=PliO krok 1

c,R=EtO e,R=PhO krok 3 • 0 ···· • 00 • 0 0 · 0 0 • 90 · · ·

0 · 0 · · • · 0 0 0 0 •·0 0 · ·· ·0

a,R=H c, R=EtO e,R=PhO krok 4

krok 5

a,R = H c,R=EtO e,R=PhO c,R=EtO e,R=PhO krok 6

krok 7 krok 6

a,R=H · c,R=EtO c,R=EťO e,R = Ph.O e,R=PEO

Krok 1) i; PC1₅, DCM; ii. allylamin, triethylamin, krok 2) i. BuLi, THF; ii. ethylbromacetát; krok 3) i. DCM; íi. Ester obecného vzorce 15, triethylamin, krok 4) Grubbův katalyzátor, DCM; krok 5) H₂ Pd/C krok 6) TMSONH₂, KOH, MeOH; krok 7) NaOH, MeOH.

DCM;

PCI5,

DCM; (10%) ;

01-2199-03-Ma • « ·· ···· ·· · • · · · · * ··· ····· • · · ···· ·· · ····· ·· ·· ·· ·

Rovněž sedmičlenné heterocyklické hydroxamové kyseliny a karboxylové kyseliny obecných vzorců 21, 22 a 24 se získaly z butenylarylbutenylfosfonátů obecného vzorce 3 po předchozí amidaci alkylaminem za vzniku fosfonamidů obecného vzorce 18, které se alkylovaly ethylbromacetátem za vzniku klíčového meziproduktu dinenasycených esterů obecného vzorce 19 (reakční schéma 5). Alternativně se tyto dieny získaly přímou fosfonylací N-allylglycinethylesteru fosfonylchloridy získanými z fosfonátů obecného vzorce 3. Kruh uzavírající metatéza dále poskytla heterocykly obecného vzorce 20, které se případně hydrogenovaly na estery obecného vzorce 23 před hydroxylaminolýzou nebo hydrolýzou za vzniku hydroxamových kyselin a karboxylových kyselin obecných vzorců 21, 22 a 24.

• · ·· · · · · ·· ·

01-2199-03-Ma ·· ·· · ···· • · · · · ··· ·····

Reakční schéma 6 c,R=EtO

c, R = EtÓ —:—>

krok 1 krok 3

c,R=EtO

Krok 1) i. PC1₅, DCM; ii. ester obecného vzorce 15, triethylamin, DCM; krok 2) Grubbův katalyzátor, DCM; krok 3) H₂ Pd/C (10%); krok 4) TMS0NH₂, KOH, MeOH.

Převedení pentenylarylpentenylfosfonátů obecného vzorce 4 na fosfonamidy obecného vzorce 25, které se hladce cyklizovaly na nenasycené heterocykly obecného vzorce 26 (reakční schéma 6), se provedlo stejnými kroky, jaké jsou popsány výše. Tyto azafosforocenony se převedly na hydroxamové kyseliny obecného vzorce 27 nebo se případně hydrogenovaly na heterocykly obecného vzorce 28 před hydroxylaminolýzou, která poskytla sloučeninu obecného vzorce 29.

01-2199-03-Ma

Reakční schéma 7

R

e,R=PhO . e,R=Ph.O

e,R=PhO e,R=PhO

Z⁰ ff <_/ ¹e,R = PhO

Krok 1) i. PC1₅, DCM; ii. aminoester obecného vzorce 30, triethylamin, DCM; krok 2) AgBF₄, THF; krok 3) Grubbův katalyzátor, DCM; krok 4) NH₂OTMS, KOH, MeOH.

Bicyklické sloučeniny s pětičlenným a šestičlenným kondenzovaným kruhem se získaly způsobem naznačeným v reakčním schématu 7. Fosfonylchlorid získaný z fosfonátu obecného vzorce 2 pomocí chloridu fosforečného, pokud se uvede do reakce s aminoesterem obecného vzorce 30 (Huby, J. Chem. Soc., Perkin trans., I, str. 145 až 155, 1991), potom poskytne čisté fosfonamidy ve formě směsi diastereomerú obecných vzorců 31 a 32, které se separují chromatografií. Jeden z isomerů se podrobil následujícím krokům. Cyklizace aminoallenu na pětičlenný kruh se provedla katalýzou iontů stříbra (detailněji viz příprava 33e) , čímž se utvořil pyrrolidin obecného vzorce 33 se dvěma pyrrolidinovými substituenty na atomu uhlíku, výlučně v cis orientaci. Kruh uzavírající metatéza opět cyklizovala dien, čímž se vytvořil bicyklus obecného vzorce 34. V tomto bodu se NMR-spektroskopickými metodami stanovila stereochemie, která prokázala, že se jedná o sloučeninu

01-2199-03-Ma

obecného vzorce 34. Na závěr se jako v předchozím případě připravila hydroxamová kyselina obecného vzorce 35 hydroxaminolýzou.

Obecné postupy

Dichlorfosfinylace chloridem hlinitým

Aromatická sloučenina se tři dny vařila pod zpětným chladičem s trichlorfosfinem (1 mol. ekviv.) a chloridem hlinitým (0,1 mol. ekviv.) pod proudem unikajícího argonu. Nezreagovaný trichlorfosfin se odstranil destilací za atmosférického tlaku. Surový produkt se rychle předestiloval při tlaku 6,6 kPa; a destilát se opatrně předestilovat při tlaku 6,6 kPa a poskytl frakci nezreagovaných aromatických uhlovodíků s nízkou teplotou varu a požadovaný dichlorarylfosfin jako produkt s vyšší teplotou varu.

Dichlorfosfinylace chloridem cíničitým

Aromatická sloučenina se tři dny vařila pod zpětným chladičem s trichlorfosfinem (1 mol. ekviv.) a chloridem cíničitým (0,1 mol. ekviv.) pod proudem unikajícího argonu. Nezreagovaný trichlorfosfin se odstranil destilací za atmosférického tlaku. Surový produkt se rychle destiloval při tlaku 6,6 kPa; a destilát se opatrně předestilovat při tlaku 6,6 kPa a poskytl frakci nezreagovaných aromatických uhlovodíků s nízkou teplotou varu a požadovaný dichlorarylfosfin jako produkt s vyšší teplotou varu.

01-2199-03-Ma

Allyl/Arbuzovův postup

0,25 mol Aryldichlorfosfinu se rozpustilo pod argonem a za chlazení ledem v bezvodém diethyletheru. Přidal se pyridin (2,2 mol. ekviv.) a následně allylalkohol (2,2 mol. ekvív.). Po dvou hodinách při pokojové teplotě se směs filtrovala při minimálním vystavení vzduchu, filtr se promyl bezvodým diethyletherem a filtrát se zahustil ve vakuu. Zbytky rozpouštědla se odstranily ve vysokém vakuu. Zbytek se přes noc ohříval při 130 °C a chromatografoval na silikagelu při vzrůstání gradientu ethylacetátu v toluenu z 0 % na 100 %. Frakce obsahující produkt se identifikovaly TLC (jodové výpary), sloučily a zahustily ve vakuu, čímž se získal čistý produkt ve formě oleje.

Butenyl/Arbuzovův postup

0,25 mol Aryldichlorfosfinu se rozpustilo v bezvodém diethyletheru pod argonem a za chlazení ledem. Přidal se pyridin (2,2 mol. ekviv.) a následně but-3-enol (2,2 mol. ekviv.). Po dvou hodinách při pokojové teplotě se směs filtrovala při minimálním vystavení vzduchu, filtr se promyl bezvodým diethyletherem a filtrát se zahustil ve vakuu. Zbytky rozpouštědla se odstranily ve vysokém vakuu. Přidal se 4-brombut-l-en (1 mol. ekviv.), roztok se přes noc ohříval při 130 °C a chromatografoval na silikagelu při vzrůstání gradientu ethylacetátu v toluenu z 0 % na 100 %. Frakce obsahující produkt se identifikovaly TLC (jodové výpary), sloučily a zahustily ve vakuu, čímž se získal čistý aryl(but-3-enoxy)but-3-enylfosfon ve formě oleje.

01-2199-03-Ma

Pentenyl/Arbuzovův postup

Při postupu, který je podobný jako butenyl/Arbuzovův postup se aryldichlorfosfin nejprve uvede do reakce s pent-4-enolem a následně s 5-brompent-l-enem, za vzniku čistého aryl(pent-4-enoxy)pent-4-enylfosfonu.

Amidace

Pod argonem se v bezvodém dichlormethanu (až 0,5 mol) rozpustil alkoxyfosfon a přidal se chlorid fosforečný (1,05 mol. ekviv.). Po 3 h míchání při pokojové teplotě se těkavé podíly odpařily ve vakuu a 15 min se aplikovalo vysoké vakuum (5,33 kPa). Zbytek se znova rozpustil pod argonem v bezvodém dichlormethanu (až 0,5 mol) a přidal se allylový amin (2 mol. ekviv.) a následně triethylamin (2 mol. ekviv.). Po 3 h se směs odpařila na silikagelu (1 g silikagelu na 100 mg produktu) a eluovala při gradientu v methanolu v ethylacetátu rostoucím z 0 % na 10 %. Frakce obsahující produkt se identifikovaly pomocí TLC (jodové výpary) a sloučily. Odstranění rozpouštědel ve vakuu poskytlo čistý produkt ve formě oleje.

Kruh uzavírající metatéza

0,01 mol Dienu se rozpustilo v dichlormethanu a přidal se Grubbův katalyzátor, tj . benzylidenbis(tricyklohexylfosfin)dichlorruthenium (0,02 mol. ekviv.). Po kompletním ukončení reakce (během dvou hodin), se reakční směs odpařila na silikagelu (1 g silikagelu na 100 mg produktu) a eluovala s rostoucím gradientem methanolu v ethylacetátu

01-2199-03-Ma

z O % na 10 %. Frakce obsahující produkt se identifikovaly pomocí TLC (jodové výpary) , sloučily a zahustily ve vakuu za vzniku čistého produktu ve formě oleje.

Alkylace

Do 0,5M fosfonamidu suspendovaného při 0 °C v bezvodém THF se přidalo butyllithium (1,15 mol. ekviv. 1,6M roztoku v hexanech). Když se všechny pevné látky rozpustily, roztok se ochladil na -78 °C, přidal se ethylbromacetát (1,6 mol. ekviv.) a reakční směs se nechala ohřát na pokojovou teplotu. Následující den vodné zpracování s fosfátovým pufrem při hodnotě pH 7 a ethylacetátem a následná chromatografie se vzrůstajícím gradientem ethylacetátu v hexanu z 0 % na 10 %, poskytly čistý produkt ve formě olej e.

Hydroxaminolýza

Do 0,7M roztoku ethylesteru rozpuštěného v bezvodém methanolu se při 0 °C přidal O-trimethylsilylhydroxylamin (2 mol. ekviv.) a následně 1M roztok monohydrátu hydroxidu hořečnatého (2 mol. ekviv.) rozpuštěný v bezvodém methanolu. Když TLC indikovala kompletní konverzi, vodné zpracování fosfátovým pufrem při hodnotě pH 2 a ethylacetátem a sušení nad síranem hořečnatým poskytlo surový produkt, který se odpařil na silikagelu (1 g silikagelu na 100 mg surového produktu) a eluoval s rostoucím gradientem methanolu v chloroformu z 0 % na 15 %. Frakce obsahující hydroxamovou kyselinu se identifikovaly na TLC vrstvách sprejem chloridu železitého, sloučily se; a

01-2199-03-Ma

zahustily ve vakuu, čímž se získala čistá hydroxamová kyselina.

Hydrogenolýza mg Cyklického olefinu se protřepalo v ethylacetátu (2 ml) s 10% palladiem na uhlíku (30 mg) při tlaku vodíku 101 Pa, dokud nedošlo k absorpci vypočteného množství vodíku. Filtrace přes polštářek celite a odstranění rozpouštědla poskytly odpovídající nasycený produkt v čistém stavu.

Hydrolýza

Ester se rozpustil v methanolu (do 0,1 mol) a při pokojové teplotě se přidal NaOH (vodný roztok, 2M, 20 mol. ekviv.). Když TLC indikovala kompletní konverzi, roztok se okyselil kyselinou chlorovodíkovou a extrahoval ethylacetátem. Extrakt se vysušil nad síranem hořečnatým, zbavil rozpouštědla ve vakuu a chromatografoval při vzrůstajícím gradientu methanolu v dichlormethanu z 10 % na 50 %. Frakce obsahující produkt se identifikovaly pomocí TLC (jodové výpary), sloučily a redukcí objemu ve vakuu se získala čistá karboxylová kyselina.

Konkrétní přípravy

Za použití výše popsaných obecných postupů se připravily následující sloučeniny:

01-2199-03-Ma ·· · ♦ · · · · ·· · • · ·» · ··· • · ·· · ···· • · · · · > · · · · · · ·· · · · · ·· ·

2a (+)Allylallylfenylfosfonát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce la allyl/Arbuzovovým postupem ve formě oleje.

3a (+)But-3-enylbut-3-enylfenylfosfonát

Připravený z dichlorfenylfosfinu butenyl/Arbuzovovým postupem ve formě oleje.

18a (+)Allylbut-3-enylfenylfosfonamid

Připravený amidací sloučeniny obecného vzorce 3a allylaminem ve formě oleje.

19a (+)Allyl(ethoxykarbony1)methylbut-3 -enylf enylfo s fonamid

Připravený alkylací sloučeniny obecného vzorce 18a ethylbromacetátem.

01-2199-03-Ma

20a ( + )Ethyl-2-oxo-2-fenylazafosforep-5-en-1-acetát

Připravený kruh uzavírající metatézou sloučeniny obecného vzorce 19a ve formě oleje.

21a, Přiklad 3 ( + )-N-hydroxy-2-oxo-2-fenylazafosforep-5-en-1-acetamid

Připravený hydroxylaminolýzou sloučeniny obecného vzorce 20a ve formě oleje. ¹³C NMR (DMSO): 166,6, 133,3,

131,5, 131,2, 130,9, 128,4, 127,6, 46,0, 44,0, 26,4, 21,5.

lb

Dichlor(4-methoxyfenyl)fosfin

Připravený z anisolu dichlorfosfinylací chloridem cíničitým ve formě oleje.

2b

Allyl(±)propenyl(4-methoxyfenyl)fosfonát

Připravený ze sloučeniny obecného allyl/Arbuzovovým postupem ve formě oleje.

vzorce lb

01-2199-03-Ma • ·· ······ ··· ···» · · · · · · • · · · · · · · · ·

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

99 99 9 9 9 9 99 9

5b

Allyl(±)allyl(4-methoxyfenyl)fosfonamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 2b amidaci allylaminem ve formě oleje.

6b

Allylethoxykarbonylmethyl(+)propenyl(4-methoxyfenyl)fosfonamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 5b alkylací ethylbromacetátem ve formě oleje, jako výsledek isomerace dvojné vazby před zpracováním.

7b

Ethyl(+)-2-(4-methoxyfenyl)-2-oxoazafosforol-3-en-l-acetát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 6b kruh uzavírající metatézou ve formě oleje.

8b

Ethyl(±)-2-(4-methoxyfenyl)-2-oxoazafosforolan-l-acetát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 7b hydrogenací ve formě oleje.

01-2199-03-Ma • ·· ······ ··· * * · · · · · · · 9 • · · ·« · ···· • 9 · · · · ··· · · · · • · · · · · · · · · · ·

9b, Příklad 7 (±)-N-hydroxy-2-(4-methoxyfenyl)-2-oxoazafosforolan-l-acetamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 8b hydroxylaminolýzou ve formě oleje. ¹³C NMR (DMSO): 165,9,

161,9, 133,8, 123,4, ,114,0, 55,2, 49,5, 45,0, 26,7, 20,6.

lc

Dichlor(4-ethoxyfenyl)fosfin

Připravený z fenetholu dichlorfosfinylací chloridem cíničitým ve formě oleje jímaného při 70-8 °C/6,6 kPa.

2c (+)Allylallyl(4-ethoxyfenyl)fosfonát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce lc allyl/Arbuzovovým postupem ve formě oleje.

16c (±)Allylethoxykarbonylmethylallyl(4-ethoxyfenyl)fosfonamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 2c amidací

N-allylglycinethylesterem ve formě oleje.

01-2199-03-Ma

11c

Ethyl(±)2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforin-4-en-l-acetát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 16c kruh uzavírající metatézou ve formě oleje.

12c, Příklad 11 (±)-N-hydroxy-2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforin-4-en-1-acetamid vzorce 11c

M+ = 311,1146 132,7, 126,3,

Připravený ze sloučeniny obecného hydroxaminolýzou ve formě oleje. ES+:

(4,8 ppm). ¹³ C NMR (DMSO): 165,6, 161,0,

123,9, 119,8, 114,3, 63,2, 50,1, 47,3, 27,1, 14,4.

17c, Příklad 12

Kyselina (±)-2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforin-4-en-l-octová

Připravená ze sloučeniny obecného vzorce 11c hydrolýzou ve formě oleje. ES+: M+ = 296,1058 (2,0 ppm). ¹³C NMR (DMSO): 161,3, 133,8, 126,9, 122,0, 118,7, 114,3,

63,2, 52,0, 49,2, 27,0, 14,4.

01-2199-03-Ma

13c

Ethyl(±)-2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforinan-l-acetát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 11c hydrogenaci ve formě oleje.

14c, Příklad 13 ( + )-N- hydroxy-2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforinan-l-acetamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 13c hydroxylaminolýzou ve formě oleje. EI+: M+ = 312,1230 (2,9 ppm). ¹³ C NMR (DMSO): 165,5, 161,3, 133,7, 122,3, 114,5, 63,2, 49,2, 48,6, 27,3, 25,7, 20,4, 14,4.

3c (+)But-3-enylbut-3-enyl(4-ethoxyfenyl)fosfonát

19c (+)Allylethoxykarbonylmethylbut-3-enyl(4-ethoxyfenyl)fosfonamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 3c amidací .N-allylglycinethylesterem ve formě oleje.

01-2199-03-Ma ·· · · tr · · · · • · · · · • · · · · · • ··· ·*··

20c

Ethyl(+)-2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforep-5-en-l-acetát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 19c kruh uzavírající metatézou ve formě oleje.

22c, Příklad 14

Kyselina (+)-2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforep-5-en-l-octová

Připravená ze sloučeniny obecného vzorce 20c hydrolýzou ve formě oleje. ¹³C NMR (DMSO): 172,3, 161,0,

132,9, 131,1, 127,8, 124,1, 114,3, 63,2, 47,1, 44,1, 26,8,

21,4, 14,4.

23c

Ethyl(±)-2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforepan-l-acetát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 20c hydrogenací ve formě oleje.

24c, Příklad 16 (+)-N-hydroxy-2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforepan-1-acetamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 23c hydroxylaminolýzou ve formě oleje. ¹³C NMR (DMSO): 166,8, 161,0,

133,2, 124,5, 114,3, 63,2, 48,9, 48,1, 30,2, 29,4, 28,8,

20,4, 14,5.

01-2199-03-Ma • ·· ····»· ·«« ···* ·· · ··· • · · ·· · · · · · * · ··· · ··· ····· • · · · · · · ·· · · ·

4c (+)Pent-4-enyl(4-ethoxyfenyl)pent-4-enylfosfonát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce lc pentenyl/Arbuzovovým postupem.

25c (+) Allylethoxykarbonylmethyl(4 -ethoxyf enyl)pent-4 -enylfosfonamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 4c amidací N-allylglycinethylesterem ve formě oleje.

26c

Ethyl(±)-2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforoc-6-en-l-acetát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 25c kruh uzavírající metatézou ve formě oleje.

27c, Příklad 9 ( + )-N- hydroxy-2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforoc-6-en-l-acetamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 26c hydroxylaminolýzou ve formě oleje. ES+: M+ = 339,1465 (2,6 ppm).

¹³C NMR (DMSO): 166,6, 160,8, 132,6, 128,8, 128,7, 125,2,

114,1, 63,1, 46,1, 45,7, 24,9, 23,6, 21,3, 14,4.

01-2199-03-Ma • · » ·

28c

Ethyl(±)-2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforocan-l-acetát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 26c hydrogenací ve formě oleje.

29c, Příklad 10 (±) -N-hydroxy-2- (4-ethoxyfenyl) -2-oxoazafosforocan-l-acetamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 28c hydroxylaminolýzou ve formě oleje. ES+: M+ = 341,1617 (3,8 ppm). ¹³C NMR (DMSO): 166,7, 160,7, 132,9, 125,4, 114,1, 63,1, 45,3, 44,7, 27,3, 26,0, 25,5, 23,1, 22,1, 14,5.

Id

Dichlor(4-(2-methylpropoxy)fenyl)fosfin

Připravený z fenylisobutyletheru dichlorfosfinylací chloridem cíničitým ve formě oleje.

2d

Allylallyl(4-(2-methylpropoxy)fenyl)fosfonát

vzorce ld

01-2199-03-Ma • ·· 999999 99 9 • · · · » · · · c 9

9 9·· 9 9 9 9 99·«

9 9 9 9 99 99 »9 9

16d

Allylethoxykarbonylmethylallyl(4-(2-methylpropoxy)fenyl)fosfonamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 2d amidací N-allylglycinethylesterem ve formě oleje.

lid

Ethyl(±)-2-(4-(2-methylpropoxy)fenyl)-2-oxoazafosforin-4-en-l-acetát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 16d kruh uzavírající metatézou ve formě oleje.

12d, Příklad 15 ( + )-W-hydroxy-2 -(4-(2-methylpropoxy)fenyl)-2-oxoazafosforin-4-en-1-acetamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce lid hydroxaminolýzou ve formě oleje. ¹³C NMR (DMSO): 165,6,

161,3, 132,8, 126,3, 123,8, 119,7, 114,4, 73,7, 50,1, 47,3,

27,6, 27,1, 18,9.

13d

Ethyl(+)-2-(4-(2-methylpropoxy)fenyl)-2-oxoazafosforinan-1-acetát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce lid hydrogenací ve formě oleje.

01-2199-03-Ma • ·» ····»· ·· · • * · · · · · · · · • ·· ·· · 9 « 9 9 fc * · · fc c ··» · · « fc ··· ···· ·· * • fcfc · · ·· ·· fc· ·

14d, Příklad 17 (+)-N-hydroxy-2-(4-(2-methylpropoxy)fenyl)-2-oxoazafosforinan-1-acetamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 13d hydroxylaminolýzou ve formě oleje. ¹³C NMR (DMSO) : 165,5, 161,6,

133,7, 122,3, 114,5, 73,7, 49,3, 48,6, 27,6, 27,3, 25,7,

20,4, 18,9.

le

Dichlor(4-fenoxyfenyl)fosfin

Připravený z fenyletheru dichlorfosfinylací chloridem hlinitým ve formě oleje destilujícího se při 150 °C/6,6 kPa (Kugelrohrova pec).

2e (±)Allylallyl(fenoxyfenyl)fosfonát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce le allyl/Arbuzovovým postupem ve formě oleje.

5e (±)Allylallyl(fenoxyfenyl)fosfonamid

Připravený amidací sloučeniny obecného vzorce 2e allylaminem ve formě oleje.

·* ·«··

01-2199-03-Ma lOe (±)-2-oxo-2-(4-fenoxyfenyl)azafosforin-4-en

Připravený kruh uzavírající metatézou sloučeniny obecného vzorce 5e.

lle (±)Ethyl-2-oxo-2-(4-fenoxyfenyl)azafosforin-4-en-l-acetát

Připravený alkylací sloučeniny obecného vzorce lOe ve formě oleje.

12e, Příklad 1 (±)-N-hydroxy-2-oxo-2-(4-fenoxyfenyl)azafosforin-4-en-l-acetamid

Připravený hydroxaminolýzou sloučeniny obecného vzorce lle ve formě oleje. ¹³ C NMR (CD₃CN) : 167,5, 162,1,

156.6, 134,5, 131,2, 127,6, 126,6, 125,7, 121,0, 120,4,

118.7, 51,5, 49,7, 28,0.

13e (+)Ethyl-2-oxo-2-(4-fenoxyfenyl)azafosforinan-1-acetát

Připravený hydrogenací sloučeniny obecného vzorce lle prakticky v kvantitativním výtěžku.

01-2199-03-Ma (+)-N-hydroxy-2-oxo-2-(4-fenoxyfenyl)azafosforinan-l-acetamid • · ···· ·· • · · • · · • · · · · · · ·

14e, Příklad 2

Připravený hydroxylaminolýzou sloučeniny obecného vzorce 13e ve formě oleje. ¹³C NMR (CD₃CN) : 167,3, 162,2,

156,4, 135,0, 131,0, 125,5, 125,3, 120,8, 118,6, 51,7,

50,2, 28,3, 26,8, 21,1.

3e (±)But-3-enylbut-3-enyl(4-fenoxyfenyl)fosfonát

Připravený butenyl/Arbuzovovým postupem ze sloučeniny obecného vzorce le ve formě oleje.

18e (±)Allylbut-3-enyl(4-fenoxyfenyl)fosfonamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 3e amidaci allylaminem ve formě oleje.

19e (±)Allyl(ethoxykarbonyl)methylbut-3-enyl(4-fenoxyfenyl)fosfonamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 18e alkylací ethylbromacetátem ve formě oleje.

• · • · • · 4

01-2199-03-Ma

20e

Ethyl(±)-2-OXO-2-(4-fenoxyfenyl)azafosforep-5-en-l-acetát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 19e kruh uzavírající metatézou ve formě oleje.

21e, Příklad 4 (±)-N-hydroxy-2-oxo-2-(4-fenoxyfenyl)azafosforep-5-en-l-acetamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 20e hydroxylaminolýzou ve formě oleje. ¹³C NMR (DMSO): 166,5,

159,8, 155,2, 133,3, 131,1, 130,2, 127,6, 127,2, 124,4,

119,6, 117,4, 46,2, 44,0, 26,5, 21,5.

23e (+)-2-oxo-2-(4-fenoxyfenyl)azafosforepan-l-acetát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 20e hydrogenací ve kvantitativním výtěžku ve formě oleje.

24e, Příklad 5 ( + )-N-hydroxy-2-oxo-2-(4-fenoxyfenyl)azafosforepan-1-acetamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 23e hydroxaminolýzou ve formě oleje. MS, přesná hmota, M+ = 374,1400 (1,1 ppm). ¹³C NMR (DMSO): 166,7, 159,7, • · t I • ·

01-2199-03-Ma

155,2, 133,5, 130,2, 127,8, 124,3, 119,7, 117,3, 48,8,

47,8, 30,0, 29,3, 28,7, 20,4.

32e (±) (IR*) Ethoxykarbonylhexa-4,5-dienyl (£?*) allyl- (4-fenoxyfenyl)fosfonamid

Připravený amidací sloučeniny obecného vzorce 2e ethyl(±)-2-aminohepta-5,6-dienoátem (Huby, J. Chem. Soc., Perkin trans., I, str. 145 až 155, 1991) . Směs stereoisomerú se separovala chromatografií. Pomaleji vznikající isomer obecného vzorce 32e se izoloval ve formě oleje.

33e

Ethyl(±)[5R*,2S*]-1-((R*)allyl(fenoxyfenyl)fosfonyl)-5-ethenylpyrrolidin-2-karboxylát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 32e následujícím způsobem: 382 mg (0,9 mmol) allenu se rozpustilo v O,1M koncentraci v dichlormethanu a přidal se 1 ekviv. tetrafluorborátu stříbrného. Po 24 h se přidal další ekviv. tetrafluorborátu stříbrného a po dalších 24 h se získaná směs zpracovala následujícím způsobem: směs se naředila 25 ml dichlormethanu a 50 ml nasyceného vodného roztoku chloridu sodného a přefiltrovala se. Filtrát se extrahoval 25 ml dichlormethanu a organické fáze se sloučily, vysušily nad síranem hořečnatým, zbavily rozpouštědla ve vakuu a olejový zbytek, který se chromatograficky čistil při gradientu 20 % petroletheru v

01-2199-03-Ma

ethylacetátu až 5 % methanolu v ethylacetátu, poskytl 191 mg (50% výtěžek) sloučeniny obecného vzorce 33e ve formě oleje.

34e

Ethyl(+)(2R* , 6R* , 9S*)-2-oxo-2-(4-fenoxyfenyl)-1,2-azafosfabicyklo[4.3.0]non-4-en-9-karboxylát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 33e kruh uzavírající metatézou jako olej.

35e, Příklad 8 (+)(2R*,6R*,9S*)-N-hydroxy-2-oxo-2-(4-fenoxyfenyl)-1,2-azafosfabicyklo[4.3.0]non-4-en-9-karboxamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 34e hydroxaminolýzou ve formě oleje. MS, přesná hmota, M+ = 384,1251 (3,1 ppm). ¹³C NMR (DMSO): 170,3, 159,7,

155,2, 131,9, 130,3, 130,2, 127,8, 124,4, 120,7, 119,6,

117,5, 61,0, 57,5, 31,1, 30,4, 26,5.

lf

Dichlor(4 -(4-chlorfenoxy)fenyl)fosfin

Připravený dichlorfosfinylací 4-chlorfenylfenyletheru chloridem hlinitým ve formě oleje s bodem varu 125-35 °C/6,6 kPa.

01-2199-03-Ma

2f ( + )Allylallyl(4-(4-chlorfenoxy)fenyl)fosfonát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce lf allyl/Arbuzovovým postupem ve formě oleje.

16f (+)Allyl(ethoxykarbonyl)methylallyl(4-(4-chlorfenoxy)fenyl)fosfonamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 2f amidací N-allylglycinethylesterem ve formě oleje.

llf (±)-2-(4-(4-chlorfenoxy)fenyl-2-oxoazafosforin-4-en-l-acetát

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce 16f kruh uzavírající metatézou ve formě oleje.

12f. Příklad 6 (±)- N-hydroxy-2 -(4-(4-chlorfenoxy)fenyl-2-oxoazafosforin-4-en-1-acetamid

Připravený ze sloučeniny obecného vzorce llf hydroxaminolýzou v krystalickém stavu po rekrystalizaci z methanolu a ethylacetátu. ¹³C NMR (DMSO): 165,5, 159,3,

154,2, 133,1, 130,0, 128,2, 127,8, 126,4, 121,4, 119,7,

117,6, 50,2, 47,0, 27,0.

01-2199-03-Ma

Test MMP ínhibičních účinků

Test hodnotil účinek testovaných sloučenin na proteolytickou aktivitu metalloproteáz na základě hodnocení štěpení fluorogenního substrátu. U neštěpeného substrátu je fluorescence zhášena intramolekulárně, nicméně štěpení substrátu uvolní fluorescenční peptidy [Bickett, Anal. Biochem, 212, str. 58 až 64, 1993; Knight, FEBS Lett, 296, str. 263 až 266, 1992).

U sloučenin se testoval inhibiční účinek v případě MMP-1 a MMP-9 (Chemicon International, CA, USA) a MMP-2 (Biogenesis Ltd., UK). Substrátem pro MMP-1 byl M-2055 (Dnp-Pro-p-cyklohexyl-Ala-Gly-Cys(Me)-His-Ala-Lys(N-Me-Abz)-NH₂) / který má strukturu podobnou syntetickému peptidu a který se získal od společnosti Bachem AG, Švýcarsko. Substrátem pro MMP-2 a MMP-9 byla fluoresceinem konjugovaná želatina získaná od společnosti Moiecular Probes lne., OR, USA.

Enzymy se aktivovaly fenylrtufacetátem a inkubovaly s vhodným substrátem a různými koncentracemi testované sloučeniny. Excitačními/emisními vlnovými délkami byly 350/450 a 485/530 pro M-2055, respektive pro želatinu.

Molární koncentrace testovaných sloučenin poskytující 50% inhibicí enzymatické aktivity (IC₅₀) se vypočetla z křivky dávka-odezva. Pro lepší přehlednost jsou výsledky zaznamenány ve formě pIC₅₀, tj . -log(IC₅₀).

Výsledky jsou shrnuty v níže uvedené tabulce 1.

• ·

01-2199-03-Ma

Hodnoty pIC₅₀ pro cyklické azafosfaderiváty uhlovodíků

	MMP-1	MMP-2	MMP-9
Příklad 1	5,6	8,3	9,0
Příklad 4	5,1	8,1	8,2
Příklad 5	5,2	8,3	8,5
Příklad 6	5,3	8,4	9,1

Jak ukazuje tabulka, cyklické fosfaderiváty uhlovodíků vykazují silnou inhibici MMP.

• ·

01-2199-03-Ma

Claims

Tv M • · ···· f·* » . · · · · • · · * · • » · · ♦ I · · . I · « · · ·

1. Sloučenina obecného vzorce I kde vazby označené jako a, bac nezávisle reprezentují jednoduchou nebo dvojnou vazbu;

man znamenají nezávisle 0, 1, 2 nebo 3 za předpokladu, že man současně neznamenají 0;

X znamená atom síry nebo atom kyslíku;

Ri znamená kde

E, pokud je přítomno, reprezentuje vazbu, methylenovou skupinu nebo ethylenovou skupinu případně substituovanou atomem halogenu, hydroxyskupinou, kyano01-2199-03-Ma skupinou, nitroskupinou, alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, halogenalkylovou skupinou, hydroxyalkylovou skupinou, alkoxyskupinou nebo alkylkarbonylovou skupinou;

s a t znamenají nezávisle 0, 1, 2 nebo 3;

A a A' nezávisle reprezentují vazbu nebo nasycený nebo nenasycený případně substituovaný cyklický nebo heterocyklický uhlovodíkový diradikál nebo triradikál;

Y reprezentuje vazbu, atom kyslíku, atom síry, C(O)NR₁₀, NR₁₀C (O) nebo NR₁₀, kde R₁₀ znamená atom vodíku, hydroxyskupinu, větvený nebo přímý, nasycený nebo nenasycený uhlovodíkový radikál případně substituovaný atomem halogenu, nitroskupinou, kyanoskupinou, hydroxylovou skupinou, alkoxyskupinou, alkylkarbonylovou skupinou nebo alkylaminoskupinou;

R₈ reprezentuje vazbu, atom vodíku, alkanový diradikál nebo alkenový diradikál, jeden nebo více etherdiradikálů (R'-O-R'') nebo aminových diradikálů (R^N-R¹¹), kde R' a R¹' nezávisle reprezentují alkylovou skupinu nebo alkenylovou skupinu s 0 až 3 atomy uhlíku;

R₉ reprezentuje atom vodíku, hydroxyskupinu, atom halogenu, kyanoskupinu, nitroskupinu, větvený nebo přímý, nasycený nebo nenasycený uhlovodíkový radikál případně substituovaný atomem halogenu, kyanoskupinou, hydroxylovou skupinou, alkoxyskupinou, alkylkarbonylovou skupinou nebo alkylaminoskupinou; NRnR₁₂, C(0)NRnR₁₂, C(0)RhR₁₂, C0(0)RnR₁₂, S(0)₂Ru, kde každý

Ru a R12 nezávisle reprezentují atom vodíku, atom halogenu, větvený nebo přímý, nasycený nebo nenasycený

01-2199-03-Ma • · · · uhlovodíkový radikál případně substituovaný atomem halogenu, kyanoskupinou, hydroxylovou skupinou, alkoxyskupinou, alkylkarbonylovou skupinou nebo alkylaminoskupinou;

R₂ reprezentuje hydroxamovou kyselinu, karboxylovou kyselinu, fosfonovou kyselinu nebo merkaptomethylovou skupinu;

R₃ a R₄ každý nezávisle reprezentuje atom vodíku, atom halogenu, kyanoskupinu, hydroxyskupinu, nitroskupinu, větvený nebo přímý, nasycený nebo nenasycený alkanový nebo alkenový radikál případně substituovaný atomem halogenu, kyanoskupinou, nitroskupinou, hydroxyskupinou, alkoxyskupinou, alkylkarbonylovou skupinou nebo alkylaminoskupinou; nebo R₃ a R₄ společně s atomy uhlíku, na které jsou navázány, a s navázaným atomem dusíku tvoří heterocyklický kruh;

každý R₅, R₆ a R₇ nezávisle reprezentuje atom vodíku, hydroxyskupinu, nitroskupinu, kyanoskupinu, atom halogenu, větvený nebo přímý, nasycený nebo nenasycený uhlovodíkový radikál případně substituovaný atomem halogenu, kyanoskupinou, nitroskupinou, hydroxylovou skupinou, alkoxyskupinou, alkylkarbonylovou skupinou nebo alkylaminoskupinou; nebo R₄ a R₅, R₅ a R₆ nebo R₆a R₇ společně s atomem uhlíku, na který jsou navázány, tvoří nasycený nebo nenasycený případně substituovaný cyklický nebo heterocyklický kruh;

a její farmaceuticky přijatelné soli.

01-2199-03-Ma • · ·· ···· · · · • · · · · · · · ·· ·· · · · · · • ··· · · · · · · · · • · ···· · · · ·· ·· ·· ·· ·
2. Sloučenina podle nároku 1, kde X znamená atom kyslíku.
3. Sloučenina podle nároku 1, kde a a c oba znamenají jednoduché vazby; b znamená dvojnou vazbu a R₄ a R₇znamenají nezávisle bud' atom vodíku, nebo methylovou skupinu.
4. Sloučenina podle nároku 1, kde je E nepřítomen; s a t oba znamenají 0; a Y znamená atom kyslíku v para poloze na A; a A znamená fenylovou skupinu.
5. Sloučenina podle nároku 1, kde R₂ znamená hydroxamovou kyselinu.
6. Sloučenina podle nároku 1 zvolená z množiny sestávající z:

( + )-N-hydroxy-2-oxo-2-(4-fenoxyfenyl)azafosforin-4-en-l-acetamidu;

( + ) -IV-hydroxy-2-oxo-2 - (4-f enoxy fenyl) azafosforinan-1-acetamidu;

( + ) -.N-hydroxy-2 -oxo-2 -f enylazaf osf orep-5 -en-1 -acetamidu;

( + )-N-hydroxy-2-oxo-2-(4-fenoxyfenyl)azafosforep-5-en-l-acetamidu;

(±)-N-hydroxy-2-oxo-2-(4-fenoxyfenyl)azafosforepan-1-acetamidu;

(+)-2V-hydroxy-2 -(4-(4-chlorfenoxy)fenyl)-2-oxoazafosforin-4-en-1-acetamidu;

01-2199-03-Ma ( + )-N-hydroxy-2 -(4-methoxyfenyl)-2-oxoazafosforolan-l-acetamidu;

(±)(R*,R*,S*)-IV-hydroxy-2-oxo-2-(4-fenoxyfenyl)-1,2-azafosfabicyklo[4.3.0]non-4-en-9-karboxamidu;

( + )-N-hydroxy-2 -(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforoc-6-en-l-acetamidu;

(+)-N-hydroxy-2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforin-4-en-l-acetamidu;

kyseliny (±)-2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforin-4-en-1-octové;

( + )-N-hydroxy-2 -(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforinan-l-acetamidu;

( + )-77-hydroxy-2 -(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforocan-l-acetamidu;

kyseliny (±)-2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforep-5-en-l-octové;

( + )-N- hydroxy-2-(4-(2-methylpropoxy)fenyl)-2-oxoazafosforin-4-en-1-acetamidu;

(±)-TV-hydroxy-2-(4-ethoxyfenyl)-2-oxoazafosforepan-l-acetamidu; a ( + ) -TV-hydroxy-2- (4- (2-methylpropoxy) fenyl) -2-oxoazafosforinan-1-acetamidu.
7. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu obecného vzorce I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl společně s farmaceuticky přijatelným excipientem.
8. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 pro použití jako léčivo.

01-2199-03-Ma
9. Způsob léčby nebo prevence chorob nebo stavů zahrnujících porušení tkáně, zánět, proliferační poškození, zánětlivé poškození neuronů, choroby související s angiogenezí, vyznačující se tím, že zahrnuje podání účinného množství sloučeniny podle nároků 1 až 6 pacientovi.
10. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že chorobou nebo stavem je kloubní revmatismus, osteoartritida, osteopenie, osteoporóza, periodontitida, zánět dásní, korneální, epidermální nebo gastrická ulcerace, stárnutí kůže, nádorové metastázy, tumorová invaze, tumorový růst, roztroušená skleróza, artritické stavy, růst solidních nádorů, lupenka, proliferační retinopatie, neovaskulární glaukom, okulární tumory, angiofibromy, hemangiomy, artritida, astma, septický šok, horečka, kardiovaskulární vlivy, hemoragie, srážení krve, akutní fázová odezva a apoptóza.
11. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 pro výrobu léčiva pro léčbu nemocí nebo stavů zahrnujících porušení tkáně, zánět, proliferační poškození, zánětlivé poškození neuronů a choroby související s angiogenezí.
12. Použití podle nároku stavem kloubní revmatismus, osteoporóza, periodontitida, epidermální nebo gastrická

11, kde je chorobou nebo osteoartritida, osteopenie, zánět dásní, korneální, ulcerace, stárnutí kůže,

01-2199-03-Ma « ·· 0 0 0 0 0 0 0 0 0

0 0 · · ·· · · 0 · « 0 0 · · · ····

0 0 0 0 0 · ··· ····· • 00 0·0· ·· · 00000 » · » « · · · nádorové metastázy, tumorová invaze, tumorový růst, roztroušená skleróza, artritické stavy, růst solidních nádorů, lupenka, proliferační retinopatie, neovaskulární glaukom, okulární tumory, angiofibromy, hemangiomy, artritida, astma, septický šok, horečka, kardiovaskulární vlivy, hemoragie, srážení krve, akutní fázová odezva a apoptóza.