CZ13192A3 - Nové použití 2‘ -O-alkyladenosinových derivátů pro přípravu léčiva vhodného pro léčení neurodegenerativních poruch - Google Patents

Abstract

Použití 2’-0-alkyladenosinových derivátů, které jsou předmětem britského patentu 2226027 a evropské patentové přihlášky 378518 a které mají obecný vzorec I, ve kterém Rl, R2 a R3 mají významy uvedené v nároku 1, pro přípravu léčiva pro léčení neurodegenerativních poruch, některých periferních neuropatií, například diabetické neuropatie, a poruch spojených s periferním vaskulárním onemocněním a/nebo poruch spojených s neuronální degenerací, hy- pertriglyceridemie, zvýšené hladiny volných mastných kyselin a/nebo cukrovky typu I a typu II a arytmií a pro ochranu proti infarktu myokardu. Některé sloučeniny obecného vzorce I mohou být použity pro snížení vysoké hladiny krevních lipidů.

Description

Vynález se týká nového použití 2 -O-alkyladenosinových derivátů, které jsou předmětem britské patentové přihlášky 2226027 A a evropských patentových přihlášek 378518 a 269574,, farmaceutických kompozic, které tyto sloučeniny obsahují a jejich použití v lékařství. Dále se vynález týká 6-cyklohexyl-2-O-methyladenosinhydrátu.

Dosavadní stav techniky

Z výše uvedené britské patentové přihlášky je známo, že uvedené sloučeniny mohou být použity jako antihypertensní činidla a koronární vasodilatátory. Je zde zmíněno, že k antihypertensní účinnosti přispívá jak inhibice sekrece reninu, tak i inhibice uvolňování noradrenalinu z nervových ukončení a přímá vasodilatace. Dále je zde uvedeno, že uvedené sloučeniny chrání vaskulární endotel mechanismem inhibice jak agregace trombocytů', tak i aktivace leukocytů. Uvedené sloučeniny údajně rovněž snižují hladinu lipidů v krvi. Dále je uvedeno, že některé z výše uvedených 2 -O-alkyladenosinových. derivátů vykazují rovněž protekční účinek vůči onemocněním způsobeným hypertensí, jakými jsou kongestivní srdeční nedostatečnost, infarkt myokardu nebo náhlá srdeční zástava a renální insuficience (viz evropské patentové přihlášky 378518 a 269574) .

Podstata vynálezu

Nyní bylo nově zjištěno, že sloučeniny, které jsou předmětem britské patentové přihlášky 2226027 a evropských patentových přihlášek 378518 a 269574 mají překvapivé potenciální použití při léčení periferních vaskulámích onemocnění, jakými jsou intermitující klaudikace a Raynaudova nemoc.

Uvedené sloučeniny jsou rovněž účinné při léčení arytmií. Ve funkci agonistú adenosinových AI-receptorů reastaurují tyto sloučeniny sinusový rytmus při supraventrikulárních tachy kardiích a vracejí ventrikulární tachykardie, indukované betaadrenergickou stimulací, zpět do normálního rytmu.

Ve funkci adenosinových A1-receptorú prekondicionují srdce tím, že imitují krátkou periodu ischemie a tím činí srdce resistentním vůči infarktu následnou ischemií. Tyto slou čeniny mohou být proto použity k ochraně srdce proti infarktu.

U uvedených sloučenin byla rovněž zjištěna neuroprotekční účinnost. Tyto sloučeniny jsou proto použitelné pro léčení neurodegenerativních poruch a některých periferních neuropatií, zejména diabetické neuropatie, a pro profylaxi periferních vaskulárních poruch spojených s neuronální degenerací.

. Uvedené sloučeniny snižují hladinu insulinu v krevní plasmě., aniž by přitom ovlivňovaly glukosovou toleranci. Tyto sloučeniny podporují účinek insulinu na vzrůst glukosy v tukové tkáni. Uvedené sloučeniny rovněž snižují obsah volných mastných kyselin v krevní plasmě. Účinek spočívající v optimalizaci hospodaření organismu s insulinem a/nebo^- ve snižováníobsahu volných mastných kyselin v krevní plasmě činí uvedené sloučeniny použitelnými pro léčení cukrovky typu I a typu II.

Vzhledem k tomu, že uvedené sloučeniny snižují hladinu triglyceridú a volných mastných kyselin v plasmě, jsou tyto sloučeniny použitelné v případech, kdy došlo ke zvýšení hladiny triglyceridú a volných mastných kyselin v plasmě.

Závěrem lze uvést, že uvedené sloučeniny vykazují dobrou metabolickou stabilitu.

V souladu s výše uvedeným vynález poskytuje způsob léčení neurodegenerativních. poruch, některých periferních neuropatií_r například diabetické neuropatie, jakož i poruch spojených s periferním vaskulárním onemocněním a/nebo poruch spojených s neuronální. degenerací, hyperglyceridemie, zvýšené hladiny volných mastných kyselin a/nebo cukrovky typu Σ a typu ΣΣ a ar/y tmie a způsob ochrany proti infarktu myokardu, jehož podstaoa spočívá v podání účinného netoxického množství sloučeniny obecného vzorce I

ve kterém

R¹ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy, allylovou skupinu, methallylovou skupinu, přímou nebo rozvětvenou alkinylovou skupinu se 3 až'7 uhlíkovými atomy, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 uhlíkovými atomy, fenylovou skupinu, která je nezávisle mono- nebo disubstituována atomem halogenu s atomovým číslem 9 až 35, alkylovou skupinou s 1 až 4 uhlíkovými atomy, alkoxylovou skupinou s 1 až 4 uhlíkovými atomy nebo trifluormethylovou skupinou, nebo fenylalkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy á jejíž fenylový kruh je případně nezávisle mono- nebo disubstituován atomem halogenu s atomovým číslem 9 až 35, alkylovou skupinou s 1 až 4 uhlíkovými atomy, alkoxylovou skupinou s 1 až 4 uhlíkovými atomy nebo trifluormethylovou skupinou, alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy mající alespoň jednu hydroxylovou skupinu nebo alespoň dvě fenylové skupiny, bicykloalkylovou skupinu, naftyialkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, acenaftylenylalkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy nebo skupinu obecného vzorce II nebo obecného vzorce III

Q ve kterých

Z znamená atom vodíku, hydroxylovou skupinu nebo aikoxylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy,

Q znamená atom vodíku nebo hydroxylovou skupinu,

A znamená skupinu -CH^-, -0-, -S- nebo přímou vazbu, n znamená číslo 1 až 3 a přerušovaná- čára v obecném vzorci II znamená případnou vazbu,

R znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy, aminovou skupinu, cykloalkylovou skupinu.

se 3 až 5 uhlíkovými atomy nebo atom halogenu s atomovým číslem 9 až 35 a znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy, osobě vyžadující takové léčení.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být použity jako takové, jako hydráty nebo jako adiční produkty s dalšími rozpouštědly, například s ethanolem, přičemž některé sloučeniny obecného vzorce I mohou být použity ve formě solí.

Předmětem vynálezu je dále použití sloučeniny obecného vzorce I nebo jejího hydrátu nebo adičního produktu s jinými rozpouštědly nebo jejích solí pro přípravu léčiva pro léčení neurodegenerativních poruch, některých periferních neuropatií například diabetické neuropatie, a poruch spojených s perifer ním vaskulárním onemocněním a/nebo poruch spojených s neuronální degenerací, hyperglyceridemie, zvýšené hladiny mastných kyselin a/nebo cukrovky typu I nebo typu II, arytmií a pro ochranu proti infarktu myokardu.

Předmětem vynálezu je také farmaceutická kompozice, jejíž podstata spočívá v tom,, že obsahuje sloučeninu obecného vzorce I nebo její' hydrát nebo adiční produkt s ostatními rozpouštědly nebo její soli. a farmaceuticky přijatelný nosič.

Předmětem vynálezu je zejména použití sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R^ znamená cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 uhlíkovými atomy, zejména cyklohexylovou skupinu, znamená atom vodíku a R^ znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy, zejména methylovou skupinu, nebo jejího hydrátu pro přípravu léčiva pro léčení neurodegenerativních poruch, některých periferních neuropatií, například diabetická neuropatie, a poruch spojených s periferním vaskulárním onemocněním a/nebo poruch spojených s neuronální degenerací, hypertriglyceridemie, zvýšené hladiny mastných kyselin a/nebo cukrovky typu I a typu II a arytmií a pro ochranu proti infarktu myokardu.

Sloučeniny obecného vzorce Ia

(Ia) ve kterém

R^a znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkový mi atomy mající případně alespoň jednu hydroxylovou skupinu nebo alespoň dvě fenylové skupiny, bicykloalkylovou skupinu, naftylalkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy_r acenaftylenylalkylovou skupinu,, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy nebo skupinu obecného vzorce II

nebo obecného vzorce III

ve kterých

Z, Q, A, Y a n mají výše uvedený význam,

R₂a znamená atom vodíku, amino-skupinu, alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy nebo atom halogenu s atomovým číslem 9 až 35 a

R^a znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy,.

jsou velmi účinné při snižování hladiny lipidů v plasmě.

V souladu s tím jsou sloučeniny obecného vzorce Ia použitelné pro léčení poruch^- spojených s vysokou hladinou lipidů v krvi, přičemž podsts^tohoto léčení spočívá v tom, že se osobě, která takové léčení potřebuje, podá účinné netoxické množství sloučeniny obecného vzorce Ia.

Sloučeniny obecného vzorce Ia mohou být takto použity pro přípravu léčiv pro léčení vysokého obsahu lipidů v krvi.

Následující sloučeniny 1 až 13 obecného vzorce I, ve kterém R^, R₂ a R^ mají níže uvedený význam, jsou popsány v britské patentové přihlášce 2226027 A. Následující sloučeniny 14 až 41 obecného vzorce I, ve kterém R^, R^ a R^ mají níže uvedený význam, jsou popsány v evropské patentové přihlášce 378518 a následující sloučeniny 42 až 54 obecného vzorce I, ve kterém R^ a R^ a R^ mají níže uvedený význam, jsou popsány v evropské patentové přihlášce 269574. Tyto sloučeniny jsou obzvláště výhodné pro použití podle vynálezu.

Tabulka

Slouče- nina
č.	R1	R2	R3
1	cyklopentyl	H	ch3
2	ρ-methoxyfenyl	H	ch3
3	cyklopentyl	H	c2h,
4	cyklopentyl	ch3	ch3
5	cyklopentyl	Br	ch3
6	cyklopropyL	H	CH3
7	cyklohaxyl	H	ch3
8 -	oykloheptyl	H	ch3
9	p-fluorfenyl	H	CH3
10	p-chlorfenyl	H	CH3
11	(R)fenyl-CH2CH(CH3)-	ΪΓ	CH3
12	ailyl	H.	CH3
13	prop-2-inyL	H	CH3
14	2,3-dihydroxypropyl	H.	CH3
15	benzyl	H	CH3
16	2,2-difenylethyl	H	ch3
17	exo-dicyklo/2.2.1/heptyl	H	ch3
18	endo-dicyklo/2.2.1/heptyl	H	ch3

Tabulka	(pokračování)
Slouče- nina č.	R1	R2	R3
19	(1-naftyl)methyl	H	ch3
20	(1-acenaftylenyl)methyl	H	CH3
21	(1,2-dihydro-1-acenaftylenyl)methyl	H	ch3
22	(2,3-dihydro-1H-inden-1-yl)	H	CH3
23	(2,3-dihydro-1H-inden-2-yl)	H	CH3
24	(2,3-dihydro-1H-inden-1-yl)methyl	H	CH3
25	(3H-inden-1-yl)methyl	H	CH3
26	(5-methoxy-2,3-dihydro-1K-inden-1-yl}	H	CH3
27	(1-tetrahydronaftyl)	H	ch3
28	(2-tetrahydronaftyl)	H	ch3.
29	(3,4-dihydro-1-naftyl)methyl	H	ch3
30	(5-hydroxy-1-tetrahydronaftyl)	H	CH3.
31	(1-hydroxy-1-tetrahydronaftyl)methyl	H	ch3
32	(5-methoxy-1-tetrahydronaftyl)	H	ch3
33	(6-methoxy-1-tetrahydronafty1)	H	ch3
34	(7-methoxy—1 -tetrahydronaftyl)	H	ch3
35	(4-chromanyl)	H	CS3
36	(4-thiochromanyl)	H	CH3
37	(9-fluorenyl)	H	ch3)

Tabulka (pokračování)

Slouče- nina
č.	R1	R2	R3
38	(9-fluorenyl)methyl	H	ch3
39	(9-hydroxy-9-fluorenyl)methyl	H	CH3
40	(9-xanthenyl)methyl	H	ch3
41	cyklohexyl	ch3	ch3
42	H	H	ch3
43	H	H	c2h5
44	H	H	C4H9
45	H	ch3	CH3
46	'h	C3H7	CH3
47	H	CH3	G4H9
48	ch3	H	CH3
49	C4S9	H	ch3
50	ch3	ch3	CH3
51	ch3	ch3	c2h5
52	C4K9	CH3	CH3
53	H	Cl	CH3
54	H	F	CH3

1

Mejvýznamnější sloučeninou pro použiti podle vynálezu je sloučenina č. 7, která se s výhodou používá ve formě hydrátu. Tato hydrátová forma sloučeniny č.7 je novou sloučeninou a spadá rovněž do rozsahu vynálezu. Tento hydrát se vytvoří reakcí známého monoetherátu sloučeniny č.7 s vodným rozpouštědlem.

Obzvláště výhodnou hydrátovou formou je 1,5-hydrátová forma.

1,5-Hydrát sloučeniny č.7, tj. S-cyklohexyl-2 -O-methyl adenosin-1,5-hydrát muže být připraven následujícím způsobem: 0,7 g 6-chlor-9-purinyl-2'-Q-methyl-D-ribosy se zahřívá ve 30 ml cyklohexylaminu na teplotu 80 °C po dobu 2 hodin. Směs se potom odpaří k suchu za sníženého tlaku. Získaný zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití směsi methylenchlo ridu a ethanolu v objemovém poměru 95:5 jako eluční soustavy. Takto přečištěný produkt se nechá vykrystalizovat ze směsi methylenchloridu a diethyletheru. Poněvadž produkt obsahuje diethylether, který nemůže být odstraněn dokonce ani za vysokého vakua, rekrystalizuje se ze směsi ethanolu a vody.

Takto získaný 6-cyklohexyl-2'-0-methyladenosin-1,5-hydrát má teplotu tání 88 až 91 °C a / -57,2° (c = 1 v dimethylformamidu).

Elementární analýza:

Vypočteno: C : 52,3 %

H : 7,2' %

N : 17,9 %

O : 22,5 %

Nalezeno: C : 52,5 %

H 7,2 %

N : 18,0 % : 22,4%..

Infračervené spektrum tohoto 1,5-hydrátu, výsledek

DSC-termální analýzy a výsledky nukleární magnetickorezonanč- 12 ní spektroskopie jsou uvedeny na připojených obrázcích. Výsledky těchto měření společně s výsledky elementární analýzy, ukazují, že výše uvedeným postupem byl připraven 6-cyklohexyl-2 -O-methyladenosin-1,5-hydrát.

Sloučeniny obecného vzorce I jsou výhodně ve farmaceuticky přijatelné formě nebo ve formě hydrátu nebo jako adiční produkty s ostatními rozpouštědly, například s ethanolem anebo jako soli. Pod pojmem farmaceuticky přijatelná forma se např. rozumí farmaceuticky přijatelná čistota uvedených sloučenin, jakož i farmaceutických přísad, jakými jsou ředidla a nosiče, přičemž do uvedeného pojmu nespadají látky, které jsou v normálních dávkovačích koncentracích toxické.

Solemi mohou být soli s alkalickými kovy, například sodné a draselné soli, nebo adiční soli, například hydrochloridy.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být za účelem po* dání formulovány do libovolné vhodné galenické formy, přičemž výhodná galenická forma bude záviset na onemocnění, jehož léčení je žádoucí a bude s výhodou tvořena jednotkovou dávkovači formou, kterou si humánní pacient může sám podávat v jediné dávce. S výhodou se sloučeniny obecného vzorce formulují do galenické formy, která je vhodná pro perorální, rektální, topickou, parenterální, intravenózní nebo intramuskulární podání.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být rovněž formulovány do galenické formy, ze které se účinná látka uvolňuje pomalu a rovnoměrně.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být formulovány do farmaceutických kompozic podle vynálezu majících formu tablet, kapslí, tobolek, prášků, granulí, kosočtverečných pastilek nebo kapalných preparátů, jakými jsou sterilní parenterální roztoky nebo suspenze, nebo čípků a rekonstituovatelných prášků. V případě potřeby přichází v úvahu i topické formulace.

3

Vzhledem k dosažení konsistence podání je výhodné, když je farmaceutická kompozice podle vynálezu ve formě jednotkové dávky.

Jednotkovými dávkovači formami mohou být tablety a kapsle a tyto tablety a kapsle mohou obsahovat konvenční pomocné látky, jakými jsou pojivá, například sirup, akácie, želatina, sorbitol, tragant nebo polyvinylpyrrolidon, plniva, například laktóza, cukr, kukuřičný škrob, fosforečnan vápenatý, sorbitol nebo glycin, tabletizační maziva, například stearát hořečnatý, desintegrační činidla, například škrob, polyviny1 pyrrolidon, natriumglykolát škrobu nebo mikrokrystalická celulóza, nebo farmaceuticky přijatelná smáčecí činidla, například natriumlaurylsulfát.

Pevné perorální kompozice mohou být připraveny konvečními směšovacími, plnícími, tabletizačními nebo jinými postupy. Opakované směšovací operace mohou být použity za účelem distribuce účinné látky ve farmaceutických kompozicích, ve kterých' je použito velkého množství plniv.

Takové operace a· postupy jsou velmi dobře známé. Tablety mohou být ovrstveny některou z velmi dobře známých metod, zejména enterickým povlakem.

Perorální kapalné formulace mohou být například ve formě emulzí, sirupu nebo elixírů anebo mohou mít formu suchých prášků, že kterých se potom bezprostředně před. použitím rekonstituuje kapalná formulace za použití vody nebo jiného vhodného vehikula. Takové kapalné formulace mohou obsahovat konvenční přísady, jakými jsou suspendační činidla, například sorbitol, sirup, methylcelulóza, želatina, hydroxyethylcelulóza, karboxymethylcelulóza, gel stearátu hlinitého, hydrogenované jedlé tuky, emulgační činidla,· například lecitin, sorbitanmonooleát nebo akácie, nevodná vehikula (která zahrnují jedlé oleje), například mandlový olej, frakcionovaný kokosový olej, olejové estery, jakými jsou estery glycerinu, propylenglykol nebo ethylalkohol, konzervační činidla, na1 4 příklad methyl- nebo propyl-p-hydroxybenzoát kyseliny sorbové, a případně aromatizační nebo barvící činidla.

Pro parenterálni podání se tekuté jednotkové dávkovači formy připravují za použití účinné sloučeniny a sterilního vehikula, přičemž účinná látka může být v závislosti na použité koncentraci buď suspendována nebo rozpuštěna v kapalném vehikulu. Při přípravě roztoků může být účinná sloučenina rozpuštěna v polyethylenglykolu nebo ethanolu a zředěna vodou pro injekce a sterilizována filtrací před naplněním do vhodné lékovkv nebo ampule a zatavením nebo vzduchotěsným uzavřením. S výhodou může být ve vehikulu rozpuštěna vhodná přísada, jakou je lokální anestetikum nebo konzervační nebo pufrovací činidlo. Parenterálni suspenze se připraví v podstatě stejným způsobem s výjimkou spočívající v tom, že se účinná sloučenina ve vehikulu suspenduje a nikoliv rozpustí, přičemž sterilizace nemůže být v tomto případě provedena filtrací. Účinná sloučenina může být sterilizována vystavením účinku ethylenoxidu před suspendováním ve sterilním vehikulu. _S výhodou je v této farmaceutické kompozici obsaženo povrchově aktivní smáčecí činidlo, které usnadňuje jednotnou distribuci účinné sloučeniny.

Tyto farmaceutické kompozice mohou obsahovat 0,1 až 99 % hmotnosti, výhodně 10 až 60 % hmotnosti účinné látky v závislosti na způsobu podání.

Sloučeniny obecného vzorce I nebo jejich hydrát nebo adiční produkt s jinými rozpouštědly nebo soli mohou být rovněž podány ve formě topické formulace, ve která se účinná sloučenina nachází v kombinaci s konvenčními topickými pomocnými látkami.

Tyto topické formulace mohou mít například formu mastí, krémů nebo vodiček, impregnovaných obvazů, gelů, sprejů a aerosolů, a mohou obsahovat vhodné konvenční přísady, jakými jsou konzervační činidla, rozpouštědla podporující penetraci účinné látky a změkčovadla v mastích a krémech.

Tyto formulace mohou obsahovat kompatibilní konvenční nosiče, jakými jsou základy mastí a ethanol nebo oleylalkohol pro kapalné formulace, například pro vtírané roztoky a emulze.

Vhodné farmaceutické formulace ve formě krému, vodiček, gelů, impregnovaných náplastí, mastí, sprejů nebo aerosolů, ve kterých může být použita sloučenina obecného vzorce I nebo její hydrát nebo adiční produkt s jinými rozpouštědly nebo soli, jsou velmi dobře známými konvenčními formulacemi, které jsou například popsány ve standardní farmaceutické a kosmetické literatuře, jakou je například Harry^s Cosmeticology, vydaná nakladatelstvím Leonard Hill 3ooks, Remington s Pharmaceutical Sciences, a v lékopisech Velké Británie a Spojených států amerických.

Vhodně tvoří sloučenina'obecného vzorce I nebo její hydrát nebo adiční produkt s jinými rozpouštědly nebo soli asi 0,5 až 20 '% hmotnosti formulace, výhodné asi 1 až 10 í, například 2 až 5 % Dávka sloučeniny obecného vzorce I, použitá při výše uvedeném léčení, se bude měnit obvyklým způsobem v závislosti na vážnosti léčeného onemocnění, hmotnosti pacienta a relativní účinnosti použité účinné sloučeniny obecného vzorce I. Obecně však vhodná jednotková dávka může činit 0,1 až 1000 mg, jako například 0,5 až 200 mg, 0,5 až 100 mg nebo 0,5 až 10 mg, zejména 0,5 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg nebo 5 mg, přičemž tato jednotková dávka může být podávána vícekrát než jednou denně, například 2x, 3x, 4x, 5x nebo δχ denně, avšak s výhodou se tato dávka podává jednou nebo dvakrát denně tak, aby celková denní dávka pro dospělého pacienta s tělesnou hmotností 70 kg činila asi 0,1 až 1000 mg, tj. asi 0,001 až 20 mg/kg/den, jako například 0,007 až 3 mg/kg/den, 0,007 až 1,4 mg/kg/den, 0,007 až 0,14 mg/kg/den nebo 0,01 až 0,5 mg/kg/den, zejména 0,01 mg/kg/den, 0,02 mg/kg/den·, 0,04 mg/kg/den, 0,05 mg/kg/den, 0,06 mg/kg/den, 0,08 mg/kg/den, 0,1 mg/kg/den nebo 0,2 mg/kg/den. Taková terapie může být prováděna po dobu několika týdnů nebo měsíců.

Výraz farmaceuticky přijatelný zahrnuje materiály, které jsou vhodné jak pro humánní, tak i pro veterinární použití.

Při výše vymezených dávkách sloučenin obecného vzorce I nebylo zjištěno, že by tyto dávky sloučenin obecného vzorce I měly jakýkoliv toxický účinek.

Za účelem stanovení farmakologické účinnosti sloučenin obecného vzorce I byly provedeny následující farmakologické testy.

a) Afinita k adenosinovým receptorům

Postupem popsaným H. Bruns-em a kol. v Molecular Phar macology 29 (1986), str. 331 až 344 se připraví prasečí stria tální membrány. Pro značení jak A^ , tak i A^ receptorů se použije neselektivní agonist adenosinových receptorů. ^H-NECA. Inhibiční koncentrace ΙΟ,-θ se odvodí z vytěsňovacích křivek přizpůsobením nelineární křivky získané metodou nejmenších čtverců Langmuirově rovnici, načež se vypočtou hodnety pK .

P

Získaná výsledky jsoa uvedené v následující tabulce, přičemž v souladu s literarurou produkt CPA vykazuje potsntní a vysoce selektivní vytěsňovací účinnost z vazby k A^-recepto rum, produkt CV 1808 je relativně slabým avšak selektivním A^-receptorovým ligandem a produkt CGS 21680 vykazuje vysokou potenci a selektivitu pro receptory A£. Sloučenina č.7 ve formě 1,5-hydrátu vykazuje dobrou afinitu a vysokou selektivi tu pro receptory A₁.

Tabulka

Afinita adenosinových receptorových ligandů vůči receptorům

	A1 (KD;nM)	A2 ’(K0;nM)	A1 :A2 selektivita n
CPAa	0,74 + 0,01	33 + 110	1260	6
CV 1808a	2460 + 757	269 + 70	0,1	5
CGS.21680a	4360 + 1080	10 + 4	0,004	4
Sloučenina č.7	23 i 2	24500+ 5160	1090	5

CPA^a = cyklopentyladenosin

CV 1808^a - 2-fenylaminoadenosin (Carbohydrates sv.81 (1974) ref. 91898 K)

CGS 21680^a = 2-/p-(2-karboxyethyl)fenethylamino/-5/-N-ethylkarboxaaiidoadenosin (FASEB J, 1989, 3 (4), ref. 4770 a 4773) .

b) Arytmie

Aktivace adenosinových receptoru snižuje výskyt supraventrikulární tachykardie a ostatních arytmií. Použitá těsto vací metoda byla popsána Clarke-m a kol. v The Pharmaceutical Journal , sv. 244, 595 až 597 (1990). Při tomto testu se slou cenina č. 7 použije ve formě 1,5 hydrátu.

c) Střední arteriální krevní tlak, bradykardie a periferní vasodilatace u anestetizovaných krys

Tento test byl proveden za použití krysích samečku Wistar s tělesnou hmotností 300 až 350 g (323 + 3 g), anestetizovaných inaktinem (150 mg/kg, intraperitoneálně), přičemž se postupuje podle metodiky, popsané Schroeder-em a kol. (Measurement of the cardiodynamics, haemodynamics and the ECG in the anesthetized rat, effects of catecholamines (dopamine and isoproterenol) in Budden et al. The Rat Electrocardiogram in Pharmacology and Toxicology Oxford Pergamon Press 1981, 155-9). Katetry byly umístěny do pravé jugulární a pravé femorální žíly, do levé srdeční komory (zaveden přes karotidu), do levé femorální arterie a aorty (zaveden přes pravou femorální arterii). Při testu byly meřeny nebo vypočteny následující proměnné veličiny: systolický, diastolický a střední arteriální krevní tlak (mm Hg, levá femorální arterie, Stathamúv snímač tlaku P 23 Gb), pulsní. tlak (mm Hg), puls (počet tepů za minutu;, odvozen z křivky krevního tlaku), rychlost vzrůstu levého ventrikulárního tlaku (dP(dt , mm Hg/s; Stathamúv snímače’tlaku P 23 Gb), srdeční výstup (ml/min/100 g tělesné hmotnosti, tepelně zřeďovací metoda, pravá jugulární žíla a aorta), totální periferní resistence (dyn.s.cm~⁵/100 g tělesné hmotnosti), ECG III. Arteriální krevní tlak, dP/dt , max puls a elektrokardiogram se kontinuálně zaznamenávají za použití Schwarzerova polygrafu^ Uvedené parametry se měří 30, 20, 10 a 2 minuty před podání testované látky a 1, 10, 30 a 60 minut po injekci testované látky do pravé femorální žíly. Sloučenina Č.7 ve formě 1,5-hydrátu se testuje v dávkách 0,003, 0,01 a 0,03 mg/kg, přičemž se pro každou dávku testované sloučeniny použije pět pokusných, zvířat.

d) Průtok krve skrze ischemický skeletový sval

Krysí samečkové s normálním krevním tlakem (s tělesnou hmotností asi 300 g) se anestetizují produktem Evipan Na (160 mg/kg, i.o.), načež se jim podváže pravá femorální arterie. Tři týdny po tomto podvázání se krysy anestetizují penthotalem (Thiopental-Na, 40 mg/kg, intraperitoneálně), načež s umístí do speciální konzoly pro měření rezonancí fosfokreatinu (PCr), anorganického fosfátu (Pí), tří fosfátů ATP a fosfomonoesterů a cukerných fosfátů (PM) použitím spektrometru Bruker Biospec 47/15, vybaveného 4,7 T-horizontálním magnetem (15 cm světlý otvor). Přívod krve do pravé zadní nohy byl potom dočasně zastaven na dobu asi 30 až 40 minut turniketem, umístěným okolo vrchní části uvedené nohy až do okamžiku, kdy hodnota PC klesne na asi 1/3 původního stavu. Potom se obnoví přívod krve a sleduje se rychlost restaurace (7^) PC. Třicet minut později se stejný postup opakuje bez a po intravenózním podání testované sloučeniny, tj. sloučeniny č.7 ve formě

1,5-hydrátu, přičemž se opět sleduje rychlost restaurace PC (7^). Poměr obou restauračních časů (T^/Tt,) je považován za kritérium pro vyhodnocení účinku testované sloučeniny na periferní cirkulaci. Některá, pokusná zvířata byla testována sympatetickým. neurotoxin-6-hydroxydopaminem v okamžiku podvázání femorální arterie, přičemž byly stanoveny účinky sloučeniny č.7 ve formě 1,5-hydrátu na uvedeným způsobem indukovanou periferní vaskulární insuficienci.

e) Glukosový transport v krysích adipocytech

Adipocyty se izolují z epididymálních tukových polštářů normálně krmených krys digesci kollagenázou. Buňky (finální koncentrace 2 % hmotnosti) se preinkubují s adenosin-deaminázou (1 U/ml), testovanými sloučeninami, například sloučeninou č.7 ve formě 1,5-hydrátu a dalších přísad po dobu 30 minut při teplotě 37 °C. Potom se přidá /3-^H/-glukóza (finální koncentrace 50/uM, 0,5/UCi/ml) a v inkubaci se pokračuje po dobu dalších 60 minut. Inkorporace radioaktivity z /3-^H/-glukózy do buněčných lipidů (míra transportu glukózy) byla vyhodnocena extrakcí buněčné suspenze (0,5 ml) s 5 ml scintilačního činidla na bázi toluenu a potom scintilačním vy20 hodnocením uvedené kapalného scintilačního činidla; ve vodě rozpustné metabolity a zbylá /3-^H/-glukóza zůstanou ve vodné fázi a nejsou detekovány.

f) Dyslipidemie charakterizovaná zvýšenou hladinou triglyceridů v krevním séru

Některé výzkumné studie'prokázaly positivní vazbu mezi hladinou triglyceridú v krevním séru a výskytem koronárního srdečního onemocnění (CHD - coronary heart disease) (Grundy v Cholesterol and Atherosclerosis: Diagnosis and Treatment, Lippincott, Philadelphia (1990). Možnost snížení rizika koronárního srdečního onemocnění snížením zvýšené hladiny triglyceridů v krevním séru vyplývá z Helsinki Heart Study, kde bylo po léčení gemfibrozilem dosaženo největšího omezení vážných koronárních příhod u hyperlipidemických pacientů typu IIB, u kterých byla zvýšena hladina jak LDL-cholesterolu, tak i celkových triglyceridú y krevním séru.. Sloučenina č„ 7 ve formě

1,5-hydrátu způsobuje výrazný a dlouhodobý pokles hladiny volných mastných, kyselin a triglyceridú. u opic.

g) Ochrana proti infarktu prekondicionací

Prekondicionace (5 minut ischemie následovaných 10 minutami regenerace) činí srdce velmi resistentním vůči infarktu způsobenému ischemií. Příslušná testovací metoda je popsána v článku G.S. Liu a kol- zveřejněném v Circulation. 84, 1, 350 až 356 (1991). Při tomto testu se použije sloučenina č. 7 ve formě 1,5-hydrátu.

JODr. Jarmila Trapfovd

Claims (12)

1. PATENTOVÉ

   TJ

   X)

   I O -'~ ¹ 03 ¹ <_ ' j m >> < *“ | -< m .4 -<

   NÁROKY o

   VAO

   XJ rc wT

   -J

   1 .

   ce I

   Použití 2'-0-alkyladenosi.nových derivátů obecného vzorKN ve kterém r1 znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy, allylovou skupinu, methallylovou skupinu, přímou nebo rozvětvenou alkinylovou skupinu se 3 až 7 uhlíkovými atomy, cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 uhlíkovými atomy, fenvlovou skupinu, která je nezávisle mono- nebo disubstituována atomem halogenu s atomovým číslem 9 až 35, alkylovou skupinou s 1 až 4 uhlíkovými atomy, alkoxylovou skupinou s 1 až 4 uhlíkovými atomy nebo trifluormethylovou skupinou, nebo fenylalkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy a jejíž fenylový kruh je případ22 ně nezávisle mono- nebo disubstituován atomem halogenu s atomovým číslem 9 až 35, alkylovou skupinou s 1 až 4 uhlíkovými atomy, alkoxylovou skupinou s 1 až 4 uhlíkovými atomy nebo trifluormethylovou skupinou, alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy mající alespoň jednu hydroxylovou skupinu nebo alespoň dvě fenylové skupiny, bicykloalkylovou skupinu, naftylalkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, acenaftylenylalkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy nebo skupinu obecného vzorce II nebo obecného vzorce III ve kterých

   Z znamená atom vodíku, hydroxylovou skupinu nebo alkoxylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy,

   Q znamená atom vodíku nebo hydroxylovou skupinu,

   A znamená skupinu -CH₂~, -0-, -S- nebo přímou vazbu, n znamená číslo 1 až 3 a přerušovaná čára v obecném vzorci II znamená případnou vazbu,
2. 2 , '

   R znamena atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy, aminovou skupinu, cykloalkylovou skupinu se 3 až 5 uhlíkovými atomy nebo atom halogenu s atomovým číslem 9 až 35 a znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy, nebo jejich hydrátů nebo adičních produktů s ostatními rozpouštědly nebo solí pro přípravů léčiva vhodného pro léčení neurodegenerativních poruch, některých periferních neuropatií, například diabetické neuropatie, a poruch spojených s periferním vaskulárním onemocněním á/nebo poruch spojených s neuronální degenerací, hypertriglyceridemie, zvýšeného obsahu volných mastných kyselin a/nebo cukrovky typu I a typu II a arytmií a pro ochranu proti infarktu myokardu.

   2. Použití podle nároku 1 sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R₁ znamená cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 uhlíkovými atomy, R^ znamená atom vodíku a R^ znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy.
3. 3. Použití podle nároku 2 sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R₁ znamená cyklohexylovou skupinu, R^ znamená atom vodíku a R^ znamená methylovou skupinu.
4. 4. Použití sloučeniny obecného vzorce Ia

   HO ve kterém znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy mající případně alespoň jednu hydroxylovou skupinu nebo alespoň dvě fenylové skupiny, bicykloalkylovou skupinu, naftvlalkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkově atomy, acenaftylenylalkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy nebo skupinu obecného vzorce II nebo obecného vzorce ΙΙΓ ve kterých

   Z, Q, A, Y a n mají významy definované v nároku. 1 a

   R^a znamená atom vodíku, aminoalkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy nebo atom halogenu s atomovým číslem 9 až 35 a

   R^a znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy, nebo jejího hydrátu nebo adičního produktu s ostatními rozpouštědly nebo solí pro přípravu léčiva vhodného pro snížení vysoké hladiny krevních lipidů.

   Farmaceutická kompozice, vyznačená tím, že
5. 5.

   obsahuje terapeuticky účinné množství sloučenin/obecného vzorce I podle nároku 1 a její farmaceuticky přijatelný nosič a že je vhodná pro léčení neurodegenerativních poruch, některých periferních neuropatií, například diabetické neuropatie, a • poruch spojených s periferním vaskulárním onemocněním a/nebo poruch spojených s neuronální degenerací, hyperglyceridemie, zvýšeného obsahu volných mastných kyselin a/nebo cukrovky typu I a typu Ilaarytmiía pro ochranu proti infarktu myokardu.
6. 6. Farmaceutická kompozice, vyznačená tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství sloučenirty obecného vzorce Ia podle nároku 4 a její farmaceuticky přijatelný nosič a že je vhodná pro snížení vysoké hladiny krevních lipidů.
7. 7. 6-Cyklohexyl-2'-O-methyladenosinhydrát.
8. 8. 6-Cyklohexyl-2'-O-methyladenosinhydrát podle nároku 7, vyznačený t í m ,. že je 1,5-hydrátem^.,
9. 9. Způsob přípravy 6-cyklohexyl-2 -O-methyladenosinhydrátu podle nároku 7,vyznačený tím, že se S-cyklohexyl-2'-O-methyladenosinmonoetherát nechá vykrystalizovat z vadného rozpouštědla.
10. 10. Způsob přípravy 1,5-hydrátu 6-cyklohexyl-2 -O-methyladenosinu podle nároku 8,vyznačený tím,že se ^b 6-cyklohexyl-2'-Q -methyladenosinmonoetherát nechá vykrystalizovat ze směsi ethylalkoholu a vody.

    *
11. 11. Použití 6-cyklohexyl-2'-O-methyladenosinhydrátu pro přípravu léčiva vhodného pro léčení vysokého krevního tlaku, onemocnění vyžadujících koronární vasodilatátory, pro inhibici agregace trombocytů a aktivace leukocytů, pro snížení hladiny krevních lipidů, proti kongestivní srdeční nedostatečnosti, infarktu myokardu, náhlé srdeční zástavě a renální insuficienci, dále pro léčení neurodegenerativních poruch, některých periferních neuropatií, například diabetické neuropatie, a poruch spojených s periferním vaskulárním onemocněním a/nebo poruch spojených s neuronální degenerací, hypertriglyceridemie, zvýšené hladiny volných mastných kyselin a/nebo cukrovky typu I a typu II a arytmií a pro ochranu proti infarktu myokardu.
12. 12. Farmaceutická kompozice ,vyznačená tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství 6-cyklohexyl-2'-O-methyladenosinhydrátu a jeho farmaceuticky přijatelný nosič a že je vhodná pro léčení vysokého krevního tlaku, onemocnění vyžadujících koronární vasodilatátory, 'pro inhibici agregace trombocytů a aktivace leukocytú, pro snížení hladiny krevních lipidů, proti kongestivní srdeční nedostatečnosti, infarktu myokardu, náhlé srdeční zástavě a renální insuficienci, dále pro léčení neurodegenerativních poruch, některých periferních neuropatií, například diabetické neuropatie, a poruch spojených s periferním vaskulárním onemocněním a/nebo poruch spojených s neuronální degenerací, hypertriglyceridemie, zvýšené hladiny volných mastných kyselin. a/nebo cukrovky typu I a typu II a arytmií a pro. ochranu proti infarktu, myokarduZastupuje : __

    ÍL CtUxA

    9ODr. Jarmila Tráplovd