CZ2001348A3

CZ2001348A3 - Farmaceutický prostředek

Info

Publication number: CZ2001348A3
Application number: CZ2001348A
Authority: CZ
Inventors: John R. Mccullough; Thomas P. Jerussi
Original assignee: Sepracor Inc.
Priority date: 1998-07-28
Filing date: 1999-07-23
Publication date: 2002-01-16
Also published as: CZ295776B6; SK1202001A3; EE200100051A; TR200100921T2; ID28894A; CO5060499A1; HRP20010075A2; HUP0102979A2; JP2002521448A; PL345764A1; US20010020031A1; NO20010464L; EA200100188A1; HK1041226A1; US6632827B2; CA2338465A1; BG105218A; EP1100502A1; US20040044039A1; NO20010464D0

Description

FARMACEUTICKÝ PROSTŘEDEK

1. Oblast techniky

Vynález se týká způsobů a prostředků k léčeni poruch centrálního nervového systému („CNS), zvracení a poruch spojených s dysfunkcí gastrointestinální motility.

V jiném hledisku, se vynález týká metabolitů cisapridu a optických isomerů těchto metabolitů.

2. Dosavadní stav techniky

2.1 Sterické vztahy a působeni léků

Je mnoho organických sloučenin v opticky aktivních formách, tj.

polarizovaného předpony D a majících schopnost otáčení roviny rovinně světla. V popsané opticky aktivní sloučenině,

L nebo R a S jsou užity k udání absolutní konfigurace molekuly kolem jejích chirálních center. Předpony d a 1 nebo (+) a (-) jsou k udání znaménka rotace rovinně polarizovaného světla sloučeninou. Označení s (-) nebo 1 udává, že je sloučenina levotočivá. Předpona ( + ) nebo d udává, že je sloučenina pravotočivá. Tyto sloučeniny, zvané stereoisomery, jsou pro udanou chemickou strukturu identické, až na to, že jsou navzájem zrcadlové obrazy. Specifické stereoisomery mohou být také nazvané jako enantiomery a směs takovýchto isomerů je často nazývaná enantiomerická nebo racemická směs.

Stereochemická čistota je významná ve farmacii, kde mnoho z většiny popsaných léků, vykazuje chiralitu. Je například možno uvést β adrenergní blokátory, propranolol, kde Sanantiomer je známý lOOkrát více silnější než R- anantiomer. Ačkoliv síla není pouze záležitostí farmacie.

• 9	9 9	• ♦	99	9
9 9	9	•	•	9	9	9 9	9 9
9	9	9	•	•	9	4 9	9	9	f
9	9	9	• · ·	•	9	9999	9 9	9	1
9 9		•	9	•	9	9 9	1
9 9	•	•			9	9 9	• 9 9

2,2 Oblast farmakologie

U.S.Patent č. 4,962,115, 5,057,525 a 5,137,896 ( společně „Van Daele) popisuje N-(3-hydroxy-4-piperidenyl) benzamidy zahrnující cisaprid. Tyto shora zmíněné sloučeniny jsou ke stimulaci motility trávicího systému. Van Daele udává, že cis a trans diastereomerické racemáty těchto sloučenin mohou být získány odděleně běžnými způsoby a že cis a trans diastereomerické racemáty mohou být dále rozděleny do jejich optických isomerů.

Cisaprid je jeden ze třídy sloučenin známých jako benzamidové deriváty. ( viz: Schapira a spol., Acta Gastroenetrolog. Belg. Lili: 446-457, 1990). Tyto benzamidové deriváty mají jako skupina několik význačných farmakologických účinků. Význačné farmakologické účinky benzamidových derivátů náleží k jejich účinkům na neuronální systémy, které jsou modulovány neurotransmiterem serotoninem. Úloha serotoninu a tudíž farmakologie benzamidových derivátů, byla široce obsažena v různých stavech po mnoho let (viz Phillis, J.W., „ The Pharmacology of Synapses, Pergamon Press, Monografie 43, 1970; Frazer, A. a spol., Annual Rev. Of Pharmacology and Threapeutics 30: 307-348, 1990). Výzkum je tedy zaměřený na určení produkce a zásobních míst serotoninu, stejně tak jako na umístění receptorů serotoninu v lidském těle za účelem zjištění souvislosti mezi těmito místy a různými chorobami nebo stavy..

V tomto ohledu bylo objeveno, že hlavní místo produkce zásob serotoninu je enterochromafinní buňka gastrointestinální sliznice. Bylo také objeveno, že serotonin má silný stimulační účinek na motilitu střeva, stimulací hladkého svalstva střeva, urychlením střevní pasáže a snížením doby absorpce, jako u průjmu. Tento stimulační účinek je také spojený s nevolností a zvracením.

• to ·

Mnoho derivátů benzamidu, je pro svoji modulaci neuronálniho systému v trávicím traktu serotoninem, často účinnými antiemetickými činidly a jsou také běžně užívány k potlačení zvracení během nádorové chemoterapie nebo radioterapie, obzvláště pokud jsou užity sloučeniny, které značně vyvolávají zvracení, jako je cisplatina ( viz: Costall a spol., Neuropharmacology 26: 1321-1326, 1987). Tento účinek je skoro jistě výsledkem schopnosti sloučenin blokovat činnost serotoninu (5HT) na specifických místech účinku, jako je receptor 5HT3, který byl klasicky označen ve vědecké literatuře jako M-receptor serotoninu (viz: Clarke a spol., Trends in Pharmacological Sciences 10: 385-386, 1989). Chemoterapie a radioterapie může navozovat nevolnost a zvracení uvolněním serotoninu z poškozených enterochromafinních buněk v trávicím traktu. Uvolnění neurotransmiteru serotoninu stimuluje jak aferentni vlákna vagu (tudíž zahajuje zvracivý reflex), tak receptory serotoninu v chemorecepční spouštěcí zóně oblasti area postrema v mozku.

Anatomická místa pro tuto činnost derivátů benzamidu a zda-li takovou činnost, je centrální nervový systém(CNS), periferní nervový systém nebo jejich kombinace, zůstávají nepoznány (viz: Barnes a spol., J. Pharm.

Pharmacol. 40: 586-588, 1988).

Druhý vynikající účinek derivátů benzamidu je zvýšená činnost hladkého svalstva trávicího traktu z jícnu k horní části tenkého střeva, tak urychlující pasáž jícnem a střevem, stejně tak jako usnadňující vyprázdnění žaludku a zvýšení tonu dolního svěrače jícnu (viz: Decktor a spol., Eur.J. Pharmacol. 147: 313-316, 1988). Ačkoliv deriváty benzamidu nejsou samy o sobě agonisty cholinergních receptorů, dříve zmíněné účinky na hladkou svalovinu mohou být blokovány činidly, která blokují muskarinové receptory, jako je atropin nebo inhibitory neuronálních transmiterů, jako je tetrodoxin, který blokuje sodíkové kanály (viz: Fernandez a Massingham, Life Sci. 36:1φ · φφ

14, 1985). Podobná blokující činnost se může týkat svíravých účinků serotoninu v tenkém střevě a Clarke, Brit.

J. Pharmacol. 96:str.

247,

1989).

Věří se, že primární účinky derivátů benzamidu na hladké svalstvo jsou. výsledkem agonistické činnosti na skupinu receptorů serotoninu, označovanou jako receptory

5HT4, které jsou umístěné na interneuronech myenterického plexu ve střevní stěně (viz:

Clarke a spol.,

Trends in Pharmacological Sciences

10: 385-386,

1989 a Dumuis spol., N. S. Arch. Pharmacol. 340: 403-410,

1989) . Aktivace těchto receptorů následně zvyšuje uvolňování acetylcholinu ze zakončení parasympatických nervů, které jsou umístěny blízko okolních vláken hladkého svalstva. Je to kombinace acetylcholinu s jeho receptory na membrány hladkého svalstva, která je účinným spouštěcím impulsem pro svalovou kontrakci.

Cisaprid má schopnosti podobné metoclopramidu, až na to, že mu chybí činnost blokující receptor dopaminu (viz: Reyntjens a spol., Curr. Therap. Res. 36: 1045-1046, 1984) a zvyšuje motilitu v tlustém střevě, stejně tak jako v horních částech trávicího traktu (viz: Milo, Curr. Therap. Res. 36: 1053-1062, 1984). Avšak účinky v tlustém střevě, mohou být kompletně blokovány atropinem a mohou představovat, alespoň zčásti, přímý účinek léku ( viz: Schuurkes a spol., J. Pharmacol. Exp. Ther. 234: 775-783, 1985). Užitím pěstovaných neuronů myších embryí a vytvářením cAMP jako konečného bodu pro určení činnosti 5HT4, byla koncentrace EC50 racemického cisapridu 7xl0⁸ M ( viz: Dumuis a spol., N. S. Arch. Pharmacol. 340: 403-410, 1989). Léky této skupiny neovlivňují sekreci žaludeční kyseliny a mají různé účinky na motilitu tlustého střeva ( viz: Reyntjens a spol., Curr. Therap. Res. 36:1045-1046, 1984 a Milo, Curr. Therap. Res. 36: 1053-1062,

1984) .

• 9			• 9	9	9 9	•
9 ·	9 9	9	•	9	9 ·	• 9
•	«	• ·	9	9	9 9		•	9
•	•	9 9 9	9 9	9	9999	* ·	•	•
♦	•	9	9	9	9	•	•	•
♦ ♦	• 9		99	9	··	♦ ··

Racemický cisaprid je především užívaný k léčeni gastroezofageálního refluxu, který je charakterizovaný jako zpětný tok obsahů žaludku do jícnu. Cisaprid je použitelný pouze jako racemická směs opticky čistých isomerů, nazývaných enantiomery, 1:1, tj. směs cis (-) a cis(+) cisapridu, známá jako „Prepulsid™.

» Pozorování, že cisaprid spouští centrální nervový systém a váže se na 5HT4 receptory, ukazuje, že cisaprid může mít účinky, zprostředkované centrálně. Jak bylo objasněno v Dumuis a spol., N. S. Arch. Pharmacol. 340: 403-410, 1989, je cisaprid silný ligand v 5HT4 receptorech a tyto receptory jsou umístěny v několika oblastech centrálního nervového systému. Modulace serotonergních systémů může mít různé behaviorální účinky.

Pro svou činnost jako prokinetické činidlo, může být cisarid také užit k léčbě dyspepsie, gastroparesy, zácpy, pooperačního ileu a intestinální pseudoobstrukce.

Dyspepsie je stav charakterizovaný snížením výkonu nebo funkce trávení, který může vzniknout jako symptom primární gastrointestinální dysfunkce nebo jako komplikace patřící k jiným poruchám, jako je apendicitis, žlučníkový záchvat nebo malnutrice. Gastroparesa je paralýza, která nastává při motorické abnormalitě žaludku nebo jako komplikace nemoci jako je diabetes, progresivní systémová sklerosa, anorexia nervosa nebo myotonická dystrofie. Zácpa je stav charakterizovaný málo častým nebo obtížným vyprazdňováním stolice, vyplývající ze stavů jako je nedostatek tonu střevní svaloviny nebo střevní křeče. Pooperační ileus je neprůchodnost střeva, která je způsobená přerušením svalového tonu po operaci. Intestinální pseudoobstrukce je stav charakterizovaný zácpou, kolikovitými bolestmi a zvracením, ale bez zřejmé fyzické obstrukce.

····

-6Společné podáváni racemického cisapridu s dalšími terapeutickými činidly, je příčinou inhibičních problémů metabolismu cisapridu v játrech. Například, ketonazol, má výrazný účinek na kinetiku cisapridu, vyplývající z inhibice metabolické eliminace cisapridu a vede k osmi násobnému zvýšeni ustáleného stavu plasmatických hladin. ( Viz: Lavrijsen, K., a spol. „ The Role of CYP3A4 in the In-vitro Metabolism of cisapride in the Human Liver Microsomes an In-vitro and In-vivo Interactions of Cisapride with Co-administered Drugs, „Department of Pharmacokinetics and Drug Metabolism, Janssen Research Foundation, Beerse, Belgium). Vzájemné působení racemického cisapridu a jiných léčebných činidel může také zesilovat vedlejší kardiovaskulární účinky, jako je kardiotoxicita. Toto zesíleni se vyskytuje, pokud jiné účinné látky, které jsou přítomné v pacientově systému, interferuji s metabolismem racemického cisapridu, tudíž vytvářejí racemický cisaprid v těle. Tyto interakce jsou význačnou nevýhodou k užiti racemického cisapridu; zejména, protože racemický cisaprid je často užívaný před, během nebo ihned po jiném terapeutickém činidlu.

Kromě toho, podáváni cisapridu člověku, způsobuje nepříznivé účinky, které zahrnují tachykardii, účinky na centrální nervový systém („CNS), zvýšeni systolického tlaku, interakce s jinými léky, průjem, abdominálni křeče a kardiálni depresi. Dále bylo objeveno, že intravenosni podáváni racemického cisapridu, demonstruje výskyt vedlejších nepříznivých účinků, který není pozorován po orálním podávání racemického cisapridu. (Viz: Stacher a spol. Digestive Diseases and Sciences 32(11):1223-1230 (1987)).

Cisaprid je skoro kompletně vstřebán po orálním podání člověku, ale biologická využitelnost základní sloučeniny je pouze 40-50%, během prvního rychlého průchodu metabolismem ···· v játrech (Viz: Van Peer a spol., in Progress in the Treatment of Gastrointestinal Motility Disorders: The Role of Cisapride. Proceedings of Symposium in Frankfurt. Listopad 1986. Johnson A. G. a Lux, G. Editoři, Excerpta Medica, Amsterdam, str. 23-29 (1988)). Více než 90% dávky cisapridu je metabolizováno hlavně oxidační N-dealkylaci piperidinového dusíku nebo aromatickou hydroxylaci, probíhající buď na 4- fluorofenoxylovém kruhu nebo na benzamidovém kruhu. Je malá část piperidinylbenzamidu z metabolizovaného cisapridu, která je identifikována jako norcisaprid. (Viz: Meuldermans, W. a spol., Drug Metab. Dispos. 16(3): 410-419, 1988 a Meuldermans, W. a spol., Drug Metab. Dispos. 16(3): 403-409, 1988). Věří se ,že metabolismus cisapridu na norcisaprid probíhá následovně:

norcisaprid • 4 9 * 9 · ·

9 9 • 9 · 9

9 9 9

99999 •9 •99 ·

Norcisaprid je hlavni močový metabolit, který obsahuje 50-80% účinné látky, zjištěné v moči člověka za 72 hodin po podáni dávky. (Viz: Meuldermans, W. a spol., Drug Metab. Dispos. 16(3): 410-419, 1988). Krátké trváni účinku, jak vidíme u cisapridu, může být často spojováno s proměnlivými farmakologickými účinky, následujícími po orálním podávání sloučenin.

Bylo by zejména potřeba nalézt sloučeninu s přednostmi cisapridu, která nebude mít výše zmíněné nedostatky.

3. Podstata vynálezu

Předkládaný vynález se týká nových prostředků, které obsahují opticky čistý (+) norcisaprid a které jsou prospěšné pro léčení poruch CNS. Dále bylo zjištěno, že takovéto léčení může být uskutečněno, pokud podstatně snižuje nepříznivé účinky, spojené s podáváním racemického cisapridu, které zahrnuji, ale nelimitují, průjem, abdominální křeče, kardiální depresi a zvýšení krevního tlaku a srdeční frekvence.

Dále bylo zjištěno, že opticky čistý (+) norcisaprid je účinné antiemetické činidlo, užívané jako podpůrná terapie ke zmírnění nevolnosti a zvracení, navozené chemoterapií nebo radioterapií, při nádorové léčbě. Kromě toho, opticky čistý (+) norcisaprid může být užit k léčbě zvracení, pokud podstatně snižuje výše popsané nepříznivé účinky, spojené s podáváním racemického cisapridu.

Dále bylo zjištěno, že tyto norcisaprid, refluxu a dalších nové j sou norcisapridu jako obsahuj ící pro léčení prostředky, prospěšné stavů, které se mohou prokinetického činidla, opticky čistý (+) gastroesofageálního týkat činnosti (+) například, dyspepsie, gastroparesy, zácpy, pooperačního ileu a • · • ♦ · * • ·

-9intestinálni pseudoobstrukce. Kromě toho, opticky čistý (+) norcisaprid může být užit k léčení stavů, které podstatně snižují výše popsané nepříznivé účinky, spojené s podáváním racemického cisapridu.

Předkládaný vynález tedy zahrnuje způsoby pro léčení výše popsaných stavů u člověka, podáváním opticky čistého (+) norcisapridu zmíněnému člověku. Předkládaný vynález také zahrnuje způsoby a prostředky, které demonstrují zdokonalenou biologickou využitelnost oproti racemickému cisapridu, bez ohledu na způsob podávání. Dále ještě, předkládaný vynález zahrnuje způsoby a prostředky pro léčení chorobných stavů u člověka, které mají neočekávaný užitek a to, být schopné podávání obojího, opticky čistého (+) norcisapridu a dalšího terapeutického činidla, bez inhibičních účinků, obecně spojovaných se společným podáváním cisapridu. a dalšího terapeutického činidla, například, bez nepříznivých lékových interakcí.

Užití opticky čistého (+) norcisapridu se jeví lepším, v porovnání s racemickým norcisapridem, v léčení výše zmíněných chorobných stavů.

Tento vynález opticky čistý (+) v léčení zvracení.

se zabývá novými prostředky, norcisaprid.

Kromě obsahuj i k léčení opticky dalších čistý stavů, které obsahují

Tyto prostředky jsou toho tyto nové prostředky , ( + ) norcisaprid, mohou být které se mohou týkat činnosti (+) účinné které užity norcisapridu jako prokinetického činidla. Tyto stavy zahrnují, ale nejsou limitovány, dyspepsii, gastroparesu, zácpu a intestinálni pseudoobstrukci, Dále ještě, opticky čistý (+) norcisaprid může být užit k léčení těchto stavů, pokud snižuje nepříznivé vedlejší účinky, spojené s podáváním racemického cisapridu.

• · ·♦··

-10(+) norcisapridu, ·· · • ··· • ··

9 99

9 9 9 • ·· ···

Předkládaný vynález dále obsahuje užití v podstatě prostého centrálního nervového isomeru, systému limitovány, úzkost, panickou stavů u člověka zahrnují, ale nejsou afektivní poruchu, způsoby pro léčení výše popsaných isomeru norcisapridu, v podstatě depresi, poruchu.

člověku, při potřebě takovéto snižují vedlejší cisapridem.

k léčení poruch které například mánii, bipolární také zjištěny podáváním (+) (-) isomeru,

Jsou prostého jeho léčby, pokud nepříznivé účinky,

Tyto účinky zahrnují, průjem, abdominální křeče, kardiální podstatně spojené limitovány, zvýšení krevního tlaku a zrychlení srdeční frekvence, opticky čistý (+) norcisaprid, může k léčení poruch CNS, pokud podstatně nepříznivé účinky, spojené s léky CNS, například s takovými jako jsou zjištěny způsoby léčení společným podáváním opticky čistého (+) norcisapridu terapeutického činidla, vedlejší účinky spojené s činidla.

být užit, ruší nebo užívanými tyto způsoby které jsou ale nejsou depresi, Mimo to, vynálezu, podle snižuje vedlejší k léčení poruch benzodiazepiny.

různých chorobných stavů

Dále jsou u člověka pokud neočekávaně podáváním cisapridu a dalšího ruší nepříznivé a terapeutického

Aktivní sloučeninou těchto prostředků derivátu a způsobů je cisapridu, tento opticky čistý isomer metabolického metabolický derivát je popsaný v Meuldermans, W. a spol.., Drug Metab. Dispos. 16(3): 410-419, 1988 a Meuldermans, W. a spol., Drug Metab. Dispos. 16(3): 403-409, 1988.

Aktivní sloučenina předkládaných zjištěných prostředků a způsobů je chemicky (+) isomer metabolického derivátu cis-4amino-5-chloro-N-(1-(3-(4-fluorofenoxy)propyl)-3-methoxy-4piperidinyl)-2-methoxybenzamid ( zde označovaný jako „cisaprid), známý jako 4-amino-5-chloro-N-(3-methoxy-4piperidinyl)-2-methoxybenzamid, zde označovaný jako ,,( + ) • φ ·· * · « φ

φφ • φ φ φφφ

• φφφ ·φ • · φφφφ φ φa • φ φ φφ φφ φφ Φ φφ φ norcisaprid. Výraz „ (+) isomer norcisapridu a zejména výraz „ (+) norcisaprid zahrnuje opticky čistý a v podstatě čistý (+) norcisaprid. Podobně, jak zde užito, výrazy „racemický cisaprid, „racemický norcisaprid nebo „ racemická směs cisapridu nebo „racemická směs norcisapridu se týkají cis diastereomerických racemátů.

Předkládaný vynález obsahuje způsob léčeni poruch CNS u člověka a způsoby léčeni poruch CNS u člověka, které zahrnují podávání terapeuticky účinného množství (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, v podstatě prostých jeho (-) stereoisomeru, člověku, při potřebě takového léčení; pokud tyto způsoby podstatně snižují původní náchylnost k nepříznivým účinkům, spojených s podáváním racemického cisapridu. (+) norcisaprid může být zejména užit k léčení různých poruch CNS, které zahrnují, ale nejsou limitovány: (1) poznávací poruchy, jako je Alzheimerova choroba, senilní demence; (2) behaviorální poruchy jako je schizofrenie, mánie, obsesivně nutkavá porucha a poruchy z používání psychoaktivních látek; (3) náladové poruchy jako je deprese, bipolární afektivní porucha, úzkostné a panické poruchy; (4) poruchy řízení autonomní funkce, jako je hypertenze a poruchy spánku; a (5) neuropsychiatrické poruchy, jako je syndrom Gillesův de la Tourettův a Huntingtonova nemoc. Tyto a další příbuzné poruchy jsou dobře známé v oboru, tudíž bude jasné odborníkům, založeno na tomto objevu, které další příbuzné poruchy mohou být léčeny (+) norcisapridem v souladu s tímto vynálezem.

Ve výhodném provedení, je (+) norcisaprid užit k léčení náladových poruch, jako je deprese, bipolární afektivní porucha, úzkostná a panická porucha a behaviorální poruchy, jako je schizofrenie, mánie a více výhodně náladové poruchy.

Předkládaný vynález také obsahuje farmaceutický prostředek k léčení člověka trpícího poruchou CNS. Tento

-12prostředek obsahuje terapeuticky účinné množství (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, v podstatě prosté jeho (-) stereoisomeru.

Mimo to, předkládaný vynález obsahuje antiemetický prostředek k léčení člověka, při potřebě antiemetické terapie. Tento prostředek obsahuje (+) norcisaprid nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl, v podstatě prosté jeho (-) stereoisomeru.

léčení

V dalším hledisku, předkládaný člověka, stavu gastrointestinálni terapeuticky motility. Tento účinného množství (+ vynález zahrnuje způsob způsobeného dysfunkcí způsob zahrnuje podávání norcisapridu nebo jeho v podstatě prostých jeho (-) potřebě léčení

Stavy,, způsobené člověka zahrnují, dyspepsii, gastroparesu, pseudoobstrukci.

farmaceuticky stereoisomeru přijatelné soli, člověku, při gastrointestinálni motility. gastrointestinálni motility u limitovány, gastroesofageální reflux, zácpu, pooperační ileus a intestinální dysfunkce dysfunkcí ale nejsou

Předkládaný vynález dále obsahuj e sůl, prostředek, farmaceuticky stereoisomeru který přijatelnou a je určený k gastrointestinálni motility zahrnuje farmace (+) norcisaprid, nebo v podstatě prosté léčení stavu, způsobeného člověka.

ještě

Tyto nové prostředky různých poruch, popsaných nepříznivé vedlejší účinky cisapridu. Tyto nové farmaceuticky přijatelný nosič, kombinace, jek popsáno níže.

dysfunkcí k léčení mohou být dále užity výše, pokud podstatně způsobené podáváním racemického prostředky mohou popřípadě obsahovat pomocnou látku nebo jejich snižuj i to* * to • ···

Zvýšená biologická využitelnost umožňuje více účinný farmakodynamický profil než racemický cisaprid nebo racemický norcisaprid a více účinné ovlivnění léčených poruch. Například, více účinné ovlivnění poruch může být dosaženo podáváním (+) norcisapridu, jelikož může být redukována frekvence dávkování. To bude usnadňovat, například léčbu během noci, kdy pacient spi. Podobně, může být nižší frekvence dávkováni prospěšná, pokud je ( + ) norcisaprid užit profylakticky nebo jako léčba zvracení u pacientů s rakovinou.

Vynález také zahrnuje snížení kardiovaskulárních vedlejších účinků, které jsou potencovány společným podáváním cisapridu s dalším terapeutickým činidlem. Mohou to být interakce mezi cisapridem a jinými terapeutickými činidly. Například, terapeutika, která interferují s metabolismem racemického cisapridu, jsou příčinou vytváření cisapridu v těle. Toto vytváření může způsobovat nebo zesilovat nepříznivé kardiovaskulární účinky, známé ve spojení s racemickým cisapridem, jako je kardiotoxicita. Tedy, přítomnost těchto terapeutik, buď při společném podávání nebo postupném podávání před nebo po racemickém cisapridu, může způsobovat nebo zesilovat nepříznivé účinky racemického cisapridu. Užití (+) norcisapridu může neočekávaně vést ke snížení nepříznivých vedlejších účinků. Věří se, že (+) norcisaprid snižuje obojí, nepříznivé lékové interakce, které se vyskytují s racemickým norcisapridem, tudíž nepřímo snižuje nepříznivé vedlejší účinky stejně tak jako snižuje nepříznivé vedlejší účinky samotného racemického cisapridu. (+) norcisaprid může být tedy společně podáván s léky jako ketonazol, známým činidlem k inhibici systému cytochrómů P 450, který je zodpovědný za metabolismus cisapridu. S uvedenými léky může být (+) norcisaprid společně podáván bez způsobení nebo zvýšení nepříznivých kardiovaskulárních účinků racemického cisapridu.

• ·	··	9 ♦	•	« ·
• t	• ·	♦ ·	•	• · ·
• ·	• ·	•	9	• ·	• ·
• «	··· ·	•	9	····	• · ·
• ·	•	9	•	•	9 ·
• 9	• 9	·«	•	·· ·

Předkládaný vynález tedy obsahuje způsoby pro léčeni výše popsaných chorob u člověka. Tyto způsoby zahrnují podáváni (a) terapeuticky účinného množství (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, v podstatě prostých jeho (-) stereoisomeru; a (b) dalšího terapeutického činidla člověku. Inhibiční problémy společného podávání, spojené s podáváním cisapridu a dalšího terapeutického činidla, mohou být překonány podáváním opticky čistého (+) norcisapridu ve spojení s dalším terapeutickým činidlem. Lékař se tudíž nebude zajímat o kardiotoxické vedlejší účinky racemického cisapridu, pokud bude podáván (+) norcisaprid s další účinnou látkou.

Mohou být užita další terapeutická činidla ve spojení s léčením (+) norcisapridem nebo pokud mohou být podávána během léčení s (+) norcisapridem, která zahrnují, ale nejsou limitována, antifungální, antivirová, antibakteriální, antitumorosní nebo antihistaminová činidla nebo selektivní inhibitory přijmu serotoninu. Příklady antifungálních činidel zahrnují, ale nejsou limitovány, ketoconazol, itraconazol a amfotericin B. Příklady antibakteriálních činidel zahrnují, ale nejsou limitovány, temafloxicinn, lomefloxicin, cefadroxil a erythromycin. Příklady antivirových činidel zahrnují, ale nejsou limitovány, ribavirin, rifampicin, AZT, DDI, acyklovir a gingaciklovir. Příklady antitumorosních činidel zahrnují, ale nejsou limitovány, doxorubicin a cisplatinu. Další činidla, která mohou být podávána společně s (+) norcisapridem zahrnují, ale nejsou limitována, digoxin, diazepam, etanol, acenokumarol, fluoxetin, ranitidin, paracetamol, terfenadin, astemizol, propranolol a další známá činidla k inhibici systému cytochrómů P450.

Využití v podstatě opticky čistého nebo opticky čistého isomerů (+) norcisapridu má za následek čistší dávku, která se týká stanovení účinnosti, snížených nepříznivých účinků a tudíž

-15• to ♦· ·» «·· • · · · · · « « • · · · · · · · »' * · ··· · · · ···· « ·« • · · · · to ·· ·· ·· ♦ · to·· zlepšeni terapeutického indexu. Takovéto využiti také umožňuje léčeni různých chorobných stavů u člověka obojím, opticky čistým (+) norcisapridem a dalším terapeutickým činidlem.

Výraz „nepříznivé účinky zahrnuje, ale není limitován, gastrointestinální poruchy jako je průjem, abdominální křeče a abdominální škroukání; únavu, bolest hlavy, kardiální depresi, zvýšení systolického tlaku, zrychlení srdeční frekvence, neurologické účinky a účinky na CNS, a nepříznivé účinky, které jsou výsledkem interakce cisapridu s které inhibují metabolismus cisapridu účinné látky zahrnují, digoxin, diazepam, ranitidin, paracetamol, astemizol a propranolol.

Tyto další ketoconazol, cimetidin, dalšími účinnými látkami, systémem cytochrómů P450. ale nejsou limitovány, etanol, acenokumarol, fluoxetin, terfenadin,

Výrazem zde užito, hmotnostních „v podstatě prostý jeho se míní prostředky,které ( + ) norcisapridu a kolem méně (-) norcisapridu. Ve více výhodném (-) stereoisomeru, obsahují nejméně

10% hmotnostních jak

90% nebo provedení, se výrazem „v podstatě prostý jeho (-) který obsahuje nejméně kolem a kolem 5% hmotnostních nebo výhodném provedení výrazem stereoisomeru, jak zde užito, se míní obsahuje 99% hmotnostních (+) norcisapridu. založená na celkovém množství norcisapridu v stereoisomeru míní prostředek, 95% hmotnostních (+) norcisapridu méně (-) norcisapridu. V nejvíce prostý jeho (-) prostředek, který Tato procenta jsou prostředku. Výrazy „v podstatě „v podstatě čistý (+) isomer norcisapridu nebo „v podstatě opticky čistý (+) norcisaprid a „opticky čistý (+) isomer norcisapridu a „opticky čistý (+) norcisaprid jsou obsaženy ve výše popsaných množstvích.

Výrazy „vyvolávající antiemetický účinek a „antiemetická terapie, jek zde užito, se míní poskytnutí úlevy od symptomů nevolnosti a zvracení, navozených spontánně nebo ve spojení

• 0	00	00	0	00		0
• ·	0 0	0 0	0	0	0	0 0
• 0	• 0	0 Φ	0 0	0	0	0
• ·	000 0	0 0	0000	0 0	0	0
• ·	0	0 0	•	0	0	0
··	00	00	0	00		000

s chemoterapii a radioterapií rakoviny, která navozuje zvracení.

Dále se těmito výrazy míní prevence výše zmíněných symptomů.

Výrazem „léčení stavů způsobených dysfunkcí gastrointestinální motility, jak zde užito, se míní léčení symptomů a stavů spojených s poruchami, které zahrnují, ale nejsou limitovány, gastroezofageální reflux, dyspepsii, gastroparesu, zácpu, pooperační ileus a intestinálni pseudoobstrukci.

Výrazem „prokinetický, jak zde užito, se mini zvýšení peristaltiky a tedy pohybu trávicího traktu.

Výrazem „gastroezofageálnmí reflux, jak zde užito, se míní stav, charakterizovaný zpětným tokem obsahů žaludku do j ícnu.

Výrazem „dyspepsie, jak zde užito, se míní stav, charakterizovaný porušením výkonu nebo funkce trávení, který může vzniknout jako symptom primární gastrointestinální dysfunkce nebo jako komplikace během jiných onemocnění jako je apendicitis, žlučníkový záchvat nebo malnutrice.

Výrazem „gastroparesa, jak zde užito, se míní paralýza žaludku, která nastává při motorické abnormalitě žaludku nebo jako komplikace onemocnění jako je cukrovka, progresivní systémová sklerosa, anorexia nervosa nebo myotonní dystrofie.

Výrazem „zácpa, jak zde užito, se míní stav, charakterizovaný málo častou defekací nebo obtížným vyprazdňováním stolice.

Tento stav vyplývá ze stavů jako je nedostatek tonu střevní svaloviny nebo střevní křeče.

• ·

Výrazem „pooperační ileus, jak zde užito, se mini střevní obstrukce při porušeni svalového tonu, která je následkem chirurgického výkonu.

Výrazem „intestinálni pseudoobstrukce, jak zde užito, se mini stav, charakterizovaný zácpou, kolikovitými bolestmi a zvracením, ale bez zřejmé fyzikální obstrukce.

Výrazemspolečné podávání, jak zde užito, se míní podávání dvou terapeutických činidel buďsoučasně, společně nebo postupně bez určitých časových limitů tak, že obě činidla jsou přítomná v těle ve stejném čase.

Racemická směs cisapridu může být syntetizována způsobem, popsaným v Evropské patentové přihlášce č. 0,076,530 Ά2, vydané 13. dubna, 1983, v U.S. Patentu č. 4,962,115, 5,057,525 a 5,137,896 a ve Van Daele a spol., Drug Development Res. 8: 225232 (1986). Metabolismus cisapridu na norcisaprid je popsaný v Meuldermans, W. a spol., Drug Metab. Dispos 16(3): 410-419, 1988 a Meuldermans, W. a spol., Drug. Metab. Dispos. 16(3): 403-409, 1988. Norcisaprid může být syntetizován ze známých komerčně dostupných výchozích látek, v souladu se standardními postupy organické chemie. Někteří odborníci mohou syntetizovat cisaprid nebo norcisaprid postupy dle EP 0,076,530 A2 a U.S.Patent č. 5,137,896, Van Daele.

(+) isomer norcisapridu může být získán z jeho racemické směsi rozdělením enantiomerů užitím běžných způsobů, tak jako z opticky aktivní dělící kyseliny. Viz., například, „Enantiomers, Racemates and Resolutions, J. Jacques, A. Collet a S. H; Wilen, (Wiley-Entenscience, New York, 1981); S. H. Wilen, A. Collet a J. Jacques, Tetrahedron,33, 2725 (1977) ; a „Stereochemistry of Carbon Compounds, E. L. Eliel (McGraw-Hill, NY, 1962) a S. H. Wilen, str. 268, v „Tables of Resolving

-18···· · · ···· φφφφ φφφφ· · • · ΦΦΦ φ φ φ φφφφ φ φ · ·· φφφφΦ· ·· ·· ·Φ φ φφφ

Agents and Optical Resolutions (E. L. Eliel, vydavatel Univ. Notre Dáme Press, Notre Dáme, IN, 1972) .

Velikost profylaktické nebo terapeutické dávky (+) norcisapridu v akutním nebo chronickém ovlivněni onemocnění a/nebo poruch zde popsaných se bude měnit se závažnosti stavu, který má být léčen, a se způsobem podáni. Dávka a dokonce i frekvence dávek, bude také různá podle věku, tělesné hmotnosti a individuální reakce pacienta. Odborníky mohou být snadno vybrány vhodné dávkovači režimy se správným uvážením těchto faktorů. Obyčejně, celkové denní dávkovači rozmezí (+) norcisapridu, pro stavy zde popsané, bude od kolem 0.5 mg až kolem 500 mg v jediné nebo v rozdělených dávkách. Výhodně, bude denní dávkovači rozmezí mezi kolem 1 mg až kolem 250 mg v jediné dávce nebo v rozdělených dávkách. Avšak nejvíce výhodně, bude denní dávkovači rozmezí mezi kolem 5 mg až kolem 100 mg v jediné dávce nebo v rozdělených dávkách. Je výhodné, pokud jsou dávky podávány lkrát až 4krát denně.

V zacházení s pacientem, může být léčba zahájena nižší dávkou, třeba kolem 5mg až kolem 10 mg, a zvýšení nad 50 mg nebo výše, bude záviset na pacientově celkové reakci. Dále je doporučeno, aby děti a pacienti nad 65 let a pacienti s porušenou funkcí jater nebo ledvin, nejprve dostali nízké dávky a aby byla provedena titrace ke zjištění individuální reakce (reakcí) a krevní hladiny (hladin). V některých případech může být nezbytné užití dávek vně tohoto rozmezí, jak bude zřejmé odborníkům. Dále je zřejmé, že klinik nebo ošetřující lékař bude vědět, jak a kdy přerušit, přizpůsobit nebo ukončit léčbu ve spojení s individuální reakcí pacienta.

K poskytnutí účinné dávky norscisapridu pacientovi, mohou být užity některé vhodné způsoby podávání. Například, orální, rektální, parenterální ( subkutánní, intramuskulární, intravenosní), transdermální a podobné formy podávání mohou být

-19• ·

použity. Dávkovači formy zahrnuji tablety, pastilky, disperse, suspense, roztoky, kapsle, měkké elastické želatinové kapsle, náplasti a podobně.

Farmaceutické prostředky, podle vynálezu, aktivní složku (+) norcisaprid nebo jeho přijatelnou sůl, a mohou také obsahovat zahrnují jako farmaceuticky farmaceuticky přijatelný nosič a popřípadě další terapeutické složky.

Výraz „farmaceuticky přijatelné soli nebo „jeho farmaceuticky přijatelná sůl se týká solí připravených z farmaceuticky přijatelných netoxických kyselin a zásad nebo organických kyselin a zásad. Jelikož sloučenina, podle vynálezu, je zásaditá, mohou být soli připraveny z farmaceuticky přijatelných netoxických kyselin. Vhodné farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami pro sloučeninu, podle vynálezu, zahrnují sůl kyseliny octové, benzensulfonové (besylát), benzoové, kafrosulfonové, citrónové, etensulfonové, fúmorové, glukonové, glutámové, bromovodíkové, chlorovodíkové, isethionové, mléčné, maleiové, jablečné, mandlové, metansulfonové, slizové, dusičné, pamoové, pantothenové, fosforečné, jantarové, sírové, vinné, ptoluensulfonové a podobně. Výhodnými adičními solemi s kyselinami jsou chloridy a sulfáty. V nejvíce výhodném provedeni je ( + ) norcisaprid podáván jako volná base.

Prostředky, podle vynálezu, zahrnují prostředky jako jsou suspense, roztoky a elixíry; aerosoly; nebo nosiče jako jsou škroby, cukry, mikrokrystalická celulosa, ředidla, granulační činidla, lubrikanty, pojivá, desintegrační činidla a podobně. V případě orálních pevných přípravků (jako jsou prášky, kapsle a tablety) budou pevné orální přípravky preferovány před kapalnými přípravky. Výhodným orálním pevným přípravkem jsou kapsle. Nejvíce výhodným orálním pevným přípravkem jsou tablety.

·· ·· ·· · ·· • · · · ··· ·· • · · · ···· ·· • · ··· · · · ···· · ·«

-7Λ- ·· ····· · bv ·· ·· ···

Vhodné farmaceutické prostředky, podle vynálezu, pro orální podávání, mohou být přítomny jako oddělené farmaceutické dávkovači formy, jako jsou kapsle, oplatky, měkké želatinové kapsle nebo tablety, nebo aerosolové spreje. Všechny tyto formy obsahují předem stanovené množství aktivní složky, jako je prášek nebo granule, nebo jako je roztok nebo suspense ve vodné kapalině, nevodné kapalině, emulse oleje ve vodě nebo kapalná emulse vody v oleji. Tyto prostředky mohou být připraveny některým z farmaceutických způsobů, ale všechny způsoby zahrnují krok přivádění ke spojení aktivní složky s nosičem, který tvoří jednu nebo více potřebných složek. Prostředky jsou zejména připravovány rovnoměrným a dokonalým promícháním aktivní složky s kapalným nosičem nebo jemně rozptýlenými pevnými nosiči nebo obojím a potom, pokud je to nezbytné, se produkt tvaruje do žádané formy.

Například, tablety mohou být připraveny stlačením nebo odléváním, popřípadě s jednou nebo s více přídavnými složkami. Stlačené tablety mohou být připraveny stlačením aktivní složky do volně rozptýlených forem, jako jsou prášky nebo granula, ve vhodném přístroji, popřípadě mohou být míchány s pojivém, lubrikantem, inertním ředidlem, povrchově aktivním nebo dispergujícím prostředkem. Odlévané tablety mohou být připraveny mletím směsi práškové složky, zvlhčené inertním kapalným ředidlem, ve vhodném přístroji. Je žádoucí, aby každá dávkovači forma, jako je tableta nebo měkká želatinová kapsle, obsahovala od kolem 0,5 mg až kolem 250 mg aktivní složky, výhodně od kolem 1 mg až kolem 100 mg aktivní složky a více výhodně od kolem 5 mg až kolem 50 mg aktivní složky. Tableta, oplatka nebo kapsle může obsahovat jednu nebo několik dávek, například, kolem 5 mg, kolem 10 mg nebo kolem 25 mg aktivní složky.

• · • · · · · · · 9 9

999 99 9 9999 99 9

Tablety a kapsle, pro jejich snadné podáváni, představují nejvíce výhodné orální dávkovači formy, v tomto případě jsou použity pevné farmaceutické nosiče. Pokud je to žádáno, mohou být tablety povlečeny standardními vodnými nebo nevodnými technikami a mohou být formulovány pro řízené uvolňování užitím technik,které jsou dobře známé odborníkům (viz, například, Ebert, Pharm. Těch., 1(5):44-50 (1977)). Měkké elastické želatinové kapsle mají měkký kulovitý želatinový obal trochu silnější než tvrdé želatinové kapsle, kde je želatina změkčována přidáním glycerinu, sorbitolu nebo podobných polyolů. Tvrdost obalu kapsle může být změněna obměnou typu želatiny a obměnou množství změkčovadla a vody. Měkké želatinové obaly mohou obsahovat konzervační prostředky, jako jsou metylparabeny, propylparabeny a kyselina sorbová, k prevenci růstu plísní. Aktivní složka může být rozpuštěna nebo rozptýlena v kapalném nosném prostředí nebo nosiči, jako jsou rostlinné nebo minerální oleje, glykoly jako je polyetylenglykol a propylenglykol, surfaktanty jako jsou polysorbáty nebo jejich kombinace.

Kromě běžných dávkovačích forem, vytyčených výše, mohou být sloučeniny, podle vynálezu, také podávány řízeným uvolňováním prostředků a/nebo přívodními prostředky, jak popsáno v U.S. Patent č. 3,845,770; 3, 916,899; 3,536,809; 3,598,123; a 4,008,719.

Vynález je dále objasněn pomocí následujících příkladů, popisujících detailně přípravu sloučenin a prostředků, podle vynálezu, stejně tak jako jejich využití. Odborníkům bude zřejmé, že může být upotřebeno mnoho modifikací látek a způsobů bez odchýlení se od cíle a zájmu vynálezu.

• ·

5. Příklady provedení vynálezu

5.1. Přiklad 1

Antiemetické účinky

Relativní účinky opticky čistého racemického cisapridu a norcisapridu jako antiemetického činidla, jsou zjištěny farmakologickou studii u fretek. Hodnocení těchto sloučenin je založené na jejich relativním účinku v testu pro měření antiemese.

Samci fretek (kastrovaní, o hmotnosti 1.0-2.0 kg) byli nakoupeni z Triple F farem (Sayre, PA). Byli umístěni po čtyřech do klece s 12ti hodinovým světelným cyklem a krmeni podle chuti krmivém Ralston Purina Cat Chow. Každá fretka byla k pokusu užita nakrmená po minimálně 24 hodinové době aklimatizace za příznivých podmínek pro zvířata.

Příprava fretky. Každá fretka byla anestezována se směsí 5% isofluranu a O₂ při uložení po dobu 2-5 minut v anestetické komoře. Anestetický plyn byl odsán odsávací hadicí ve vakuu. Zvířata byla vyjmuta a zvážena. Zatímco bylo zvíře udržováno pod anestesií užitím malé nosní masky přívodem 5% isofluranu a O₂, byly mu do žíly (cephalica) na hřbetu přední tlapy vpraveny injekce zkoumané sloučeniny nebo nosného prostředí za použití manžety a 1 ml tuberkulinové stříkačky s 25 G jehlou. Každá přední tlapa byla pro snadnější určení polohy žíly oholena. Doba zotavení, pokud se týká anestesie, byla 5-8 minut.

Příprava léku. Morfinsulfát (15mg/kg) byl získán běžným způsobem a před každou zkouškou zředěn na lmg/ml ve fysiologickém roztoku chloridu sodného. Byl zvážen sypný prášek cisplatiny a rozpuštěn ve fysiologickém roztoku chloridu sodného, zahřátého na 75°C, ke zhotovení roztoku 5mg/ml (90 mg bylo umístěno ve scintilační lahvičce a doplněno na 18 ml

-23·· fysiologického roztoku chloridu sodného). Roztok byl míchán michadlem a udržován v inkubátoru při 40 °C až do podáni injekce. Roztok byl čirý, světle žluté barvy. Zkoumaná sloučenina, pokud byla ve vodě rozpustná, byla rozpuštěna ve fysiologickém roztoku chloridu sodného při teplotě místnosti (10 mg base/10 ml) k přípravě Img/ml roztoku jako base. Pro dávky 3.0-10.0 mg/kg byl připraven roztok 5 mg/ml. Pro dávky 0.001 mg/kg byl připraven roztok 0.01 mg/ml.

Model zvracející po morfinu: Pokus se z dávkování zkoumané sloučeniny pěti fretkám a jedné fretce s podáváním nosného prostředí (tj. fysiologického roztoku chloridu sodného), jako kontroly. Zkoumaná sloučenina nebo fysiologický roztok chloridu sodného (0,5 ml) byla vstříknuta i. v. v čase nula. O pět minut později byl morfinsulfát 0,3 mg/kg podán s.c. do oblasti zátylku. Po 30ti minutách po morfinové injekci byla zaznamenána pozorování.

Clsplatínový model: Cisplatina lOmg/kg byla vstříknuta i.

v. každé anestezované fretce v čase nula. O 30 minut později byl skupině šesti fretek vstříknut fysiologický roztok chloridu sodného (0,5 ml) nebo zkoumaná sloučenina (C=l, zkouška=5).

Pozorování byla zaznamenána po čtyřech hodinách.

Počáteční dávka zkoumané sloučeniny byla u obou pokusů 1 mg/kg. Dávkování byla zvýšena nebo snížena po přírůstcích jedna polovina log. Pokus byl proveden ke zkoušce nejméně tří dávek tak, že procento snížení zvracení po morfinu nebo cisplatině bylo 70% nebo více v případě první dávky, přibližně 50% v případě druhé dávky a méně než 50% v případě třetí dávky. Tyto tři dávky a účinky byly užity k vytvoření hodnoty ED 50.

Pokusné sledování a sběr údajů. Klece pro šest fretek, byly upraveny dveřmi z plexiskla a zdvíhacími dny pro snazší pozorování a fretky byly umístěny do klecí individuelně.

φ φ

-24Množství zvracivých epizod a dávení a doby, ve kterých k nim došlo, byly zaznamenány v průběhu 30ti minut po počáteční době, kdy byla podána injekce zkoumaného léku (morfinový model). Množství zvracivých epizod a dávení a doby, při kterých k nim došlo, byly zaznamenány v průběhu čtyř hodin po počáteční době, ve které byla podána injekce cisplatiny (cisplatinový model). Zvracívá episoda byla definována jako vyprázdnění pevných látek nebo kapaliny nebo jako dávení, mající za následek otevření úst bez vyprázdnění obsahů žaludku. Dávení byla definována jako rytmické pohyby svalů hrudního koše. Souhrn zvracivých epizod a dávení byl průměrně stanoven pro každou skupinu pěti fretek a účinek léčení byl vypočítán jako procento snížení zvracivých epizod ve srovnání s kontrolními hodnotami podle vzorce:

#epizody (fys.roztok chloridu sodného.)- #epizody(lék) X 100 ttepizody (fysiologický roztok chloridu sodného)

K vytvořeni hodnoty ED 50 byla užita průměrná ochrana v %, při použití analýzy probitů a RS-1 statistického balíčku.

5.2. Přiklad 2

Biologická dostupnost

Jednotlivá dávka testované látky nebo nosného prostředí se podá samcům malých honících psů buď intravenosně jako bolus po jednu minutu při použití injekční jehly s křidélkem č. 23 do véna saphena nebo se podá jako jednotlivá dávka pomocí orální sondy. Od každého psa se před pokusem odeberou 2 ml plné krve a dále pak v intervalech 0.083, 0.25, 0.5, 1, 2, 3, 4, 6, 9, 12 a 24 hod. po intravenosním nebo orálním podání optických isomerů nebo racemické směsi cisapridu nebo norcisapridu. Před podáním testované látky jsou psi umístěni na utaženém řemenu a po odběru krevních vzorků v intervalu 0.083 hod. se převedou do

-25metabolických kleci. Všechny krevní vzorky se sbírají cévním katétrem, umístěným na začátku pokusu ve véna cephalica.

Krev je nabírána do 3 ml stříkačky. Prvních 1.0-2.0 ml krve se odloží. Další 2.0 ml plné krve se rychle přemístí do heparinizované zkumavky. Heparinizované zkumavky se udržují na ledu až do přidání krve. Po přidání krve do zkumavky se obsahy zkumavky míchají a centrifugují k získání plasmy. Plasma se opatrně slije a přemístí do testovací zkumavky, označené štítkem s: číslem zvířete, dávkou podané testované látky, dobou podání a dobou sběru krevního vzorku. Zkumavky se až do analýzy skladují při -20°C.

Analýza koncentrace optických isomerů nebo racemátů norcisapridu se v každém plasmatickém vzorku určí užitím vysokotlaké kapalinové chromatografie. Pro každou testovanou látku je plasmatická koncentrace s ohledem na dobu' sběru vzorku zanesena do diagramu pro oba způsoby podání. Orální biologická dostupnost každé testované látky se stanoví srovnáním C_max a AUC pro orální způsob podání oproti testované látce pro intravenosní způsob podání. T_1/2 pro každou testovanou látku pro oba způsoby podání se vypočítá jako ukazatel trvání účinku.

5.3. Přiklad 3

Aktivita 5HT1A receptoru

K určení potenciální agonistické a/nebo antagonistické činnosti racemického norcisapridu, cisapridu a jejich enantiomerů se užije volba receptoru a amplifikační technologie (ER-SAT, Receptor technologies lne., Winooski, VT) na klonovaných subtypech lidských receptorů serotoninu 5-HTi_A , k jehož expresi dochází v NIH 3T3 buňkách (Burstein a spol., J. Biol Chem., 270:3141-3146 (1995); a Messier a spol., Pharmacol. Toxicol., 76(5):308-311 (1995)).

·· • · · • · • · ·· · « · · • · ·

-26Zkouška zahrnuje koexpresi enzymů jako markéru, βgalaktosidasy s příslušnými receptory serotoninu. stimulují proliferaci buněk, které exprimují receptor markér. Ligandem indukované účinky mohou být stanoveny markéru.

Ligandy a tudíž zkouškou

NH 3T3 buňky se inkubují, uskuteční transfekce užitím lidských receptorů HTi_A,pSV-^-galaktosidasy a DNA spermie lososa, změní o jeden den později a po dvou dnech, naočkují na plotny a serotoninu poté se

5Prostředi se podíly buněk podrobených účinku trypsinu se umístí do vyhloubení ploten s 96 vyhloubeními. Po pěti dnech pěstování se za přítomnosti ligandů měří hladiny β-galaktosidasy. Buňky se pak propláchnou a se substrátem, o-nitrofenyl β-D-galaktopyranosidem.

405 nm na odečítacím inkubuj í

Plotny se odečtou po 16ti hodinách při Každá sloučenina je testována v sedmi odlišných koncentracích (10, 2.5, 0.0098 a 0.0024 nM).

zařízeni.

pro aktivitu třikrát

0.625, 0.156, 0.039,

Žádná ze sloučenin nevykazovala v lidských 5-HT_XA receptorech z antagonistické inhibice sloučenin jsou agonistickou aktivitu serotoninu.

Údaj e sestaveny z rovnice:

Odpověď

Max odpověď+ (Min odpověď) + (koncentrace ligandu/EC₅₀)

IC₅₀ vazeb) koncentraci

Hodnoty specifických oproti nejmenších čtverců v tabulce 1 a 2.

(koncentrace potřebné k inhibici 50% se vypočítají z antagonistické činnosti 2μΜ 5-HT, užitím metody nelineárních (KaleidaGraph). Výsledky jsou zobrazeny • · * · · ·

-27·<♦ · ·

Aktivita 5ΗΤ2 receptoru

Κ určeni potenciální agonistické a/nebo antagonistické činnosti racemického norcisapridu, cisapridu a jejich enantiomerů se užije volba receptoru a amplifikační technologie (ER-SAT, Receptor technoiogies lne., Winooski, VT) na klonovaných subtypech lidských receptorů serotoninu 5-HT₂ , k jehož expresi dochází v NIH 3T3 buňkách (Burstein a spol., J. Biol Chem., 270:3141-3146 (1995); a Messier a spol., Pharmacol. Toxicol., 76(5):308-311 (1995)).

Zkouška zahrnuje koexpresi enzymů jako markéru, βgalaktosidasy s příslušnými receptory serotoninu. Ligandy stimulují proliferaci buněk, které exprimují receptor a tudíž markér. Ligandem indukované účinky mohou být stanoveny zkouškou markéru.

NH 3T3 buňky se inkubují, naočkují na plotny a poté se uskuteční transfekce užitím lidských receptorů serotoninu

5HT₂, pSV^-galaktosidasy a DNA spermie lososa.

změní o jeden den později a po dvou dnech,

Prostředí se podíly buněk podrobených účinku trypsinu se umístí do vyhloubení ploten s 96 vyhloubeními. Po pěti dnech pěstování se za přítomnosti ligandů měří hladiny β-galaktosidasy. Buňky se pak propláchnou a inkubují se substrátem, o-nitrofenyl β-D-galaktopyranosidem. Plotny se odečtou po 16ti hodinách při 405 nm na odečítacím zařízeni. Každá sloučenina je testována pro aktivitu třikrát v sedmi odlišných koncentracích (10, 2.5, 0.625, 0.156, 0.039,

0.0098 a 0.0024 nM).

Žádná ze sloučenin nevykazovala agonistickou aktivitu v lidských 5-HT₂ receptorech serotoninu. Údaje z antagonistické inhibice sloučenin jsou sestaveny z rovnice:

Odpověď

Max odpověď+ (Min odpověď) 1 + (koncentrace ligandu/EC₅₀)

Hodnoty IC₅₀ (koncentrace potřebné k inhibici

50% specifických vazeb) oproti koncentraci nejmenších čtverců se vypočítají z antagonistické činnosti 2μΜ 5-HT, užitím metody nelineárních (KaleidaGraph). Výsledky jsou zobrazeny v tabulce 1 a 2.

TABULKA 1

Vypočítané hodnoty IC₅₀ (μΜ) na receptorech 5-HT_1A a 5-HT₂

Sloučenina	5-HT_1A	5-HT₂
(±) norcisaprid	7.48	2.21
(+) norcisaprid	0.0054	0.38
(-) norcisaprid	1.30	—

TABULKA 2

Vypočítané hodnoty IC_5O (μΜ) na receptorech 5-HT_1A a 5-HT₂

Sloučenina	5-HT_1A	5-HT₂
(±) cisaprid	—	0.26
(+) cisaprid	—	0.0050
(-) cisaprid	—	7.08

• · ····

5.4. Příklad 4

Vazba receptorů 5HT3

Racemický norcisaprid, racemický cisaprid a jejich ( + )- a (-)- enantiomery byly testovány (Cerep, Celle 1'Evescault,Francie) pro vazbu na subtypy receptorů 5HT₃, odvozených od N1E-115 buněk.

Po inkubaci s příslušnými ligandy, byly přípravky rychle filtrovány ve vakuu přes GF/B filtry ze skelných vláken a byly promyty ledovým pufrem za použití Brendelova nebo Packardova buněčného stroje pro oddělování buněk. Vázaná radioaktivita byla určena počítačem pro kapalinovou scintilaci (LS 6000, Beckman) při použití scintilační kapaliny (Formula 989) .

Specifická vazba radioligandu k receptorů byla definována jako rozdíl mezi celkovou vazbou a nespecifickou vazbou, určovanou v přítomnosti přebytku neoznačeného ligandu. Výsledky byly vyjádřeny jako procento inhibice specifické vazby, získané v přítomnosti sloučenin. IC₅₀ byly určovány užitím koncentrací, sahajících od 3 x 1CT¹⁰ až do 10’⁵ M, k získání úplných kompetičních křivek a byly vypočítány nelineární regresní analýzou. Výsledky jsou znázorněny v tabulce 3 a 4 níže.

Receptor 5HT4

Racemický norcisaprid, racemický cisaprid a jejich (+)- a (-)- enantiomery byly testovány (Cerep, Celle 1'Evescault,Francie) pro vazbu na subtypy receptorů 5HT₄, odvozených od korpus striatum morčete.

Po inkubaci s příslušnými ligandy, byly přípravky rychle filtrovány ve vakuu přes GF/B filtry ze skelných vláken a byly promyty ledovým pufrem za použití Brendelova nebo Packardova buněčného stroje pro oddělování buněk. Vázaná radioaktivita

-30ΦΦΦ* φφ φ ·· • · * · φφφ ·· φ φφφφ φφφφ ·· • · φφφ φ φ φ Φ·ΦΦ « φ φ •φ φφφ» φφ φφφφ Φ· · φφ · byla určena počítačem pro kapalinovou scintilaci (LS 6000, Beckman) při použití scintilační kapaliny (Formula 989).

Specifická vazba radioligandu k receptoru byla definována jako rozdíl mezi celkovou vazbou a nespecifickou vazbou, určovanou v přítomnosti přebytku neoznačeného ligandu. Výsledky byly vyjádřeny jako procento inhibice specifické vazby, získané v přítomnosti sloučenin. IC₅₀ byly určovány užitím koncentrací, sahajících od 3 x 1O’¹⁰ až do ΙΟ’⁵ M, k získání úplných kompetičních křivek a byly vypočítány nelineární regresní analýzou. Výsledky jsou znázorněny v tabulce 3 a 4 níže.

TABULKA 3

Hodnoty IC₅₀ (nM) pro vazbu na receptorech 5-HT₃ a 5-HT₄

Sloučenina	5HT₃	5HT₄	Poměr 5HT₃/5HT₄
Rac-norcisaprid	8.2	686	0.012
(+) norcisaprid	4.5	331	0.014
(-) norcisaprid	30.4	1350	0.023

TABULKA 4

Hodnoty IC₅₀ (nM) pro vazbu na receptorech 5-HT₃ a 5-HT₄

Sloučenina	5HT₃	5HT₄	Poměr 5HT₃/5HT₄
Rac-cisaprid	365	169	2.2
(+) cisaprid	310	340	0.9
(-) norcisaprid	2790	199	14.0

• ♦ · ·· • · · ·

Aktivita agonistů 5-HT₄ receptorů, může být také stanovena užitím zkoušky, založené na schopnosti aktivních sloučenin zvyšovat tvorbu cyklického AMP u neuronů myších embryí, vyrostlých v tkáňové kultuře (viz: Dumuis a spol., N.S. Arch. Pharmacol. 340:403-410, 1989).

5.5. Přiklad 5

Stanoveni kardiovaskulárních účinků

Použijí se bdělé krysy s normálním tlakem nebo spontánní hypertensí. Krevní tlak se zaznamenává nepřímo v teplotně řízeném prostředí před pokusem a po 1, 2 a 4 hodinách. Zkoumaná látka se podá vhodným způsobem. Zkoumané látky jsou racemický ( + ) a (-) cisaprid a racemický ( + ) a (-) norcisaprid. Jako významné se zhodnotí změny systolického tlaku více než 10% (>10) v některém ze dvou dříve zmíněných třech postupných časových bodech. Zkoumá se také tachykardie. U stejných krys s normálním lakem nebo se spontánní hypertensí, se zaznamená, bezprostředně po záznamu krevního tlaku, srdeční frekvence kardiografem. Zvýšení srdeční frekvence vyšší než 20% (>20) než kontrolní údaj před léčbou, se zhodnotí jako významné.

Podobné studie mohou být provedeny s použitím morčat nebo selat.

5.6. Přiklad 6

Účinky centrálního nervového systému

Účinky racemických nebo opticky čistých enantiomerů norcisapridu a cisapridu na paměť, mohou být zkoušeny užitím způsobu, popsaného Forster a spol., Drug Development Research, 11:97-106 (1987). V tomto postupu se farmakologické účinky léků

-32♦ · ·· ·· « • · · ♦ · ♦♦ • · * · · · ·· • ♦ ··· · · · ···· • · · · ·· ·· ·· φ·« ·· •· •· • ·· •· »· na paměť testují u myší užitím „únikové zkoušky. Skupiny myší se označí podle podání nosného prostředí nebo léčebné látky a každá myš se trénuje ke vstupu do správné větve T bludiště pro únik před 0.8 mA elektrickou ránou, přiváděnou ze dna klece do tlapy. Myším se podávají dávky nosného prostředí nebo testované sloučeniny během sledovaného období.

Myši jsou nejprve podrobeny preferenční zkoušce, při které vstup do každého ramene bude mít za následek ukončení elektrického šoku, ale myši se trénují pro únik před elektrickou ranou opačným ramenem ve všech následujících pokusech. Myši se trénují („minimální trénink) až se dosáhne dvakrát po sobě správné volby ramene (kriterium poznání) .

Po týdnu trénování se všechny myši testují pro retenci rozeznávání. Míra retence je počet správných voleb v procentech, t j . takových, při kterých myš vstoupí do toho ramene bludiště, ve kterém nedostane šok do tlapy. Retence rozeznávání se srovnává pro skupiny myší, které dostaly dávku s ( + ) norcisapridem, (-) norcisapridem, racemickým norcisapridem, (+) cisapridem, (-) cisapridem, racemickým cisapridem nebo nosným prostředím.

Účinky racemických a opticky čistých enantiomerů norcisapridu nebo cisapridu na spánek mohou být testovány užitím elektroencefalografické analýzy. Skupiny krys nebo psů se připraví implantací mozkových elektrod při celkové anestézii pro elektroencefalografické záznamy a poté se tyto elektrody, po vymizení účinků anestézie, připojí k elektroencefalografickému záznamovému přístroji. Záznamy se zhotovují plynule a jsou užity ke klasifikaci spánkového stavu zvířat. Spánkové stavy jsou klasifikovány buď jako „bdění, „pomalé spánkové vlny nebo „REM spánek. Procentuální zastoupení každého spánkového stavu , následujícího po podání placeba, isomerů nebo racemátu norcisapridu nebo isomerů nebo • * ····

-33racemátu cisapridu , se srovnává k vyhodnoceni účinku zkoumaných látek na regulaci spánku.

Blokáda podmíněné únikové odpovědi (CAR) může být užita k demonstraci schopnosti recemického a opticky čistého norcisapridu nebo cisapridu k léčení symptomů schizofrenie. Testovací postup používá krysy, které se trénují k úniku před elektrickou ranou do tlapy, stlačením páky na začátku testovacího období. Začátek testovacího období se signalizuje neškodným stimulem (světlem nebo bzučákem). Zvířata, která se při tomto postupu plně trénují, se budou vyhýbat elektrické ráně do tlapy ve více než 90% sledované doby. Sloučeniny, které jsou účinná antipsychotika, budou tuto podmíněnou únikovou odpověď blokovat. Tedy (-) , ( + ) a racemický norcisaprid a cisaprid se testují podáváním stanovených dávek testovaných a referenčních sloučenin trénovaným krysám a poté se zjišťují jejich relativní účinky na podmíněný únik.

Racemický a opticky čistý cisaprid a norcisaprid se testují pro antidepresivní účinnost užitím testu s myší pověšenou za ocas ( Steru a spol., Psychopharmacology 85:367370, 1985) . Stanovená dávka (-) , ( + ) nebo racemického norcisapridu nebo (-) , ( + ) nebo racemického cisapridu nebo referenční účinné látky se podá myši a tato myš se zavěsí ve výšce kolem 15 cm nad stolem na háček, který se napojí na ocas. Pohyby zvířete se zaznamenávají na polygraf. Myši se typicky zmítají několik minut a poté se pokusy o pohyb mísí s obdobími imobility („behaviorální beznaděj). Snížení celkového trvání imobility během standardního zkušebního období ukazuje potenciální antidepresivní účinek testované sloučeniny.

Racemický a opticky čistý norcisaprid a cisaprid se testují pro účinky na poruchy z užívání psychoaktivních látek podáváním testované nebo referenční sloučeniny laboratorním zvířatům, například, krysám, které se trénují do stlačení páky • ·

-34v očekáváni příjmu jedné z různých psychoaktivních látek („zvíře si samo podá lék). Jednotlivá zvířata, použitá v této studii, se sledují pro samo-podávání kokainu, alkoholu a morfinu. Fixované poměry a progresivní poměry se užijí pro nastavení počtu stlačení páky, které je požadováno pro zvíře k přijetí látky. (-), (+) a racemický norcisaprid nebo cisaprid se podávají ve stanovených dávkách před standardním obdobím, kdy si zvíře samo podává lék. Snížení množství samo-podávání nebo redukce počtu stlačení páky/odměna udává, že testovaná sloučenina má použití v léčbě poruch z užívání psychoaktivních látek.

5.7 Příklad 7

Orální prostředek

Tablety

Složení	Množství na tabletu v mg
	A	B	C
Aktivní složka (+) norcisaprid	5.0	10.0	25.0
Laktosa BP	62.0	57.0	42.0
Škrob BP	20.0	20.0	20.0
Mikrokrystalická celulosa	10.0	10.0	10.0
Hydrogenovaný rostlinný olej	1.5	1.5	1.5
Pólyvinylpyrrolidon	1.5	1.5	1.5
Hmotnost po slisování	100.0	100.0	100.0

··	• ·	• ·	•	99	9
• 9		•	9		9 9	9 *
• ·	• ·	•	9	• ·	9 9	•
•	•	#♦· ·	• 9	9999	9 9 9	•
•	•	•	9 9	9	9 9	•
♦ ♦	• 9	9 9	9	99	··♦

Aktivni složka (+) norcisaprid se proseje skrz vhodné síto a smíchá s laktosou, až se vytvoří homogenní směs. Přidají se přiměřené objemy vody a prášky se granulují. Po sušení se přidají granula a smíchají se zbývajícími pomocnými látkami. Výsledná granula se stlačí do tablet požadovaných tvarů. Mohou být připraveny tablety s jiným obsahem účinné látky, změnou poměru aktivní složky k pomocné látce (látkám) nebo hmotností po slisování.

Odborníků bude zřejmé, že jsou možné různé modifikace a varianty v jednotlivých provedeních předkládaného vynálezu. Rozumí se, že takovéto modifikace jsou bez odchýlení se od cíle a podstaty vynálezu, definovaného v nárocích.

Claims

1. Použiti účinného množství (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, zejména prosté (-) stereoisomerů pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení nebo prevenci poruch, způsobených disfunkcí gastrointestinálni motility.

2. Použití účinného množství (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, zejména prosté (-) stereoisomerů pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení nebo prevenci gastroesofageálního refluxu.

3. Použití účinného množství (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, zejména prosté (-) stereoisomerů pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení nebo prevenci dispepsie.

4. Použití účinného množství (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, zejména prosté (-) stereoisomerů pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení nebo prevenci gastroparézy.

5. Použití účinného množství (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, zejména prosté (-) stereoisomerů pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení nebo prevenci zácpy.

6. Použití účinného množství (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, zejména prosté (-) stereoisomerů pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení nebo prevenci intestinální pseudoobstrukce.

♦ ··

7. Použiti podle nároku 1, při němž se ( + ) norcisaprid podává perorálně.

8. Použiti podle nároku 7, při němž se ( + ) norcisaprid podává ve formě tablety.

9. Použiti podle nároku 1, při němž se ( + ) norcisaprid podává parenterálně.

10. Použití podle nároku 1, při němž se podává 0,5 až 500 mg (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli denně.

11. Použití podle nároku 10, při němž se podává 1 až 250 mg (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli denně.

12. Použití podle nároku 11, při němž se podává 5 až 100 mg (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli denně.

13. Použití podle nároku 10, při němž se uvedené množství (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli podává rozděleně ve formě jednotlivých dávek 1 až 4krát denně.

14. Použití podle nároku 1, při němž množství (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli tvoří alespoň 90 % hmotnostních celkového hmotnostního množství norcisapridu.

15. Použití účinného množství (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, v podstatě prosté (-)

·· ·· • ♦ · · • · ♦ · • · ··· · * ·· ·· 4 • · · · · · · · • · · · · · • · · · · · * 38 • · · ·· ·· • · · · · ··· ·· ·· • 4··

stereoisomeru pro výrobu farmaceutického prostředku pro vyvolání prokinetického účinku k léčeni gastroesofageálního refluxu.

16. Použití podle nároku 15, při němž se (+) norcisaprid podává parenterálně nebo perorálně ve formě tablety, kapsle nebo kapalné suspenze.

17. Použití podle nároku 15, při němž se podává 0,5 mg až 500 mg (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli denně.

18. Použití podle nároku 17, při němž se podává 1 mg až 250 mg (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli denně.

19. Použití podle nároku 18, při němž se podává 5 mg až 100 mg (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli denně.

20. Použití podle nároku 17, při němž se uvedené množství (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli podává rozděleně ve formě jednotlivých dávek 1 až 4krát denně.

21. Použití podle nároku 15, při němž uvedené množství (+) norcisapridu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli tvoří alespoň 90 % hmotnostních celkového hmotnostního množství norcisapridu.

22. Použití podle nároku 15, při němž se (+) norcisaprid nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl, v podstatě prostá

ΜΗ·· (-) stereoisomeru podává spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem.

23. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ící se t i m, že jako svou účinnou složku obsahuje (+) norcisaprid nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl, v podstatě prostou (-) stereoisomeru spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem.