CZ20014304A3

CZ20014304A3 - Extrakty Tanacetum parthenium

Info

Publication number: CZ20014304A3
Application number: CZ20014304A
Authority: CZ
Inventors: Ezio Bombardelli; Paolo Morazzoni
Original assignee: Indena S. P. A.
Priority date: 1999-06-03
Filing date: 2000-05-31
Publication date: 2002-03-13
Also published as: PT1181030E; AU5527200A; HK1046245A1; PL352107A1; SK285014B6; HUP0201258A2; NO20015867L; AU769365B2; PL197514B1; KR100727121B1; NO328245B1; RU2241475C2; US20010021400A1; HU228799B1; EP1181030B1; DE60005174D1; JP2003501392A; CZ301703B6; CN1353612A; KR20020019452A

Description

Extrakty Tanacetum parthenium

Oblast techniky

Vynález se týká extraktů Tanacetum parthenium, v podstatě prostých a-nenasycených γ-laktonů. Vynález se dále týká způsobu výroby těchto extraktů a farmaceutických a kosmetických prostředků, které tyto extrakty obsahují, zvláště takových, které obsahují extrakty, v podstatě prosté parthenolidu.

Dosavadní stav techniky

Extrakty Tanacetum parthenium, rostliny, náležející do čeledi Asteraceae/Composite a rovněž známé pod názvem Altamisa, Crisanthemum, Leucanthemum nebo Prythrum parthenium již byly užívány pří léčení migrény, závrati, kloubních zánětů, menstruálních poruch, horečnatých stavů, bolesti zubů, bolesti žaludku a při bodnutí hmyzem. Extrakty uvedené rostliny obsahují těkavé oleje různé povahy, zejména mono- a seskviterpenové složky, dále flavonoidy, taninové látky, pyrethrin a také terpenoidy ze skupiny seskviterpenových laktonů, známých pod názvy germacranolidy, guaianolidy a eudesmanolídy. Uvedené látky jsou charakteristické svojí a-nenasycenou γ-laktonovou strukturou, běží zejména o sloučeniny, známé pod názvem parthenolid, 3-p-hydroxyparthenoid, costunolid, 3-p~hydroxycostunolid, artemorin, 8-ahydroxyestafiatin a chrysanthemonin.

Přítomnost uvedených seskviterpenových laktonů se považuje za základní podmínku pro farmakologickou publikace J. Pharm.

·· 4« • ♦ · 4 » 4 « > · 4 ► · 4

4444 účinnost uvedených extraktů podle Pharmacol. 1992, 44, 391-395.

Pozornost byla zaměřena zejména na parthenolid, který se považuje za základní účinnou složku extraktu, současně však také za složku, zodpovědnou za alergické reakce, k nimž může někdy docházet při léčení extrakty Tanacetum parthenium, jak bylo uvedeno v publikacích Arch. Dermatol. Forsch. 1975, 251(3), 235-44, tamtéž 1976, 255(2), 111-21, Contact Dermatitis, 1988, 38(4), 207-8, Am. J. Contact Dermatol. 1998-9 (1): 49-50, Br. J. Dermatol. 1995, 132(4): 543-7.

Extrakty Tanacetum parthenium, obsahující parthenolid, byly popsány v publikacích WO 94 06800,

EP 553658, WO 92 11857, GB 2 166 952, EP 98 041 a WO 98 39018.

Podstata vynálezu

Nyní bylo zjištěno, že extrakty Tanacetum perthenium, v podstatě prosté α-nenasycených γ-laktonů, zvláště prosté parthenolidu, mají zajímavé farmakologické vlastnosti a současně podstatně snížené riziko vzniku alergických reakcí.

Extrakty podle vynálezu je tedy možno běžně použít jako účinné složky pro výrobu farmaceutických nebo kosmetických prostředků.

Pod pojmem „v podstatě prostý a-nenasycených γ-laktonů nebo „v podstatě prostý parthenolidu se v průběhu přihlášky rozumí extrakt, jehož obsah ««·«

0 0

0 0 ·· 0

0 0 0

00

00 « ·0 0 • 0 0 *·0 0 0 0

0000 parthenolidu je nižší než 0,2 % hmotnostní, s výhodou nižší než 0,1 %, zvláště nižší než 0,09 % a zvláště výhodný nižší než 0,07 % hmotnostních.

Extrakt podle vynálezu je možno získat postupem, který spočívá v tom, že se

a) extrahují vzdušné části rostliny acetonem, alkoholy nebo směsí těchto rozpouštědel s vodou,

b) materiál ze stupně (a) se extrahuje uhlovodíkovými rozpouštědly,

c) neuhlovodíková fáze se extrahuje apolárním rozpouštědlem,

d) na extrakt v apolárním rozpouštědle, odpařený a znovu rozpuštěný ve směsi vody a alkoholu, se působí silně bazickou pryskyřicí,

e) pryskyřice se podrobí eluci alkoholy a výsledný eluát se odloží,

f) pryskyřice se zpracovává alkoholovým roztokem kyseliny nebo roztokem kyseliny v směsi vody a alkoholu, roztok se odpaří a výsledný odparek se extrahuje apolárním rozpouštědlem,

g) apolární rozpouštědlo ze stupně (f) se odpaří na odparek, který se přidá k odparku po odpaření uhlovodíkového extraktu ze stupně (b) a k acetonové nebo alkoholové fázi, získané po extrakci apolárním rozpouštědlem ze stupně (c) ,

h) směs se odpaří a usuší.

Parthenolid a jiné příbuzné seskviterpenové laktony je možno tímto způsobem odstranit vzhledem k tomu, že bazická pryskyřice zcela neočekávaně nevyvolává otevření laktonového kruhu, který je jinak citlivý na hydrolýzu v bazickém prostředí. Flavonové složky s kyselými

• ·

9 • * ♦« ···· • 9 9 ©· 99

hydroxyskupinami jsou pryskyřicí na rozdíl od parthenolidu a příbuzných sloučenin zadrženy, takže je možno parthenolid a příbuzné látky odstranit.

Výhodnými rozpouštědly pro různé extrakční stupně jsou následující látky:

stupeň a): aceton, methanol, ethanol nebo směsi těchto rozpouštědel s vodou, stupeň b): hexan, n-pentan, petrolether, ligroin, stupeň c): methylenchlorid, chloroform, ethylacetát, s výhodou methylenchlorid, stupeň f): ethylacetát.

Pod pojmem „alkoholová rozpouštědla nebo rozpouštědla ze směsi vody a alkoholu se rozumí methanol nebo methanol s obsahem 10 až 80 % objemových vody.

Bazické pryskyřice, které je podle vynálezu možno použít, jsou běžně dodávané pryskyřice, například pod obchodním názvem Relite 2A, Relite 3A2, Dowex 2.

Extrakt podle vynálezu je možno získat také tak, že se vychází z běžných obchodně dodávaných extraktů, na tyto extrakty se působí silně bazickou pryskyřicí, popřípadě po předchozí extrakci rozpouštědly typu uhlovodíků, kterými je možno odstranit lipofilní složky, které by se mohly dostat do nežádoucí interference s použitou pryskyřicí.

Obsah «-nenasycených γ-laktonů nebo parthenolidu ve výsledném extraktu se stanoví pomocí HPLC.

fc· fcfcfcfc • » · • fcfc • · · fc · · fc fcfc fcfc fcfc • fc fc fc fc · • · •fc ·· • fcfc fc fcfc · • fcfc fcfcfc fcfc fcfcfcfc souvislosti s přiloženým

Vynález bude popsán také v výkresem.

Přehled obrázků na výkresech

Na obr. 1 je znázorněn typický profil extraktu, získaného způsobem podle vynálezu při provádění HPLC. Je zřejmé malé množství parthenolidu.

Extrakty podle vynálezu mají výhodné farmakologické vlastnosti a současně podstatně snížené riziko vzniku alergických reakcí. Zachování farmakologických vlastností, charakteristických pro běžně dodávané extrakty Tanacetum parthenium přes téměř úplné odstranění seskviterpenových laktonů je velmi překvapující vzhledem ke zprávám, které i v poslední době dokládají vztah mezi biologickou účinností a složením známých extraktů, zvláště v publikaci J. Pharm. Pharmacol. 1992, 44: 391-395.

Extrakty podle vynálezu, v podstatě prosté parthenolidu mají zvláště vysokou účinnost proti shlukování krevních destiček, protizánětlivou účinnost, účinnost proti migréně a analgetickou účinnost.

Součást podstaty vynálezu tvoří také farmaceutické prostředky, které jako svou účinnou složku obsahují účinné množství extraktu Tanacetum parthenium podle vynálezu ve směsi s vhodnými nosiči.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu budou obsahovat obvykle 10 až 500 mg extraktu a budou podávány 3krát až 4krát denně podle doporučení lékaře. Výhodné

podání je perorální podání, je však možno extrakty podávat i jiným způsobem, například perorálně nebo také parenterálně.

Prostředky podle vynálezu jsou zvláště vhodné pro léčení a prevenci záchvatů migrény.

Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady, které však nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Příprava extraktu kg Tanacetum parthenium se extrahují při teplotě 50 až 60 °C celkem 20 litry 70% vodného methanolu. Extrakt se zahustí ve vakuu na přibližně 1 litr a zředí stejným objemem methanolu. Výsledný roztok se extrahuje 3krát 2 litry n-hexanu. Hexanové extrakty se odpaří do sucha ve vakuu, čímž se získá přibližně 30 g odparku, který se označí jako extrakt H. Roztok ve směsi vody a methanolu se pak extrahuje 2krát 0,5 litry methylenchloridu. Organická fáze se odpaří do sucha ve vakuu, čímž se získá 70 g odparku, který se označí jako extrakt DCM. Fáze ve směsi methanolu a vody (extrakt HM) se odloží. Extrakt DCM se rozpustí v 0,6 litrech 90% methanolu a za míchání se k němu přidá na 3 až 4 hodiny celkem 0,6 litru silně bazické pryskyřice Relite 2A. Pak se suspenze zfiltruje za sníženého tlaku a pryskyřice se promyje přibližně 2 litry 90% methanolu. Methanolový roztok, který obsahuje parthenolid a příbuzné látky se odloží. Bazická pryskyřice se pak zpracovává za míchání 1 hodinu působením 0,6 litry methanolu s obsahem 65 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Pak se pryskyřice odfiltruje ve vakuu a promyje se 2,5 litry methanolu. Filtrát a promývací materiál se spojí, zahustí se ve vakuu na objem přibližně 200 ml a extrahuje 3krát 200 ml ethylacetátu. Výsledný extrakt E.A., který obsahuje flavonové složky tanetin a příbuzné látky, se odpaří do sucha ve vakuu, čímž se získají přibližně 4 g odparku. Odparky extraktů H a E.A. se spojí s extraktem HM. Výsledný roztok se odpaří do sucha ve vakuu a pevný odparek se suší za sníženého tlaku při teplotě 50 °C do stálé hmotnosti. Tímto způsobem se získá 490 g extraktu T. parthenium, zbaveného parthenolidu, který se analyzuje pomocí HPLC, při použití sloupce Zorbax SB C18, jako elučni činidlo se užije A:H₂0+0,01 % TFA, B:MeCN+0,01 % TFA, gradient A:B = 90 % až 10 %:10 % až 90 %, rychlost průtoku 1 ml/min, tímto způsobem je možno prokázat obsah parthenolidu nižší než 0,07 %.

Příklad 2

Farmakologická účinnost

Byl použit experimentální model s indukcí stimulace neuronů nitroglycerínem u krys, popsaný v publikaci Brain Research 1995, 682: 167-181, tamtéž 1995, 37-44, a také v publikaci Neuropharmacol. 1997, 36(10), 1417-1424.

Nitroglycerin, vasodilatační látka, běžně užívaná k léčení některých kardiovaskulárních poruch může být použita také jako diagnostický prostředek při sledování migrény vzhledem k tomu, že po podání této látky dojde k ·· ···· ·· · »· ·· • · · ···· ·*·· ·· ·· ·· ··· ·· ···· simulovanému migrénovému záchvatu. Záchvat, vyvolaný nitroglycerinem není okamžitý, dochází k němu po několika hodinách a v typických případech je doprovázen běžnými přídatnými příznaky, jako jsou nausea a světloplachost. Vasodilatační účinnost organických dusičnanů včetně nitroglycerinu je způsobena metabolismem na oxid dusičitý, který patrně také hraje svoji úlohu jako nervový přenašeč v SNC. Stimulace nervových buněk rychle aktivuje transkripci několika látek typu protoonkogenázy, které jsou vzhledem k rychlé a přechodné indukci nazývány okamžitými časnými geny. Z těchto látek je zatím nej sledovanější c-fos a bílkovina, pro kterou je tento gen kódem, Fos, která se dostává do jádra, v němž přetrvává několik hodin a její přítomnost je možno prokázat immunohistochemicky.

Provedení pokusu krysích samců kmene Sprague-Dawley bylo rozděleno do pěti pokusných skupin. Dvěma skupinám, kontrolní skupině a jedné z pokusných skupin byl podán pouze 0,5% roztok karboxymethylcelulózy jako nosné prostředí v množství 10 ml/kg, ostatním třem skupinám byl tři dny perorálně podáván extrakt Tanacetum parthenium, v podstatě prostý parthenolidu, TPPDE v dávkách 100 a 200 mg/kg nebo běžný extrakt Tanacetum parthenium TPRE ve stejné dávce.

hodinu po posledním podání byl všem zvířatům s výjimkou kontrolní skupiny podkožně podán nitroglycerin v dávce 10 ml/kg.

hodiny po podání nitroglycerinu byly krysy anestetizovány sodnou solí pentobarbitalu a vzestupnou aortou byl protlačen fixační roztok. Pak byl mozek rychle vyjmut a fixován ve stejném fixačním roztoku přes noc. Celým mozkem byly provedeny řezy s tloušťkou 50 pm na zmrazovacím mikrotomu. Tyto řezy byly sériově uloženy do 6 vyhloubení s obsahem chladného roztoku chloridu sodného s fosfátovým pufrem, PBS a pak zpracovány pro imunohistochemické vyšetření.

Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce. Tabulka uvádí počet imunoreaktivních neuronů (průměr ± směrodatná odchylka) v paraventrikulárním jádru hypothalamu PVH, v locus coeruleus LC a v parabrachiálním jádru PBN 4 hodiny po podání nitroglycerinu.

Tabulka

Ošetření	PVH	LC	PBN
Kontrola	95 ± 43,1	47,0 ± 21,2	27,3 + 15,2
Nitroglycerin	574,2 ± 298,5	334,3 ± 61,4	231,3 ± 89,4
TPPDE (100) + nitroglycerin	378,5+182,9*	200,5 ± 43,4*	140,7 ± 64,6*
TPPDE (200) + nitroglycerin	123,4+74,5**	87,5 ± 24,5**	71,6 ± 28,6**
TPRE (200) + nitroglycerin	569,7 ± 288,3	321,2 ± 49,1	228,3 ± 87,5

*p<0,03 pro TPPDE(IOO) + nitroglycerin proti kontrolní skupině s nitroglycerinem **p<0,001 pro TPPDE(200) + nitroglycerin proti kontrolní skupině s nitroglycerinem

Zastupuje:

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Extrakty Tanacetum parthenium, v podstatě prosté a-nenasycených γ-laktonů, zíškatelné způsobem, při němž se

a) extrahují vzdušné části rostliny acetonem, alkoholy nebo směsí těchto rozpouštědel s vodou,

b) materiál ze stupně (a) se extrahuje uhlovodíkovými rozpouštědly,

c) neuhlovodíková fáze se extrahuje apolárním rozpouštědlem,

d) na extrakt v apolárním rozpouštědle, odpařený a znovu rozpuštěný ve směsi vody a alkoholu, se působí silně bazickou pryskyřicí,

e) pryskyřice se podrobí eluci alkoholy a výsledný eluát se odloží,

f) pryskyřice se zpracovává alkoholovým roztokem kyseliny nebo roztokem kyseliny v směsi vody a alkoholu, roztok se odpaří a výsledný odparek se extrahuje apolárním rozpouštědlem,

g) apolární rozpouštědlo ze stupně (f) se odpaří na odparek, který se přidá k odparku po odpaření uhlovodíkového extraktu ze stupně (b) a k acetonové nebo alkoholové fázi, získané po extrakci apolárním rozpouštědlem ze stupně (c),

h) směs se odpaří a usuší.
2, Extrakt podle nároku 1, vyznačuj ící tím, že je v podstatě prostý parthenolidu.
3. Extrakt podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že obsahuje méně než 0,2 % hmotnostní α-nenasycených γ-laktonů.
4. Extrakt podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že obsahuje méně než 0,1 % hmotnostní a-nenasycených γ-laktonů.
5. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ící se t í m, že jako svou účinnou složku obsahuje extrakt podle některého z nároků 1 až 4 spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem.
6. Kosmetický prostředek pro perorální podání, vyznačující se tím, že jako svou účinnou složku obsahuje extrakt podle některého z nároků 1 až 4 spolu s přijatelným nosičem.