CZ20002962A3 - Způsob a meziprodukty, použitelné k přípravě antifolátů - Google Patents

Abstract

Řešení se týká meziproduktů a způsobů, zaměřených na jejich výrobu a na výrobu derivátů pyrimidinu vzorce V z těchto meziproduktů, přičemž tyto deriváty jsou meziprodukty pro > přípravu použitelných antifolátových sloučenin nebojsou sami použitelné antifolátové sloučeniny.

Description

Způsoby a meziprodukty, použitelné k přípravě antifolátů

Oblast techniky

Vynález se týká syntetické organické chemie. Konkrétně se vynález týká způsobů přípravy meziproduktů, použitelných při syntézách cenných antifolátových sloučenin.

Dosavadní stav techniky

Sloučeniny, známé antifolátovou aktivitou jsou dobře známy jako chemoterapeutika k léčení rakoviny. Řada derivátů N-(6-amino-(pyrrolo(2,3-d)pyrimidin-3-ylacyl)glutamové kyseliny vzorce V:

kde:

Yje CH=CH, O nebo S;

R³ je vodík, chlor nebo fluor;

R⁴ je hydroxyskupina, skupina chránící karboxyskupinu nebo skupina NHCH*(C(O)R⁵)CH₂CH₂C(O)R⁵,

R⁵ je vodík nebo skupina chránící karboxyskupinu; R⁶ je vodík nebo skupina chránící aminoskupinu;

R⁷ je hydroxy nebo amino; a konfigurace na dusíkovém atomu, označeném * je S;

ajejich farmaceutické soli, byla popsána jako antifoláty nebo meziprodukty pro antifoláty v US patentech 4 684 653 a 4 882 334, které jsou v dalším textu označovány zkratkami jejich posledních trojčíslí, t.j. 653' a 334'.

Klíčovým krokem při syntéze sloučenin vzorce V, který je uveřejněn v patentech US '334 a '653, je hydrogenace sloučenin vzorce VI:

kde

Zi a Z₂ jsou oba vodík nebo společně tvoří vazbu; R⁴' je skupina chránící karboxyskupinu nebo

NHC*H(C(O)R^5,)CH₂CH₂C(O)R⁵';

R⁵' je skupina chránící karboxyskupinu; a R⁶' je skupina chránící aminoskupinu;

při které vzniká izomerní směs sloučenin vzorce V(a)

V(a)

- 3 Výsledná sloučenina vzorce V(a) může popřípadě mít chránící sloučeninu odstraněnou, takže vzniká isomerní směs sloučenin vzorce V. V US patentech '334 a '653 se dále uvádí, že jednotlivé diastereomery vzorce V se mohou oddělit fyzikálně chromatografii nebo se mohou s výhodou diastereomery od sebe oddělit převedením na diastereomerní soli s chirálními kyselinami, jako je kyselina kafrsulfonová, a následnou selektivní krystalizací jednoho z diastereomerů.

V US '334 a '653 se uvádí, že sloučeniny vzorce VI se mohou získat za prvé kopulací sloučeniny vzorce VII se sloučeninou vzorce VIII;

kde X je bróm nebo jód; v přítomnosti katalyzátoru o složení palladium/trisubstituovaný fosfin, typu, který popsal Sakamoto v Synthesis, 1983, str. 312 a dále.

Syntéza uvedená shora je v mnoha směrech dostačující. V průmyslovém měřítku je použití katalyzátoru na bázi vzácného kovu drahé, doprovází jej nutné čištění a environmentální potíže a může dojít k chybám vznledem ke změnám v poměru množství vzácného kovu, které je ve správném oxidačním stavu ku komplexní formě katalyzátoru. Dále, jestliže se počítá s výhodnou krystalizační separační procedurou, které byla shora popsána, jako s následujícím stupněm, tak po izolaci diastereomerů filtrací obsahuje filtrát směs dvou diastereomerů. Tento filtrát většinou nelze podrobit další separaci krystalizecí, a proto separační účinnost je nedostatečná bez nutnosti použít následně nepříjemný chromátografický separační stupeň. V některých případech, » » · • · · • · ·

- 4 např. když Y je S, R³ je vodík, R⁴ je NHC*H(C(O)R⁵)CH₂CH₂C(O)R⁵, a R⁷ je hydroxyskupina lze zjistit ve frakcích filtrátu až 80% požadovaného izomeru (toho, který má vyšší antifolátovou aktivitu).

Zlepšení oproti známému stavu techniky, který přináší tento vynález, není spjato s použitím katalyzátoru na bázi vzácného kovu pro produkci sloučeniny vzorce VI a umožňuje přesto zvýšit absolutní výtěžky požadovaného diastereomerů vzorce VI ze směsí, obsahujících oba diastereomery, při použití by krystalizační separace.

Podstata vvnálezu
Vynález se týká sloučeniny vzorce III:	Wr2
co2r d	R3	0
NC		V
kde: Y je CH=CH, 0 nebo S; R je Ci-Cé alkyl;	(III)
R1 a R2 jsou nezávisle	Ci-Cň alkyl	nebo společně s dusíkovým

atomem, ke kterému jsou vázány, tvoří heterocyklus;

R³ je vodík, chlor nebo fluor;

φ φ Φ· φ ·

- 5 ♦ · φ Φ Φ· • · φ · • · φ · • φ · « · • · · φ • · * φ · ·

R⁴ je hydroxyskupina, skupina chránící karboxyskupinu nebo NHC*H(C(O)R⁵)CH₂CH2C(O)R⁵ kde konfigurace na uhlíkovém atomu označeném * je S; a

R⁵ je vodík nebo skupina chránící karboxyskupinu; nebo sůl nebo solváte kterékoliv této sloučeniny.

Vynález se také týká sloučeniny vzorce IV.

kde:

R⁶ je vodík nebo skupina chránící aminoskupinu; a

R⁷ je hydroxy nebo amino;

nebo soli nebo solvátu kterékoliv této sloučeniny.

Dále se vynález týká způsobu přípravy sloučeniny vzorce IV:

• ·

(IV) který zahrnuje reakci sloučeniny vzorce III(a):

( III(a) ) kde:

R⁴' je skupina chránící karboxyskupinu nebo NHC*H(C(O)R⁵')CH2CH2C(O)R⁵' kde konfigurace na uhlíkovém atomu označeném * je S; a

R⁵' je skupina chránící karboxyskupinu;

s 2,4-diamino-6-hydroxypyrimidinem za přítomnosti vhodné kyseliny a rozpouštědla.

Dále se vynález také týká způsobu přípravy sloučeniny vzorce IV nebo její soli nebo jejího solvátu, který zahrnuje reakci sloučeniny vzorce V(b):

H

A A

A A ·

A A A

A A A

A A A nebo soli nebo solvátu kterékoliv této sloučeniny, s oxidačním činidlem za přítomnosti vhodného rozpouštědla.

Sloučeniny

V obecném vzorci, který se používá pro charakterizaci tohoto vynálezu v tomto dokumentu, mají obecně známé chemické termíny stejný význam, v jakém jsou v oboru používány. Například termín C1-C4 alkyl znamená to methyl, ethyl, propyl, isopropyl, cyklopropyl, n-butyl, s-butyl, t-butyl a cyklobutyl. Termín Ci-Có alkyl zahrnuje ty zbytky, které byly vyjmenovány pro C1-C4 alkyl a mohou to navíc být alifatické, lineární, rozvětvené nebo cyklické jednovazné skupiny, které mají pět nebo šest dusíkových atomů a patří mezi ně, mimo jiné, pentyl, cyklopentyl, hexyl, cyklohexyl, 2-methylpentyl, a podobně, term C1-C4 alkoxy znamená C1-C4 alkyl skupinu připojenou přes kyslíkový atom.

Termín halogen nebo halogenid znamená to chlor, brom nebo jod.

Termín heterocyklus znamená 5ti nebo 6tí členný, částečně nenasycený nebo aromatický heterocyklický kruh, který obsahuje dusíkový atom a může popřípadě obsahovat další heteroatom, vybraný z N, S nebo O.

Termín skupina chránící karboxyskupinu znamená substituent karbonylu, který je v oboru používán pro blokování nebo ochranu karboxylové funkční skupiny, jestliže reakce, které jsou prováděny na dalších funkčních skupinách dané sloučeniny, by mohly karboxyskupinu pozměnit. Tento substituent může spolu s karbonyl, ke kterému je připojen, například tvořit ester. Může to být například Ci-Cň alkyl, substituovaný Ci-Có alkyl, C2-C6 alkenyl, substituovaný C2-C6 alkenyl, benzyl, substituovaný benzyl, benzhydryl, substituovaný benzhydryl, trityl, substituovaný trityl a trialkylsilylester. Konkrétní typ skupiny chránící karboxyskupinu není kritický, neboť funkčně

- 8 φ φ φ <

♦ » φφ ί · · « φ · navázaná karboxylová skupina je stabilnější vůči podmínkám následujících reakcí než samotná karboxylová skupina) a může být odstraněna v libovolné fázi syntézy bez roztržení zbytku molekuly. Pokud R⁴ obsahuje skupinu chránící karboxyskupinu, tak chránící skupina je výhodně C1-C4 alkoxy nebo benzyloxy. Nejvýhodnějšími chránícími skupinami jsou methoxy, ethoxy a benzyloxyskupina. Mezi skupiny chránící karboxyskupinu odstranitelné katalytickou hydrogenací patří například benzylové chránící skupiny. Další příklady těchto chránících skupin jsou popsány v T.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, N.Y., (2nd ed., 1991), (zde se zkracuje odkaz na Greene) kapitola 5.

Termín C2-C6 alkenyl znamená mono-nenasycený, jednovazný, uhlovodíkový zbytek, obsahující od 2 do 6 uhlíkových atomů, které mohou mít řetězce ve větvené nebo lineární konfiguraci. Příkladem skupin, které vyhovují, tomuto termínu, jsou, mimo jiné, ethylenyl, propylenyl, allyl, butylenyl, a pentylenyl.

Termíny substituovaný Ci-Ce alkyl a substituovaný C₂-C₆ alkenyl znamenají Ci-Cď alkyl a C2-C6 alkenylskupinu, která je substituovaná 1 až 3 krát nezávisle halogenem, fenylem, tri(Ci-C₄ alkyl)silylem nebo substituovanou fenylsulfonylskupinou.

Termíny substituovaný benzyl, substituovaný benzhydryl, a substituovaný trityl znamená benzyl, benzhydryl a trityl skupinu, která je substituovaná 1 až 5 krát nezávisle nitro, C1-C4 alkoxy, Ci-Cé alkyl nebo hydroxy(Ci-Có alkyl) skupinou. Tyto substituce jsou míněny jen ve stericky schůdném uspořádání, takže skupina je chemicky stabilní.

Termín trialkylsilyl znamená jednovaznou silylovou skupina substituovaný 3 krát nezávisle Cj-Có alkylovou skupinou. Termín substituovaný fenylsulfonyl znamená fenylsulfonyl skupinu, kde fenylová skupina je v para poloze substituována Ci-Cg alkylem, nitro nebo halogen skupinou.

0

- 9 • ·

0 0 0 ♦ ·0 ·

0 0 0

0 0 ·

0 0 0

0 0 0

Termín skupina chránící aminoskupinu, jak je používán zde v popisu, znamená substituent aminoskupiny, obecně používaný k blokování nebo chránění aminové funkční skupiny, zatímco reagují jiné funkční skupiny na sloučenině. Skupina chránící aminoskupinu, uvažováno dohromady s aminoskupinou, ke které je vázána, může tvořit imid, např. ftalimido a tetrachlorftalimido skupina; karbamát, například, methyl, ethyl, a 9-fluorenylmethylkarbamát nebo amid, např. N-formyl a N-acetylamid. Přesný druh a typ skupiny chránící aminoskupinu, který se použije, není kritický, neboť funkčně navázaná aminoskupina je stabilnější vůči podmínkám následujících reakcí než samotná aminoskupina) na jiných místech molekuly meziproduktu a může být selektivně odstraněna v jakékoliv fázi syntézy bez roztržení zbytku molekuly ani žádné jiné skupiny chránící aminoskupinu nebo více aminoskupin. Obecně vzato, skupiny chránící aminoskupiny, odstranitelné kyselou hydrolýzou, t.j., ty z nich, které jsou labilní v kyselém prostředí, jsou výhodnější. Tak například, výhodnou skupinou, chránící aminoskupinu, je 2,2-dimethyl-l-oxopropyl. Další příklady skupin a metod, které označují shora uvedené termíny popsán v Greeneovi, v kapitole 2.

Termín farmaceutická sůl a sůl, jak je zde užívánm, znamená soli, připravené reakcí sloučenin podle vynálezu s minerální nebo organickou kyselinou (například chlorovodíkovou, bromovodíkovou, jodovodíkovou nebo p-toluensulfonovou kyselinou) nebo anorganickou zásadou (například hydroxidem, uhličitanem nebo hydrogenuhličitanem sodným, draselným, lithným, a hořečnatým). Takové soli jsou známy jako adiční soli s kyselinami nebo se zásadami. Další příklady solí viz, například, Berge, S.M, Bighley, L.D., a Monkhouse, D.C., J. Pharm. Sci., 66, 1, 1977.

Termín solvát znamená shluk, který zahrnuje jedno nebo více molekul rozpouštědla, jako například sloučenina vzorce III nebo IV, s jednou nebo více molekulami rozpouštědla.

·· ·· > * # 9

I · · «

- 10 Reakční činidla

Termín vhodné rozpouštědlo znamená jakékoliv rozpouštědlo nebo směs rozpouštědel, které jsou inertní vůči prováděné reakci, a které dostatečně rozpouštějí reakční činidla a vytvářejí prostředí, ve kterém se může požadovaná reakce provádět.

Termín vhodná kyselina znamená jakoukoliv kyselinu, jejíž K_a je dostatečně nízká, aby ovlivnila danou reakci bez signifikantní podpory nežádoucích reakcí.

Termín oxidační činidlo znamená činidlo, jehož oxidační potenciál je dostatečně vysoký, aby ovlivnilo žádoucí reakci bez signifikantní podpory nežádoucích reakcí. Mezi vhodná oxidační činidla patří kovy jako je nikl, palladium, platina a podobně; kovy na pevných nosičích jako například palladium nebo platina na uhlíku a podobně; kovové komplexy jako je oxid rtuťnatý a manganatý nebo octan měďnatý a oxidační činidla na bázi benzochinonu jako je

2,3-dichlor-5,6-dikyano-l,4-benzochinon (DDQ) a tetrachlor-l,4-benzochinon (chloranil), a podobně.

Termín termodynamická báze znamená bázi, která poskytuje reverzibilní deprotonaci kyselého substrátu nebo funguje jako protonová past pro ty protony, které jsou vedlejšími produkty dané reakce a je dost reaktivní, aby se sjejí pomocí dosáhlo žádoucí reakce bez signifikantní podpory nežádoucích reakcí. Příklady termodynamických bází jsou, mimo jiné, octany, octan dehydráty, uhličitany, hydrogenuhličitany, C1-C4 alkoxidy a hydroxidy (například octan, octan dehydrát, uhličitan, hydrogenuhličitan, C1-C4 alkxoxid nebo hydroxid lithný, sodný nebo draselný), tri(Ci-C4 alkyl)aminy nebo aromatické heterocykly obsahující dusík (například imidazol a pyridin).

4

- 11 • 4 4 4

9 4 9

4 4 4 4 • · · · ·* »φ

Syntézy

Sloučeniny vzorce III se dají připravit ze sloučeniny vzorce I a II, jak je ilustrováno na následujícím schématu 1, kde Lg je chlor, brom, jod, OSO₂Me, OSO₂-fenyl nebo OSO₂-p-tolyl a R, R¹, R², R³, R⁴, R⁴' a Y mají význam uvedený shora.

III

Sloučeniny vzorce I se mohou přidat ke sloučeninám vzorce II, rozpustit nebo rozmíchat ve vhodném rozpouštědle za přítomnosti termodyanamické báze, čím vzniknou sloučeniny vzorce III(a). Výhodné a za/edené rozpouštědlo je dichlormethan. Výhodnou a zavedenou zásadou je triethylamin. Obvykle se používá poměru jednoho ekvivalentu báze a sloučenina vzorce I ku sloučenině vzorce II, ale mírné přebytky v řádu 0,01 až 0,1 ekvivalentů jsou tolerovatelné. Reakce může být prováděna při teplotách mezi -78°C až teplotou okolí, ale je výhodné, když se provádí při teplotě -25°C až -20°C. Reakce je obvykle ukončena za 30 minut až 18 hodin, ale pokud se provádí za výhodné teploty, ukončí se asi za 1 až 3 hodiny. Výhodným halogenidem ve sloučenině vzorce I je chlorid. R je výhodně C1-C4 alkyl, zejména methyl nebo ethyl. R¹ a R² jsou výhodně C1-C4 alkyl, ale je zejména

- 12 9

9

9 99

9 9

99 • ♦ * • * 9 9 • 9 « « ♦ ♦ ·« • ♦ · * • · · * * · * 9 • 9 9 9 ·» 99 výhodné, pokud jsou oba buď methyl nebo ethyl. Je výhodné, když R⁴' je skupina chránící karboxyskupinu, přičemž touto chránící skupinou je C2-C4 alkoxyskupina, zejména methoxy nebo ethoxy skupina nebo taková skupina, která je odstranitelná katalytickou hydrogenací, například benzyloxyskupina (jak je znázorněno na následujícím schématu). V celém popisu platí, že R³ je výhodně vodík a Y je výhodně CH=CH nebo S.

Ačkoliv výsledná sloučenina vzorce III(a) může mít skupinu chránící karboxyskupinu odstraněnou, jak uvádí Greene, pro účely provádění celého procesu, který je znázorněn na schématech 1 až 3 se chránící skupina na karboxyskupině ponechává při provádění reakce nebo reakcí, uvedených na schématu 2, nedotčena.

Sloučeniny vzorce IV se dají připravit ze sloučenin vzorce III(a) novým procesem, který ilustruje dále uvedené schéma 2, kde R, R¹, R², R³, R⁴, R⁴', R⁶, R⁷ a Y mají význam uvedený shora.

Schéma 2

IV ♦ « · • · · • · · • · ·

- 13 Tautomerní směs 2,4-diamino-6-hydroxypyrimidinu nebo 2,4diaminopyrimidin-6-onu (zde označovaná jako 2,4diamino-6-hydroxypyrimidin), se může přidávat ke sloučenině vzorce III(a), rozpuštěné nebo rozmíchané ve vhodném rozpouštědle, za přítomnosti vhodné kyseliny, čímž vzniknou sloučeniny vzorce IV(a). Obvyklé a výhodné rozpouštědlo je přibližně 1:1 (obj:obj) směs acetonitrilu a vody. Poměr acetonitrilu ku vodě není kritický, ale je výhodné, když je upraven tak, aby tvořil roztok při počátečním smísení všech reakčních složek. Známou a výhodnou kyselinou je kyselina octová. Kyselina se nejčastěji používá v molárním přebytku. Tak například se používá obecně asi 2 až asi 4 ekvivalentů na jeden ekvivalent sloučeniny vzorce III(a), přičemž 3 ekvivalenty jsou výhodné. Počet ekvivalentů 2,4-diamino-6-hydróxypyrimidinu, použitý v poměru ke sloučenině vzorce III(a) není kritický, ale asi 1 až asi 2 ekvivalenty jsou výhodné. Dokonce ještě výhodnější množství je asi 1 až asi 1,5 a úplně nej výhodnější asi 1 až asi 1,1 ekvivalentů. Reakce se může provádět při tepotách v rozmezí od pokojové teploty do teploty refluxu směsi, ale je výhodné, když se provádí při teplotě refluxu směsi. Dále, reakce může trvat 12 až asi 48 hodin, v závislosti na reakční teplotě. Pokud se reakce provádí při teplotě refluxu směsi, je obyčejně ukončena po asi 18 hodinách. R je výhodně Ci-C₄ alkyl, zejména methyl nebo ethyl. R¹ a R² jsou výhodně C1-C4 alkyl, ale je zejména výhodné, když oba jsou buď methyl nebo ethyl. R³ je výhodně vodík. Jak bylo uvedeno v předešlém textu, je výhodné, pokud R⁴' je skupina chránící karboxyskupinu, když touto chránící skupinou je C1-C4 alkoxyskupina, zejména methoxy nebo ethoxy skupina nebo jiná skupina, která je odštěpitelná katalytickou hydrogenací (jak je znázorněno na schématu 3).

Sloučeniny vzorce IV, kde R⁷ je aminoskupina, se mohou připravovat ze sloučenin vzorce IV(a), jak se uvádí v předchozím textu a v odkazech, včetně US patentu 4,882,334, ale je výhodné, když R⁷ je hydroxyskupina.

Sloučeniny vzorce IV, ve kterých R⁶ je skupina chránící aminoskupinu, se dají připravovat ze sloučenin vzorce IV(a), jak uvádí Greene • φ φφ » · ♦ ♦ • φφφ » φ φ φ

Β Φ Φ φ

Φ 9 Φ ·

- 14 • φ φφ » ♦ φ » » φφφ • · · φ ► · φ · ♦ Φ *φ nebo jak se diskutuje v dále uvedené přípravě 8. Kromě toho je nutné, aby skupina chránící aminoskupinu, výhodně odstranitelná kyselou hydrolýzou, jak je znázorněno na dále uvedeném schématu 5, například 2,2-dimethyl-l-oxopropyl, byla přítomna na R⁶ nebo aby byla tato amino skupina před hydrogenací protonována, jak je znázorněno na níže uvedeném schématu 3. Kromě toho, ačxoliv sloučeniny vzorce IV(a) mohou mít skupina chránící karboxyskupiny odstraněny, jak uvádí Greene, pro účely provádění celého procesu, jak je naznačen na schématech 2 až 3, je výhodné, když skupina chránící karboxyskupinu se ponechá nedotčena do reakce na schématu 3.

Izomerní směs sloučenin vzorce V(b) se může připravit ze sloučeniny vzorce IV(b), jak je znázorněno na dále uvedeném schématu 3, kde R³, R⁴, R⁶', R⁷ a Y mají význam uvedený shora.

Schéma 3

V(b)(R)

Směs 1:1

V(b) (S)

- 15 Sloučeniny vzorce IV(b), připravené podle schematů 1 a 2, lze hydrogenovat v podstatě podle US patentů 4 684 653 a 4 882 334 jejichž obsah se tímto odkazem zahrnuje do popisu. Jako pomocné křížové odkazy se uvádí, že sloučeniny vzorce IV(b) v tomto vynálezu korespondují se sloučeninami vzorce III v US '653 a sloučeninami vzorce II v US '334. Je výhodné, když skupina chránící aminoskupinu na R⁶' není odstraněna, jak uvádí Greene, ale ponechá se stále na sloučenině do separačních procedur, které jsou diskutovaných ve schématech 4 a 5, které jsou uvedeny dále.

Pokud se postup, znázorněný na schématu 3, provádí se sloučeninami vzorce IV(b) výhodnou skupinou na R⁴, t.j., skupinou chránící karboxyskupinu, a skupina chránící karboxyskupinu je odstranitelná katalytickou hydrogenací, tak se chránící skupina odstraňuje hydrogenací za podmínek reakce ze schématu 3. Toto odstranění, kterým vznikají sloučeniny vzorce V(b), kde R⁴ je hydroxyskupina, napomáhá zavedení skupiny R⁴, která se nachází ve finálních antifolátových produktech, t.j. chirálních glutamových kyselinách, diskutovaných níže.

Sloučeniny vzorce V, které vykazují antifolátovou aktivitu, jsou takové, ve kterých R⁴ je NHC*H(C(O)R⁵)CH2CH2C(O)R⁵) a R⁶ je vodík (dále též finální produkty), a proto jsou takové sloučeniny výhodné. Ačkoliv glutamátová strana řetězce může být zavedena v jakékoliv fázi procesu podle tohoto vynálezu, je při provádění procesu podle schémat 1, 2, 3 když jsou prováděny postupně, s výhodnými skupinami, které jsou zmíněny shora, výhodný okamžik k zavedení glutamátového zbytku je po hydrogenací, znázorněné na schématu 3. Provádí se kopulací sloučeniny vzorce V nebo V(b), kde R⁴ je hydroxy, s derivátem glutamové kyseliny, v němž je chráněna karboxylová skupina, a který má vzorec H2NC*H(C(O)R³')CH₂CH₂C(O)R⁵', způsobem, který je obecně popsán v PCT přihlášce WO 86/05181, s použitím běžných kondenzačních technik, které se používají pro vytváření peptidických va.zeb. Tyto techniky zahrnují aktivaci karboxyskupiny pomoci vytvoření směsného anhydridu nebo chloridu kyseliny, reakce dicyklohexylkarbodiimidem nebo použití

- 16 difenylchlorfosfonátu. Další informace o metodách vytváření amidické vazby viz například publikace Bodanszky, M., Principles of Peptide Synthesis, 2nd Ed., Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, 1993. Je výhodné, když je přítomna glutamátová strana řetězce a když jsou R⁵ skupiny, které se nacházejí na této straně řetězce, obě chráněny karboxyskupinami, například Ci-Có alkoxyskupinami, když se provádějí postupy podle schémat 4 a 5. Veškeré diskuse a struktury, které spadají do schémat 4 a 5 uvedených dále, se týkají situace, kdy výhodné substituenty na R⁴ jsou sice přítomny, ale nejsou nutné pro to, aby byly procesy uvedené na schématech 4 a 5 proveditelné

Finálního produkty sloučenin vzorce V, sloučeniny vzorce V(c)(R), znázorněné dále, jsou výhodné vzhledem k tomu, že mají zvýšenou antifolátovou aktivitu ve srovnání se sloučeninami vzorce V(c)(S). Tyto individuální diastereomerní finální produkty, připravené podle shora uvedeného popisu nebo podle shora uvedeného odkazu na US patenty 4 684 653 a 4 882 334, se mohou oddělit podle údajů v těchto patentech, t.j., chromatografii nebo výhodně rekrystalizací. Tak například, vhodně zvolená chirální kyselina se může použít k vytvoření směsi diastereomerních solí, lépe upravitelné na selektivně rekrystalizovatelnou směs, ze které je jako derivát oddělitelný jeden diastereomer, jak je znázorněno na schématu 4, uvedeném dále, kde R³, R⁵ , R⁶, R⁷ a Y mají význam uvedený shora.

φφ φφ

- 17 • φ φ φ φ • · φ • φ φ • φ φ φφ

Schéma 4

FILTRÁT

Aby se mohla provést separace ze schématu 4 je třeba, aby R⁶ ve sloučeninách vzorce V(c) byl vodík. Pokud se proces ve schématu 4 provádí s výhodnou skupinou na R⁶, t.j., chránící skupinou, odstranitelnou kyselou hydrolýzou jako je 2,2-dimetyl-l-oxopropyl, pak se tato chránící skupina odstraní přidáním chirální kyseliny a separačním stupeň pro její odstranění není nutný. Tudíž sloučeniny vzorce V(c), kde R⁶ je vodík, nemusejí být nutně připravovány

- 18 • * ·♦ • * · « • · ♦ · • · · · • · · · ·· ·♦ • » • · · • · · • · · • · · ♦ · *· připravovány v separačním stupni před provedením rozkladu ze schématu 4. Eliminace nutnosti provádět zvláštní stupeň je důvodem, proč jsou výhodné pro chránění aminoskupiny chránící skupiny, labilní v kyselém prostředí.

Prvním stupněm ve schématu 4 je přidání chirální kyseliny ke směsi sloučenin vzorce V(c), rozpuštěné nebo rozmíchané ve vhodném rozpouštědle. Tento přídavek má dvě funkce: 1 - chirální kyselina odstraní chránící skupinu z aminoskupiny na R⁶ a 2 - s chirální kyselinou se vytvoří diastereomerní adiční sůl sloučeniny vzorce V(d). Když Y je CH=CH, výhodnou kyselinou pro tento účel je kyselina (lS)-(+)-kafrosulfonová.

Pokud Y je O nebo S, výhodnou kyselinou je (lR)-(-)-kafrosulfonová kyselina. Výhodné rozpouštědlo pro odstraňování chránící skupiny a tvorbu soli je nižší alkohol, výhodně ethanol.

Když je vytvořena sůl, provádí se separace nebo rekrystalizace ve stupni 2, a to rozmícháním sloučeniny vzorce V(d) ve vhodném rozpouštědle, zahřátím směsi až ke vzniku pravého roztoku, a ponecháním chladnout za účelem vysrážení požadovaného isomeru. Významnými parametry při chirálním dělení v rozpouštědle obecně, a při dělení sloučenin vzorce V(d) konkrétně, jsou: systém rozpouštědel, rychlost míchání a teplota. Výhodné systémy rozpouštědel jsou směsi nižších alkoholů, výhodně ethanolu, s vodou. Poměr ethanolu k vodě, vy^:ádřeno objemově, může být od asi 0,33 až do asi 3 ku 1, ale směs 1:1 je výhodná. Poměr rozpouštědla ku rozpouštěné látce by měl být asi 10 až asi 20 ku 1, ale výhodný poměr je asi 15 ku 1. Rychlost míchání v průběhu krystalizace může mít značný vliv na rozpouštění. Je výhodné, když se vytvoří soli a rozpustí se zahříváním krystalizačního roztoku, a pak vzorky nejsou při krystalizaci míchány. Teplota může také mít vliv na rozpouštění. Následující chlazení na teplotu nižší, než má okolí může zvýšit výtěžek produktu, ale prodražuje náklady na separaci. Je výhodné ponechat krystalizaci, aby proběhla při teplotě mezi asi 20°C a 34°C přičemž teplota okolí (asi 22°C) je nejvýhodněji.

- 19 Aby se předešlo hydrolýze esterů na glutamátovém zbytku za kyselých podmínek ve vodném prostředí při dělení izomerů, je výhodné použít pufr jako je octan sodný. Množství octanu sodného je přibližně ekvivalentní přebytku kyseliny a výhodně se přidává po ukončení solvolýzy skupiny chránící aminoskupinu.

Filtrát získaný ve schématu 4 neobsahuje směs diastereomerních solí vzorce V(d). Tato směs se obohatí diastereomerem vzorce V(d)(S), t.j., kyselou adiční solí V(d)(S), která nekrystaluje. Tato obohacená směs není obvykle použitelná pro další separaci doplněním nějaké složky a krystalizaci. Tudíž velký přebytek isomeru byl dosud nevyužitelný další krystalizaci. Schéma 5, které je uvedeno dále, kde R³, R⁴', R⁶, R⁷ a Y mají význam definovaný shora, ilustruje další novou metodu přípravy sloučenin vzorce IV, která je obohacena o další separaci produktu z této směsi krystalizaci.

• «

Φ· • · «

- 20 ··« ··· • * ·· • φ · · • · ·» φ φ · · • · · · φφ * · • φ φ • · φ φ φ · φ φ · φ ·

Hydrogenace

Směs 1:1 • 0 0 0

0 ·0 *· »0 • · · · • 0 0 0

0 0 0 • 0 0 t • 0 0 0

Pokud se má proces, uvedený na schématu 5, provádět s použitím obsahu filtrátu ze schématu 4 jako zdroje výchozích látek, je výhodné když se nejprve extrahují ze směsi volné báze sloučenin vzorce V(c). To je snadno proveditelné zředěním směsi rozpouštědlem, které není mísitelné s vodou a přidáním vodného roztoku slabé báze k této směsi. Touto slabou bází může být například hydrogenuhličitan sodný. Pro tento účel jsou vhodnými činidly dichlormethan a vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného. Tak například působení dichlormethanu na filtrát (asi 0,33 ml dichlormethanu/g filtrátu) a přidání asi 2 ekvivalentů 1M vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného poskytne při pokojové teplotě po asi 30 minutách dvě čiré, snadno oddělitelné fáze. Organická fáze se odebere a výhodně suší s použitím běžného sušidla nebo činidel před reakcí. Výhodné je v tomto směru jako sušící postup použití po sobě následujícího protřepání se solankou a s 1M roztokem hydrogenuhličitanu sodného.

Když je provedena extrakce, musí se znovu navázat skupina chránící aminoskupinu na R⁶ nebo se tato aminoskupina musí před prováděním procesu, znázorněného na schématu 5, protonovat. Opětné zavedení chránící skupiny je výhodné a může být provedeno tak, jak to popisuje shora citovaný Greene a jak je diskutováno v přípravě 9, uvedené dále. Je výhodné, aby skupina chránící aminoskupinu byla odstranitelná kyselou hydrolýzou, aby tedy touto chránící skupinou byl například 2,2-dimethyl-l-oxopropyl. Výsledné sloučeniny vzorce V(e) se pak separují dále popsaným způsobem.

Jednotlivé samostatné diastereomery nebo směsi sloučenin vzorce V(e) v jakémkoliv poměru se mohou rozpouštět nebo rozmíchat ve vhodném rozpouštědle a přidání oxidačního činidla poskytne sloučeniny vzorce IV(b). Volba rozpouštědla, reakčních teplot, a dosažené doby trvání reakcí závisejí obecně na použitém oxidačním činidle.

Výhodné oxidační činidlo je DDQ. Pokud se jako oxidační činidlo používají DDQ nebo chloranil, jsou vhodné jako prostředí uhlovodíky jako je

- 22 • * • · · · • t · · •99 9 • · · 9 • · ft * pentan, hexan, toluen a podobně; nižší alkoholy jako methanol, ethanol, isopropanol a podobně nebo chlorované uhlovodíky jako je chloroform, dichlormethan a podobně. Chlorované uhlovodíky, zejména dichlormethan, jsou výhodné. Pokud se oxidace provádí za výhodných podmínek výhodnými sloučeninami vzorce V(e), není obecně nutné chromatografícké čištění výsledných sloučenin vzorce IV(b). Viz například v příkladu 6, který je uveden v dalším textu.

Reakce se obvykle provádí při teplotách 0°C až 200°C po dobu asi 30 minut až asi 24 hodin. Reakce se výhodně provádí při teplotách mezi 15°C až 80°C. Dokonce ještě výhodnější je, když se reakce provádí v rozmezí teplot 20^cC až 40°C a nej výhodnější je, když se reakce provádí při pokojové teplotě po dobu asi 20 minut až 1 hodina.

Množství oxidačního činidla se mění v závislosti na tom, které oxidační činidlo se používá, ale obecně se pohybuje od asi 0,1 ekvivalentů až do asi 5 ekvivalentů najeden ekvivalent sloučeniny vzorce V(e). Pokud se používá DDQ, jsou výhodné asi 1,1 až asi 3 ekvivalenty. Výhodnější je použít asi 1,8 až asi 2,2 ekvivalentů a použití asi 1,9 až asi 2,1 ekvivalentů je nejvýhodnější.

Karboxy a/nebo amino chránící skupiny ve sloučeninách vzorce IV(b) se výhodně neodstraňují, jak uvádí Greene. Místo toho se výhodně provádí postup tak, že se redukují sloučeniny vzorce IV(b) zpět na diastereomerní směs sloučenin vzorce V(e) v poměru 50:50, aby se mohla provést separace s použitím chirální kyseliny, jak je znázorněno na schématu 4.

Hydrogenace se může provést rozpuštěním nebo rozmícháním sloučeniny vzorce IV(b) ve vhodném rozpouštědle za přítomnosti hydrohenačního katalyzátoru a vystaveni směsi atmosféře vodíku. Známé a výhodné rozpouštědlo k tomuto účelu je směs tetrahydrofuranu a ethanolu v objemovém poměru asi 4:1, známým a výhodným hydrogenačním katalyzátorem je 5% palladium aa uhlíku. Katalyzátor se obvykle používá v hmotnostním poměru v rozmezí od asi 10 % až ··

0

0 • 0 • 0 «

- 23 00 *<· «

• 00 • 0 •

• t * 4)

Β· · » • · 0 asi 200 % počítáno na hmotnost sloučeniny vzorce IV(b). Výhodně je toto rozmezí od asi 20 % do asi 75 % a nej výhodněji je asi 25 %. Je obvykle výhodné vytvořit atmosféru vodíku, kde tlak vodíku je roven nebo větší něž tlak okolí. Typickým rozmezím je rozmezí, jehož dolní hranici tvoří tlak okolí a horní hranice je asi 100 psi vodíku. Výhodnější je atmosféra vodíku mezi 40 psi a asi 60 psi přičemž 50 psi je nej výhodnější. Reakce se může provádět při teplotách od teploty okolí až do teploty refluxující směsi. Při 50 psi vodíku je výhodná reakční teplota asi 100 °C, při které se reakce obvykle v podstatě ukončí asi do 4 hodin.

Po získání směsi sloučenin vzorce V(e) v poměru 1:1, která se připraví způsobem, který je znázorněn na schématu 5, lze dále doplnit separaci, jak je diskutováno na schématu 4 shora. Tento cyklus se může opakovat tolikrát, kolikrát si praxe vyžádá pro maximalizaci výtěžku diastereomerů vzorce V(d)(R).

2,4-Diamino-6-hydroxypyrimidin, chráněný glutamovými kyselinami vzorce H2NC*H(C(O)R⁵JCH₂CH₂C(O)R⁵' a sloučeniny vzorce I a II jsou v oboru známé a další, které nejsou komerčně dostupné jsou snadno připravitelné zavedenými postupy syntézy. Například viz dále uvedené přípravy 1 - 6.

Optimální doba pro provádění reakcí ze schematů 1-5 může být stanovena monitorováním stupně konverze reakce běžnými chromatografickými technikami. Volba rozpouštědla obecně není kritická, neboť použité rozpouštědlo je vůči prováděné reakci inertní a dostatečně rozpouští reakční složky, aby vzniklo prostředí, ve kterém probíhá potřebná reakce. Pokud není uvedeno jinak, veškeré reakce, které jsou zde popsány jsou výhodně prováděny v inertní atmosféře. Výhodnou inertní atmosférou je dusík.

Následující přípravy a příklady jsou pouze ilustrativní a neomezují žádným způsobem rozsah vynálezu. Termíny a zkratky, použité v příkladech mají běžný význam, pokud není uvedeno jinak. Například

- 24 °C, N, mmol, g, mg , d.e. , ml , M, HPLC MS(FD), MS(HR), IR, a ^ňlHNMR'', znamenají normální nebo normalita, milimol. gram. miligram.

• ·· · · «· « • · · · · * · · ·· ·· ··· · · · • · · · ···· • ·· · * ·· ·· , t.t. , ΈΑ, stupně Celsia, diastereomerní přebytek, mililitr, molární nebo molarita, vysokotlaká kapalinová chromatografie, teplota tání, elementární analýza, plošná desorpční hmotnostní spektrometrie, vysokofrekvenční hmotnostní spektrometrie, infračervená spektroskopie a protonová jaderná magnetická resonanční spektroskopie. Kromě toho, uvedená absorpční maxima u IR spekter jsou pouze ta, která jsou předmětem zájmu a nejde o veškerá maxima, která byla pozorována.

Příprava 1

5-(3-(1,3-dioxolan-2-yl]propyl)-2-thiofen karboxylová kyselina

Do roztoku 64,8 g (640 mmol, 83,9 ml) diisopropylaminu ve 400 ml tetrahydrofuranu, který byl ochlazen na -15°C, bylo přidáno po kapkách 400 ml (640 mmol) 1,6M n-butyllithia v hexanu po dobu 25 minut, reakční teplota byla udržována pod -5°C. Po 15 minutách míchání byl přidán po kapkách roztok 5-methyl-2-thiofenkarboxylové kyseliny (41,4 g, 291 mmol) v 150 ml tetrahydrofuranu v průběhu 30 minut, teplota byla opět udržována pod -5°C. Výsledný tmavě zelený dianionový roztok byl míchán pr teplotě od -15°C do -10°C po 90 minut. Do tohoto roztoku byl po kapkách přidán v průběhu 15 minut 2-(2-bromethyl)-l,3-dioxolan (57,9 g, 320 mmol) a fuchsinově zbarvená směs byla míchána po 3 hodiny při -10°C až -5°C. HPLC analýza (30% acetonitrilu/70% 1% vodného roztoku kyseliny octové, 2 ml/min, 30 cm C-18 kolona, λ= 280 nm) ukázala 9,0 %

5-methyl-2-thiofenkarboxylové kyseliny a 88,5 % titulní sloučeniny.

Reakce byla zalita 600 ml vody a okyselena na pH 3 pomocí 6N vodné kyseliny chlorovodíkové. Žlutá směs byla extrahována třikrát 5 00 ml tbutylmethyletheru a spojené organické extrakty byly vysušeny síranem

- 25 • · 9 · ·· ·· ·· • · ·· · ·· · · ·· · • « · · ·· · · · * • · · · · · ··· · φ · * * · · · Φ ···· • · · · · · « · · · » · · · horečnatým, zfiltrovány a zahuštěny. Surový produkt byl triturován 300 ml heptanu a pevná látka byla zfiltrována, promyta heptanem, a vysušena do sucha na filtru, čímž bylo získáno 58,21 g (82,5 %) titulní sloučeniny, která podle NMR obsahovala méně než 3% výchozích složek.

*H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 1,81 (m, 4H) , 2,91 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 3,92 (m, 4H), 4,90 (t, J = 4,4 Hz, 1H), 6,84 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 3,7 Hz, 1H).

Příprava 2

Methyl-5-(3-[l,3-dioxolan-2-yl]propyl)-2-thiofen karboxylát

Do roztoku 5-(3-[l,3-dioxolan-2-yl]propyl)-2-thiofen karboxylové kyseliny (58,0 g, 239 mmol) ve 300 ml dimethylformamidu byl přidán uhličitan draselný (41,4 g, 299 mmol) a poté methyljodid (51,0 g, 359 mmol). Kal byl míchán při teplotě místnosti po dobu 17 hodin a potom nalit do 600 ml vody. Vzniklá suspenze byla extrahována dvakrát 500 ml tbutylmethyletheru a spojené extrakty byly promyty vodou, vysušeny síranem hořečnatým, zfiltrovány a zahuštěny v rotační odparce, čímž bylo získáno 57,84 g (94,30) titulní sloučeniny v dostatečné čistotě pro použití v přípravě 3.

IR (CHC1₃, cm'¹) 3021, 1707, 1541, 1463, 1296, 1101.

‘HNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 1,75 (m, 4H), 2,84 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 3,81 (s, 3H) , 3,82 (m, 2H) , 3,92 (m, 2H) , 4,84 (t, J = 4,3 Hz, 1H) , 6,76 (d, J = 3,9 Hz, 1H) , 7,58 (d, J = 3,7 Hz, 1H).

- 26 Příprava 3

Methy 1-5-(butan-4-al)-2-thiofen karboxylát

Methyl-5-(3-[l,3-dioxolan-2-yl]propyl)-2-thiofen karboxylát (10,0 g, 39,0 mmol) a 1,0 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové byly rozpuštěny v 120 ml v soustavě 2:1 kyselina octová/voda a vzniklý žlutý roztok byl zahříván olejové lázni při teplotě 60°C po dobu 2 hodiny. Roztok se nechal ochladit na 25°C a byl nalit do 120 ml vody. Po míchání po dobu 15 minut, byla směs extrahována dvakrát 125 ml t-butylmethyletheru. Spojené organické extrakty byly promyty dvakrát vodou a dvakrát nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, poté byly vysušeny síranem hořečnatým, zfiltrovány a zahuštěny, čímž bylo získáno 8,24 g (99,5%) titulní sloučeniny, která byla v dostatečné čistotě pro použití v přípravě 4. *H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 2,01 (m, 2H), 2,50 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,87 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 3,84 (s, 3H), 6,79 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 9,75 (s, 1H)

Příprava 4

Methyl-5-(4-diethylaminobut-3-enyl)-2-thiofen karboxylát

Methyl-5-(butan-4-al)-2-thiofen karboxylát (16,7 g, 78,6 mmol) byl ochlazen na 0°C -5°C za současného míchání a působilo se na něj diethylaminem (11,5 g, 157 mmol) po dobu 5 minut. Chladicí lázeň byla odstraněna a bylo přidáno 27,6 g uhličitanu draselného v jedné dávce. Oranžová směs byla zahřívána při 60°C jednu hodinu a potom se nechala ochladit na 25°C. Reakční směs byla zředěna 50 ml dichlormethanu, zfiltrována přes filtr Hyflo© a dobře pomyta přebytkem dichlormethanu. Filtrát byl zahuštěn na 19,6 g (93,4%) titulní sloučeniny, která byla v

- 27 • · &· · · • · · · e ·· « • ·· · · · · · · • · · · · · · · ·· ·· ·· 99 dostatečné čistotě pro použití v přípravě 5. 'HNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 1,01 (t, J = 7,1 Hz, 6H), 2,28 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,68 (m, 2H), 2,91 (q, J =

7,1 Hz, 4H), 3,89 (s, 3H), 4,12 (m, 1H), 5,84(d, J = 13,9 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,94 (d, J = 8,1 Hz, 2H).

Příprava 5

Sodná sůl methyl hydroxymethylenkyanoacetátu

Kovový sodík (11,8 g, 0,511 mol) byl rozpuštěn v 450 ml methanolu a do tohoto horkého roztoku byl přidán v průběhu dvou minut roztok ethylformiátu (104 g, 1,41 mol) a methylkyanoacetátu (43,8 g, 0,440 mol). Během přidávání se vytvořilo malé množství sraženiny. Reakční směs byla zahřívána pod refluxem a byla tam udržována po dobu 1,5 hodin. Hustá bílá suspenze se nechala ochladit na 20°C -25°C a sraženina byla zfiltrována, promyta diethyletherem, a vysušena ve vakuu při 45°C, čímž bylo získáno 40,4 g (61,60) titulní sloučeniny, která byla v dostatečné čistotě pro použití v přípravě 6.

Příprava 6

Methyl chlormethylenkyanoacetát

K suspenzi sodné soli methyl hydroxymethylenkyanoacetátu (19,0 g, 127 mmol) v 200 ml dichlormethanu byl přidán v jedné dávce pentachlorid fosforečný (26,5 g, 127 mmol). Reakční směs se nechala v exotermní reakci, až dosáhla refluxní teploty a potom byla po dobu 4 hodin ponechána s mícháním pod refluxem. Vzniklá světle žlutá suspenze se nechala ochladit na 23°C a potom byla nalita do 400 ml studené vody. Směs byla míchána 15 minut a fáze byly odděleny. Vodná vrstva byla extrahována 100 ml dichlormethanu a spojené organické vrstvy byly

- 28 promyty dvakrát vodou, vysušeny síranem hořečnatým a zahuštěny, čímž bylo získáno 16,8 g titulní sloučeniny, která byla v dostatečné čistotě pro použití v příkladu 1.

*H NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 3,88 (s, 3H), 7,58 (s, 0,35H), 8,04 (s, 0,65H).

Příprava 7

N-[[5-[2-[(6R)-2-amino-3,4,5,6,7,8-hexahydro-4-oxopyrido-(2,3-d)pyrimidin-6-yl]ethyl]-2-thienyl)karbonyl]-L-glutamová kyselina, diethylester soli (lR)-(-)-10-kafrosulfonové kyseliny (R-R-L)

Směs N-[[5-[2-[2-[(2,2-dimethyl-loxopropyl)amino)-3,4,5,6,7,8-hexahydro-4-oxopyrido-(2,3-d)pyrimidin-6-yl] ethyl]-2-thienyl] karbonyl]-L-glutamové kyseliny, diethylester (456,1 g, 0,748 mol) a bezvodá (lR)-(-)-10kafrosulfonová kyselina (197,6 g, 0,84 mol) v 3,4 1 absolutního ethanolu byly zahřívány pod refluxem. Po 28 hodinách bylo ověřeno pomocí HPLC analýzy (C18 kolona při 40°C, 40:60 acetonitriLpufr, rychlost proudění 2,0 ml/min, detekce při 280 nm, pufr - 1:0,3:100 ledová kyselina octová:triethylamin:voda), že reakce byla dokončená. Směs se nechala ochladit na 68°C a bylo přidáno 6,34 g octanu sodného, 3,4 1 vody a 23 g aktivního uhlí. Směs, která se přídavky ochladila na 46°C, se nechala míchat po dobu 20 min, potom byla zfiltrována přes Hyflo®. Vzniklý roztok byl míchán, ochlazen na 34°C, a naočkován. Směs se nechala stát při teplotě místnosti 12 hodin bez pohybu, aby se mohly vyvinout krystaly. Krystaly byly odděleny filtrací a vysušena. Filtrát byl ještě nechán stát přes noc, kdyby se ještě objevila dodatečná krystalizace. Krystaly z filtrátu byly odděleny, spojeny s prvním podílem a vysušeny, čímž bylo získáno 292,2 g R-R-L titulní sloučeniny. Částečně vyčištěná sůl byla rekrystalizována dvakrát ze soustavy ethanol-voda 1:1 v 15-ti násobku své hmotnosti. Bylo získáno 101,9 g (35,6% teorie ) titulní sloučeniny jako monohydrát, 95,4% d.e. podle HPLC analýzy.

- 29 Teplota tání 207°C- 210°C.

MS(FD) m/z 505 (M+); [α]₅₈₉ -52,8°, [α]₃₆₅ -267,7° (c 1,0 DMSO).

EA Vypočteno pro C₃3H47N₅OioS₂-H₂0 (755,90): C, 52,44; H, 6,53 N, 19,26 Nalezeno: C, 52,31; H, 6,35; N, 19,20.

Příprava 8

Získání 2:3 směsi R-L a S-L diastereomerů diethylesteru N [[5-[2-[2-amino1,4,5,6,7,8-hexahydro-4-oxopyrido[2,3-dJpyrimidin-6-yl)ethyl]-2thienyl]karbonyl]-L-glutamové kyseliny z filtrátu z Přípravy 7

Vodný roztok 1M hydrogenuhličitanu sodného byl přidán do míchané směsi filtrátu z Přípravy 7 (1000 g, asi 1,93% titulní sloučeniny (w/w)) a dichlormethanu (333 g). Hodnota pH byla upravena na 5,0 až přibližně 7 přidáním dalšího vodného roztoku 1M hydrogenuhličitanu sodného (50,0 g). Vzniklá směs byla míchána po dobu 1 hodiny. Fáze byly odděleny za vzniku 392,9 g o čiré žluté organické fáze. Roztok byl promyt 0,5M vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (50 g) po dobu 3 0 minut. Fáze byly odděleny za vzniku 341,3 g mírně zakalené žluté organické fáze. Bylo odebráno 5 g kontrolního vzorku a zbývající roztok byl promýván roztokem 10% vodného chloridu sodného (100 g) po dobu 15 minut. Po 1 hodině oddělování fází bylo izolováno 293,4 g mírně zakalené žluté organické fáze. Bylo odebráno 5 g kontrolního vzorku a roztok byl zahuštěn do pěny v rotační odparce. Zbytek byl znovu rozpuštěn v dichlormethanu (100 g) a znovu zahuštěn do pěny. Vakuovým sušením, po dobu 18 hodiny při 45°C/5 Torr bylo získáno 17,86 g žluté pěny (90,6 % možného výtěžku směsi 36,8:63,2 titulních sloučenin, respektive, 88,7 % výtěžku, odvozeného od původního filtrátu, 90,0 % výtěžku odvozeného od hmotnostní bilance produktu ve vodné a organické vrstvě). Tento materiál byl převeden do recyklačních postupů v příkladech 6 a 7 bez dalšího čištění.

• « « · · ·

- 30 ·· ·· • » 9 · • · « « • · · · • · ♦ · • · ♦ »

Příprava 9

2:3 Směs R-L a S-L diastereomerů diethylesteru N-[[5-[2-[2[(2,2-dimethyll-oxopropyl)amino)-3,4,5,6,7,8-hexahydro-4-oxopyrido-(2,3-d)-pyrimidin6-yl]ethyl]-2-thienyl]karbonyl] L-glutamové kyseliny

Bezvodý pyridin (50,9 g, 642,9 mmol) byl přidán do 2:3 směsi R-L a S-L diastereomerů diethylesteru N-[[5-[2-[2amino-3,4,5,6,7,8hexahydro-4-oxopyrido-(2,3-d)-pyrimidin-6-yl]ethyl]-2-thienyl]karbonyljL-glutamové kyseliny (24,7 g, 49,0 mmol) z přípravy 8 a 4-dimethylaminopyridinu (1,49 g, 12,2 mmol). Po zahřátí na 100°C s mícháním přetrvával žlutý roztok. V průběhu 4 minut byl přidán anhydrid kyseliny pivalové (19,0 g, 102,8 mmol); s každou kapkou vznikla bílá pevná látka, která dispergovala. Po 4,5 hodinách byla reakční směs ochlazena na 50°C (pozor: tuhne za nižší teploty), pak byla převedena do separační nálevky a byly přidány dichlormethan (500 ml) a potom IN vodná kyselina chlorovodíková (660 ml). Organická vrstva byla separována a extrahována IN vodnou kyselinou chlorovodíkovou (250 ml) plus dichlormethanem (100 ml), aby se zabránilo zakalení. Vzniklá organická vrstva byla promyta solankou (200 ml) opět s přidáním dalšího dichlormethanu (100 ml), aby se zabránilo zakalení, pak bylo provedeno vysušení síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo částečně odstraněno při vákuu 26,5 palců Hg a při 40°C až do doby, kdy odpařování skoro skončilo. Do zbývajícího roztoku byl přidán v průběhu 3 5 minut bezvodý diethylether (300 ml) za vzniku bílé směsi. Po 15 minutách míchání byla oddělena pevná látka vakuovou filtrací, promyta dvakrát diethyletherem (100 ml). Pozn.: filtrace vyžaduje 15-30 minut a byla míchána po každém přídavku diethyletheru. Vakuovým sušením při 40°C/5 torr po dobu 2 hodin bylo získáno 27,88 g surového produktu. Tento zbytek byl refluxován pod ethylacetátu (700 ml) až do získání světle žlutého roztoku. Obsah se nechal s mícháním po dobu 1 hodiny ustát na teplotu místnosti. Bílá směs byla umístěna do ledové lázně ·· ·· ‘ · * « ř · · « • · a míchána 1,5 hodin. Produkt byl izolován vakuovou filtrací, promyt třikrát chladným ethylacetátem (50 ml) a jednou diethyletherem (100 ml). Vakuovým sušením při 40°C/5 Torr bylo získáno 19,40 g (680) titulní sloučeniny jako bílá pevná látka s teplotou tání 169°C - 170°C.

[a]²⁰D -0,2° (c 1,01, MeOH). EA Vypočteno pro C₂₈H₃₉N₅O₇S: C, 57,03; H, 6,67; N, 11,88; O, 18,99; S, 5,44. Nalezeno: C, 57,05; H, 6,47; N, 21,66; O, 19,16; S, 5,66.

Příklad 1

Methyl-5-(3-[2-kyano-2-karboethoxyethenyl]-4-diethylaminobut-3-enyl)-2thiofen karboxylát

Do roztoku methyl-5-(4-diethylaminobut-3-enyl)-2-thiofen karboxylátu (19,4 g, 72,4 mmol) a triethylaminu (7,3 g, 72,4 mmol) v 160 ml dichlormethanu ochlazeného na 25°C byl po kapkách v průběhu 25 minut přidán roztok methyl-chlormethylenkyanoacetátu (10,5 g, 72,4 mmol) v 40 ml dichlormethanu, teplota reakční směsi byla udržována pod -20°C. Zakalený oranžový roztok byl míchán při 25°C až -20°C po dobu dvou hodin a potom se nechal ohřát na 20°C. Reakční směs byla zředěna 150 ml vody a dvě vrstvy se nechaly míchat společně po několik minut a pak byl odděleny. Organická vrstva byla vysušena síranem hořečnatým, zfiltrována a zahuštěna na oranžový olej. Olej byl triturován diethyletherem, což vyvolalo krystalizaci požadovaného produktu. Vzniklá pevná látka byla zfiltrována, promyta etherem a vysušena. Bylo získáno 19,6 gramů (72%) titulní sloučeniny, která byla v dostatečné Čistotě pro použití v Příkladu₂. MS m/z 377 (M+H). EA Vypočteno pro Ci₉H₂₄N₂O₄S: C, 60,62 ; H, 6,43 ; N, 7,44. Nalezeno: C, 61,67 ; H, 6,85; Ν, 7,33.

- 32 * · ·· φ *· * φ · · φ • · φφφ» φφφφ • φ φ · ·· φφφ φφ φ • · φφφφ ΦΦΦ· φφφ · ·· φφ φφ ·· φφ

Příklad 2

2-Amino-l,4-dihydro-4-oxopyrido-6-(2-[2-karbomethoxythiofen-5y 1] ethy 1)[2,3-djpyrimidin

Do roztoku methyl-5-(3-[2-kyano-2-karboethyoxyethenyl]-4diethylaminobut-3-enyl)-2-thiofen karboxylátu (10,0 g, 26,56 mmol) v 50 ml acetonitrilu byl přidán 2,4-diamino-6-hydroxypyrimidin (3,35 g, 26,56 mmol), 45 ml vody, a 5 ml kyseliny octové. Vzniklá suspenze byla zahřívána pod refluxem 18 hodin a potom se nechala ochladit na 25°C. Reakční směs byla neutralizována na pH 6,7 vodným 2N hydroxidem sodným, přičemž sraženina zhoustla. Pevná látka byla zfiltrována, promyta soustavou 1:1 acetonitril/voda, a vysušena ve vakuu při 50°C. Bylo získáno 5,96 gramů (68%) titulní sloučeniny.

Příklad 3

2-Amino-l,4-dihydro-4-oxopyrido-6-(2-[2-karboxythiofen-5 yl]ethyl) [2,3-d] pyrimidin

2-Amino-l,4-dihydro-4-oxopyrido-6-(2-[2-karbomethox:ythiofen-5-yl] ethyl) [2,3-d] pyrimidin (5,4 g, 16,35 mmol) byl rozpuštěn v 54 ml vodného 2N hydroxidu sodného a zahříván na 40°C s mícháním. HPLC analýza (30% acetonitril/70% vodného 1% roztoku kyseliny octové, 1 ml/min, Cs 25 cm kolona, 1 = 280 nm) prokázala úplnou hydrolýzu methylesteru. Roztok byl zředěna 81 ml ethanolu a okyselen na pH 3 vodnou 6N kyselinou chlorovodíkovou. Vzniklá sraženina byla zfiltrována, promyta soustavou 1:1 ethanol/voda, a vysušena ve vakuu při 50° C , čímž bylo získáno 5,02 g (97%) titulní sloučeniny jako světle žlutá pevná látka. ^NMR (300 MHz, DMSO-d_ó) δ 2,97 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 3,15 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 6,89 (d, J = 3,6 Hz, ÍH), 7,50 (d, J = 3,6 Hz, ÍH), 8,05 (d, J = 2,3 Hz, ÍH), 8,45 (d, J = 1,8 Hz, ÍH).

• Β ΒΒ • Β Β Β

Β · Β «

Β ΒΒΒ

Β Β Β Β

Β Β ΒΒ

- 33 • * Β» • · Β Β

Β Β ΒΒ

Příklad 4

2-[(2,2-Dimethyl-l-oxopropyl)amino]-l,4-dihydro-4-oxopyrido-6-(2-[2karboxythiofen-5-yl] ethyl)[2,3-d] pyrimidin

Do suspenze 2-amino-l,4-dihydro-4-oxopyrido-6(2-[ 2karboxythiofen-5-yl] ethyl)[2,3-d] pyrimidinu (0,93 g, 2,94 mmol) v 20 ml anhydridu kyseliny pivalové byl přidán dimethylaminopyridin (0,036 g, » 0,294 mmol) a směs byla zahřívána na 250°C po dobu 18 hodin, během této doby reakční směs znatelně zřídla. Reakce se nechala ochladit na 25°C a produkt byl vysrážen přídavkem 100 ml diethyletheru. Sraženina byla zfiltrována s pod tlakem a promyta etherem. Vzniklá pevná látka byla rozmíchána ve 20 ml vody a působilo se na ni vodným roztokem IN hydroxidu sodného až do vzniku roztoku. Roztok byl okyselen na pH 4 pomocí 6N vodné kyseliny chlorovodíkové, což způsobilo vznik sraženina produktu. Pevná látka byla zfiltrována, promyta vodou a methanolem, vysušena ve vakuu při 50 °C , čímž bylo získáno 0,84 g (71%) titulní sloučeniny žlutohnědá pevná látka.

‘HNMR (300 MHz, DMSO-db) δ 1,23 (s, 9H), 3,14 (m, 4H), 6,90 (d, J =

3,6 Hz, 2H), 7,48 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,70 (s, 1H), 11,37 (bs, 1H), 12,25 (s, 1H).

Příklad 5

N-[[5-[2-[2-[(2,2-dimethyl-1 -oxopropyl)amino] -1,4-dihy dro-4-oxopyrido[2,3-d]-pyrimidin-6-yl] ethyl)-2-thienyl] karbonyl]-L-glutamová kyselina, diethylester

Do směsi 2-[ (2,2-dimethyl-l-oxonropyl)amino] l,4-dihydro-4oxopyrido-6-(2-[2-karboxythiofen-5-yl]ethyl)[2,3-d]pyrimidinu (0,54 g, 1,35 mmol) a N-methylmorfolinu (0,41 g, 4,05 mmol) v 5 ml dimethylformamidu byl přidán v jedné dávce 2-chlor-4,6-dimethoxy-l,3,5- 34 ♦· ΑΑ AA »« • * A A A · » • · AA A A · • · · » A A A ·* AA · A · · triazin (0,31 g, 1,75 mmol). Vzniklá suspenze byla míchána při teplotě místnosti 16 hodin. Pak byl přidán diethylester L-glutamové kyseliny (0,36 g, 1,48 mmol) a míchání pokračovalo při teplotě místnosti 3 hodin. Reakční směs byla rozdělena mezi 30 ml methylenchloridu a 30 ml vody, a obě vrstvy byly míchány společně a pak byly ponechány, aby se oddělily. Organická vrstva byla zahuštěn jantarový olej, který byl triturován ethanolem, takže se vysrážela pevná látka. Pevná látka byla zfiltrována, promyta ethanolem a vysušena ve vakuu při 50 °C za vzniku 0,59 g (75%) titulní sloučeniny.

Teplota tání 72°C-76°C.

NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1,14 (m, 6H) , 1,22 (s, 9H) , 2,04 (m, 2H), 2,38 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 3,12 (m, 4H), 4,05 (m, 4H), 4,34 (m, 1H), 6,88 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,61 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 8,72 (s, 1H), 10,85 (vbs, 2H).

Příklad 6

N-[[5-[2-[2-[(2,2-dimethyl-l-oxopropyl)amino]-l,4-dihydro-4-oxopyrido[2,3-d]-pyrimidin-6-yl]ethyl]-2-thienyl]karbonyl] L-glutamová kyselina, diethylester

Dichlormethan (350 ml) byl přidán do 2:3 směsi R-L a S-L diastereomerů diethylesteru N-[[5-[2-[2-[(2,2-dimethyli-oxopropyl)amino)3,4,5,6,7,8-hexahydro-4-oxopyrido-(2,3-d)-pyrimidin-6-yl)ethyl]-2thienyl]karbonyl]-L-glutamové kyseliny (17,0 g, 28,9 mmol) z přípravy 9 a směs byla míchána 30 minut, až vznikl světle žlutý roztok. Jako pevná látka byl přidán 2,3-dichlor-5,6-dikyano-l,4-benzochinon (DDQ) (13,4 g, 59,2 mmol). Roztok se nejprve změnil na temně purpurový, po 30 minutách míchání teplotě místnosti se změnil na světle růžovou směs. Růžová pevná látka byla odstraněna filtrací, promyta třikrát dichlormethanem (25 ml). Filtrát byl míchán třikrát po 30 minut s nasyceným roztokem

· 0 ♦ 0 0 ·

0 0 ·

- 35 hydrogenuhličitanu sodného (200 ml) a separován. Konečná organická vrstva byla míchána 30 minut s hydrogenuhličitanem sodným (100 ml) a voda (100 ml), pak byla separována. Organická vrstva byla promyta solankou (100 ml) a vysušena síranem hořečnatým. Odstraněním rozpouštědla za sníženého tlaku bylo získáno 14,7 g (87,1%) titulní sloučeniny.

Teplota tání 57°C -87°C.

IR(CHC1₃): 3690-3025, 2978, 3000, 1736, 1677, 1629, 1558, 1449, 1245,

1147, 1022, 811 cm-1. MS(HR)

Vypočteno pro C28H35N5O7S: 586,234100.

Nalezeno: 586,233546.

Příklad 7

1:1 Směs R-L a R-S diastereomerů N-[[5-[2-[2[(2,2-dimethyl-loxopropyl)amino)-3,4,5,6,7,8-hexahydro-4-oxopyrido-(2,3-d)-pyrimidin-6yl]ethyl]-2-thienyl]karbonyl] L-glutamová kyselina, diethylester

Diethylester N-[[5-[2-[2-[(2,2-dimethyl-l-oxopropyI)amino]1,4-dihydro-4-oxopyrido-[2,3-d]-pyrimidin-6-yl] ethyl]-2-thienyl] karbony 1]L-glutamové kyseliny (1,0 g, 1,8 mmol), 5% palladiového katalyzátoru na uhlíku (0,26 g), ethanol (4,0 ml), a tetrahydrofuran (16,0 ml) byly přidány do hydrogenační nádoby. Vzniklá směs tlakově nasycena dusíkem (10 psig) a vyvětrána. Potom byla směs třikrát tlakově nasycena vodíkem (50 psig) a vyvětrána. Tlak vodíku byl pak nastaven na 50 psig a teplota se zvýšila na 100°C. Po 22 hodinách, kdy podle HPLC zůstalo pouze 7 % výchozích složek, se reakce nechala ustát na pokojovou teplotu a katalyzátor byl odstraněn filtrací přes filtr Celíte a promyt soustavou 4:1 tetrahydrofuran/ethanol. Filtrát byl odpařen, znovu rozpuštěn v dichlormethanu (25 ml), extrahován vodným hydrogenuhličitanem sodným (25 ml), vysušen síranem hořečnatým, a odpařen. Zbytek byl míchán v ethylacetátu (10 ml) pod refluxem. Po 1 hodině se směs nechala ochladit na

- 36 • * · · φ φφ φ φ φφ φ • φ φ φφφ φφφφ • « φφ φφ φφφ φφ φ • · φφφφ φφφφ φφφ φφφ φφ φφ «φ «· teplota místnosti a byla potom míchána v ledové lázni 30 minut. Potom byla reakční směs zfiltrována a filtrační koláč byl promyta chladným ethylacetátem (3 ml). Filtrační koláč byl vakuově vysušen při 40°C/5 Torr, bylo získáno 940 mg (83%) titulní sloučeniny jako bílá pevná látka.

Teplota tání 169°C -170°C. EA Vypočteno pro C28H39N5O7S:

C, 57,03; H, 6,67; N, 11,88; O, 18,99; S, 5,44.

Nalezeno: C, 57,26; H, 6,45; N, 11,86; O, 18,73; S, 5,4.

Vynález byl podrobně popsán, včetně jeho výhodných provedení. Nicméně odborníkovi v oboru bude po přečtení popisu jasné, že lze vynález uskutečnit v různých modifikacích a/nebo zlepšeních, která spadají do rozsahu a myšlenky vynálezu, jak je stanovena v následujících nárocích.

Přestože sloučeniny vzorců III a III(a) jsou znázorněny v celém popisu pouze v jedné konkrétní konfiguraci na každé ze dvou dvojných vazeb, do rozsahu vynálezu spadají veškeré možné izomery.

Claims (18)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Sloučenina vzorce III:

   kde:

   Y je CH=CH, O, nebo S;

   R je Ci-Có alkyl;

   R a R jsou nezávisle C1-C6 alkyl nebo spolu s dusíkem, ke kterému jsou připojeny, tvoří heterocyklus;

   R³ je vodík, chlor, nebo fluor;

   R⁴ je hydroxyskupina, skupina chránící karboxyskupinu nebo skupina NHC*H(C(O)R⁵)CH2CH2C(O)R⁵, kde konfigurace na uhlíkovém atomu označeném * je S; a

   R⁵ je vodík nebo skupina chránící karboxyskupina;

   nebo její sůl nebo solvát.
2. 2. Sloučenina podle nároku 1 kde Y je CH=CH nebo S, R je C1.C4 alkyl, R¹ a R² jsou nezávisle C1-C4 alkyl, R³ je vodík a R⁴ je C1-C4 alkoxy nebo benzyloxy nebo její sůl nebo solvát.
3. 3. Sloučenina podle nároku 2 kde R je methyl nebo ethyl, R¹ a R² jsou oba methyl nebo ethyl a R⁴ je methoxy, ethoxy, nebo benzyloxy; nebo její sůl nebo solvát.
4. 4. Sloučenina vzorce IV:

   *· ·· ·· ·· ···· · · « · (IV) kde:

   Y je CH=CH, O, nebo S;

   R³ je vodík, chlor, nebo fluor;

   R⁴je hydroxyskupina, skupina chránící karboxyskupinu, nebo skupina NHC*H(C(O)R⁵)CH₂CH₂C(O)R⁵, kde konfigurace na uhlíkovém atomu označeném * je S; a

   R⁵ je vodík nebo skupina chránící karboxyskupinu;

   R⁶ je vodík nebo skupina chránící aminoskupinu; a

   R⁷ je hydroxy nebo amino;

   nebo její sůl nebo solvát.
5. 5. Sloučenina podle nároku 4, kde Y je CH=CH nebo S a R³ je vodík; nebo její sůl nebo solvát.
6. 6. Sloučenina podle nároku 5, kde R⁴je methoxy, ethoxy, benzyloxy nebo skupina NHC*H(C(O)R⁵)CH₂CH₂C(O)R⁵; R⁵ je Ci-Cď alkyl; R⁶je skupina chránící aminoskupinu a R⁷ je hydroxyskupina; nebo její sůl nebo solvát.
7. 7. Sloučenina podle nároku 6, kde R⁴ je skupina NHC*H(C(O)R⁵)CH₂CH₂C(O)R⁵; nebo její sůl nebo solvát.
8. 8. Způsob přípravy sloučeniny vzorce IV:

   - 39 »· » « ·· kde:

   Y je CH-CH, O, nebo S;

   R³je vodík, chlor, nebo fluor;

   R⁴je hydroxyskupina, skupina chránící karboxyskupinu nebo skupina NHC*H(C(O)R⁵)CH2CH2C(O)R⁵, kde konfigurace na uhlíkovém atomu označeném * je S; a

   R⁵je vodík nebo skupina chránící karboxyskupinu;

   R⁶ je vodík nebo skupina chránící aminoskupinu; a

   R⁷ je hydroxy nebo amino;

   nebo její sůl nebo solvát;

   vyznačující se tím, že zahrnuje:

   a) reakci sloučeniny vzorce III(a):

   ( IH(a) ) ·· φφ

   - 40 kde:

   R je Ci-Có alkyl;

   R a R jsou nezávisle Cj-Cé alkyl nebo spolu s dusíkem ke kterému jsou připojeny tvoří heterocyklus;

   R je skupina chránící karboxyskupinu nebo skupina NHC*H(C(O)R⁵')CH2CH2C(O)R⁵, kde konfigurace na uhlíkovém atomu označeném * je S; a

   R je skupina chránící karboxyskupinu;

   s 2,4-diamino-6-hydroxypyrimidinem za přítomnosti vhodné kyseliny a rozpouštědla;

   b) popřípadě zavedení skupiny chránící aminoskupinu na R⁶; a

   c) popřípadě odstranění některé ze skupin, chránících karboxyskupiny na R⁴'.
9. 9. Způsob podle nároku 8, vyznačující se tím, že sloučenina vzorce IV je sloučenina kde R⁷ je hydroxy, Y je CH=CH nebo S a R³ je vodík; nebo její sůl nebo solvát.
10. 10. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že sloučenina vzorce III(a) je sloučenina kde R⁴' je methoxy, ethoxy, nebo benzyloxy; neoo její sůl nebo solvát; a provádí se stupeň b) v nároku 7.
11. 11. Způsob podle nároku 10, vyznačující se tím, že sloučenina vzorce IV je sloučenina, kde R⁶ je 2,2-dimethyl-l-oxopropyl; nebo její sůl nebo solvát.
12. 12. Způsob podle nároku 8, vyznačující se tím, že kyselinou je kyselina octová a rozpouštědlem je acetonitril.

    - 41 • 9 9 9 9 9 · 9 9

    9 9 9 9 ··· ··· 99 99 99 9»
13. 13. Způsob přípravy sloučenina vzorce IV:

    kde:

    Y je CH=CH, O, nebo S;

    R³ je vodík, chlor, nebo fluor;

    R⁴ je hydroxy, skupina chránící karboxyskupinu, nebo skupinu NHC*H(C(O)R⁵)CH2CH2C(O)R⁵, kde konfigurace na uhlíkovém atomu označeném * je S; a

    R⁵ je vodík nebo skupina chránící karboxyskupinu;

    R⁶ je vodík nebo an skupina chránící aminoskupinu; a

    R je hydroxy nebo amino; nebo její sůl nebo solvát;

    vyznačující se tím, že zahrnuje:

    a) reakci sloučeniny vzorce V(b):

    ( V (b) ) kde:

    • 0 00 • 0 0· 00 • · 0 0 0 • 0 · 0 0 0 0 0 • • 0 0 0 0 « 0 • 0 • 0 · 0 • 00 0 • 0 0 0 0 «0 0 0 • 0 0 00 0

    R⁴' je skupina chránící karboxyskupinu nebo skupina NHCH(C(O)R⁵')CH₂CH₂C(O)R⁵'; a

    R⁵' je skupina chránící karboxyskupinu; nebo její sůl nebo solvát;

    s oxidačním činidlem za přítomnosti vhodného rozpouštědla; a * b) popřípadě odstranění některé ze skupin, chránících karboxyskupiny na R⁴' a/nebo na R⁶;

    s podmínkou, že pokud R⁶ je vodík ve sloučenině vzorce V(b), pak sloučenina vzorce V(b) musí být adiční sůl s kyselinou.
14. 14. Způsob podle nároku 13, vyznačující se tím, že sloučenina vzorce IV je sloučenina, kde Y je CH=CH nebo S a R³ je vodík; nebo její sůl nebo solvát.
15. 15. Způsob podle nároku 14, vyznačující se tím, že sloučenina vzorce V(b) je sloučenina kde R⁴, je NHC*H(C(O)R^5,)CH2CH2C(O)R⁵', R⁵' je Ci-C6 alkyl; R⁶je skupina chránící aminoskupinu; a R⁷ je hydroxyskupina; nebo její sůl nebo solvát.

    ¹
16. 16. Způsob podle nároku 15, vyznačující se tím, že sloučenina vzorce V(b) je sloučenina, kde R⁵' je methyl nebo ethyl a R⁶ je

    2,2-dimethyl-l-oxopropyl; nebo její sůl nebo solvát .
17. 17. Způsob podle nároku 13, vyznačující se tím, že oxidačním činidlem je 2,3-dichlor-5,6-dikyano-l,4-benzochinon a rozpouštědlem je dichlormethan.

    • • ♦ 4 4· • * 4 4 • 4 · • * » • 4 • • • • e • β • • * 4 • 44 4 4 4 4« • 4 4 • • « 44 • • 4 • 4 •
18. 18. Způsob podle nároku 15, vyznačující se tím, že dále obsahuje stupeň hydrogenace sloučeniny vzorce IV(d):

    ( IV(d) ) ve vhodném rozpouštědle; aby vznikla směs, obsahující sloučeniny vzorců V(f)(R) a V(f) (S)

    V(f) (S) ;

    nebo sůl nebo solvát kterékoliv z těchto sloučenin.