CZ20023469A3 - Lipopolysacharidy - Google Patents
Lipopolysacharidy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20023469A3 CZ20023469A3 CZ20023469A CZ20023469A CZ20023469A3 CZ 20023469 A3 CZ20023469 A3 CZ 20023469A3 CZ 20023469 A CZ20023469 A CZ 20023469A CZ 20023469 A CZ20023469 A CZ 20023469A CZ 20023469 A3 CZ20023469 A3 CZ 20023469A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- lps
- coli
- lipoid
- dsm
- chain
- Prior art date
Links
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 title claims abstract description 63
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 57
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 4
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 claims description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 2
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 claims description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 claims 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 abstract description 6
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 abstract description 4
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 20
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 19
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 2-Amino-2-Deoxy-Hexose Chemical compound NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 7
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 7
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- FZHXIRIBWMQPQF-UHFFFAOYSA-N Glc-NH2 Natural products O=CC(N)C(O)C(O)C(O)CO FZHXIRIBWMQPQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 6
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 5
- 238000001030 gas--liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 4
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 4
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 3
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 description 2
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 2
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000005016 nuclear Overhauser enhanced spectroscopy Methods 0.000 description 2
- -1 nucleoside oligosaccharide Chemical class 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 2
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000001551 total correlation spectroscopy Methods 0.000 description 2
- XLEYFDVVXLMULC-UHFFFAOYSA-N 2',4',6'-trihydroxyacetophenone Chemical compound CC(=O)C1=C(O)C=C(O)C=C1O XLEYFDVVXLMULC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VOBNSQKMDIOJTQ-UHFFFAOYSA-N 2-aminoethyl phosphono hydrogen phosphate Chemical compound NCCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O VOBNSQKMDIOJTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VUEOQWDVOXEFDJ-UHFFFAOYSA-N 2-pyridin-2-ylacetic acid;hydrate Chemical compound O.OC(=O)CC1=CC=CC=N1 VUEOQWDVOXEFDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RVBUGGBMJDPOST-UHFFFAOYSA-N 2-thiobarbituric acid Chemical group O=C1CC(=O)NC(=S)N1 RVBUGGBMJDPOST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 description 1
- 241000697872 Bactria Species 0.000 description 1
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 229910004373 HOAc Inorganic materials 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N Heavy water Chemical compound [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 1
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 108020002230 Pancreatic Ribonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000005891 Pancreatic ribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 241001523956 Parengyodontium album Species 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- 239000003377 acid catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SIHHLZPXQLFPMC-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol;hydrate Chemical compound O.OC.ClC(Cl)Cl SIHHLZPXQLFPMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 235000021310 complex sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 231100000284 endotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002346 endotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007689 endotoxicity Effects 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003953 foreskin Anatomy 0.000 description 1
- 239000005350 fused silica glass Substances 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 150000002386 heptoses Chemical class 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 description 1
- IXHBTMCLRNMKHZ-LBPRGKRZSA-N levobunolol Chemical compound O=C1CCCC2=C1C=CC=C2OC[C@@H](O)CNC(C)(C)C IXHBTMCLRNMKHZ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 238000006140 methanolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- KSSNXJHPEFVKHY-UHFFFAOYSA-N phenol;hydrate Chemical compound O.OC1=CC=CC=C1 KSSNXJHPEFVKHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Lipopolysacharidy
Oblast techniky
Vynález se týká nových lipopolysacharidů z E.coli (LPS). Tyto LPS se liší od dosud známých LPS z E.coli zvláště ve fosforylované cukerné části jádra ve stupni polymerizace O-řetězce. Lipoid A odpovídá strukturálně a biologicky obvyklému typu E.coli. Popsaný LPS není jen vhodný pro identifikaci kmenu coli, který jej nese, nýbrž mu také propůjčuje sníženou patogenitu při zachování jeho imunomudulačního účinku.
Dosavadní stav techniky
Endotoxiny se rozumí bakteriální strukturní složky, které se oproti exotoxinům nevylučují živými baktriemi, nýbrž se především uvolňují po autolýze (rozpouštění buněčné struktury). U takzvaných klasických endotoxinů se jedná o lipopolysacharidy stálé za horka, dále nazývané jako LPS, z vnějších buněčných membrán Gram-negativních bakterií. LPS sestávají z takzvaného lipoidu A, oligosacharidu jádra a specifického O-řetězce, přičemž lipoid A odpovídá za toxický účinek LPS.
Endotoxiny stimulují v makroorganizmu produkci mediátorů imunosystému, jako je interleukin 1, zkráceně IL-1, a faktor tumorové nekrózy, zkráceně TNFa.
O složení endotoxinů enterobakterií a zvláště E-coli byla již provedena celá řada výzkumů, přičemž se zjistilo, že mutanty S/R zpravidla obsahují pouze jednu • ·
-2opakovací jednotku, tedy „repeating unit“ svého O-řetězce (srov. obr.1). Vychází se z toho, že v těchto případech gen, který kóduje pro polymerizační enzym Ořetězce, je defektní a proto se na oligosacharid jádra přenáší pouze jedna „repeating unit“. Struktury LPS podobného typu, ale jiné struktury, se také často nacházejí v lidských patogenních zárodcích, jako je neisseria, vibrio, campylobacter, helicobacter atd. Tyto zárodky disponují LPS, který mu umožňuje, aby se imunitní obrana hostitele pomocí zvláštního molekulárního mimikri kromě jiného zbavila přítomnosti kyseliny sialinové a oligosacharidů s obsahem sialinové kyseliny, které se podobají glykoproteinům a glykolipidům savců. Pro E.coli DSM 6601 byl zhotoven 06-serotyp. Tato struktura byla zkoumána a publikována P.E.Janson et al., Carbohydr.Res. 131 (1984) 277-283. Struktura odpovídá vzorci uvedenému na obr. 2.
Také lipoid A bakterií coli byl zkoumán různými výzkumnými týmy, přičemž se ukázalo, že struktura lipoidu A zpravidla existuje v hexaacylové formě a shoduje se pro všechny serotypy E.coli (obr.3). Struktura hexaacylové sloučeniny byla zveřejněna v roce 1984 Th.Rietschel et al., Structure and conformation of the lipid A component of lipopolysacharides; Handbook of Endotoxins (Proctor, R., ed.), Vol.1, Chemistry of Endotoxin (E.Th.Rietschel, ed.), Elsevier, Amsterdam (1984), stránky 187-200 a odpovídá zobrazení na obr. 3.
Specifický O-řetězec a lipoid A jsou společně vázány oligosacharidem jádra. Doposud je u E-coli známo 5 různých oligosachridů jádra; vynález se odkazuje na O. Holst et al., Chemical structure of the core region of lipopolysaccharide, v: Bacterial Endotoxic Lipopolysaccharides, Vol. 1, Morrison D.C. a Ryan, J.L. (ed.), Boča Raton, FL, USA (1992) stránky 135-170 (srov. obr. 4).
Podstata vynálezu
Při výzkumech LPS E.coli kmene DSM 6601 se ukázalo, že lipoid A ve svém složení odpovídá hexaacylové formě lipoidu A popsaného také pro E.coli.
Výzkumy ohledně uvolňování IL-1 a TNFa v lidských monocytech potvrzují, že lipoid A má stejnou aktivitu, a proto s velkou pravděpodobností odpovídá známé struktuře lipoidu A E.coli (srov. obr.5, obr.6). Tato doměnka byla potvrzena chemickými analýzami.
Struktura specifického O-antigenu E.coli DSM 6601 překvapuje skutečností, že se v řetězci zřejmě pravidelně opakuje pouze jediná „repeating unit“ (srov. obr. 1_), z čehož lze usoudit, že se u kmene DSM 6601 jedná o mutant S/R, což je pro lidský izolát nanejvýš neobvyklé. Struktura této „repeating unit“ ale odpovídá, jak ukazuje serologická analýza, základnímu vzoru O-řetězce E-coli 06.
Oblast jádra u kmene DSM 6601 odpovídá známé struktuře R1. Strukturální zvláštnosti spočívají ovšem v tom, že bylo analyticky zjištěno 8 fosfátových zbytků na molekulu LPS, přičemž na lipoid A zpravidla připadají 2 fosfátové zbytky. Dále byl nalezen nestechiometrický obsah pyrofosfoethanolaminu.
Souhrnně se proto zjistilo, že se LPS kmene DSM 6601 výrazně liší od dosud známého LPS z E.coli, zvláště ve fosforylovanén cukerném zbytku jádra a ve stupni polymerizace O-řetězce. Lipoid A odpovídá strukturálně a biologicky obvyklému typu E.coli, což podtrhuje roli této látky při biologické účinnosti. Popsaný LPS je vhodný nejen pro identifikaci kmene coli, který nese, nýbrž mu také propůjčuje sníženou patogenitu při zachování jeho imunomodulačního ··· · 9 ··· ···· ·· ··. .... ···· účiku. Skutečnost, že O-řetězec je vázán β- místo α-glykozidickou vazbou, se mohla nejprve výrazně projevit na příkladu S/R-mutantů DSM 6601 E.coli.
U lipopolysacharidu (LPS) E.coli DSM 6601 se jedná o novou smooth-rough (S/R)-strukturu, která se na jedné straně skládá z dosud známé dílčí struktury (specifický O-řetězec, oligosacharid jádra a lipoid A), na druhé straně byla plně charakterizována v předkládané komplexní formě (srov. Obr.7). Specifický Ořetězec, sestávající jen z jediné opakující se jednotky („repeating unit“) serotypu 06, je β-glykozidicky vázán na oligosacharid jádra a tím je připojen jinak, než Ořetězec (α-glykozidicky). Oligosacharid jádra má strukturu R1, chemický nález, který se potvrdí serologickými vyšetřeními R1-specifickými protilátkami. Složky lipoidu A mají pro lipoid A E.coli určitou charakteristickou chemickou strukturu.
LPS E.coli kmene DSM 6601 má překvapující homogenitu. Lze zjistit pouze heterogenitu s ohledem na fosfátové substituenty (PP a P-Etn vs. P a P), která se především popisuje v této formě. Pomocí komplexních analýz NMR se mohl substituent P-Etn v oligosacharidu jadra jednoznačně stanovit oligosacharidu jádra R1 v poloze 2 druhé heptozy (Hep).
Komplexní struktura LPS kmene DSM 6601 je zobrazena na obr.7.
Následně se vynález blíže objasní pomocí příkladů.
·· • ···
-5Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Výroba LPS
LPS byl získán z promyté a vysušené bakteriální hmoty po modifikované extrakci směsí fenol/voda; potud se vynález odkazuje na O. Westphal et al., Bactrial Lipopolysaccharides, Extraction with Phenol-Water and Futher Applications of the Proceduře, Meth. Cabohydr. Chem., Vol.V (1965) str. 83-91.
g suchých vymrazených bakterií, které byly nejdříve dvakrát promyty destilovanou vodou, byly podle Westphala a Janna extrahovány podle odpovídajícího modifikovaného předpisu. Modifikace spočívala v následné úpravě enzymu (DNAza, RNAza, Proteináza K) vodného extraktu, která slouží k tomu, aby se odstranily eventuální cizí proteiny a složky DNA/RNA. Proto se vodná fáze (ca. 1,2 I) při pokojové teplotě smíchá s 20 mg RNAzy (ribonuklaza A, bovine pancreas, Sigma) a 20 mg DNAzy (DNAza I, bovine pancreas, grade II, Sigma) a směs se při pokojové teplotě míchá 30 hodin. Následně se přidá 20 mg proteinázy K (tritirachium album, Boehringer Mannheim) a míchá dalších 12 hodin. Suspenze se potom 24 hodin při teplotě 4 °C třikrát dialyzuje 15 I destilované vody a následně suší vymrazením. Extrakt upraveného enzymu se opět pohltí v destilované vodě, takže se dosáhne konečné koncentrace 50 mg/ml. Tato suspenze se třikrát v chladu ultracentriguguje (155.000xg, 4 °C, 4 h). Sediment (LPS) se pohltí ve 150 ml destilované vody a ještě hednou tři dny dialyzuje vodou a následně lyofilizuje (výtěžek LPS: 1,45 g, 3,1 % hmotn/hmotn).
Příklad 2
Analýza LPS z E.coli kmene DSM 6601
Hexosamin (HexN) (znamená glukosamin + galaktosamin, GIcN+GalN) byl podle modifikovaného testu Morgan-Elson stanoven (Strominger, J.L., Park, J.T Thompson, R.E. J. Biol. Chem. 234, 3263-3268 (1959)), ale alternativně také pomocí HPLC (PICO-TAG, Waters). Oproti testu Morgan-Elson mohou být při tomto analytickém způsobu GlcN a GalN nejen odděleně stanoveny a kvantifikovány, nýbrž lze tímto způsobem paralelně zjistit přítomnost GIcNfosfátu, 2-ethanolaminu (Etn) a 2-ethanolaminofosfát (Etn-P), které se v LPS často nacházejí. Plynová-kapalinová chromatografie (GC) byla provedena na plynovém chromatografu Varian 3700 GC nebo Hewlett Packard (HP 5890 Serie II) na kapilární koloně (fused-silica SPB-5®, 30 m, Supelco). Kombinace plynovákapalinová chromatografie/hmotnostní spektrometrie (GC-MS) probíhala na hmotnostním spektrometru (HP Modell 5989), který byl vybaven kapilární kolonou HP-1 (30 m, Hewlet Packard). Analýzy GC nebo GC-MS byly použity pro stanovení neutrálního cukru (Glc, Gal, Hep, Man) jako jejich alditolacetáty (Sawardeker, J.S., Slonerker, J.H.Jeanes, A. Anal. Chem. 37, 1602-1604)) a také pro stanovení a kvantifikaci masných kyselin jako jejich methylesterových derivátů mastných kyselin po silné methanolýze (2M HCI/MeOH, 120 °C, 16 h) (Wollenweber, H.W. a Rietschel, E,Th., Analysis of lipopolysaccharide (lipid A) fatty acids, J.Microbiol.Meth. 11, (1990) 195-211) a extrakci chloroformem. U obou způsobů analýzy GC se začalo při teplotě 150 °C (izotermicky 3 minuty) a pomocí lineárního teplotního gradientu 5 °C/min. se zvýšilo na teplotu 320 °C. Fosfát byl stanoven podle Lowry et al. (Lowry, O,H., Roberts, N.R., leiner, K.Y., Wu, M.KL. Farr, A.L., J.Biol.Chem. 207, 1-17 (1954)) a 2-keto-3-desoxy-D-mano.,>4
-7oktulozonová kyseliny (Kdo) pomocí zbytku kyseliny thiobarbiturové (Waravdekar, V.C.& Saslaw, L.D., J.Biol.Chem. 234, 1945-1950 (1959)).
Provedení a čištění volného lipoidu A oligosacharidu jádra
LPS (258,8 mg) byl suspendován v 25 ml 0,1 M NaOAc/HOAc (pH 4,4) a při teplotě 100 °C 1 hodinu podroben mírné kyselé hydrolýze. Poto byl lipofilní podíl (lipoid A) třikrát extrahován z hydrolyzátu 25 ml chloroformu (výtěžek 23,2 mg). Lipoid A z organické fáze byl dále čištěn pomocí preparativní vrstvové chromatografie (PSC) (2 mm PSC Kieselgel 60 Platte, E.Merck, Darmstadt), která se chromatografovala směsí chloroform-methanol-voda 100:75:15 (obj/obj/obj) a vyvinula ponořením do destilované vody. Tímto způsobem se získalo 6 frakcí, ze kterých hlavní frakce (Rf s 0,4) představuje vyčištěný difosforylovaný hexaacyl-lipoid A (DPHLA-Ec66oi)· Vyčištěný DPHLA-Ec6601 (výtěžek 2,06 mg) byl rozpuštěn ve směsi chloroform-methanol 8:2 (obj/obj) a před MALDI-TOF-MS upraven iontoměničem (Amberlite IRA 120, forma H+). Část (250 gg) vyčištěného DPHLA-EC6601 byla použita pro biologické experimenty.
Vodná fáze chloroformové extrakce byla sušena vymrazením (výtěžek: 272 mg) a oligosacharid byl dále čištěn pomocí kolony TSK [3,5x89 cm, TSK HW-40(S), E.Merck] ve směsi pyridin-kyselina octová-voda 8:20:2000, (obj/obj/obj). Jednotlivé oligosacharidové frakce (Pool A, B, C a D) byly analyzovány pomocí GC-MS a spektroskopie NMR. Hlavní frakce (Pool A, #28-41; 49,05 mg), která obsahovala jako cukerné složky O-řetězce (Man, GalNac), tak také složky oligosacharidu (Hep, Kdo), byly dále čištěny. Ostatní frakce obsahovaly monosacharidy, blíže nezkoumané artefakty Kdo (anhydro- a laktony) a nakonec sůl. Hlavní frakce dělení TSK ukázala, jak v analýze GC-MS, tak také v analýze
.......i..:..
NMR, všechny složky oligosacharidu jádra (Kdo, Gal, Hep) a O-řetězce (Man, GalNAc) a byly dále zpracována.
Proto bylo nejdříve zkoumáno, zda je analytická vysokotlaká chromatografie s výměnou aniontů („high pressure anion exchange chromatografy, HPAEC“) vhodná pro homogenní čištění oligosacharidů. K tomu byla použita specifická metodika HPLC pro analýzu komplexních cukerných struktur (systém DIONEX) s analytickou kolonou CarboPac PA1; (4,6 mm x 250 mm) a lineárním gradientem soli (5 min při 0, potom 50 min. na 0,5 M NaOAc) při průtoku 1 ml/min. Eluát byl detekován pomocí pulsního amperometrického detektoru (PAD) na snížených ekvivalencích (molekuly cukru). Tímto způsobem se mohly získat čtyři oligosacharidové frakce, které byly dále čištěny analogicky pomocí semipreparativní HPAEC.
Semipreparartivní HPAEC probíhala pomocí kolony CarboPac PA1 [(9 mmx250 mm) systém Dionex] se stejným gradientem soli jako při analytickém HPAEC (5 min. při 0, potom 50 min. na 0,5 M NaOAc) a průtoku 4 ml/min. Nanesení oligosacharidu (42 mg; pool A z kolony TSK) na semipreparativní HPAEC probíhalo ve dvou analogických bězích HPAEC. Eluát byl ve frakcích shromážděn za jednu minutu a ty byly jednotlivě podrobeny analytické HPAEC. Tímto způsobem byly pomocí semipreparativní HPAEC získány dvě hlavní frakce (frakce I, retenční doba tg ~ 12 min. a frakce II, tg ~ 15 min.). Obě frakce HPAEC musely být před MALDI-TOF-MS a analýzou NMR odsoleny pomocí kolony G-10 (2,5x120 cm) (výtěžek:frakce I 4,68 mg; frakce II 4,39 mg).
-9Hmotnostní spektrometrie matrix-assisted laser desorption/ionisation timeof-flight (MALDI-TOF)
Hmotnostní spektrometrie matrix-assisted laser desorption/ionisation time-offlight (MALDI-TOF-MS) byla snímána na neutronovém spektrometru (spočívající v době přeletu) Bruker-Reflex (Bruker- Franzen Analytik, Břemen) výlučně v lineární konfiguraci a v negativním modusu při urychlovacím napětí 20 kV a „delayed ion extraction“. Vzorky byly nejdříve rozpuštěny v chloroformu (lipoid A) nebo destilované vodě (frakce oligosacharidu) na roztok o koncentraci 10 pg/μΙ a jeho část 2 μΙ byla s 2 μΙ matečného roztoku, sestávající z 0,5 M 2,4,6trihydroxyacetofenonu (Aldrich, Steinheim) roztuštěna v methanolu. Části (0,5 μΙ) této směsi byly naneseny na kovový nosič a vysušeny fénem.
Spektroskopie NMR
Jednorozměrná (1D) 1H a 31P-NMR- a dvourozměrná (2D) NMR spektra byla snímána spektrometrem Bruker Avance DRX-600 (Bruker, Rheinstetten) a spektra 13C NMR byla snímána spetrometrem Bruker AMX-360 při 300 K v 2H2O. Před každým měřením byly vzorky dvakrát sušeny vymrazením deuterizovanou vodou 2H2O). Jako externí referenční signál byl použit aceton (3h 2,225 ppm, 3c 31,45 ppm) nebo 85% H3PO4 (δΡ 0 ppm). Standardní software Bruker (XWINNMR 1.3) byl použit pro snímání dat NMR. Doby míchání pro TOCSY (total correlated spectroscopy) popř. NOESY (nuclear overhauser enhancement spectroscopy) byly 100 popř. 500 ms.
- 10• · · ·
Serologické analýzy
Serologické analýzy byly provedeny jako Western-Blots, které byly vyvinuty třemi různými protilátkymi.
1. Polyklonální anti-O6-antiserum (králičí) bylo vyrobeno z E.coli kmene DSM 6601 (serotyp O6:K5:H1) v hygienickém ústavu Hamburg (Hygieneinstitut) (prof. Bockenmuhl).
2. Polyklonální anti-E-co// R1-antiserum (králičí, interní označení: K299/d58) bylo získáno imunizací drsnou formou mutantu, která obsahuje jádro R1 (anti-R1).
3. Monoklonální protilátka (WN1-222-5, interní označení F 167), byla použita, která reaguje křížově proti všem jádrovým oligosacharidům E.coli již od minimální struktury (>Rd).
··♦·
-11Tabulka
| Analýza složek E.coli LPS extrahovaného z kmene DSM 6601 | ||
| Složka | Množství složek nmol/mg (mol/LPS)a | |
| Sacharidy | Analýza 1 | Analýza 2 |
| GlcNb | 283 (1,8) | n.b |
| GalN | 139 (0,9) | n.b. |
| HexN0 | 591 (3,8) | 589 (2,9) |
| Kdo | 248 (1,6) | 242 (1,2) |
| Man | 321 (2,1) | 383 (1,9) |
| Gal | 474 (3,0) | 557 (2,8) |
| Glc | 1069 (6,9) | 1291 (6,4) |
| L, D-hep | 566 (3,6) | 442 (2,2) |
| Polární skupiny P | 1188 (7,6) | 1146(5,7) |
| Ent-P | 85 (0,5) | n.b. |
| Mastné kyseliny 12:0 | 130 (0,8) | 162 (0,8) |
| 14:0 | 156 (1,0) | 201 (1,0) |
| 14:0 (3-OH) | 460 (3,0) | 504 (2,5) |
| 16:0 | stopy | stopy |
Molární poměr jednotlivých složek (v závorkách) byl kvůli přítomnosti GalNAc a GIcNAc v O-řetězci normován na hodnotu kyseliny myristinové (14:0) (1,0 mol 14:0/mol LPS).
GlcN stanoven pomocí katalyzátoru aminokyseliny. Hodnota vznikne ze součtu hodnot GlcN a GlcN-6P.
HexN fotometricky stanovena podle Morgan-Elson
n.b. není stanoveno ·· »·00
- 12Preparáty LPS získané podle popsaného způsobu byly společně se srovnávacím LPS podrobeny polyakryamidové Gelektoroforéze (srov. obr.1). Pro provedení SDS-PAGE analýzy LPS se pracovalo s 16% polyakrylamidovým gelem (U.K., Laemmli, Cleavage of structural proteins during assembly of head of bacteriophage T4, nátuře, 227, 680-685 (1970)). Svazky LPS byly nabarveny citlivým alkalickým způsobem stříbrné barvy. (C.M. Tsai a Frasch, C.F., A sensitive silver stain for detecting lipopolysaccharides in polyacrylamide gels, Anal. Biochem., 119, 1982, 115-119).
Výsledek výzkumu je zobrazen na obrázku 1.
Příklad 3
Biologická aktivita
a) Aktivita 1L-1
Aktivita IL-1 se stanoví pomocí proliferačního testu MNC v přebytku kultury. Lidské monocyty (MNC) se izolují z periferní krve dobrovolného dárce (8x105 MNC/200 ml) a ty se převedou do sklenice a současně se míchají s testovanou látkou. Pro testování biologické aktivity in vitro se buňky nejprve stimulují LPS (10 ng/ml). Po inkubační době 8 hodin se 150 ml přebytku kultury zkoumá na uvolnění cytokinu. Aktivita IL-1 se stanoví pomocí proliferačního testu fibroblastů v přebytku kultury. Požadované fibroblasty byly získány z lidské předkožky. Proliferace těchto fibroblastů se zvýšila pomocí IL-1. Srovnáním křivky účinné dávky přebytku kultury s křivkou standardu v probitanalýze (Probitanalyse) se stanoví biologická aktivita v přebytku kultury. LPS ze známého endotoxicky
Λ·* ·· ····
♦♦ ·· • · · · • · · • · 9 « 9 9 ·· 999«
-13aktivního kmene bakterie (Salmonella friedenau) slouží jako reference (pozitivní kontrola) a je proto uvedena na obrázku 5.
b) Aktivita TNFa
Aktivita TNFa v přebytku kultury se stanoví v testu cytotoxicity s buněčnou linií L929 citlivou na TNF. Srovnání křivky účinné dávky přebytku kultury s křivkou standardu v probitanalýze umožní stanovení aktivity TNF. Také zde slouží známý endotoxicky aktivní LPS ze Salmonella friedenau jako pozitivní kontrola.
Výsledky jsou graficky zobrazeny na obrázku 6.
Výsledky ukazují, že s ohledem na rozdělení IL-1 a TNFa nelze zjistit žádné výrazné rozdíly mezi LPS ze Salmonella firedenau, který slouží jako standard a pozitivní kontrola, a LPS z kmene DSM 6601 (obr. 5 a 6, obrázky dole). To se potvrzuje také tím, že lipoid A kmene DSM 6601 je téměř shodně aktivní s vysoce čistým lipoidem A z E.coli (obr. 5 a 6, obrázky nahoře).
Zastupuje:
Claims (6)
- Patentové nároky1. Lipopolysacharid (LPS) podle struktury zobrazené na obrázku 7.
- 2. LPS podle nároku 1,vyznačuj ící se tím, že obsahuje 8 fosfátových zbytků na molekulu LPS.
- 3. LPS podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že obsahuje 0,5 mol P-Etn na molekulu LPS.
- 4. Způsob výroby LPS podle nároku 1 až 3, v y z n a č u j í c í se t í m, že promytá a vysušená bakteriální hmota E.coli se známým způsobem podrobí extrakci fenol/voda a takzvaný extrakt se zpracuje s RNAzou/ DNAzou a proteinazou K.
- 5. Způsob podle nároku 4, v y z n a č u j i c i se t i m, že se použije E.coli kmen DSM 6601.
- 6. Použití lipopolysacharidů z E.coli kmen DSM 6601 podle nároků 1 až 3 pro mikrobiologické, biotechnické, analytické, diagnostické a/nebo lékařské účely.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE10013539A DE10013539B4 (de) | 2000-03-20 | 2000-03-20 | Lipopolysaccharide aus Escherichia coli, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendungen |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20023469A3 true CZ20023469A3 (cs) | 2003-04-16 |
Family
ID=7635468
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20023469A CZ20023469A3 (cs) | 2000-03-20 | 2001-03-20 | Lipopolysacharidy |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6833451B2 (cs) |
| EP (1) | EP1266023A2 (cs) |
| JP (1) | JP2003528175A (cs) |
| KR (1) | KR20030047878A (cs) |
| CN (1) | CN1436245A (cs) |
| AP (1) | AP2002002622A0 (cs) |
| AU (2) | AU2001273899B2 (cs) |
| BG (1) | BG107115A (cs) |
| BR (1) | BR0109392A (cs) |
| CA (1) | CA2402544A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ20023469A3 (cs) |
| DE (1) | DE10013539B4 (cs) |
| EA (1) | EA005217B1 (cs) |
| EE (1) | EE200200537A (cs) |
| HK (1) | HK1053148A1 (cs) |
| HR (1) | HRP20020682A2 (cs) |
| HU (1) | HUP0204540A3 (cs) |
| IL (1) | IL151785A0 (cs) |
| IS (1) | IS6517A (cs) |
| MX (1) | MXPA02009215A (cs) |
| NO (1) | NO20024480L (cs) |
| NZ (1) | NZ520968A (cs) |
| PL (1) | PL368447A1 (cs) |
| SK (1) | SK13492002A3 (cs) |
| UA (1) | UA75068C2 (cs) |
| WO (1) | WO2001070756A2 (cs) |
| YU (1) | YU71202A (cs) |
| ZA (1) | ZA200207408B (cs) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030031684A1 (en) | 2001-03-30 | 2003-02-13 | Corixa Corporation | Methods for the production of 3-O-deactivated-4'-monophosphoryl lipid a (3D-MLA) |
| DE10328669B4 (de) * | 2003-06-26 | 2005-12-01 | Pharma-Zentrale Gmbh | Plasmidfreier Klon des E. coli Stammes DSM 6601 |
| US20050238651A1 (en) * | 2003-11-25 | 2005-10-27 | Gurtner Gregory J | Treatment of inflammatory bowel disease |
| WO2005051321A2 (en) * | 2003-11-25 | 2005-06-09 | Washington University | Treatment of inflammatory bowel disease through induction of indoleamine 2,3-dioxygenase |
| US8821884B2 (en) * | 2004-07-27 | 2014-09-02 | The Regents Of The University Of California | Compositions and methods using MD-2 mutants and chimeric proteins |
| CN100354428C (zh) * | 2005-01-13 | 2007-12-12 | 丁友玲 | 隧道式干热灭菌设备测试用内毒素指示剂的制备方法 |
| US10017727B2 (en) | 2005-11-28 | 2018-07-10 | Gen-Ichiro Soma | Method for fermentation and culture, fermented plant extract, fermented plant extract composition, method for producing lipopolysaccharide and lipopolysaccharide |
| US9664677B2 (en) | 2010-04-19 | 2017-05-30 | Massachusetts Institute Of Technology | Polymer-nanostructure composition for selective molecular recognition |
| US20130066064A1 (en) * | 2010-05-20 | 2013-03-14 | Glaxosmithkline Biologicals S.A, | Novel process |
| CN105137073A (zh) * | 2015-08-06 | 2015-12-09 | 中国兽医药品监察所 | 牛布鲁氏菌胶体金抗体检测试纸条 |
| PL432842A1 (pl) * | 2020-02-10 | 2021-08-16 | Uniwersytet Warszawski | LPS do zastosowania w indukowaniu u osobnika tolerancji na alergeny pokarmowe wywołujące alergie pokarmowe zależne od IgE |
| KR20230074410A (ko) * | 2020-03-13 | 2023-05-30 | 헤파이스토스-파마 | 해독된 지질다당류(lps), 천연 무독성 lps, 및 이의 용도 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19844191A1 (de) * | 1998-09-28 | 2000-03-30 | Pharma Zentrale Gmbh | Lipopolysaccharide aus Escherichia coli |
-
2000
- 2000-03-20 DE DE10013539A patent/DE10013539B4/de not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-03-20 NZ NZ520968A patent/NZ520968A/en unknown
- 2001-03-20 MX MXPA02009215A patent/MXPA02009215A/es unknown
- 2001-03-20 AU AU2001273899A patent/AU2001273899B2/en not_active Ceased
- 2001-03-20 CZ CZ20023469A patent/CZ20023469A3/cs unknown
- 2001-03-20 EP EP01940260A patent/EP1266023A2/de not_active Withdrawn
- 2001-03-20 UA UA2002108256A patent/UA75068C2/uk unknown
- 2001-03-20 EA EA200200997A patent/EA005217B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-03-20 WO PCT/EP2001/003153 patent/WO2001070756A2/de not_active Application Discontinuation
- 2001-03-20 HU HU0204540A patent/HUP0204540A3/hu unknown
- 2001-03-20 CA CA002402544A patent/CA2402544A1/en not_active Abandoned
- 2001-03-20 AP APAP/P/2002/002622A patent/AP2002002622A0/en unknown
- 2001-03-20 PL PL01368447A patent/PL368447A1/xx unknown
- 2001-03-20 YU YU71202A patent/YU71202A/sh unknown
- 2001-03-20 JP JP2001568957A patent/JP2003528175A/ja active Pending
- 2001-03-20 EE EEP200200537A patent/EE200200537A/xx unknown
- 2001-03-20 KR KR1020027012241A patent/KR20030047878A/ko active IP Right Grant
- 2001-03-20 BR BR0109392-4A patent/BR0109392A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-03-20 IL IL15178501A patent/IL151785A0/xx unknown
- 2001-03-20 CN CN01806916A patent/CN1436245A/zh active Pending
- 2001-03-20 AU AU7389901A patent/AU7389901A/xx active Pending
- 2001-03-20 US US10/239,254 patent/US6833451B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-03-20 SK SK1349-2002A patent/SK13492002A3/sk unknown
-
2002
- 2002-08-20 HR HRP20020682 patent/HRP20020682A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2002-08-21 IS IS6517A patent/IS6517A/is unknown
- 2002-09-16 ZA ZA200207408A patent/ZA200207408B/xx unknown
- 2002-09-18 BG BG107115A patent/BG107115A/bg unknown
- 2002-09-19 NO NO20024480A patent/NO20024480L/no not_active Application Discontinuation
-
2003
- 2003-06-18 HK HK03104380.7A patent/HK1053148A1/zh unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gottschalk | The chemistry and biology of sialic acids and related substances | |
| Kulshin et al. | Structural characterization of the lipid A component of Pseudomonas aeruginosa wild‐type and rough mutant lipopolysaccharides | |
| Carlson et al. | Polyuronic acids produced by Pseudomonas aeruginosa | |
| DORFMAN | Polysaccharides of connective tissue | |
| US5952313A (en) | LPS antagonists and methods of making and using the same | |
| CZ20023469A3 (cs) | Lipopolysacharidy | |
| WO2009149155A1 (en) | Microbial-derived chondroitin sulfate | |
| Sandal et al. | Identification, structure, and characterization of an exopolysaccharide produced by Histophilus somni during biofilm formation | |
| Haishima et al. | Structural investigation on the lipopolysaccharide of Escherichia coli rough mutant F653 representing the R3 core type | |
| Masoud et al. | General strategy for structural analysis of the oligosaccharide region of lipooligosaccharides. Structure of the oligosaccharide component of Pseudomonas aeruginosa IATS serotype 06 mutant R5 rough-type lipopolysaccharide | |
| Jin et al. | Preactivation-based, iterative one-pot synthesis of anticoagulant pentasaccharide fondaparinux sodium | |
| US6534648B1 (en) | Isolated algal lipopolysaccharides and use of same to inhibit endotoxin-initiated sepsis | |
| DRAPER et al. | Galactosamine in walls of slow-growing mycobacteria | |
| JP2010529980A (ja) | 栄養組成物 | |
| Naess et al. | Chemical composition and biological activity of lipopolysaccharides prepared from type strains of Campylobacter jejuni and Campolybacter coli | |
| Rybka et al. | Determination of endotoxin by the measurement of the acetylated methyl glycoside derivative of Kdo with gas–liquid chromatography-mass spectrometry | |
| Schulte | Genetic and sex-related differences in the structure of submandibular glycoconjugates | |
| Song et al. | Structure of novel gangliosides, deaminated neuraminic acid (KDN) containing glycosphingolipids, isolated from rainbow trout ovarian fluid | |
| JP4091137B2 (ja) | 免疫抑制剤 | |
| US6444654B1 (en) | Isolated asgal lipopolysaccharides and use of same to inhibit innate immune response | |
| Qu et al. | Design, Synthesis and Bioactivity of Core 1 O-glycan and its Derivative on Human Gut Microbiota | |
| Vliegenthart et al. | Introduction to sialic acids | |
| DE19844191A1 (de) | Lipopolysaccharide aus Escherichia coli | |
| Varbanets et al. | Characterization of the Lipopolysaccharide from Rahnella aquatilis 1-95 | |
| Kobatake et al. | Lipopolysaccharide isolated from Mycobacterium tuberculosis strain Aoyama B |