CZ20022490A3 - Chromatografická metoda separace paclitaxelu a cefalomaninu - Google Patents
Chromatografická metoda separace paclitaxelu a cefalomaninu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20022490A3 CZ20022490A3 CZ20022490A CZ20022490A CZ20022490A3 CZ 20022490 A3 CZ20022490 A3 CZ 20022490A3 CZ 20022490 A CZ20022490 A CZ 20022490A CZ 20022490 A CZ20022490 A CZ 20022490A CZ 20022490 A3 CZ20022490 A3 CZ 20022490A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- paclitaxel
- cephalomannin
- starting material
- butyl
- solvent
- Prior art date
Links
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 title claims abstract description 63
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 title claims abstract description 63
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 title claims abstract description 63
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 title 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 20
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 12
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 11
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 11
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 241001116500 Taxus Species 0.000 claims description 9
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 5
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 5
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 4
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 4
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 239000006188 syrup Substances 0.000 claims description 3
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 claims description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims 2
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 claims 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract 1
- 241001116498 Taxus baccata Species 0.000 description 9
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 7
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- NMJJFJNHVMGPGM-UHFFFAOYSA-N butyl formate Chemical group CCCCOC=O NMJJFJNHVMGPGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- QUKGYYKBILRGFE-UHFFFAOYSA-N benzyl acetate Chemical compound CC(=O)OCC1=CC=CC=C1 QUKGYYKBILRGFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 241000202349 Taxus brevifolia Species 0.000 description 3
- 241001674343 Taxus x media Species 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- RUPAXCPQAAOIPB-UHFFFAOYSA-N tert-butyl formate Chemical compound CC(C)(C)OC=O RUPAXCPQAAOIPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229940007550 benzyl acetate Drugs 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- GJRQTCIYDGXPES-UHFFFAOYSA-N isobutyl acetate Chemical compound CC(C)COC(C)=O GJRQTCIYDGXPES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012285 osmium tetroxide Substances 0.000 description 2
- 229910000489 osmium tetroxide Inorganic materials 0.000 description 2
- WMOVHXAZOJBABW-UHFFFAOYSA-N tert-butyl acetate Chemical compound CC(=O)OC(C)(C)C WMOVHXAZOJBABW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N Ozone Chemical compound [O-][O+]=O CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009065 Taxus cuspidata Nutrition 0.000 description 1
- 241001330449 Taxus wallichiana Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- OAEQYDZVVPONKW-UHFFFAOYSA-N butan-2-yl formate Chemical compound CCC(C)OC=O OAEQYDZVVPONKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000004508 fractional distillation Methods 0.000 description 1
- KDCIHNCMPUBDKT-UHFFFAOYSA-N hexane;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.CCCCCC KDCIHNCMPUBDKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000029305 taxis Effects 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D305/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atoms
- C07D305/14—Heterocyclic compounds containing four-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atoms condensed with carbocyclic rings or ring systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/04—Plant cells or tissues
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Botany (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Epoxy Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
Předkládaný vynález se týká separace paclitaxelu od jeho analogu cefalomaninu, přičemž se vychází z rostlinných extraktů rodu Taxus nebo jejich buněčných kultur. Konkrétně se paclitaxel separuje od cefalomaninu chromatograficky na silikagelových kolonách s přímou fází.
Dosavadní stav techniky
Paclitaxel formálně nazývaný „Taxol“ je výjimečně slibný prostředek proti rakovině. Byl izolován (Wani et al. v roce 1971) z kůry Taxus brevifolia (J.Am.Chem.Soc. 93, 2325, 1971) a jeho struktura byla definována pomocí chemických metod a krystalografických analýz zářením X.
Paclitaxel byl schválen ministerstvem potravin a léčiv pro léčbu rakoviny prsu a vaječníku a je v současné době v klinických zkouškách pro léčbu rakoviny plic a tlustého střeva (například viz W.P.McGuire a E.K.Rowinsky, Paclitaxel in Cancer Treatment, M.Dekker, new York 1995, stránky 1 až 337).
| » «· | 0» | • 000 | • 0 | 00 | ||
| • 00 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | • | 0 » |
| 0 00 | • | 0 | 0 | • | 0 | 0 |
| 0 | ||||||
| 0 0 0 | 0 | • | 0 | 0 | • | • |
| 0 0 0 00 | • · | 0 | 00 | 0000 |
Primárním přírodním zdrojem paclitaxelu je kůra stromu pacifického tisu, Taxus brevifolia. Bylo také zjištěno, že paclitaxel je přítomen v epigeální částech a kořenech jiných druhů tisu včetně evropského tisu (Taxus baccata), azijského tisu (Taxus wallichiana a Taxus chinesis) a tisu kultivovaného pro ornamentální účely (například, Taxus media).
Způsob izolace paclitaxelu z kteréhokoliv přírodního zdroje je složité a drahé, částečně vzhledem k relativně nízké koncentraci v rostlinných materiálech, ale také vzhledem k přítomnosti jedné z jeho obdobných látek cefalomaninu. Obsahy cefalomaninu a poměry mezi paclitaxelem a cefalomaninem se v rostlinných materiálech mění v závislosti na druhu a části rostliny. Obecně bylo zjištěno, že obsah paclitaxelu a cefalomaninu se pohybuje od 0,001% do 0,08% a nebo od 0,001% do 0,22% (K.M.Witherup et al., J.Nat.Prod., 53, 1249, 1990;, R.G. Kelsey et., J.Nat.Prod., 55, 912, 1992; N.C.Wheeler et al.,
J.Nat.prod., 55,432, 1992). Zvláště druhy Taxis media, které jsou obnovitelným rostlinným materiálem, jsou nejběžněji používaným surovinovým materiálem pro výrobu paclitaxelu a obsahují v průměru největší koncentraci cefalomaninu ve srovnání s jinými druhy.
Rovněž technikami výroby paclitaxelu založenými na buněčných kulturách tisu, které v poslední době zaznamenaly podstatný nárůst, aby se zabránilo obvyklé extrakci drahého rostlinného materiálu, se získá významné množství cafalomaninu jako příměs paclitaxelu.
Strukturální rozdíl mezi paclitaxelem a cefalomaninem spočívá pouze v části postraního řetězce sloučeniny, mají tedy podobné chemické vlastnosti. Obě sloučeniny proto mají velmi podobné chromatografické vlastnosti a separační čistota těchto příbuzných sloučenin je obtížná. Bylo předloženo množství chromatografických metod založených hlavně na použití chromatografie s inverzní fází nebo na drahých kolon s vázanou fází (J.H.Cardellina, JLiq.Chromatogr., 14, 659, 1991;, S.L.Richheimer et al., Anal.Chem. 64, 2323, •e ·» • · « · ··»· • · * · · · • · · » · · 9 > · · * » · · * · · · · · • Μ <*« *· · ·· ·«··
- 3 «· ·«
1992; E.R.M. Wickremesinhe et al., J.Liq.Chromatogr., 16, 3263, 1993;
K.M.Witherup et al., J.Liq.Chromatogr., 12, 2117, 1989), ale tyto metody se nemohou snadno upůatnit v komerčním měřítku. Z tohoto důvodu použití metod umožňující separaci paclitaxelu a cefalomaninu nabývá velmi na důležitosti.
V minulosti bylo předloženy metody separace paclitaxelu a cefalomaninu založené na rozdílné reaktivitě dvou sloučenin s oxidanty. Bylo zjištěno, že dvojná olefinická vazba existující v tiglinovém zbytku cefalomaninu by mohla být oxidována reakcí s oxidem osmičelým (D.G.I.Kingston et al., J.Nat.Prod., 55, 259, 1992) nebo s ozonem (J.T.Beckvermit et al., J.Org.Chem., 61, 9038, 1996), protože paclitaxel nepodstoupil žádnou chemickou transformaci oxidačními reakcemi. Jiný přístup představuje působení bromu na směs paclitaxelu a cefalomaninu (J.M.Rimoldi et al., J.Nat. Prod., 59, 167, 1996). Působení bromem provedené při řízených teplotních a časových podmínek reakce má za následek tvorbu dibromocefalomaninu, protože paclitaxel není ovlivněn touto reakční složkou. Tyto metody však mají nevýhodu při použití takových toxických činidel jako je oxid osmičelý a v každém případě mají za následek destrukci nebo transformaci cefalomaninu na jeho deriváty, ze kterých se cefalomanin může regenerovat pouze složitými syntézními postupy. Existuje však potřeba levné, jednoduché, bezpečné a účinné separace cefalomaninu z paclitaxelu. Podle toho je primárním předmětem tohoto vynálezu vytvořit jednoduchou metodu separace paclitaxelu a cefalomaninu z jejich směsí nebo extraktů tisu.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález se týká způsobu separace paclitaxelu od cefalomaninu a jiných příbuzných sloučenin. Konkrétně tato metoda zahrnuje získání výchozího materiálu, který obsahuje paclitaxel a cefalomanin;
i
I
rozpuštění výchozího materiálu v kterémkoliv z konkrétně uvedených rozpouštědel za vzniku směsi;
podrobení směsi kolonové chromatografií za vzniku eluované frakce paclitaxelu, eluovaná frakce cefalomeninu a zbyteku; a oddělené sušení paclitaxelu a cefalomaninu za vzniku krystalických forem paclitacelu a nebo cefalomaninu.
Rozpouštědlem je výhodně butylformát nebo butyl nebo benzylacetát.
«'
Překvapivě bylo zjištěno, že vysoce čistý paclitaxel a cefalomanin by se mohl ? získat s vysokými výtěžky chromatogrfickým dělením na silikagelové koloně s přímou fází za použití jednoho rozpouštědla jako eluentu. Výhodně má toto rozpouštědlo následující obecný vzorec, ,0
R.
kde R-ι je atom vodíku nebo skupina methyl a R2 s výhodou obsahuje čtyři atomy uhlíku, to znamená, že to může být n-butyl, isobutyl, sek.-butyl nebo t-butyl. Tyto rozpouštědla nejsou často používaná v rutinním chromatografickém čištění na koloně, ale umožňují překvapivě dobré praktické výsledky ve specifickém případě separace paclitaxelu-cafalomaninu.
Výchozím materiálem podle vynálezu může být směs cefalomaninu a paclitaxelu samotná v kterémkoliv poměru nebo extrakt z čerstvých nebo suchých kořenů, listů, větví, semen tisu (Taxus) nebo z jejich směsi. Způsob podle vynálezu může také zahrnovat extrakt získaný z buněčné kultury. Tyto výchozí materiály jsou obecně známé kterémukoliv odborníkovi z oboru, takže není třeba se o nich dále zmiňovat.
« ·
Požadovaným extraktem může být surový nebo čištěný extrakt. Ten druhý z nich se získá působením obvyklých rozpouštědel a je podroben předběžnému chromatografickému čištění. Opět jsou tyto techniky odborníkům v oboru dobře známé, takže není třeba se o nich dále zmiňovat. Výchozí materiál může být ve formě pevné látky, sirupu nebo polopevného gumového materiálu v závislosti na experimentálních podmínkách používaných pro jeho přípravu, materiál může být jednoduše podroben kolonové chromatografií, která následuje po jeho rozpuštění v některém z rozpouštědel popsaných výše.
Chromatografické čištění podle vynálezu používá jednoduchou, silikagelovou přímou fázi v množství 50 až 100 hmotnostních dílů, vztaženo na výchozí materiál v závislosti na jeho složení.
Kolonová chromatografie s rozpouštědly podle vynálezu je rychlá, nevyžaduje vysoké tlaky a provádí se za normálních gravitačních podmínek.
Tabulka 1 ukazuje chování cefalomaninu a paclitaxelu při tenkovrstvé chromatografické analýze při použití silikagelových destiček a sérií rozpouštědel podle vynálezu, které umožňují uspokojivou separaci dvou sloučenin.
- 6 • · · · · ·
Tabulka 1 - Hodnoty Rf paclitaxelu a cefalomaninu na silikgelových destičkách
| Rozpouštědlo | Ri | r2 | Paclitaxel | Cefalomanin |
| n-Butylformát | H | n-C4H9 | 0,17 | 0,12 |
| i-Butylformát | H | Í-C4H9 | 0,20 | 0,15 |
| t-Butylformát | H | t-C4H9 | 0,20 | 0,13 |
| n-Butylformát | ch3 | n-C4H9 | 0,36 | 0,28 |
| s-Butylformát | ch3 | s-C4H9 | 0,35 | 0,24 |
| i-Butylacetát | ch3 | í-C4H9 | 0,31 | 0,19 |
| t-Butylacetát | ch3 | t-C4H9 | 0,19 | 0,09 |
| Benzylacetát | ch3 | PhCH2 | 0,28 | 0,16 |
Použití rozpouštědel popsaných v tomto vynálezu pro izolaci paclitaxelu a cefalomaninu pomocí chromatografie na silikagelové koloně s přímou fází poskytuje mnoho výhod.
Za prvé výtěžky paclitaxelu skutečně bez obsahu cefalomaninu a obráceně výtěžky cefalomeninu většinou bez -obsahu paclitaxelu pomocí kolonové chromatografie. Za druhé použití silikagelové přímé fáze poskytuje značné ekonomické výhody před použitím silikagelové inverzní fáze popsaném ve výše uvedené literatuře a za třetí použití některého z rozpouštědel pro eluci kolony umožňuje jeho rychlou recyklaci bez použití frakční destilace v operacích spojených s průmyslovými, kontinuálními způsoby výroby. Kterákoliv jiné složky přítomné ve výchozím materiálu společně s paclitaxelem a cefalomeninem se eliminují chromatografickým čištěním.
• · • · · *
- 7 Eluované frakce se odpaří ve vakuu na sušinu a zbytky krystalizují ve vhodném rozpouštědle, přičemž za vzniku paclitaxelu a cefalomaninu v požadované krystalické formě.
Způsob popsaný v tomto vynálezu proto znamená jednoduché řešení výroby velkých množství paclitaxelu bez obsahu cefalomaninu, které umožňuje zvýšení výtěžku ze získaných množství a levnější způsob výroby tohoto antitumorového léčiva.
Příklady provedení vynálezu
Následující příklady objasňují, ale neomezují tento vynález.
Příklad 1 - Izolace paclitaxelu z extraktu tisu Taxus media obsahujícího cefalomanin
Z 290 g extraktu vyrobeného ze 620 kg tisu Taxus media (zcela rostlinného původu) podle způsobu popsaného V.Senilh et al. (J.Nat.Prod. 47, 131, 1984), se analýzou HPLC zjistilo, že obsahuje 183 g paclitaxelu a 81 g cefalomaninu. Extrakt se rozpustil v 3,5 I t-butylacetátu a roztok se naplnil do kolony obsahující 60 kg silikagelu. Eluovalo se celkem 1200 I t-butylu. Následnou elucí 350 I rozpouštědla se získalo 400 I frakce obsahující paclitaxel a méně než 3% cefalomaninu a dalších 200 I frakce obsahující cefalomanin a méně než 3% paclitaxelu. Obě frakce se odděleně zkoncentrovaly ve vakuu na sušinu a zbytky krystalizovaly ze směsi hexanaceton. Získaná množství 154 g paclitaxelu a 70 g cefalomaninu mají čistotu HPLC nad 99% a jejich fyzikálně-chemické a spektroskopické hodnoty jsou shodné s informacemi uvedenými v literatuře (G.N.Chmurný et al., J.Nat.Prod. 55, 414, 1992; C.J.Falzone et al., Tetrahedron Letters, 33, 1169, 1992; V.Senilh et al., J.Nat.Prod. 47, 131, 1984).
- 8 Příklad 2 - Izolace paclitaxelu a cefalomaninu ze směsi obsahující obě látky
Směs obsahující 70 g paclitaxelu a 30 g cefalomaninu se rozpustila v 1,5 I t-butylformátu a roztok se naplnil do kolony obsahující 10 kg silikagelu suspendovaného ve stejném rozpouštědle. Kolona se eluovala t-butylformátem a frakce se po analýzách HPLC/TLC spojily. Frakce obsahující paclitaxel a cefalomanin se odděleně zkoncentrovaly na sušinu a zbytky krystalizovaly z acetonu a heptanu ve vhodných poměrech za vzniku paclitaxelu a cefalomaninu, které mají čistotu HPLC nad 99%.
Zastupuje:
Claims (10)
1. Způsob separace paclitaxelu od cefalomaninu, vyznačující se t í m, že zahrnuje:
získání výchozího materiálu, který obsahuje paclitaxel a cefalomanin;
rozpuštění výchozího materiálu v rozpouštědle, které má následující vzorec:
kde Ri je atom vodíku nebo skupina methyl a R2 je skupina alkyl nebo arylalkyl obsahující čtyři až sedm atomů uhlíku, za vzniku směsi;
podrobení směsi kolonové chromatografií za vzniku eluované frakce paclitaxelu, eluované frakce cefalomaninu a zbytku; a oddělené sušení frakcí paclitaxelu a cefalomaninu za vzniku oddělených krystalických forem paclitaxelu a nebo cefalomaninu.
2. Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že uvedený výchozí materiál obsahuje kterýkoliv poměr cefalomaninu a paclitaxelu.
3. Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že uvedeným výchozím materiálem je extrakt z čerstvých nebo suchých kořenů, listů, větví, semen tisu Taxus nebo jejich směsi.
• · · · • · · · · ·
5.
5.
6.
6.
Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že uvedeným výchozím materiálem je extrakt získaný z buněčné kultury tisu Taxus.
Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že uvedený výchozí materiál je ve formě pevné látky, sirupu nebo polopevného gumového materiálu.
Způsob podle nároku 1,vyznačuj ící se tím, že strukturní vzorec rozpouštědla obsahuje Ri jako atom vodíku nebo skupinu methyl a R2 jako skupinu n-butyl, isobutyl, sek.-butyl nebo t-butyl.
Způsob separace paclitaxelu od cefalomaninu vyznačující se t í m, že zahrnuje:
získání výchozího materiálu, který obsahuje paclitaxel a cefalomanin;
rozpuštění výchozího materiálu v rozpouštědle, které má následující vzorec,
R.
O—R.
kde Ri je atom vodíku nebo skupina methyl a R2 je skupina alkyl nebo arylalkyl obsahující čtyři až sedm atomů, za vzniku směsi;
podrobení směsi kolonové chromatografii za použití silikagelové kolony s přímou fází při použití rozpouštědla podle vzorce uvedeného výše jako eiuentu za vzniku eluované frakce paclitaxelu, eluované frakce cefalomaninu a zbytku; a oddělené sušení frakcí paclitaxelu a cefalomaninu za vzniku oddělených krystalických forem paclitaxelu a nebo cefalomaninu.
·· ·
- 11 • · · ·· ·
8. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že vzorec rozpouštědla obsahuje Ri jako atom vodíku nebo skupinu methyl a R2 jako skupinu n-butyl, isobutyl, sek.-butyl nebo t-butyl.
9. Způsob podle nároku 7, v y z n a č u j í c í se t í m, že se použije silikagel v množství 50 až 100 hmotnostních dílů, vztaženo na výchozí materiál.
10. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že uvedený výchozí materiál obsahuje kterýkoliv poměr cefalomaninu a paclitaxelu.
11. Způsob podle nároku 7,vyznačující se tím, že uvedeným výchozím materiálem je extrakt z čerstvých nebo suchých kořenů, listů, větví, semen tisu Taxus nebo jejich směsí.
12. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že uvedeným výchozím materiálem je extrakt získaný z buněčné kultury tisu Taxus.
13. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že uvedený výchozí materiál je ve formě pevné látky, sirupu nebo polopevného gumového materiálu.
14. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že vzorec rozpouštědla obsahuje Ri jako atom vodíku nebo skupinu methyl a R2 jako skupinu n-butyl, isobutyl, sek.- butyl nebo t-butyl.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/724,504 US6333419B1 (en) | 2000-11-28 | 2000-11-28 | Chromatographic separation method of paclitaxel and cephalomannin |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20022490A3 true CZ20022490A3 (cs) | 2002-10-16 |
| CZ304180B6 CZ304180B6 (cs) | 2013-12-11 |
Family
ID=24910677
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20022490A CZ304180B6 (cs) | 2000-11-28 | 2001-11-09 | Chromatografická metoda separace paclitaxelu a cefalomaninu |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6333419B1 (cs) |
| EP (1) | EP1392669B1 (cs) |
| JP (1) | JP4177665B2 (cs) |
| KR (1) | KR100842457B1 (cs) |
| CN (1) | CN1187347C (cs) |
| AR (1) | AR031511A1 (cs) |
| AT (1) | ATE427305T1 (cs) |
| AU (1) | AU780761B2 (cs) |
| CA (1) | CA2398405C (cs) |
| CZ (1) | CZ304180B6 (cs) |
| DE (1) | DE60138229D1 (cs) |
| DK (1) | DK1392669T3 (cs) |
| ES (1) | ES2321160T3 (cs) |
| HU (1) | HU229096B1 (cs) |
| IL (2) | IL150901A0 (cs) |
| NO (1) | NO328356B1 (cs) |
| PL (1) | PL202590B1 (cs) |
| PT (1) | PT1392669E (cs) |
| RU (1) | RU2276669C2 (cs) |
| SI (1) | SI1392669T1 (cs) |
| SK (1) | SK287109B6 (cs) |
| WO (1) | WO2002044162A1 (cs) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2315890T3 (es) * | 2004-07-02 | 2009-04-01 | Ivax Pharmaceuticals S.R.O. | Procedimiento para el aislamiento de paclitaxel. |
| PL1778660T3 (pl) * | 2004-07-02 | 2009-07-31 | Ivax Pharmaceuticals Sro | Sposób rozdzielania paklitakselu i cefalomanniny |
| DE602004008903T2 (de) * | 2004-07-13 | 2008-06-19 | Indena S.P.A. | Verfahren zur Gewinnung von Paclitaxel aus Taxuspflanzen |
| US7112687B2 (en) * | 2004-07-15 | 2006-09-26 | Indena, S.P.A. | Methods for obtaining paclitaxel from taxus plants |
| CN102219764B (zh) * | 2011-05-12 | 2013-06-26 | 河南省科学院化学研究所有限公司 | 一种工业化分离纯化紫杉醇的方法 |
| KR102263764B1 (ko) * | 2014-08-13 | 2021-06-09 | 주식회사 엘지생활건강 | 세팔로만닌 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 피부 미백 또는 항염증용 화장료 또는 약학 조성물 |
| CN104251896B (zh) * | 2014-09-30 | 2016-07-20 | 江苏红豆杉药业有限公司 | 一种半合成紫杉醇的检测方法 |
| CN104262300A (zh) * | 2014-09-30 | 2015-01-07 | 江苏红豆杉药业有限公司 | 一种除去紫杉醇中三尖杉宁碱的方法 |
| CN113512015A (zh) * | 2021-05-26 | 2021-10-19 | 上海卓鼎生物技术有限公司 | 一种工业化提纯三尖杉宁碱的方法 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5475120A (en) | 1990-11-02 | 1995-12-12 | University Of Florida | Method for the isolation and purification of taxol and its natural analogues |
| WO1992018492A1 (en) | 1991-04-19 | 1992-10-29 | The University Of Mississippi | Methods and compositions for isolating taxanes |
| FR2703049B1 (fr) * | 1993-03-22 | 1995-04-21 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Procédé de purification des taxoïdes. |
| WO1997009443A1 (en) | 1995-09-05 | 1997-03-13 | Michigan State University | PROCESS FOR THE ISOLATION AND PURIFICATION OF TAXOL AND TAXANES FROM TAXUS spp |
| US5856532A (en) | 1996-08-14 | 1999-01-05 | Council Of Scientific & Industrial Research | Process for the production of taxol |
| US6136989A (en) * | 1998-12-30 | 2000-10-24 | Phytogen Life Sciences, Incorporated | Method for high yield and large scale extraction of paclitaxel from paclitaxel-containing material |
| US5969165A (en) * | 1999-01-07 | 1999-10-19 | 508037 (Nb) Inc. | Isolation and purification of paclitaxel and other related taxanes by industrial preparative low pressure chromatography on a polymeric resin column |
| US6002025A (en) | 1999-02-24 | 1999-12-14 | Bcm Developement Inc. | Method for the purification of taxanes |
-
2000
- 2000-11-28 US US09/724,504 patent/US6333419B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-11-09 KR KR1020027009572A patent/KR100842457B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2001-11-09 CZ CZ20022490A patent/CZ304180B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-11-09 CN CNB018041345A patent/CN1187347C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-11-09 SK SK1092-2002A patent/SK287109B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2001-11-09 CA CA002398405A patent/CA2398405C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-09 ES ES01998544T patent/ES2321160T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-09 PL PL355683A patent/PL202590B1/pl unknown
- 2001-11-09 AU AU19085/02A patent/AU780761B2/en not_active Ceased
- 2001-11-09 AT AT01998544T patent/ATE427305T1/de active
- 2001-11-09 DK DK01998544T patent/DK1392669T3/da active
- 2001-11-09 RU RU2002120482/04A patent/RU2276669C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-11-09 JP JP2002546532A patent/JP4177665B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-11-09 EP EP01998544A patent/EP1392669B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-09 SI SI200130911T patent/SI1392669T1/sl unknown
- 2001-11-09 DE DE60138229T patent/DE60138229D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-09 PT PT01998544T patent/PT1392669E/pt unknown
- 2001-11-09 WO PCT/EP2001/012982 patent/WO2002044162A1/en not_active Ceased
- 2001-11-09 IL IL15090101A patent/IL150901A0/xx unknown
- 2001-11-09 HU HU0204028A patent/HU229096B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2001-11-26 AR ARP010105483A patent/AR031511A1/es active IP Right Grant
-
2002
- 2002-07-25 IL IL150901A patent/IL150901A/en active IP Right Grant
- 2002-07-25 NO NO20023555A patent/NO328356B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5380916A (en) | Method for the isolation and purification of taxane derivatives | |
| US5475120A (en) | Method for the isolation and purification of taxol and its natural analogues | |
| EP0809639B1 (en) | Isolation and purification of paclitaxel and cephalomannine | |
| RU2112770C1 (ru) | Производные таксана, способ их получения, фармкомпозиция | |
| CZ20022490A3 (cs) | Chromatografická metoda separace paclitaxelu a cefalomaninu | |
| WO1995007900A1 (en) | New cytotoxic agents | |
| WO1995007900A9 (en) | New cytotoxic agents | |
| JP4081696B2 (ja) | タキソールの製造方法 | |
| US5965752A (en) | Preparative scale isolation and purification of taxanes | |
| HK1050523B (en) | Chromatographic separation method of paclitaxel and cephalomannin | |
| EP1778660B1 (en) | Process for the separation of paclitaxel and cephalomannin | |
| AU2006201733B2 (en) | Process for manufacturing paclitaxel and 13-acetyl-9-dihydrobaccatin III | |
| EP2493885B1 (fr) | Molecules polyketides comme agents anticancereux | |
| JPH0940567A (ja) | タキソールおよびタキサンテルペノイド類の製造方法 | |
| Popcevski et al. | Structural revision of stemoburkilline from an E-Alkene to a Z-Alkene | |
| CH348966A (fr) | Procédé de préparation de 1,4-3-céto-stéroïdes | |
| HK1005375B (en) | Isolation and purification of paclitaxel and cephalomannine | |
| HK1005375A1 (en) | Isolation and purification of paclitaxel and cephalomannine |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20201109 |