CZ115398A3 - Přípravky a způsoby pro léčbu deficitních stavů kostí - Google Patents

Přípravky a způsoby pro léčbu deficitních stavů kostí Download PDF

Info

Publication number
CZ115398A3
CZ115398A3 CZ981153A CZ115398A CZ115398A3 CZ 115398 A3 CZ115398 A3 CZ 115398A3 CZ 981153 A CZ981153 A CZ 981153A CZ 115398 A CZ115398 A CZ 115398A CZ 115398 A3 CZ115398 A3 CZ 115398A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
bone
compound
substituted
compounds
alkyl
Prior art date
Application number
CZ981153A
Other languages
English (en)
Inventor
Charles Petrie
Mark W. Orme
Nand Baindur
Kirk G. Robbins
Scott M. Harris
Maria Kontoyianni
Laurence H. Hurley
Sean M. Kerwin
Gregory R. Mundy
Original Assignee
Zymogenetics, Inc.
Osteoscreen, Inc.
Board Of Regents University Of Texas System
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zymogenetics, Inc., Osteoscreen, Inc., Board Of Regents University Of Texas System filed Critical Zymogenetics, Inc.
Publication of CZ115398A3 publication Critical patent/CZ115398A3/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
    • A61K31/549—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame having two or more nitrogen atoms in the same ring, e.g. hydrochlorothiazide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

Oblast techniky:
Vynález se týká přípravků a způsobů pro použití pro omezení nežádoucí kostní ztráty u obratlovců při nebezpečí takové ztráty kosti, při léčení stavů, které jsou charakterizovány nežádoucí kostní ztrátou nebo potřebou růstu kosti, při léčení zlomenin a při léčení potíží chrupavky. Ještě přesněji se vynález týká použití konkrétní třídy sloučenin identifikovaných nebo charakterizovaných vysokou výkonností testovacích vyšetření.
Dosavadní stav techniky:
Kost není statická tkáň. Je předmětem stálého odbourávání a resyntézy v komplexním procesu zprostředkovaném osteoblasty, které produkují novou kost, a osteoklasty, které kost odbourávají. Aktivity těchto buněk jsou řízeny velkým počtem cytokinů a růstových faktorů, z nichž nyní bylo mnoho identifikováno a klonováno. Současné znalosti týkající se těchto faktorů popsal Mundy (Mundy, G.R. Clin Orthop 324:2428, 1996; Mundy, G.R. J Bone Miner Res 8:S505-10, 1993).
Ačkoliv existuje dost informací týkajících se faktorů, které ovlivňují odbourávání a resorpci kosti, informace o růstových faktorech, které stimulují tvorbu nové kosti, jsou mnohem omezenější. Pracovníci výzkumu zkoumali zdroje těchto aktivit, a zjistili, že kostní tkáň sama o sobě je skladištěm faktorů, které mají schopnost stimulovat kostní buňky. A tak extrakty z hovězí kostní tkáně získané z • · · · • ··· · · • · · • · · · j sou také • · · · · ♦ • ··· · · ··· • · · © · · · ♦ _ ······· ······ ·· ·· jatek obsahují nejenom strukturální proteiny, které zodpovědné za udržování strukturní integrity kosti, ale biologicky aktivní růstové faktory, které mohou stimulovat kostní buňky k proliferaci. Mezi těmito druhými faktory jsou tranformující růstový faktor β, růstové faktory vázající se na heparin (kyselý nebo bázický fibroblastový růstový faktor), růstové faktory podobné inzulínu (růstový faktor I podobný inzulínu a růstový faktor II podobný inzulínu) a nedávno popsaná rodina proteinů nazvaná kostní morfogenetické proteiny (bone morphogenetic proteins, BMP) . Všechny tyto růstové faktory působí na další typy buněk, stejně jako na buňky kosti.
BMP jsou novými faktory v široké super-rodině transformujícího růsového faktoru β. Poprvé byly identifikovány v Wozney J. a kol., Science (1988) 242:152834, použitím genových klonovacích technik, které následovaly předchozí popisy charakterizující biologickou aktivitu extraktů z demineralizované kosti (Urist M. Science (1965) 150:893-99). Rekombinantní BMP2 a BMP4 mohou indukovat tvorbu nové kosti, pokud jsou lokálně vstříknuty do subkutánní tkáně krys (Wozney J. Molec Reprod Dev (1992) 32:160-67). Tyto faktory jsou exprimovány normálními osteoblasty při jejich diferenciaci a bylo zjištěno, že stimulují diferenciaci osteoblastu a tvorbu kostních uzlíků in vitro stejně jako tvorbu kosti in vivo (Harris S. a kol., J. Bone Miner Res (1994)9:855-63). Tato druhá jmenovaná vlastnost naznačuje potenciální využitelnost jako terapeutické látky u nemocí, které mají za následek úbytek kosti.
Buňky, které jsou odpovědné za tvorbu nové kosti, jsou osteoblasty. Jak se osteoblasty diferencují z prekurzorů na zralé buňky, tvořící kost, exprimují a vylučují řadu • · · · • · · · • · · o ······· · □ ······ · · · · · · enzymů a strukturálních proteinů kostní matrice, včetně kolagenu typu 1, osteokalcinu, osteopontinu a alkalické fosfatázy (Stein G. a kol. Curr Opin Cell Biol (1990) 2:101827; Harris a kol., (1994), supra). Také syntetizují řadu růst regulujících peptidů, které jsou uloženy v kostní matrici, a jsou pravděpodobně odpovědné za normální tvorbu kosti. Tyto růstově regulační peptidy zahrnují BMP (Harris S. a kol. (1994), supra). Ve studiích primárních kultur fetálních krysích kalvariálních osteoblastů jsou kultivovanými buňkami před tvorbou mineralizovaných kostních uzlíčků exprimovány BMP 1, 2, 3, 4 a 6 (Harris S. a kol. (1994), supra}. Podobně jako alkalická fosfatáza, osteokalcin a osteopontin jsou BMP exprimovány kultivovanými osteoblasty při jejich proliferaci a diferenciaci.
Ačkoliv jsou BMP účinnými stimulátory tvorby kosti in vitro i in vivo, má jejich použití jako terapeutických činidel pro zlepšení hojení kostí nevýhody. Receptory kostních morfogenetických proteinů byly identifikovány v mnoha tkáních a BMP samy o sobě jsou exprimovány v široké škále tkání ve specifických časových a prostorových schématech. To naznačuje, že BMP mohou působit na řadu jiných než kostních tkání, a potenciálně omezuje možnost jejich využití jako terapeutických látek při systemickém podávání. Navíc, jelikož jsou to peptidy, musely by být podávány pomocí injekcí. Tyto nevýhody ukládají řadu omezení na rozvoj BMP jako terapeutických činidel.
Je velice mnoho stavů, které jsou charakterizovány potřebou zvýšit kostní tvorbu. Pravděpodobně nej zřejmější je případ zlomeniny kosti, kde by bylo potřeba stimulovat růst kosti a urychlit a dokončit obnovu kosti. Látky, které zlepšují tvorbu kosti, mohou být rovněž užitečné při • · • · ·· postupech obličejových rekonstrukcí. Jiné stavy s kostním deficitem zahrnují defekty segmentů kostí, onemocnění periodontu, metastatické onemocnění kostí, osteolytickou chorobu kosti a stavy, kdy by prospěla úprava pojivové tkáně, jako je hojení nebo regenerace defketů nebo zranění chrupavky. Rovněž velký význam mají chronické stavy osteoporozy, včetně osteoporozy spojené se stářím a osteoporozy spojené s postmenopauzálním hormonálním obrazem. Další stavy charakterizované potřebou růstu kostí zahrnují primární a sekundární hyperparathyreoidismus, osteoporozu z nepoužívání, osteoporozy spojené s diabetes a osteoporozy spojené s glukokortikoidy. Dále nebo alternativně mohou sloučeniny podle předloženého vynálezu upravovat metabolismus, proliferaci a/nebo diferenciaci normálních nebo aberujicích buněk nebo tkání.
V současnosti neexistuje žádný úspěšný farmaceutický přístup ke zvládnutí těchto stavů. Zlomeniny kostí se léčí výlučně použitím sádrových obvazů, dlah, upínacích zařízení a dalších striktně mechanických prostředků. Další zhoršeni stavu kostí spojená s postmenopauzální osteoporozou se snižují nebo preventivně ošetřují estrogeny nebo bisfosfonáty.
j sou deriváty sloučenin, kterou lze považovat za
Patent US 5 280 040 popisuje třídu
3,4-diarylchromany. Tyto sloučeniny
2,3,4-trifenylbutanolu, kde hydroxyskupina v poloze ether s ortho-polohou fenylskupiny substituované butanolu. Výchozí 3,4-diarylchromany neobsahují dusíkové tvoří spojovacích skupinách centchroman, obsahuje ze substituentů na poloze aromatických nebo jejich atomy. Výhodná sloučenina, substituent pouze v jednom skupině. Tyto sloučeniny jsou popsané v patentu US jako vhodné pro léčení osteoporozy.
dusíkový fenylové 5 280 040 v
v
Předložený vynález popisuje sloučeniny vhodné pro omezeni nebo léčeni deficitních stavů spojených s kostmi a další použití, které by mělo být odborníkovi v dané oblasti z uvedených skutečností zřejmé.
Podstata vynálezu:
Vynález poskytuje sloučeniny, které mohou být podávány jako standardní léčiva a které mají metabolický účinek na zlepšení růstu kostí. Sloučeniny podle vynálezu lze identifikovat pomocí testů na jejich schopnost aktivovat řídící prvky spojené s těmito faktory. Vynález je tedy veden na způsoby a prostředky pro stimulaci růstu skeletální (kostní) tkáně, kdy metody a kompozice používají jako účinné látky sloučeniny, kde jsou dva aromatické systémy spojeny tak, aby byly od sebe vzdáleny asi 1,5 až asi 15 angstrómů. Takto spojené systémy (včetně linkeru, který je váže) zahrnuji alespoň jeden atom dusíku jiný, než substituent kruhu.
Lze tudíž sloučeniny vhodné podle vynálezu popsat jako sloučeniny vzorce Ar1 - linker - Ar2, kde každý ze symbolů Ar1 a Ar2 je nezávisle aromatický systém a spojující část vzorce udržuje vzdálenost Ar1 a Ar2 průměrně 1,5 až 15 angstrómů od sebe. Ar1 a Ar2 a linker mohu být výhodně substituovány neinterferujícími substituenty. Ve vhodných sloučeninách může být buď v Ar^, Ar2 a/nebo linkeru alespoň jeden dusíkový atom, nezávisle na jiných substituentech. Výhodně také obsahují sloučeniny podle vynálezu alespoň jeden další heteroatom vybraný ze skupiny sestávající z N, S a 0, nezávisle na jiném substituentu.
Jiné sloučeniny podle vynálezu zahrnují specifické pětičlenné kruhy se separaci náboje.
Tento vynález je tedy veden na způsoby léčení poruch kosti použitím popsaných sloučenin a farmaceutických přípravků pro toto použití.
Stručný popis výkresů;
Obrázek 1 znázorňuje křivku dávky a odpovědi u sloučeniny, označené 59-0008.
Obrázky 2 a 3 znázorňují sloučeniny podle vynálezu a výsledky, získané s nimi v in vitro testech.
Způsoby uskutečnění vynálezu:
Rychlý screeningový test účinnosti u sloučenin schopných stimulovat expresi reportérového genu spojeného s BMP promotorem (surogát pro produkci kostních morfogenetických faktorů, které jsou produkovány endogenně) je popsán v americké patentové přihlášce č. 08/458,434, podané 2. června 1995, jejíž celý obsah je zde zahrnut jako odkaz. Tento test je rovněž popsán jako součást studie imortalizovaných myších osteoblastů (odvozených z exprimování transgenu složeného z BMP2 promotoru řídícího expresi Tantigenu u myší) v Ghosh-Choudhery, N. a kol., Endocrinology (1996) 137:331-39. V této studii byly imortalizované buňky stabilně transfektovány plazmidem obsahujícím reportérový gen luciferázy řízený myším promotorem BMP2 (-2736/114 bp) , a odpovídaly způsobem závislým na dávce na rekombinantní lidský BMP2.
Stručně řečeno využívá test buňky, transformované • · · · · · · ♦ ··
99· · 99·· 9 9··
999 99 99 999 9·
9· 9 9 9 9 · ♦· ···· ·· ·· ·· ···· permanentně nebo přechodně konstrukty, v nichž je promotor kostního morfogenetického proteinu, konkrétně BMP2 nebo BMP4, spojen s reportérovým genem, typicky luciferázou. Tyto transformované buňky jsou potom vyhodnoceny na produkci produktu reportérového genu; sloučeniny, které aktivuji BMP promotor řídí produkci reportérového proteinu, který může být snadno zjišťován. Této rychlé testovací technice bylo podrobeno přes 40 000 sloučenin, ale pouze velmi malé procento je schopno vyvolat hladinu produkce luciferázy 5krát vyšší, než je množství produkované vehikulem. Sloučeniny, které aktivují BMP promotor, mají společně některé strukturní charakteristiky, nevyskytující se u inaktivních sloučenin. Aktivní sloučeniny (BMP promotoraktivni sloučeniny nebo aktivní sloučeniny) jsou vhodné k podporování růstu kosti nebo chrupavky, a tudíž pro léčení obratlovců při potřebě růstu kosti nebo chrupavky.
BMP promotor aktivující sloučeniny lze testovat v řadě jiných zkoušek, které testují specificitu a toxicitu. Například je možno na reportérový gen navázat ne-BMP promotory nebo reaktivní elementy a vložit do vhodné hostitelské buňky. Je například možno zjišťovat cytotoxicitu vizuálním nebo mikroskopickým pozorováním buněk obsahujících BMP promotor - reportérový gen a/nebo ne-BMP-promotor reportérový gen. Alternativně může být monitorována syntéza nukleové kyseliny a/nebo proteinu buňkami. U in vivo zkoušek mohou být odebírány tkáně a zkoumány vizuálně nebo mikroskopicky, popřípadě ve spojení s barvivý, která usnadňují histologické vyšetření. Při posuzování výsledků in vivo testů může být rovněž vhodné zkoumat biodistribuci testované sloučeniny použitím běžných metod lékařské chemie a zvířecích modelů.
Zde používané termíny omezení nebo omezující a • · • · ·· * · • ··· • ··
léčit nebo léčení jsou vzájemně zaměnitelné termíny. Tyto termíny zahrnují odklad rozvoje symptomů kostního deficitu a/nebo redukci intenzity těchto symptomů, které se budou nebo se očekává, že se budou rozvíjet. Tyto termíny dále zahrnuji zlepšování již existujících symptomů kostního nebo chrupavkového deficitu, prevenci dalších symptomů, zlepšování nebo prevenci metabolických příčin symptomů, prevenci nebo zvrat kostní resorpce a/nebo podporu kostního růstu. Tyto termíny označují, že bylo dosaženo příznivých výsledků u ošetřených obratlovců s chrupavkovým, kostním nebo skeletálním deficitem nebo s možností rozvoje takového deficitu.
Kostním deficitem se míní nerovnováha v poměru tvorby kosti k resorpci kosti, taková, že pokud se neupravuje, vykazuje subjekt méně kosti, než je žádoucí, nebo jsou kosti subjektu méně neporušené a soudržné, než je žádoucí. Kostní deficit také může vyplývat ze zlomeniny, z chirurgického zákroku nebo onemocnění zubů nebo periodontu. Poruchami chrupavky se míní poškození chrupavky, méně chrupavky, než je žádoucí, nebo chrupavka, která je méně neporušená a soudržná, než je žádoucí.
Příklady použití sloučenin podle předloženého vynálezu zahrnují: opravy kostních vad a nedostatku, jako jsou ty, které nastávají v uzavřených, otevřených a roztříštěných zlomeninách; profylaktické použití u repozice uzavřených a otevřených zlomenin; podpora hojení kostí v plastické chirurgii; stimulace kostního vrůstání do necementovaných protetických kloubů a dentálních implantátů; zvýšení horního obsahu kostní hmoty u premenopauzálních žen; léčení nedostatečnosti vzrůstu; léčení onemocnění a defektů periodontu a jiné postupy oprav zubů; zvyšování tvorby kosti • · · • ··· • · • · •·9· 9 9
99
9 9
9 999
9 9 během distrakční osteogeneze; a léčení jiných skeletálnich vad, jako je osteoporoza způsobená věkem, postmenopauzálni osteoporoza, glukokortikoidy indukovaná osteoporoza nebo osteoporoza z nepoužívání a artritida. Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být rovněž vhodné pro nápravu vrozených, úrazem indukovaných nebo chirurgických resekcí kosti (například při léčení rakoviny) , a v kosmetické chirurgii. Dále lze použít sloučeniny podle vynálezu pro omezení nebo léčení chrupavkových vad a poruch, a mohou být užitečné při hojení ran nebo opravě tkáně.
Nedostatky nebo vady kosti nebo chrupavky mohou být léčeny u obratlovců podáváním sloučenin podle vynálezu, které vykazují některé strukturální a funkční charakteristiky. Přípravky podle vynálezu mohu být podávány systemicky nebo lokálně. Pro systemické užití jsou sloučeniny podle vynálezu formulovány pro parenterální (například intravenózní, subkutánní, intrámuskulární, intraperitoneální, intranasální nebo transdermální) nebo enterální (například orální nebo rektální) dávkování běžnými postupy. Intravenózní podání může probíhat řadou injekcí nebo kontinuální infuzí po delší dobu. Podání injekcemi nebo jinými cestami jednotlivě balených podání se může provádět v intervalech od jednou týdně po jednou až třikrát denně. Obdobně lze podávat zde popsané sloučeniny cyklickým způsobem (podání popsané sloučeniny; následné nepodávání; následuje podání popsané sloučeniny, a pod). Léčení pokračuje, dokud není dosaženo požadovaného výstupu. Obecně zahrnují farmaceutické přípravky sloučeninu podle předloženého vynálezu ve spojení s farmaceuticky přijatelným nosičem, jako je fyziologický roztok, pufrovaný fyziologický roztok, 5% dextroza ve vodě, borátový fyziologický roztok obsahující stopy kovů nebo podobně. Přípravky mohou dále zahrnovat jednu nebo více pomocných látek, konzervačních
• · • · «· • · 99 99
• · • • 9 9 9 9 9 ·
• • 99 • ♦ 9 99 9 9 9 9
• 9 * 9 9 9 9 9 9 999 9 9
• • ♦ • 9 9 9 9 9 9
···· • · ·· 9 9 9 9 9 9
prostředků, prostředků pro zvýšení rozputsnosti, pufrovacích látek, albuminu k zabránění ztrát proteinu na povrchu lékovky, mazadel, plniv, stabilizátorů a podobných. Způsoby přípravy jsou ze stavu techniky dobře známé a jsou popsány například v Remingtonxs Pharmaceutical Sciences, ed. Gennaro, Mack Publishing Co., Easton Pa, 1990, který je zde začleněn jako odkaz, předloženého apyrogenních
Farmaceutické přípravky pro použití podle vynálezu mohou být ve formě sterilních, kapalných roztoků nebo suspenzí, potažených kapslí, čípků, lyofilizovaných prášků, transdermálních náplastí nebo jiných forem známých ze stavu techniky. Lokální podání může být injekcí na místě poškození nebo defektů, nebo vložením nebo připojením pevného nosiče na místě, nebo přímou topickou aplikací viskozní kapaliny nebo podobně. Pro lokální podání poskytuje nosič výhodně matrici pro růst kosti nebo chrupavky, a ještě výhodnější je nosič, který může být subjektem absorbován bez nepříznivých účinků.
Dávkování těchto sloučenin na zraněná místa se může vylepšit použitím přípravků s řízeným uvolňováním, jaké jsou popsány v neukončené americké patentové přihlášce č. 07/871246 (odpovídající WIPO zveřejněné přihlášce WO 93/20859, která je zde zahrnuta svým obsahem jako odkaz). Filmy tohoto typu jsou zejména vhodné jako povlaky pro protetické součásti a chirurgické implantáty. Tyto filmy mohou být například obaleny kolem vnějšího povrchu chirurgických šroubů, drátů, hřebů, destiček a podobných. Implantovatelné přípravky tohoto typu se v ortopedické chirurgii běžně používají. Filmy se mohou rovněž použít pro povlak kostních výplňových materiálů, jako jsou hydroxyapatitové bloky, demineralizované zátky kostní matrice, kolagenové matrice a podobné. Obecně se filmy nebo součásti, jak jsou zde popsané, aplikují na kost v místě fraktury. Aplikace probíhá obvykle implantací do kosti nebo
9··· • · · • 999
9· · ··
9»····
999 9
99
9999
9 99 · ··
9«··
99··
9 ·♦ • 999 * ··· · · • · ·
9999 připojením na povrch použitím standardních chirurgických postupů.
Spolu s kopolymery a nosiči uvedenými výše mohou biodegradovatelné filmy a matrice zahrnovat další účinné nebo inertní složky. Zvláštnímu zájmu se těší ty látky, které podporují růst tkáně nebo infiltraci, jako růstové faktory. Příkladné růstové faktory pro tyto účely zahrnují epidermální růstový faktor (EFG), fibroblastový růstový faktor (FGF), růstový faktor pocházející z trombocytů (PDGF), transformující růstové faktory (TFG), parathyroidní hormon (PTH), inhibiční faktor leukemie (LIF), a růstové faktory podobné inzulínu (IGF) a podobné. Látky, které podporují růst kosti, jako jsou kostní morfogenetické proteiny ( patent US 4 761 471; PCT publikace WO 90/11366), osteogenin (Sampath a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA (1978) 84:7109-13) a NaF (Tencer a kol., J. Biomed. Mat. Res. (1989) 23: 571-89) jsou také preferovány. Biodegradovatelné filmy nebo matrice,, zahrnují síran vápenatý, fosforečnan vápenatý, hydroxyapatit, kyselinu polymléčnou, polyanhydridy, kostní nebo dermální kolagen, čisté proteiny, složky extracelulární matrice a podobné a jejich kombinace. Tyto biodegradovatelné materiály se mohou použít v kombinaci s nebiodegradovatelnými materiály k zajištění požadovaných mechanických, kosmetických vlastností nebo vlastností rozhraní tkáně nebo matrice.
Alternativní postupy dodávání sloučenin podle předloženého vynálezu zahrnují použití osmotických minipump ALZET (Alza Corp., Palo Alto, CA); materiály matrice se stálým uvolňováním, jako jsou popsány Wang a kol. (PCT publikace WO 90/11366); elektricky nabité perličky dextranu, jak jsou popsány Bao a kol., (PCT publikace WO 92/03125);
·· ·· • · ♦ * • · ·· • · · • ·· dávkovači systémy na bázi kolagenu, například jako jsou popsány Ksanderem a kol. , Ann. Surg. (1990) 211(3):288-94; systémy methylcelulozového gelu, jak jsou popsány Beckem a kol., J. Bone Min. Res (1991) 6(11): 1257-65; a systémy na bázi alginátu, jak jsou popsány Edelmanem a kol., Biomaterials (1991) 12:619-26 a podobně. Jiné postupy velmi dobře známé ze stavu techniky pro stálé lokální podávání do kosti zahrnují porézní potažené kovové protézy, které mohou být impregnovány, a pevné plastické tyčinky, do nichž jsou zabudovány terapeutické kompozice.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu lze také použít spolu s látkami, které inhibují resorpci kosti. Antiresorpční činidla, jako je estrogen, bisfosfonaty a kalcitonin, jsou pro tyto účely vhodné. Ještě přesněji, sloučeniny zde popsané mohou být podávány po časové období (například měsíce až roky), dostatečné k nápravě stavu kostního deficitu. Když dojde ke srovnání kostního deficitu , může být obratlovci podávána antiresorpční sloučenina k udržení správného stavu kostí. Obdobně mohou být sloučeniny zde popsané podávány s antiresorpční sloučeninou při cyklickém postupu (podání popsané sloučeniny, následuje antiresorpční sloučenina, následuje popsaná sloučenina, a podobně).
V dalších složeních lze použít běžné přípravky, jako jsou ty popsané dále.
Vodné suspenze mohou obsahovat účinnou složku ve směsi s farmaceuticky přijatelnými pomocnými látkami, zahrnujícími suspendační činidla, jako je methylceluloza; zvlhčovači činidla, jako je lecitin, lysolecitin nebo mastné alkoholy s dlouhými řetězci. Uvedené vodné suspenze mohou rovněž obsahovat konzervační látky, barviva, ochucovadla a sladidla, v souladu s průmyslovými normami.
• · · • · ·· · • · · · · • · · ·· ··
Přípravky pro topické a lokální aplikace zahrnují aerosolové spreje, lotiony, gely a mastě ve farmaceuticky přijatelných nosičích, které mohou zahrnovat nižší alifatické alkoholy, polyglykoly, jako je glycerol, polyethylenglykol, estery mastných kyselin, oleje a tuky a silikony. Přípravky mohou dále obsahovat antioxidanty, jako je kyselina askorbová nebo tokoferol, a konzervační látky, jako estery kyseliny phydroxybenzoové.
Parenterální přípravky zahrnují zejména sterilní nebo sterilizované produkty. Injekční kompozice mohou být vytvořeny s obsahem účinné sloučeniny a některého ze známých injekčních nosičů. Mohou obsahovat soli pro úpravu osmotického tlaku.
Pokud je to vhodné, mohou být osteogenní činidla zabudována do liposomů některým z postupů, popsaných pro přípravu liposomů pro použití při léčení různých patogenních stavů. Kompozice podle vynálezu mohou využívat sloučeniny uvedené výše, zabudované do liposomů, k zaměření těchto sloučenin do makrofágů, monocytů, jiných buněk a tkání a orgánů, které přijímají liposomální kompozici. Sloučeniny podle vynálezu, zabudované do liposomů, mohou být využity pro parenterální podání, kde umožňují efektivní využití nižších dávek sloučenin, pro další upřesnění specificity liposomů mohou být dále zabudovány ligandy.
Vhodné běžné postupy přípravy liposomů zahrnují, ale neomezují se na ně, ty, které popsal Bangham, A.D. a kol., J Mol Biol (1965) 23:238-252, Olson, F. a kol., Biochiia Biophys Acta (1979) 557:9-23, Szoka, F. a kol., Proč Nati Acad Sci
USA (1978) 75:4194-4198, Mayhew, E. a kol (1984)
775:169175, Kim, S. a kol. Biochim Biophys Acta (1983)
728:339:348, a Mayer, a kol. Biochim Biophys Acta (1986) 858:161-168.
Liposomy mohou být vyrobeny z předložených sloučenin ve spojení s jakýmkoliv z běžných syntetických nebo přírodních materiálů s fosfolipidovými liposomy, včetně fosfolipidů z přírodních zdrojů, jako jsou vejce, rostlinných nebo živočišných zdrojů, jako je fosfatidylcholin, fosfatidylethanolamin, fosfatidylglycerol, sfingomyelin, fosfatidylserin, nebo fasfatidylinosit. Syntetické fosfolipidy, které se mohou rovněž použít, zahrnují, ale neomezují se na ně: dimyristoylfosfatidylcholin, dioleoylfosfatidylcholin, dipalmitoylfosfatidylcholin a distearoylfosfatidylcholin, a odpovídající syntetické fosfatidylethanolaminy a fosfatidylglyceroly. Cholesterol a jiné steroly, cholesterol hemisukcinat, glykolipidy, cerebrosidy, mastné kyseliny, gangliosidy, sfingolipidy, 1,2bis(oleoyloxy)-3-(trimethylamonio)propan (DOTAP), N-[l-(2,3dioleoyl)propyl-N,N,N-trimethylamoniumchlorid (DOTMA) a další kationtové lipidy mohou být zabudovány do liposomů, jak je odborníkovi známo ze stavu techniky. Relativní množství fosfolipidů a přísad použitých v liposomech se může, pokud je to potřeba, měnit. Výhodná rozmezí jsou od asi 60 do 90 molárních procent fosfolipidů; cholesterol, cholesterol hemisukcinát, mastné kyseliny nebo kationtové lipidy mohou být použity v množstvích, ležících od 0 do 50 molárních procent. Množství předložených sloučenin zabudovaných do lipidové vrstvy liposomů se může měnit s koncentrací lipidů v rozmezí od asi 0,01 do asi 50 molárních procent.
Použitím běžných postupů může být přibližně 20 až 30 % sloučenin přítomných v roztoku zachyceno v liposomech; tedy přibližně 70 až 80 % sloučeniny odchází nevyužito. Naproti • ·
• ♦· ·· · · · • · · ·· ·* tomu, pokud je sloučenina zabudována do liposomů, je do liposomu zabudována prakticky celá sloučenina a v podstatě nezůstává nevyužita žádná účinná sloučenina.
Liposomy s výše uvedeným složením se mohou vyrábět ještě specifičtěji vzhledem ke svým uvažovaným cílům se zabudováním monoklonálních protilátek nebo jiných ligandů, specifických pro cíl. Například monoklonální protilátky k BMP receptoru mohou být do liposomů zabudovány vazbou na fosfatidylethynolamin (PE) zabudovaný do liposomu postupem podle Lesermana, L. a kol., Nátuře (1980) 288:602-604.
Rovněž je uvažováno veterinární použití popsaných sloučenin. Taková použití zahrnují omezení nebo léčení nedostatků nebo poškození kosti nebo chrupavky u domácích zvířat, dobytka a čistokrevných koní. Sloučeniny zde popsané mohou rovněž modifikovat okolí cílové tkáně nebo orgánu, tak, že přitahují buňky tvořící kost na místa, která tyto buňky potřebuj i.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být použity ke stimulaci růstu buněk tvořících kosti nebo jejich prekurzorů, nebo k indukci diferenciace prekurzorů buněk, tvořících kost, a to in vitro nebo ex vivo. Termín buněčný prekurzor, jak se zde používá, označuje buňku, která je určena na dráhu diferenciace, ale která obecně neexprimuje markéry nebo nefunguje jako zralá, zcela diferenciovaná buňka. Zde používané termíny mezenchymální buňky nebo mezenchymální kmenové buňky označují různorodě aktivní progenitorové buňky, které jsou schopné mnohonásobného dělení a jejichž potomstvo dává vznik skeletálním tkáním, včetně chrupavky, kosti, šlach, vazů, dřeně, podpůrné vazivové tkáně a pojivové tkáně (viz A. Caplan J. Orthop. Res. (1991) 9:64150) .
·· ·· • · ··· · • · «· ·
Termín osteogenní buňky,, který se zde používá, zahrnuje osteoblasty a prekurzorové buňky osteoblastů. Přesněji jsou popsané sloučeniny vhodné pro stimulaci buněčné populace obsahující mezenchymální buňky dřeně, čímž se zvyšuje počet osteogenních buněk v této buněčné populaci. Ve výhodném postupu se z buněčné populace odebírají hematopoetické buňky, buď před nebo po stimulaci popsanými sloučeninami. Při praktickém provádění těchto postupů mohou osteogenní buňky expandovat. Expandované osteogenní buňky mohou být dodány infuzí (nebo reinfuzí) obratlovci, který je potřebuje. Například vlastní mezenchymální kmenové buňky subjektu mohou být vystaveny působení sloučenin podle vynálezu ex vivo, a získané osteogenní buňky mohou být vneseny nebo řízeny na požadované místo uvnitř subjektu, kde nastane další proliferace a/nebo diferenciace osteogenních buněk bez imunitního odmítnutí. Obdobně mohou být buněčnou populací vystavenou popsaným sloučeninám imortalizované lidské fetální osteoblastové nebo osteogenní buňky. Pokud jsou takové buňky dodány infuzí nebo implantovány obratlovci, může být výhodné tyto nevlastní buňky podrobit „imunoochraně nebo provést imunosupresi (výhodně lokálně) příjemce pro zlepšení transplantace a opravy kosti nebo chrupavky.
Podle předloženého vynálezu je účinné množství kompozice takové množství, které poskytne statisticky významný účinek. „Účinné množství pro terapeutické účely je například množství kompozice, obsahující účinnou sloučeninu podle vynálezu, potřebné k poskytnutí klinicky významného zlepšení rychlosti uzdravování při nápravě zlomeniny, zvratu kostní ztráty u osteoporozy; zvratu u poškození nebo chorob chrupavky, prevenci nebo zdržení vypuknutí osteoporozy; stimulaci a/nebo zvýšení tvorby kosti při pseudoartrózách u zlomenin a distrakční osteogenezi; zvýšení
·· ·· • · · · • · ·· ··· · · • · · ·» ·« a/nebo zrychlení růstu kosti na protetických prostředcích; nápravědentálních defektů. Tato účinná množství je možno stanovit použitím rutinních optimalizačních postupů, a jsou závislá na konkrétním stavu, který se má léčit, na stavu pacienta, na cestě podání, složení, mínění praktického lékaře a dalších faktorech, které jsou odborníkovi v oboru zřejmé. Požadovaná dávka sloučeniny podle vynálezu (například při osteoporoze, kdy je požadováno zvýšení tvorby kosti) je manifestována jako statisticky významný rozdíl v kostní hmotě mezi léčenou a kontrolní skupinou. Tento rozdíl kostní hmoty může být nahlížen například jako 5 až 20% nebo větší nárůst kostní hmoty u léčené skupiny. Jiná měření klinicky výrazného zlepšení uzdravování mohou například zahrnovat testy na pevnost v lomu a napětí, pevnost v lomu a torzi, ohyb ve 4 bodech, zlepšenou pojivost v kostní biopsii a jiné biochemické testy známé pro odborníka v oboru. Obecné návody k léčebným režimům se získají z experimentů prováděných na zvířecích modelech předmětných chorob.
Dávkování sloučenin podle vynálezu se bude měnit podle rozsahu a naléhavosti potřeby léčení, účinnosti podávané sloučeniny, celkového zdravotního stavu subjektu a dalších okolností, odborníkovi známých. Obecně se mohou typickému člověku podávat v denních orálních dávkách asi 0,1 mg/kg až 1000 mg/kg, a ještě výhodněji od asi 1 mg/kg do asi 200 mg/kg. Parenterální dávka bude přiměřeně 20 až 100 % orální dávky.
Testovací zkoušky
Osteogenní aktivita sloučenin použitých v postupech podle vynálezu může být ověřena použitím in vitro testovacích postupů, jako je hodnocení transkripce
• · ·· reportétového genu vázaného na promotor spojený s kostním morfogenetickým proteinem, jak je popsáno výše, nebo alternativními postupy, jako jsou následující:
Postup pro testování neonatální myší lebeční klenby (In vitro)
Tato zkouška je podobná testu popsanému Gowenem M. & Mundym G. J Immunol (1986) 136:2478-82. Stručně řečeno se čtyři dny po narození z ICR švýcarských bílých myších mláďat odeberou mikrodisekcí čelní a temenní kosti a rozštěpí se podél sagitálního švu. Kosti se inkubují v BGJb mediu (Irvine Scientific, Santa Ana, CA) plus 0,02% (nebo nižší koncentrace) β-methylcyklodextrinu, přičemž medium také obsahuje testovací nebo kontrolní látku, při 37 °C ve vlhké atmosféře s 5 % CO£ a 95 % vzduchu po dobu 96 hodin.
Potom se kosti odeberou z inkubačního media a fixují se v 10% pufrovaném formalinu po 24 až 48 hodin, odvápňují se ve 14% EDTA po dobu 1 týdne, upraví se alkoholem a vloží se do parafinového vosku. Připraví se 3 pm řezy lebeční kosti. Vyberou se ukázkové řezy pro histomorfometrické posouzení tvorby kosti a kostní resorpce. Změny kosti se měří na sekcích řezaných ve vzdálenosti 200 pm. Osteoblasty a osteoklasty jsou identifikovány na základě své typické morfologie.
Jiný stanovení pomocný účinků ne-BMP.
test se může použít jako kontrolní ke testované sloučeniny zprostředkovaných Například mitogenní aktivita se může měřit zkoušky, kde je element reagující na sérum promotorem použitím testovací (SRE-element) jako promotor a reportérový gen luciferázy.
Konkrétněji mohou tyto testovací zkoušky • · • · · · detekovat cestu přenosu signálu zprostředkovanou přes SRE, jako je cesta proteinkinázy C. Pro tento účel je například vhodný screening SRE-luciferazy osteoblastového aktivátoru a screening SRE-luciferazy mimetika inzulínu. Obdobně může být testována stimulace cest zprostředkovaných elementem odpovídajícím na cAMP (CRE). Například mohou být použity u testů CRE-luciferázy ke stanovení zvýšených hladin cAMP buňky transfektované receptory PTH a kalcitoninu (dvě látky účinné v případě kostí). Tak je možno pomocí těchto typů podpůrných testů zjišťovat specificitu testované sloučeniny pro BMP promotor.
Testováni účinků sloučenin na růst myší lebečni kosti in vivo
Použijí se samci ICR švýcarské bílé myši ve stáří 4 až 6 týdnů a o hmotnosti 13 až 26 g, 4 až 5 myší na skupinu. Test na růst kosti lebečni klenby se provádí postupem, jako je popsán v PCT přihlášce WO 95/24211, která je zde začleněna jako odkaz. Stručně řečeno, testovaná sloučenina nebo vhodné kontrolní vehikulum se injikuje do subkutánní tkáně přes pravou kalvu normální myši. Obvykle je kontrolním vehikulem látka, v níž je sloučenina rozpuštěná, a je to PBS obsahující 5 % DMSO, nebo PBS obsahující Tween (2 μ1/10 ml) . Zvířata jsou 14. den usmrcena a histomorfometrem se změří nárůst kosti. Kostní vzorky pro stanovaní množství se očistí od přiléhající tkáně a fixují se v 10% pufrovaném formalinu 24 až 48 dní, odvápní se ve 14% EDTA po 1 až 3 týdny, zpracují se alkoholem a uloží se do parafinového vosku. Připraví se tří až pěti pm řezy kosti lebečni klenby a vyberou se reprezentativní řezy pro histomorfometrické hodnocení účinků na tvorbu kosti a kostní resorpci. Řezy se měří použitím světlé komory napojené přímo ke sledování mikroskopického φ φ obrazu na digitalizační desce. Změny kosti se měří na sekcích řezaných 200 pm od sebe, přes 4 sousední lxl mm pole na obou, injikovaných a neinjikováných stranách lebeční kosti. Nová kost se identifikuje svou charakteristicky tvořenou strukturou, a osteoklasty a osteoblasty jsou identifikovány svou odlišovací morfologií. Ke zpracováni vstupu v digitální formě pro stanovení počtu buněk a měření plochy nebo obvodů se použije histomorfometrický software (OsteoMeasure, Osteometrix, lne., Atlanta).
Další in vivo testy
Uvedené sloučeniny mohou být dále testovány na nedotčených zvířatech testováním dávkování in vivo. Vzorové dávkování se může provést subkutánním, intraperitoneálním nebo orálním podáním, nebo se může uskutečnit injekci, postupným uvolňováním nebo jinými dávkovacími postupy. Časové období podávání testované sloučeniny se může měnit (například 28 dní je vhodných stejně jako 35 dní ).
Test subkutánního podávání in vivo se může provést například následovně:
V typické studii se 70 samic krys Sprague-Dawley, tři měsíce starých a se souhlasnou hmotností, rozdělí do sedmi skupin s deseti zvířaty v každé skupině. Ta zahrnuje základní kontrolní skupinu zvířat usmrcených na začátku testu; kontrolní skupinu, které se podává pouze vehikulum;kontrolní skupinu ošetřovanou PBS; a pozitivní kontrolní skupinu, které se podává sloučenina ( bez proteinu nebo protein) známá k urychlení růstu kostí. Zbývajícím třem skupinám se podávají tři hladiny dávek testované sloučeniny.
Shrnuto - testovaná sloučenina, pozitivní kontrolní sloučenina, PBS, nebo samotné vehikulum jsou podávány subkutánně jednou denně po dobu 35 dní. Všem zvířatům je vstříknut kalcein devět dní a dva dny před usmrcením ( dvě injekce kalceinu podávané každý určený den). Tělesná hmotnost se měří týdně. Na konci 35-denního cyklu jsou zvířeta zvážena a vykrvácena orbitálním nebo kardiálním propíchnutím. Stanoví se sérový vápník, fosfát, osteokalcin a CBC. Odeberou se obě kosti nohy ( kost stehenní a kost holenní) a lumbální obratle, očistí se od připojené měkké tkáně a uloží se do 70% ethanolu pro vyhodnocení, které se provádí periferní kvantitativní počítačovou tomografií (pQCT; Ferretti, J. Bone (1995) 17:353S-64S) měřením absorpce dvojité rentgenové energie (DEXA; Laval-Jeantet A. a kol., Calcif Tissue Intl (1995) 56: 14-18; J. Casez a kol. Bone and Minerál (1994) 26:61-68) a/nebo histomorfometricky. Takto lze stanovit účinek testovaných sloučenin na přestavbu kosti.
Uvedené sloučeniny mohou také být testovány na zvířatech s akutní ovariektomií ( model prevence) použitím testu dávkování léku in vivo. Tyto zkoušky mohou také zahrnovat jako kontrolní skupinu skupinu léčenou estrogenem. Příkladné subkutánní podávání se provádí následovně:
V typické studii se 80 samic krys Sprague-Dawley, tři měsíce starých a se souhlasnou hmotností, rozdělí do osmi skupin s deseti zvířaty v každé skupině. Ta zahrnuje základní kontrolní skupinu zvířat usmrcených na začátku testu; tři kontrolní skupiny (s napodobením odebrání vaječníku (napodobení OVX) + pouze vehikulum; s odebraným vaječníkem (OVX) + pouze vehikulum; OVX ošetřené PBS) a kontrolní skupinu, které se podává sloučenina známá k urychlení růstu kostí. Zbývajícím třem skupinám OVX zvířat se podávají tři hladiny dávek testované sloučeniny.
• · *·· ···· ·· ···· · · ·· ·· ·· · ·
Jelikož ovariektomie (OVX) vyvolává přejídáni, byla všechna OVX zvířata během 35-denní studie krmena v páru se zvířaty s napodobením OVX. Stručně řečeno byla podávána subkutánně jednou denně po 35 dní testovaná sloučenina, pozitivní kontrolní sloučenina, PBS nebo samotné vehikulum. Obdobně je možno testovanou sloučeninu formulovat do implantovatelných pelet, které se implantují na dobu 35 dní, nebo mohou být podávány orálně, například jako žaludeční sonda. Všem zvířatům, včetně skupin s napodobením OVX a vehikulem a OVX a vehikulem, je vstříknut intraperitoneálně kalcein devět dní a dva dny před usmrcením (dvě injekce kalceinu podávané každý určený den k zajištění správného označení nově vzniklé kosti). Tělesná hmotnost se měří týdně. Na konci 35-denního cyklu se zpracuje krev a tkáně zvířat, jak bylo popsáno výše.
Uvedené sloučeniny se mohou také testovat na zvířatech s chronickým OVX (model léčení). Exemplární protokol léčení pozitivní kostní ztráty u ovariektomizovaných zvířat, který může být použit k posouzení účinnosti anabolických látek, může být následující:
Ve stručnosti: 80 až 100 šestiměsíčních samic krys Sprague-Dawley se podrobí v čase 0 napodobenině chirurgického zákroku (napodobení OVX) nebo ovariektomii (OVX) a 10 krys se usmrtí, aby sloužily jako základní kontrolní vzorky. Tělesná hmotnost se během experimentu zaznamenává týdně. Po přibližně 6 týdnech kostního úbytku (42 dní) se náhodně vybere 10 krys s napodobením OVX a 10 OVX krys a usmrtí se jako kontrolní vzorky doby úbytku. Ze zbývajících zvířat se použije 10 krys s napodobením OVX a 10 OVX krys jako kontrolní vzorky pro ošetření placebem. Zbývající OVX zvířata se ošetřují 3 až 5 dávkami testovaného léčiva po dobu 5 • · φφφφ φ φ φ φ φ φ φ · · φφφφ φφ φφ φφ φφ φφ týdnů (35 dní) . Jako pozitivní kontrolní vzorek může být skupina OVX krys ošetřována látkou, jako je PTH, tj. známým anabolickým činidlem v tomto modelu (Kimmel a kol. Endocrinology (1993) 132:1577-84). Ke stanovení účinků na tvorbu kosti může být postup následující. Vyříznou se a shromáždí kosti stehenní, holenní a lumbální obratle 1 až 4. Proximální levá a pravá kost holenní se použijí pro pQCT měření, pórovitou kostní minerálovou hustotu (BMD) (gravimetrické stanovení) a histologii, zatímco střední část každé holenní kosti se podrobí kortikální BMD nebo histologii. Kosti stehenní se připraví pro pQCT testování střední části před biomechanickým testováním. Co se týká lumbálních obratlů (LV) , LV2 se zpracují pro BMD (může se také provést pQCT); LV3 se preaprují pro histologii neodvápněné kosti; a LV4 se zpraují pro mechanické testování.
Povaha sloučenin vhodných podle vynálezu:
Všechny sloučeniny podle vynálezu obsahují dva aromatické systémy, Ar^ a Ar2, vzájemně oddělené linkerem ve vzdálenosti 1,5-15 Á, a mohou obsahovat alespoň jeden atom dusíku. Oba systémy reprezentované Ar^ a Ar2 mohou obsahovat nerušící substituenty. Nerušící substituenty v aromatickém systému reprezentovaném Ar^ a nerušící substituenty v aromatickém systému reprezentovaném Ar2 jsou zde reprezentovány ve vzorci symboly Ra, respektive R^; ale je pochopitelné, že označení jednoho Ar jako Ar^ a druhého jako Ar2 je libovolné. Pro zjednodušení odkazu je každý označen samostatně; je však zřejmé, že linkery popsané dále, vyjma palindromických, mohou existovat ve sloučeninách v „obráceném pořadí atomů. Obvykle mohou být nerušící substituenty z širokého rozmezí. Mezi substituenty, které neinterferuji s příznivým účinkem sloučenin podle vynálezu «·· ·' · · · φ φ φ * ··· · · φφ« φ · ·· • · * · φ · * φ · ·· · · ♦ • · · ♦ · φ * φφφ • · · · φ · φφ ·· ·» φφ na kosti léčeného subjektu, jsou zahrnuty alkyl (1-6C, výhodně nižší alkyl 1-4C), včetně forem s přímým nebo větveným řetězcem, alkenyl (1-6C, výhodně 1-4C), alkinyl (16C, výhodně 1-4C), z nichž všechny mohou mít přímé nebo větvené řetězce a mohou obsahovat další substituenty; halogeny včetně F, Cl, Br a I; siloxyskupina; OR, SR, NR2, OOCR, COOR, NCOR, NCOOR a benzoyl, CF3, OCF3, SCF3, N(CF3)2, CN, SO, SO2R a SO3R, kde R je alkyl (1-6C) nebo H. Kde jsou v aromatickém systému v sousedních polohách dva substituenty Ra nebo dva substituenty Rb, mohou tvořit kruh. Dále mohou být obsaženy kruhy v substituentech, které obsahují dostatek uhlíkových atomů a heteroatomů.
Výhodné nerušící substituenty zahrnují hydrokarbylové skupiny 1-6C, včetně nasyceného a nenasyceného, lineárního nebo větveného hydrokarbylu, stejně jako hydrokarbylové skupiny obsahující kruhové systémy; halogenskupiny, alkoxyskupiny, hydroxyskupiny, aminoskupiny, monoalkyl- a dialkylaminoskupiny, kde alkylskupiny jsou 1-6C, CN, CF3, a COOR.
Ačkoliv počet substituentů Ra a Rb je obvykle 0-4 nebo 0-5, v závislosti na dostupných polohách v aromatickém systému, zahrnují výhodná provedení ty, kde počet Ra je 0, 1 nebo 2 a počet Rb je 0, 1 nebo 2.
Spojovací skupinou (linkerem) L může být kovalentní vazba nebo jakákoliv skupina, která má valenci alespoň dvě a překrývá lineární vzdálenost od asi 1,5 do asi 15 angstromů, včetně těch, které obsahují cyklické skupiny, které splňují tento prostorový požadavek. Vhodné linkery jsou rozděleny podle zde uvedené definice na tři obecné kategorie: (1) pružné • · ·· ♦ ··· • · · · * · · f • · · · · ··· » · · · · · * 25 ···· ·♦ ·♦ ·· ·♦ . ·· nekonjugující linkery, (2) pružné konjugující linkery, a (3) vázané linkery. Vhodná volba linkeru bude záviset na výběru Arl a Ar2. Ne všechny linkery definované dále jsou vhodné pro všechny kombinace Ar^ a Ar2.
Jak je zde definováno, pružné nekonjugující linkery jsou ty, které spojují pouze jednu pozici Ar^ s jednou pozicí Ar2 a poskytují pouze jednoduchou kovalentní vazbu nebo jednoduchý řetězec mezi Ar1 a Ar2. Řetězec může obsahovat větve, ale nesmí obsahovat π-vazby (s výjimkou ve větvích) nebo cyklické části v řetězci. Atomy linkeru v řetězci samotném rotují volně kolem jednoduchých kovalentních vazeb, a proto má linker více než dva stupně volnosti. Zejména vhodnými ohebnými nekonjugujícími linkery, vedle kovalentní vazby, jsou ty, které mají následující vzorce: -NR-, -CR2-, -S-, nebo -0-, přičemž R je H nebo alkyl (1-6C), výhodněji H nebo nižší alkyl (1-4C) a ještě výhodněji H. Rovněž výhodné jsou ty, které mají vzorec: -NRCO-, -CONR-, -CR2S-, -SCR2-r -OCR2-, -CR20-, -NRNR-, -CR2CR2-, -NRSO2-, -SO2NR-, -CR2CO-, -COCR2- a -NR-NR-CO-CR2- a jeho komplement -CR2-CO-NR-NR-, včetně jejich izosterů. Rovněž výhodné jsou ty, které mají vzorce: -NR(CR2)2NR-, -0(CR2)2^“, včetně jejich izosterů.
Optimální volba linkeru s touto skupinou závisí na povaze Arl a Ar2.
Pružné konjugující linkery jsou ty, které spojují pouze jednu pozici Ar^ s jednou pozicí Ar2, ale zahrnují alespoň jednu dvojnou nebo trojnou vazbu a/nebo jeden nebo více cyklických systémů, a tudíž mají pouze dva stupně volnosti. Pružný konjugující linker může tvořit kompletně konjugovaný vazebný systém π-vazeb mezi Ar^ a Ar2 a tak způsobovat koplanaritu Ar^ a Ar2. Příklady vhodných pružných konjugujících linkerů zahrnují: -RC=CR-; -N=N-; -C=C-; -RC=N~; -N=CR-;
-NR-N=CR; -NR-NR-CO-CR=CR-; a podobné, kde R je H nebo alkyl(1-6C); výhodně H nebo nižší alkyl (1-4C); a ještě výhodněji H.
Vázané linkery jsou ty, které mají více než jeden bod spojení s jiným nebo oběma Ar^ a Ar^ , a proto obvykle umožňují pouze jeden stupeň volnosti. Vázané linkery tvoří nejčastěji spojené 5- nebo 6-členné cyklické části s Ar a/nebo Ar^, kde Ar^ nebo Ar^ mají alespoň jeden substituent vhodně umístěný pro vznik druhé kovalentní vazby s linkerem, např. kde Ar^ je fenylová skupina s reakčním substituentem v poloze orto-, nebo je derivatizován na linker přímo v orto poloze. (Ačkoliv by aromatické části měly být v správně označovány jako fenylen nebo naftylen, používá se v takovýchto případech obecný termín fenyl nebo naftyl, který zahrnuje obě formy těchto částí, monovalentní a bivalentní). Příklady zejména vhodných vázaných linkerů zahrnují
a podobné, kde X je O, N, S nebo CR, a
Y je CR2 nebo C=0.
·· ·· ♦· ··44 • · · · 4 4 4 * 4· * 444 · 4 444 · 444 •4 444 44 44 4444·
4*4 444*444 «444 *4 «4 *· 4444
Mnoho sloučenin, vhodných pro vynález, je komerčně dostupných a mohou být syntetizovány postupy známými ze stavu techniky. Ty sloučeniny vhodné pro tento vynález, které jsou novými sloučeninami, mohou být získány obdobně postupy obecně ze stavu techniky známými.
V jedné skupině sloučenin podle vynálezu je Ar1 substituovaný nebo nesubstituovaný aromatický systém obsahující šestičlenný heterocyklus a sloučeniny vhodné podle vynálezu mají vzorec:
L—Ar2 kde Ra je nerušící substituent;
m je celé číslo 0-4;
každá tečkovaná čára znamená popřípadě π-vazbu;
každé Z je nezávisle N, NR, O, S, CR nebo CR£, kde každé R je nezávisle H nebo alkyl (1-6C);
X je O, S, SO nebo SO2;
L je pružný linker; a
Ar 2 je substituovaný nebo nesubstituovaný 6-členný aromatický kruh.
Skupina zejména výhodných provedení je vzorce:
v němž:
R1 je vybrán ze skupiny: N=NAr, NR^COAr, CONR^Ar, • 99 9 9 9 9 9. 9·
999 9 »999 ♦999 · 9 9 · ♦ · · ♦ ·····
99 · 9 9 ··«.· ** ”
Cř^OAr, CH2NR6Ar, kde Ar je šestičlenný (ne)substituovaný aromatický kruh. Přípustné substituenty na tomto aromatickém kruhu zahrnují:
halogen, nižší alkyl, alkenyl nebo alkinyl s přímým nebo větveným řetězcem, popřípadě substituovaný šestičlenným aromatickým, alkylcyklickým nebo alkenylcyklickým kruhem, hydroxyl, siloxy, acyloxy, nižší alkoxyl s přímým nebo větveným řetězcem, benzoyl, karboalkoxy, karbamoyl, popřípadě substituovaný na dusíku alkylem s nižším řetězcem nebo fenylem, nebo karboxyl, kde r6 je vybrán ze skupiny: vodík nebo nižší alkyl s přímým nebo větveným řetězcem;
r2 a R5 jsou jednotlivě vybrány ze skupiny: H, hydroxy, siloxy, acyloxy, halogen, kyan, nižší alkyl s přímým nebo větveným řetězcem, nebo nižší alkoxyl s přímým nebo větveným řetězcem;
R3 a R4 jsou jednotlivě vybrány ze skupiny: H, halogen, nižší alkyl, alkenyl nebo alkinyl s přímým nebo větveným řetězcem, popřípadě substituovaný šestičlenným aromatickým, alkylcyklickým nebo alkenylcyklickým kruhem, hydroxyl, siloxy, acyloxy, nižší alkoxyl s přímým nebo větveným řetězcem, benzoyl, karboalkoxy, karbamoyl, popřípadě substituovaný na dusíku nižším alkylem nebo fenylem, a karboxy;
X a Y jsou buď: NR3 resp. N; v tomto případě X a Y jsou vázány jednoduchou vazbou, nebo CR9 resp. CRl-θ; v tomto případě X a Y jsou vázány dvojnou vazbou, přičemž
R3 je buď H nebo nižší alkyl;
R9 a R10 jsou jednotlivě vybrány ze skupiny: H, halogen nebo nižší alkyl;
Z je vybrán ze skupiny: 0, S, SO a SO2;
nebo solí těchto sloučenin.
« · · • ··· • ♦ ♦ • · · ·· • · · · ·· ♦· • · ·· «· ·· *· · 9· • ··
9999
Sloučeniny výše uvedeného vzorce I mohou být připraveny různými způsoby, například:
a) zpracováním thiohydrazidů obecného vzorce II, nebo odpovídajících thiohydrazonů, v horké kyselině octové na vzduchu
b) reakcí sloučenin obecného vzorce III s bromem,
III ; nebo
c) zahříváním sloučenin obecného vzorce IV v protickém rozpouštědle,
d)
R5 H s
R\
1 N N 1 1 IV
r3/ FH h
R2
; nebo
reakcí sloučenin obecných vzorců V nebo VI s
hydridem sodným,
; nebo
♦ · ♦ ♦ ·♦ ♦ ·
• · • ♦ • • · • •
• ·♦· • • ··· « · ♦ ·
• • · φ e • • * * ·♦· t •
• • · • · • 9 • »
··· · ·· • ♦ 9· 99 ··
e) reakci sloučenin obecného vzorce VII s bázi,
VII ; nebo
f) vhodným reakcí pyryliových nukleofilem, sloučenin obecného vzorce VIII
VIII kde R2, R3, R4, R5 jsou definovány výše a R je vybrán ze skupiny: Ar, NHAr, NHNHAr, COAr, karboalkoxy-, alkoxy-, NR^COAr, CH2OAr a CI^NR^Ar, kde Ar a R$ jsou stejné, jako je uvedeno výše, volitelně s následnou konverzí některé jedné nebo více skupin R, R2, R3, R4, R^ na nové skupiny R, R2, R3, R4, R$ odebráním chránící skupiny, »· adicí, substitucí nebo eliminací; nebo oxidaci síry na sulfoxid nebo sulfon; a, pokud je to vhodné, konverzí sloučeniny obecného vzorce I na její sůl nebo jejím ,.z její soli.
Příklad:
Difenylthiohydrazon se zahřívá v refluxu kyseliny octové na vzduchu po 30 až 90 minut za vzniku benzothiadiazenu 1.
• · · • · ·· ♦ · · • ··· ·· • · · · ·· ·· •· · · •· ·· ·♦· ·· • ·· ·* ··
Konkrétní příklady sloučenin obecného vzorce I zahrnují: 3-fenylazo-lH-4,1,2-benzothiadizin 2-fenylazo-2H-benzopyran
Jinou skupinou sloučenin vhodných pro použití v postupech podle vynálezu jsou sloučeniny vzorce:
L—Ar2 kde Ra je nerušící substituent;
n je celé číslo 0 a 5;
L je pružný linker, který neobsahuje dusík; a
Ar^ je substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný naftyl.
Zejména výhodnými z této skupiny jsou sloučeniny vzorce:
XXXV v němž r35 je vybrán ze skupiny: H, hydroxy-, alkoxyl, acyloxya silyloxy-;
r36 je buď Ar, nebo COAr, kde Ar je (ne) substituovaný fenyl, v němž jsou vhodné substituenty vybrány ze skupiny: H, hydroxy-, (ne)substituovaný alkoxy-, acyloxy-, siloxy-, (ne)substituovaný alkyl, (ne) substituovaný alkenyl, nebo (ne)substituovaný alkínyl, karboxy-, karboalkoxy-, karbamoyl joň pádně substituovaný na dusíku alkylem s nižším řetězcem, a a ryl;
• · • • · • • · • •
• ··· * · • · · • · ··
* •
• • · • · • * • • •
♦ ·· · ·· ·· • · ♦ ·
r37 je vybrán ze skupiny: H, hydroxy-. alkoxy-, halogen, acyloxy- a siloxyl;
r38 je vybrán ze skupiny: H, hydroxy-, alkoxy-, acyloxy, siloxy-, (ne)substituovaný alkoxy-, acyloxy-, siloxy-, (ne)substituovaný alkyl, (ne)substituovaný alkenyl, a (ne)substituovaný alkinyl, nebo jejich soli.
Sloučeniny obecného vzorce XXXV mohou být připraveny zpracováním acetofenonu obecného vzorce XXXVI s vhodným aldehydem obecného vzorce XXXVII, buď za zásaditých nebo kyselých podmínek,
H
XXXVII nebo zpracováním příslušného alkinu obecného vzorce XXXVIII s halogenidem kyseliny obecného vzorce XXXIX za přítomnosti vhodného katalyzátoru, jako je chlorid hlinitý,
R37 0
H ς=ξ—R3S r3bA<^
XXXVIII XXXIX
nebo zpracováním halogenidů kyselin obecného vzorce XXXIX s (E)-1,2-bis(tri-n-butylcín)ethylenem, nebo s vinylstannanem obecného vzorce XL za přítomnosti vhodného katalyzátoru, například paladiového katalyzátoru.
• · • ·· • · • · · · • · • · ·· (n-Bu)3Sn r35
R36
XL nebo zpracováním acetofenonu obecného vzorce XLI se silnou bázi,
CH3 r36
XLI kde R35, R38, R37 a R38 jsou definovány výše, volitelně s následnou konverzí některé jedné nebo více skupin R33 , R38, R37, R38 na nové skupiny R3^, R38, R37 a R38 odebráním chránící skupiny, konfet? zcrei', adicí, substitucí nebo eliminací; a, pokud je to vhodné, konverzí sloučeniny obecného vzorce XXXV na její sůl nebo jejíbí uVa(nén('m z její soli.
Konkrétní reprezentativní sloučeniny obecného vzorce XXXV zahrnují:
2.4- dimethoxy-2'-hydroxychalkon
1-(2-hydroxyfenyl)-3-(4-methoxyfenyl)propan-1, 3-dion
1.4- dioxo-l,4-difenylbut-2-en
Další skupinou sloučenin vhodných podle vynálezu jsou sloučeniny vzorce:
n
Φ φ φ • φ · φ φφφ φφφφ ·· φ · φ φ φφφφ φ φ φ φ φφ φφ φ φ φ φ φ φφφ φ
φ φ φ φφ φφ kde Ra je nerušící substituent;
n je celé číslo 0 a 5;
L je vázaný linker; a
Ar2 je substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný naftyl.
Zejména výhodnými sloučeninami z této skupiny jsou sloučeniny vzorců IX, XIV a XX, jako následující:
IX v němž:
r11 a r12 jsou jednotlivě vybrány ze skupiny:
H, hydroxy-, Ci_galkoxy~, acetyloxy-, a Ci_i2 (ne)substituovaný alkyl;
R13, R14 a R17 jsou jednotlivě vybrány ze skupiny:
H, hydroxy-, C^-g přímý nebo větvený řetězec alkoxy-, a acetyloxy-;
r!5 je vybrán ze skupiny: Hydroxy-, (ne)substituovaný C^_i2 alkoxy-, C]_i2alkylr (ne)substituovaný alkenyl, a acetyloxy-;
r!6 je vybrán ze skupiny: H, hydroxy-, (ne) substituovaný nižší alkoxy-, acetoxy-, (ne)substituovaný alkyl, a (ne)substituovaný alkenyl;
kde R11, R12 mohou tvořit 5-7členný (ne)substituovaný karbocyklus nebo heterocyklus;
kde R15, R16 mohou tvořit 5-7 členný (ne)substituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh;
χΐ je karbonyl nebo CH2;
a tečkovaná čára může být dvojná vazba, • · • · · · • · • · ·· • ·· v němž přípustné substituenty na výše uvedených substituovaných skupinách zahrnují: nižší alkyl, nižší alkoxyl, hydroxy-, siloxy-, halogen, karboxyl, a aryl, za následujících podmínek:
pokud je karbonyl a pokud r!5 je hydroxy a pokud pouze jeden z R^, R^-2 nebo R13 je hydroxy-, potom alespoň jeden z R14, R16 a R17 musí být jiný než H;
nebo pokud R^3 je alkoxy-, a pokud R^, R^2, r13 společně jsou H, potom R^7 nemůže být ani H ani hydroxy-;
nebo pokud R^3 je (ne)substituovaný alkoxy-, a pokud Rll, R^2, a r13 společně sestávají pouze z H, nebo H a jednoho nebo dvou alkoxy-, a R^-7 je H, potom R^·4 musí být jiný než H, Me nebo hydroxymethyl;
nebo pokud R^3 je hydroxy- nebo alkoxy-, a pokud Rll, R^·2, R^3 společně sestávají pouze z H, nebo jednoho nebo dvou alkoxy-, nebo H a pouze jednoho nebo dvou alkylů, a R^7 je Ci_4 alkyl, potom alespoň jeden z R^4 a R^-θ musí být jiný než H;
nebo pokud R^·3 je hydroxy- a pokud R^·, R^2,
R^4 a jsou všechny H, R^7 nesmí být ani H ani hydroxy-;
nebo pokud R^·3 je iso-propoxy, a R11, R12 a R13 společně sestávají pouze z H, nebo H a jednoho nebo dvou hydroxy-, potom alespoň jeden z R^4, R^, R-*-7 musí být j iný než H;
nebo pokud R^3 je 1,5 di(nižší)alkyl C5_gQalkyl, potom alespoň jeden z R^·, R-*-2, R^·3, R^4, R^ a R^7 musí být jiný než H;
nebo jejich soli.
Sloučeniny obecného vzorce uvedené výše lze připravit postupem, kdy ketony struktury (X) uvedené dále:
• · • ·· • · • · • · ··
reagují s alkylortoformiátem za přítomnosti báze, nebo reagují s ethyloxalylchloridem za přítomnosti pyridinu, následnuje hydrolýza a dekarboxylace, nebo reagují s alkylformiátem za přítomnosti alkalického kovu, nebo reagují s N,N-dialkylformamidem za přítomnosti oxychloridu fosforečného, nebo reagují s kyanidem za přítomnosti halogenovodíku, nebo dehydratací 2-hydroxyisoflavanoidů obecného vzorce (XI):
XI nebo podrobením sloučenin obecného vzorce XII katalytické hydrogenaci,
nebo zpracováním sloučenin obecného vzorce XIII, dostupných z alkylace odpovídajícího fenylacetátu, s vhodným benzylhalidem, následuje redukce s (PF6)2Rh(EtC5Me4)(C6H6), • · • ·· • · • ··· • · • ···
XIII v němž skupiny R^, r12, r13, r1$, r!6 a R^7 jsou definovány výše, volitelně s následnou konverzí některé jedné nebo více skupin R^, R^, R^S, R^5, a R17 na nové skupiny R^, R^f R^, r14, r!5z r16 a r17 odebráním chránící skupiny, dehydrogenací, adicí, substitucí nebo eliminací; a, pokud je to vhodné, konverzí sloučeniny obecného vzorce IX na její sůl nebo jejím z její soli.
Přiklad
1,3,5-trihydroxybenzen se ponechá reagovat s isopentylchloridem, následuje katalytická hydrogenace za vzniku produktu 2. Sloučenina 2 se ponechá reagovat s chloridem 3 kyseliny za vzniku ketonu 4. Keton 4 se zpracovává s ethyloxalylchloridem v pyridinu při 0 °C a získá se ester, který se hydrolyzuje ve vodném acetonu obsahujícím uhličitan sodný za vzniku kyseliny 5. Při zahříváni v refluxním toluenu probíhá u kyseliny 5 dekarboxylace za vzniku sloučeniny 6, která během zpracování s 2,3-dichlor-5,6-dicyano-l,4benzochinonem poskytuje isoflavanoid 7.
• · · • · ·· ·· •· · · •· ·· ··· ·· • ·· ·· ··
Konkrétní reprezentativní sloučeniny obecného vzorce IX zahrnují:
tectorigenin robuston methylether robustonu
7,2' t 4'-trihydroxyisoflavon
6,2', 3'-trihydroxy-7,4'-dimethoxyisoflavan
8,4'-dimethoxy-7-hydroxisoflavon.
Sloučeniny XIV mají strukturu:
XIV kde:
R18 a R19 jsou jednotlivě vybrány ze skupiny:
H, hydroxy-, (ne)substituovaný alkyl, (ne)substituovaný alkoxy-, COR^lkarboxy-, karboalkoxy,- OR22, karbamoyl výhodně substituovaný na dusíku nižším alkylovým řetězcem nebo fenylem, acyloxy-, halogen, kyano- a azido-.
r20 je Vybrán ze skupiny: H, hydroxy-, halogen, nižší alkylový řetězec, acyloxy- a siloxy-;
kde r21 je vybrán ze skupiny: alkyl, alkenyl, alkinyl, aralkyl, (ne)substituovaný fenyl, (ne)substituovaný naftyl, thienyl, furanyl a pyridyl;
a r22 je složen z ¢3-5 uhlohydrátové části;
nebo jejich solí.
Sloučeniny obecného vzorce XIV mohou být připraveny reakcí ylidů obecného vzorce XV buď s chloridem kyseliny obecného vzorce XVI, nebo anhydridy kyseliny obecného vzorce XVII:
• · · · · ♦ ··· 9 9999
9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9
99 9 9 9 9 9 9 9
kyselin obecného vzorce XVIII nebo zpracováním kyselinou polyfosforečnou, anhydridem kyseliny trifluoroctové nebo podobným činidlem,
XVIII nebo zpracováním chalkonů obecného vzorce XIX buď s bází, nebo s bází, a následně zpracováním s 2,3-dichlor-5,6-dicyano-1,4-benzochinonem,
XIX v němž skupiny R18, R19, R20 jsou stejné, jak je uvedeno výše, volitelně s následnou konverzí některé jedné nebo více skupin R18, R^-9, R28, na nové skupiny R^8, R19, R20 odebráním chránící skupiny, adicí, substitucí nebo eliminací; a, pokud je to vhodné, konverzí sloučeniny obecného vzorce XIV na její sůl nebo jejítt? z její soli.
• · 4 ·
Konkrétními reprezentativními sloučeninami obecného vzorce XIV jsou:
5,4'-dimethyl-7-acetylflavon
7-benzoyloxyflavanon apiin acetát
Sloučeniny struktury XX mají vzorec:
kde p23ř R24f r25, r26 jsou jednotlivě vybrány ze skupiny:
H, hydroxy-, (ne)substituovaný alkoxy-, siloxy-, (ne)substituovaný alkyl, (ne)substituovaný alkenyl, halogen, karboxyl, a acyloxy-, a kde R23 a r24, a podobně R23 a R2^ mohou společně znamenat 5-7 členný (ne)substituovaný karbocyklický nebo heterocyklický kruh, a kde substituenty na výše zmíněných prí^Zně substituovaných skupinách mohou zahrnovat nižší alkylový řetězec, nižší řetězec alkoxy-, hydroxy-, siloxy-, acyloxy-, halogen, benzoyl, karboxy-, karboalkoxy-, a karbamoyl, připdně substituovaný na dusíku nižším alkylovým řetězcem, fenyl, thienyl, furyl nebo pyridinyl;
Y1 je vybrán ze skupiny: 0, -OCH2CH2O-, -OCH2CH2S-, -OCH2CH2CH2O-, -SCH2CH2CH2S-, a -SCH2CH2S-;
X2 je vybrán ze skupiny: CH2, 0, a S;
s následujícími podmínkami:
pokud X a Y jsou 0 a R24 nebo R25 jsou buď oba alkoxy-, nebo alkoxy- a alkyl, nehledě na pořadí, potom alespoň jeden z R23 a R26 musí být jiné než H, • · nebo jejich soli.
Sloučeniny obecného vzorce XX se mohou připravit reakcí amidů obecného vzorce XXI se sek.butyllithiem a tetramethylethylendiaminem v THF, následovanou adicí benzaldehydů obecného vzorce XXII, a přidáním kyseliny. Získané laktony obecného vzorce XXIII mohou být redukovány katalytickou hydrogenací nebo zpracováním s aktivovaným zinkem v kyselině, následuje dehydratace trifluoracetanhydridem,
V Mt ,NC
Lprsoo)ic nebo zpracováním diaryletherů obecného vzorce XXIV s
kyselinou sírovou, chloridem hlinitým
trifluoracetanhydridem, nebo podobnými činidly,
p26 ,CO?H
li i Z
O-fW XXIV
Mr2<
kde R23, R24, R23, R26 jsou definovány výše, volitelně s následnou konverzí některé jedné nebo více skupin R23, R24, R23, R2^ na nové skupiny R23, R24, R23, R2^ odebráním chránící skupiny, adicí, substitucí nebo • ·· eliminaci; a , pokud je to vhodné, konverzí sloučeniny obecného vzorce XX na její sůl nebo jejím uVPČneh/m z její soli.
Konkrétní reprezentativní sloučeniny obecného vzorce XX zahrnují:
3-isopropoxyanthron
Jiná skupina, která je vhodná ve vynálezu, je vzorce:
x4—x3
v němž:
X3 je NR27, X4 je CR30, X5 je 0, X6 je CR31, X7 je 0;
nebo X3 je NR30, X4 je CR27 nebo N , X5 je NR31, X6
je CR28, X7 je 0 nebo S ;
nebo X3 je NR27, X4 je CR30, X5 je NR28, X6 je
CR31, X7 je Ο- nebo S;
nebo X3 je NR27, Χ4 je CR28 : nebo N, X5 je NR30, X6
je CR29, X7 je NR32;
nebo X3 je NR30, X4 je CR27 nebo N , X5 je NR28, X8
je CR29, X7 je ( NR32;
nebo X3 je NR27 , X4 je CR30 r X5 je S, X6 je CR31, X7 je NR32;
nebo X3 je NR30, X4 je CR27 , X5 je S, X6 je CR28, X7 je NR32;
nebo X3 je S, X4 je CR30, X5 je NR27, X6 je CR31, X7 je 0“ nebo S~;
nebo X3 je S, X4 je CR30 , X5 je NR27, X6 je CR28, X7 je NR32;
nebo X3 je S, X4 je CR27, X5 je NR30, X6 je CR28,
9 • · • · · · • · · • · · · ♦ • · 9 ·
43 • • · • · · • ♦ · • · 9 9 tt · · • • ·
X7 je NR32;
nebo X3 je S, X4 je NR32; je CR30, X5 je s, Χθ je CR27, X7
nebo X3 je S, X4 je 0“ ; je CR30, X5 je s, Χθ je CR31, X7
nebo X3 je NR30, X4 je CR27 nebo N, X5 je NR31, χθ
je N, X7 je 0 nebo S ;
nebo X3 je NR27, X4 je CR30 , X5 je NR28, X6 je N,
X7 je NR32 nebo CZ2Z3;
nebo X3 je NR27, X4 je CR23 nebo N, X5 je NR30, Χθ
je N, X7 je NR32 nebo CZ2Z3;
nebo X3 je NR30, X4 je N, X5 je £ s, χθ : je CR31, X7
je 0“ ;
nebo X3 je S, X4 je ; CR27, X5 je NR30, X6 je N,
X7 je NR32;
nebo X3 je S, X4 je CR30, X5 je NR27, : Χθ je
N, X7 je NR32
nebo X3 je 0 nebe • s, X4 je N, X5 je NR30, X6 je
N, X7 je NR32;
kde r27, r28, r29 jsou jednotlivě nižší alkyly s přímým nebo větveným řetězcem;
r30 a r31 jsou jednotlivě vybrány ze skupiny:
vodík, (ne)substituovaný alkyl s přímým nebo větveným řetězcem, (ne)substituovaný aromát, v nichž substituenty mohou zahrnovat: halogen, nižší alkyl, alkenyl, alkinyl s přímým nebo větveným řetězcem, popřípadě substituovaný šestičlenným aromátem, cyklický alkylový nebo cyklický alkenylový kruh, hydroxyl, alkoxyl s přímým nebo větveným řetězcem, benzoyl, karboalkoxy, karbamoyl, popřípadě substituovaný na dusíku nižším alkylem nebo fenylem, nebo karboxy;
r32 je vybrán ze skupiny:
Ar, COAr, COR33, kde Ar je šestičlenný (ne)substituovaný aromatický kruh, kde substituenty na tomto kruhu mohou zahrnovat: halogen, nižší alkyl, alkenyl, alkinyl s přímým nebo větveným řetězcem, popřípadě substituovaný šestičlenným aromátem, cyklický alkylový nebo cyklický alkenylový kruh, hydroxyl, alkoxyl s přímým nebo větveným řetězcem, benzoyl, karboalkoxy, karbamoyl, popřípadě substituovaný na dusíku nižším alkylovým řetězcem nebo fenylem, nebo karboxy;
r33 je vybrán ze skupiny:
vodík a alkyl s přímým nebo větveným řetězcem;
Z2 a Z3 jsou jednotlivě vybrány ze skupiny:
CN a CO2R34;
R34 je vybrán ze skupiny:
vodík, alkyl s přímým nebo větveným řetězcem a (ne)substituovaný aromát;
nebo jejich soli.
Sloučeniny uvedeného obecného vzorce XXV mohou být připraveny zpracováním sloučenin obecného vzorce XXVI, kde X3 je NR30 nebo S, X9 je CR30 nebo N, X10 je NR30 nebo S, Z4 je CO2H, CO2R30 nebo CN, s chloridy kyselin nebo anhydridy,
X9-X8 /
X10
XXVI nebo reakcí sloučenin obecného vzorce XXVII, kde X11 je
NR39 nebo S, X12 je N nebo CR30, X^3 je halogen, SMe nebo
OEt, s aminy, sulfidy nebo enoláty,
XXVII • · • · • · nebo reakci sloučenin obecného vzorce XXVIII, kde je 0 nebo S? s uhličitýkh, isokyanáty, isothiokyanáty nebo sulfid^
XXVIII nebo reakcí sloučenin obecného vzorce XXIX s hydroxidem sodným,
N—0
XXIX nebo reakcí sloučenin obecného vzorce
XXX alkyltosyláty, aryltosyláty nebo alkylhalogenidy,
N—N
R30b/
XXX
NHR32 nebo reakcí sloučenin obecného vzorce XXXI s \ΰ/ι' arylisokyanidphloridy, fosgenem, thiofosgenem, nebo 3,3-bis(methylthio)akrylonitrily,
XXXI • · • ·
A nebo reakcí sloučenin obecného vzorce XXXII, kde X^6 je 0, S nebo NH, s ethoxidem sodným nebo HC1 za přítomnosti chloridů kyselin nebo HC1 za přítomnosti anhydridů kyselin,
XXXII nebo reakcí sloučenin obecného vzorce XXXIII, kde χ17 je NH nebo S, s chloridy kyselin, anhydridy kyselin, nebo HONO,
NHR30 γ17 N Λ Η
XXXIII nebo reakcí sloučenin obecného vzorce XXXIV s Cu(acac)2·
XXXIV kde R.22, r28, r29, r30, r31, r32, r33 a r34 jsou definovány výše, volitelně s následnou konverzí některé jedné nebo více skupin r22, r28, r29, r30 f r31, r32, r33 a r34 na nové skupiny r22, r28, r29, r30, r31, r32, r33 a r34 odebráním chránící skupiny, kond^n^c.^ adicí, substitucí nebo eliminací; a , pokud je to vhodné, konverzí sloučeniny obecného vzorce XXV na její sůl nebo její/n z její soli.
Konkrétní reprezentativní sloučeniny obecného vzorce XXV zahrnují:.
3-(4-chlorfenyl)-1,2,3,4-oxatriazolium-5-(4-chlorfenyl)aminid • ·
1,3-di(4-methylfenyl)-1,2,3,4-tetrazolium-5-oxid.
Následující příklady mají být považovány za ilustrující, nikoliv omezující vynález.
Příklad 1
Sloučenina 59-0008 byla syntetizována postupem podle Mc. Donald, W.S., a kol., Chem Comm (1969) 392-393; Irving, Η. N. N. H. a kol. Anal Chim Acta (1970) 49: 261-266. Stručně, 10,0 g dithizonu se vloží do 100 ml EtOH a 50 ml AcOH a zahřívá se pod refluxem po 18 h. Po ochlazení se nejprve zředí 100 ml vody a potom 50 ml IN NaOH. Dále se neutralizuje přídavkem 6N NaOH pro nastavení pH na 5,0. Tato temně purpurová směs se potom zkoncentruje na rotační odparce pro odstranění organických látek. Když kapalina ztratí svou temně purpurovou barvu, zfiltruje se a tmavá sraženina se spojí. Po purifikaci mžikovou chromatografií (4,5 x 25,7 cm; EtAc/Hep. (1:4); Rf 0,22) následuje rekrystalizace z EtOH a získá se 2,15 g (25% výtěžek) tmavě purpurových krystalů, b.t.=184-185 °C.
1H NMR (CDC13) 7,90 (d z d), Jg=7,7, J2=2,2, 2H) , 7,64 (hump, 1H), 7,49 (m, 3H) , 7,02 (m, 1H) , 6,91 (m, 2H) , 6,55 (d,
J=8,l, 1H).
MS (El) 254 (47, M+), 105 (26), 77 [100], 51 (27). HRMS (El, M+) 254,0626 (vypočt. 254,0626182).
Anal. vypočt. pro C13HXQN4S: C, 61,40; H, 3,96; N, 22,03. Stanoveno: C, 61,40; H, 4,20; N, 22,06.
Příklad 2
Screening vysokého výkonu
Několik tisíc sloučenin bylo testováno systémem, popsaným v patentové přihlášce US č. 08/458434, podané 2. června
1995, a zde začleněném jako odkaz. Standardní pozitivní srovnávací sloučeninou byla sloučenina podle vynálezu, 590008 (také označovaná 0S8”) která má vzorec:
”0S8
Podrobněji, byly použity buňky 2T3-BMP-2-LUC stabilně transformované buněčné linie osteoblastu, popsané v GhoshChoudhury a kol., Endocrinology (1996) 137:331-39, uvedeném výše. Buňky byly kultivovány použitím a-MEM, 10% FCS s 1% penicillin/streptomycinem a 1% glutaminem (očkovací medium), a jednou týdně byly děleny 1:5 . Pro testování byly buňky resuspendovány v očkovacím mediu obsahující; m 4% FCS, očkovány na mikrotitrační plotny v koncentraci 5 x 103 buněk (v 50 μΐ) /prohlubeň, a inkubovány 24 hodiny při 37 °C v 5% CO2· K iniciaci testu bylo přidáno do každé prohlubně 50 μΐ testované sloučeniny nebo srovnávacího vzorku v DMSO ve dvojnásobné koncentraci, takže výsledný objem byl 100 μΐ. Koncentrace výsledného séra byla 2% FCS, a výsledná DMSO koncentrace byla 1%. Sloučenina 59-0008 (10 μΜ) byla použita jako pozitivní kontrolní vzorek.
Zpracované buňky byly inkubovány po 24 hodiny při 37 °C a 5% CO2· Potom bylo medium odebráno a buňky byly promyty třikrát s PBS. Po odstranění přebytku PBS se do každé prohlubně přidalo 25 μΐ IX buněčného kultivačního lýzového reagens (Promega #E153A) a inkubovalo alespoň deset minut. Volitelně byly plotny/vzorky v tomto bodě zmraženy. Do každé prohlubně bylo přidáno 50 μΐ substrátu luciferasy
·♦ ··
9 9 9
9 99
(Pomega #E152A; 10 ml testovacího pufru Promega luciferasy na 7 mg testovacího substrátu Promegy luciferasy). Byla měřena luminiscence automatizovaným 96-prohlubňovým luminometrem, a byla vyjádřena buď jako pifcogramy aktivity luciferasy na prohlubeň , nebo jako pifcogramy aktivity luciferasy na mikrogram proteinu.
V této zkoušce vykazovala sloučenina 59-0008 (3fenylazo-lH-4,1,2-benzothiadiazin) model reaktivity, jak je znázorněn na obr.l. Aktivita sloučeniny 59-0008 byla maximální při koncentraci přibližně 3-10 μΜ a , ještě přesněji, při asi 3 μΜ, a takto poskytla odezvu přibližně 175 světelným emisním jednotkám. Další testované sloučeniny byly vyhodnocovány při různých koncentracích, a tyto výsledky byly srovnány s výsledky získanými u 59-0008 při 10 μΜ (tato hodnota byla normalizována na 100). Například kterákoliv testovaná sloučenina na obr.2 a obr.3, která ukazuje vyšší aktivitu než 10 μΜ 59-0008, bude mít výsledek nad 100.
Jak je znázorněno na obr.2 (39 plátů) a obr. 3 (10 plátů), byla stanovena řada sloučenin jako zejména účinných.
Příklad 3
In vivo hodnoty růstu kosti lebeční klenby
Sloučenina 59-0008 byla testována in vivo podle postupu popsaného dříve ( viz In vivo testování vlivu sloučenin na růst kostí lebeční klenby myší, supra.) Ve srovnání s kontrolním vzorkem vehikula indukuje sloučenina 59-0008 4násobné zvětšení šířky nové lebeční klenby.
• · ·· ··· · ·
Přiklad 4
Chondrogenní aktivita
Sloučeniny 59-0008, 59-0102 a 50-0197 byly testovány na vliv na diferenciaci chrupavkových buněk ve srovnáni s působením rekombinantniho lidského BMP-2. Stručně řečeno byla izolována myší klonálni chondrogenní buněčná linie TMC23 a klonována z žeberni chrupavky transgenních myší, obsahující kontrolní oblast genu BMP-2 řídící velký T-antigen SV-40, vytvořenou podle Ghosh-Choudhury a kol Endocrinology 137:331-39, 1996. Tyto buňky byly kultivovány v DMEM/10% FCS a 7 dní po konfluenci bylo nalezeno, že exprimují T-antigen a také produkuji aggrecan (barvení toluidinovou modří při pH 1,0) a kolagen typu II (imunobarvení).
Pro měření aktivity alkalické fosfatázy (ALP) byla použita technika LF Bonewald a kol. J Biol Chem (1992) 267:8943-49. Stručně řečeno byly buňky TMC-23 očkovány na 96 prohlubňové mikrotitrační plotny v DMEM obsahujícím 10% FCS v množství 4 x 103 buněk/prohlubeň. Dva dny po očkování byly buňky konfluentní a medium bylo nahraženo čerstvým mediem obsahujícím 10% FCS a různé koncentrace sloučenin nebo rekombinantniho BMP-2. Po další 2 nebo 5 denní inkubaci byly plotny promyty dvakrát PBS a potom byl přidán (100 μΐ /prohlubeň) lýzující roztok (0,05% Tritonu X-100). Buňky byly lýzovány třemi cykly mraženi-rozmražení, -70 °C (30 min) následovaných 37 °C (30 min při třepání). Dvacet mikrolitrů buněčného lyzátu bylo testováno s 80 μΐ 5 mM pnitrofenolfosfátu v 1,5 M 2-amino-2-methylpropanolovém pufru, pH 10,3 (kit Sigma ALP, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) po 10 min při 37 °C. Reakce byla zastavena přídavkem 100 μΐ 0,5 M NaOH. Spektrofotometrická absorbance při 405 nm byla srovnávána s absorbancí p-nitrofenolových standardů k určení ALP aktivity ve vzorcích. Obsah proteinu v buněčném
• « 9· • 9
• 9 • • •
• • 99 • 9
• • ♦ ♦ • ♦
• • · 9 9
·· 9·
99 9· 9·
9 • 9 • ·
• 99 • 9 • 9
9 >9 • 99 • ♦
9 9 • 9 ♦
• 9 9 9 99
lyzátu byl stanoven Bio-Rad proteinovým testovacím kitem (Bio-Rad, Hercules, CA) . Konkrétní aktivita byla vypočtena použitím těchto dvou parametrů.
Druhý den zvýšily sloučeniny 59-0008 (10~9 M), 59-0197 (10-9 M) hladiny ALP průměrně 3-, 2- a 2,5-násobně ve srovnáni s kontrolním vzorkem vehikula.
Z výše uvedeného je zřejmé, že ačkoliv konkrétní provedení vynálezu byly popsány za účelem ilustrování, mohou být vytvořeny různé modifikace bez vybočení z ducha a rozsahu vynálezu. Proto vynález není omezen jinak, než připojenými nároky.
·« · fr* ·· ·· ·· ♦ · ·· · · · · · · · · • · · · « · ·♦·· • · · · * ··· « ··· · · • · · · · · · · ···· ··· ·» ·· «· ··

Claims (1)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    Použití sloučeniny vzorce k kde Ra je nerušící substituent;
    m je celé číslo nula až 4;
    každá tečkovaná čára znamená případnou π-vazbu;
    každý symbol Z nezávisle znamená N, NR, 0, S, CR nebo CR2< kde každý symbol R nezávisle znamená H nebo alkyl(16C) ;
    X je 0, S, SO, nebo SO2;
    L je pružný linker; a
    Ar^ je substituovaný nebo nesubstituovaný 6-členný aromatický kruh, pro výrobu léčiva pro léčbu stavu obratlovce charakterizovaného deficitem nebo potřebou náhrady růstu kosti a/nebo nežádoucí úrovní resorpce kostí, přičemž toto použití zahrnuje podávání účinného množství této sloučeniny tomuto obratlovci.
    2. Použití sloučeniny vzorce podle nároku 1, v y z n a č u j í c i se tím , že L je pružný konjugovaný linker. 3. Použití sloučeniny vzorce podle nároku 1, v y z n a č u j i c i se tím, že význam symbolu L je
    vybrán ze skupiny sestávající z kovalentní vazby, -N=N-, -RC=CR, -RC=N-, -N=CR-, -NRC0-, -C0NR-, -CR2O- a -CR2NR-, kde každý ze symbolů R nezávisle znamená H nebo alkyl(1-6C).
    • · • *· 99 99 99 • · ·· • ♦ 9 9 9 9 9 9 • • • · • 9 9 9 ·« • • » · · 99· 9 999 9 9 • • • · 9 9 9 9 ···· ··· 99 99 99 • 9
    4. Použití sloučeniny vzorce podle nároku vyznačující se tím, že Ar2 je kde j e nerušící substituent a n je celé číslo od 0 do 5.
    5. Použití sloučeniny vzorce podle nároku 4, vyznačující se tím, že Ar2 je nesubstituovaný fenyl.
    6. Použití sloučeniny vzorce podle nároku 1, v yznačující se tím, že uvedenou sloučeninou je 59-0008.
    Farmaceutická kompozice pro použití při způsobu léčení stavu obratlovce charakterizovaného nedostatečností nebo potřebou náhrady růstu kostí a/nebo nežádoucí úrovní resorpce kosti, vyznačující se tím, že zahrnuje farmaceuticky přijatelný nosič a účinné množství sloučeniny vzorce kde Ra je nerušící substituent m je celé číslo 0 až 4;
    každá tečkovaná čára znamená případnou π-vazbu;
    54 • · 9 9 9 9 9 99 9 9 9 99 9 9 9 999 ♦ · ·· « · 9 9 9 9 9 9 ·· 9 9 9 9 9 999 9 9 9 99 9 9 9 9 9 99 999 9 9 99 každý symbol Z nezávisle znamená N, NR, 0, S, CR, nebo cr2, kde každý symbol R nezávisle znamená H nebo alkyl(1-
    6C) ;
    X je O, S, SO nebo SO2;
    L je pružný linker; a
    Ar^ je substituovaný nebo nesubstituovaný 6-členný aromatický kruh.
    8. Kompozice podle nároku 7, vyznačující se tím, že L je pružný konjugovaný linker.
    9. Kompozice podle nároku 7, vyznačující se tím, že L je vybrán ze skupiny sestávající z kovalentní vazby, -N=N-, -RC=CR-, -RC=N-, -N=CR-, -NRCO-, -CONR-, -CR2O- a -CR2NR-, kde každý ze symbolů R nezávisle znamená H nebo alkyl(1-6C).
    10.
    Kompozice podle nároku 7, vyznačuj tím, že Ar^ je kde rL je nerušící substituent a n je celé číslo od 0 do 5.
    11. Kompozice podle nároku 7, v y z n a č u j i c í s e tím, že Ar^ je nesubstituovaný fenyl. 12. Kompozice podle nároku 7, v y z n a č u j í c i s e
    tím, že uvedenou sloučeninou je 59-0008.
    13. Použití sloučeniny vzorce
    L—Ar2
    9
    9
    9999
    9999
    9 99 • · ··
    999 ··
    99
    9999 kde Ra je nerušící substituent;
    n je celé číslo 0 a 5;
    L je pružný linker, který neobsahuje dusík; a
    Ar2 je substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný naftyl, pro výrobu léčiva pro léčení stavu obratlovce charakterizovaného nedostatečností nebo potřebou náhrady růstu kostí a/nebo nežádoucí úrovní resorpce kosti, přičemž toto použití zahrnuje podávání účinného množství této sloučeniny tomuto obratlovci.
    14. Použití sloučeniny vzorce podle nároku 13, v y značující se tím, že Ra je -NR2 nebo -COOR, kde R je H nebo alkyl ( 1-6C). 15. Použití sloučeniny vzorce podle nároku 13, v y značující se tím, že Ar2 je substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl. 16. Použití sloučeniny vzorce podle nároku 13, v y značující se tím, že Arl a Ar2 jsou různé.
    17. Farmaceutická kompozice pro použiti při způsobu léčení stavu obratlovce charakterizovaného nedostatečností nebo potřebou náhrady růstu kostí a/nebo nežádoucí úrovní resorpce kosti, vyznačující se tím, že zahrnuje farmaceuticky přijatelný nosič a účinné množství sloučeniny vzorce ·· kde Ra je nerušící substituent;
    n je celé číslo 0 a 5;
    L je pružný linker, který neobsahuje dusík; a
    Ar2 je substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo
    substituovaný nebo nesubstituovaný naftyl. Kompozice podle nároku 17, v y z n a č u j i c i se m , že Ra je -NR2 nebo -COOR, kde R je H nebo alkyl(1-6C). Kompozice podle nároku 17, v y z n a č u j i c i se
    tím, že Ar2 je substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl.
    20. Kompozice podle nároku 17, vyznačující se tím, že Ar^ a Ar2 jsou různé.
    21. Použití sloučeniny vzorce kde Ra je nerušící substituent;
    n je celé číslo 0 a 5;
    L je linker se sférickým omezením; a
    Ar2 je substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný naftyl, pro výrobu léčiva pro léčení stavu obratlovce charakterizovaného nedostatečností nebo potřebou náhrady růstu kostí a/nebo nežádoucí úrovní resorpce kosti, přičemž toto použití zahrnuje podávání účinného množství této sloučeniny tomuto obratlovci.
    44 • ·· • 4 44 44 • * 44 • • • 4 4 4 4 4 • • • • 4 4 4 4 4 4 • • 4 • *44 4 444 4 * 4 • • 4 4 4 4 4 44*4 44* *4 44 4 * 44
    22. Použiti sloučeniny vzorce podle nároku
    21, vyznačující se tím,
    -COOR, kde R je H nebo alkyl(1-6C).
    že Ra je -NR2 nebo
    23.
    Použití sloučeniny vzorce podle nároku 21, vyznačující se tím, je substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl.
    24. Farmaceutická kompozice pro použití při způsobu léčení stavu obratlovce charakterizovaného nedostatečností nebo potřebou
    náhrady růstu kostí a/nebo nežádoucí úrovní resorpce kosti, v y z n a č u jící se tím , že zahrnuj e farmaceuticky přijatelný nosič a účinné množství sloučeniny vzorce RV. •s
    kde Ra je nerušící substituent;
    n je celé číslo 0 a 5;
    L je linker se sterickým omezením; a
    Ar^ je substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný naftyl.
    25. Kompozice podle nároku 24, vyznačující se tím, že R1 je -NR2 nebo -COOR, kde R je H nebo alkyl(1-6C).
    26. Kompozice podle nároku 24, vyznačující se tím, že Ar^ je substituovaný nebo nesubstituovaný fenyl.
    27. Použití sloučeniny vzorce podle některého z nároků 1, 13 nebo 21, vyznačující se tím, že uvedeným stavem je osteoporoza, zlomenina nebo deficit kosti, primární nebo sekundární hyperparathyreoidismus, onemocnění nebo defekt
    ·· • ·· ·· ·· ·· • · ·· • · • · • · • • • • • · • · • · ·· • • • · · ··· • ··· • • • • • · • • • • ···· ··· ·· ·· ··
    periodontu, metastatické onemocněni kostí, osteolytická kostní choroba, stav po plastické chirurgii, po protetické kloubní chirurgii nebo po dentální implantaci.
    28. Použití sloučeniny vzorce podle některého z nároků 1, 13 nebo 21, vyznačující se tím, že se uvedenému obratlovci dále podává jedno nebo více činidel, které podporují růst kosti nebo které inhibuji resorpci kosti.
    29. Použití sloučeniny vzorce podle nároku 28, vyznačující se tím, že uvedená činidla jsou vybrána ze skupiny sestávající z kostních morfogenetických faktorů, antiresorpčních činidel, osteogenních faktorů, morfogenních proteinů odvozených od chrupavky, růstových hormonů a diferenciačních faktorů.
    • ·
    0.093 2.10 2.04 2.07! 0.029 ..1.56 1.71 1.63 0.0091 1.45. 1.42 1.44 I 670028 1.28' 1.371 1.33 0.0000 1.32 1.30' 1.31! 0.0000 1.20 1.00 1.101 Iprům. základ 1.20
CZ981153A 1995-10-23 1996-10-23 Přípravky a způsoby pro léčbu deficitních stavů kostí CZ115398A3 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US583095P 1995-10-23 1995-10-23

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ115398A3 true CZ115398A3 (cs) 1998-12-16

Family

ID=21717974

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ981153A CZ115398A3 (cs) 1995-10-23 1996-10-23 Přípravky a způsoby pro léčbu deficitních stavů kostí

Country Status (13)

Country Link
EP (1) EP0866710A4 (cs)
JP (1) JP2000513324A (cs)
KR (1) KR19990067010A (cs)
CN (1) CN1201393A (cs)
AU (1) AU706262B2 (cs)
BR (1) BR9611210A (cs)
CA (1) CA2235481A1 (cs)
CZ (1) CZ115398A3 (cs)
EA (1) EA199800393A1 (cs)
HU (1) HUP9802319A3 (cs)
NO (1) NO981810L (cs)
PL (1) PL327617A1 (cs)
WO (1) WO1997015308A1 (cs)

Families Citing this family (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2258822A1 (en) * 1996-06-20 1997-12-24 Sean Kerwin Compounds and methods for providing pharmacologically active preparations and uses thereof
WO1998017267A1 (en) * 1996-10-23 1998-04-30 Zymogenetics, Inc. Compositions and methods for treating bone deficit conditions
US6080779A (en) * 1996-12-13 2000-06-27 Osteoscreen, Inc. Compositions and methods for stimulating bone growth
US6376476B1 (en) 1996-12-13 2002-04-23 Zymogenetics Corporation Isoprenoid pathway inhibitors for stimulating bone growth
WO1999009986A1 (fr) * 1997-08-22 1999-03-04 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Derives de 4-aminoquinazoline
US6649631B1 (en) 1997-10-23 2003-11-18 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods for treating bone deficit conditions
DE19812204A1 (de) * 1998-03-19 1999-11-04 Plantamed Arzneimittel Gmbh Verwendung von Extrakten aus Cimicifuga racemosa und Belamcanda sinensis als estrogenartiges organselektives Arzneimittel ohne uterotrope Wirkung
JP2000004882A (ja) * 1998-06-18 2000-01-11 Hoechst Marion Roussel Kk ヒトｍｐ５２遺伝子プロモーターおよびこれを用いた有用物質の探索法
US6838436B1 (en) 1998-07-10 2005-01-04 Osteoscreen Inc. Inhibitors of proteasomal activity for stimulating bone growth
US6902721B1 (en) 1998-07-10 2005-06-07 Osteoscreen, Inc. Inhibitors of proteasomal activity for stimulating bone growth
US6462019B1 (en) 1998-07-10 2002-10-08 Osteoscreen, Inc. Inhibitors of proteasomal activity and production for stimulating bone growth
US6462036B1 (en) 1998-11-06 2002-10-08 Basf Aktiengesellschaft Tricyclic pyrazole derivatives
EP1127051A2 (en) * 1998-11-06 2001-08-29 Basf Aktiengesellschaft Tricyclic pyrazole derivatives
WO2000078351A1 (fr) * 1999-06-18 2000-12-28 Mitsubishi Pharma Corporation Promoteurs de l'osteogenese
AU6865100A (en) * 1999-09-02 2001-04-10 Mitsubishi Pharma Corporation Osteogenesis promoting agents
ATE305302T1 (de) 1999-12-28 2005-10-15 Eisai Co Ltd Heterozyklische verbindungen mit sulfonamid- gruppen
FR2806408B1 (fr) * 2000-03-17 2002-10-11 Oreal Composition cosmetique comprenant un derive de furane- naphtoquinone, leur utilisation comme agent colorant et derives
DE50107573D1 (de) 2000-06-05 2006-02-09 Austria Wirtschaftsserv Gmbh Heterocyclische hydrazone als anti-krebs-wirkstoffe
US6660737B2 (en) 2001-05-04 2003-12-09 The Procter & Gamble Company Medicinal uses of hydrazones
US7119120B2 (en) 2001-12-26 2006-10-10 Genzyme Corporation Phosphate transport inhibitors
AU2003220935A1 (en) * 2002-04-03 2003-10-13 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited. Benzamide derivatives
WO2004035522A1 (ja) * 2002-08-30 2004-04-29 Bf Research Institute, Inc. プリオン蛋白蓄積性疾患の診断プローブおよび治療薬ならびにプリオン蛋白の染色剤
JPWO2004054978A1 (ja) 2002-12-16 2006-04-20 株式会社 ビーエフ研究所 タウ蛋白蓄積性疾患の診断プローブとしてのキノリン誘導体
EP1603883B1 (en) 2003-02-03 2012-03-28 Janssen Pharmaceutica NV Quinoline-derived amide modulators of vanilloid vr1 receptor
CA2564085C (en) 2004-04-30 2013-04-02 Takeda Pharmaceutical Company Limited Heterocyclic amide compound and use thereof as an mmp-13 inhibitor
BRPI0608353A2 (pt) 2005-02-17 2009-12-01 Wyeth Corp derivados de indol, benzotiofeno, benzofurano e indeno cicloalquilfundidos
ES2454966T3 (es) 2007-02-01 2014-04-14 Resverlogix Corp. Compuestos para la prevención y el tratamiento de enfermedades cardiovasculares
WO2009076792A1 (en) 2007-12-19 2009-06-25 Givaudan Sa Cooling compounds
US8114995B2 (en) 2008-06-26 2012-02-14 Resverlogix Corp. Methods of preparing quinazolinone derivatives
ES2542835T3 (es) 2009-01-08 2015-08-12 Resverlogix Corporation Compuestos para la prevención y el tratamiento de enfermedades cardiovasculares
WO2010088414A2 (en) * 2009-01-28 2010-08-05 Emory University Subunit selective nmda receptor potentiators for the treatment of neurological conditions
CA3146333A1 (en) 2009-03-18 2010-09-23 Resverlogix Corp. Phenyl-quinazolin-4(3h)-one and phenyl-pyrido[2,3-d]pyrimidin-4(3h)-one derivatives and compositions thereof useful as anti-inflammatory agents
ES2821018T3 (es) 2009-04-22 2021-04-23 Resverlogix Corp Nuevos agentes antiinflamatorios
RS58911B1 (sr) 2011-11-01 2019-08-30 Resverlogix Corp Oralne formulacije sa trenutnim otpuštanjem za supstituisane hinazolinone
WO2014012889A1 (en) 2012-07-18 2014-01-23 University College Dublin - National University Of Ireland, Dublin Anti-angiogenic compounds
CN102942515A (zh) * 2012-10-22 2013-02-27 暨南大学 一种乙烯桥连吲哚化合物及其合成方法和用途
US9073878B2 (en) 2012-11-21 2015-07-07 Zenith Epigenetics Corp. Cyclic amines as bromodomain inhibitors
WO2014080291A2 (en) 2012-11-21 2014-05-30 Rvx Therapeutics Inc. Biaryl derivatives as bromodomain inhibitors
US9271978B2 (en) 2012-12-21 2016-03-01 Zenith Epigenetics Corp. Heterocyclic compounds as bromodomain inhibitors
CA2977308A1 (en) 2015-03-13 2016-09-22 Resverlogix Corp. Compositions and therapeutic methods for the treatment of complement-associated diseases
CN107019687B (zh) * 2017-05-08 2020-10-27 上海市伤骨科研究所 N-(4-氯苯基)-3-羟基-2-萘甲酰胺类化合物的用途
CN111116552B (zh) * 2020-01-17 2022-10-11 河北科技大学 一种喹唑啉酮类化合物及其制备方法
CN114469863B (zh) * 2021-11-26 2023-09-26 南方医科大学南方医院 甾醇脂质体作为牙髓和牙本质药物传递系统的应用
CN116650495B (zh) * 2021-12-10 2024-04-19 中南大学湘雅医院 芳香族化合物作为神经丛素蛋白-b2的激活剂以及在制备治疗骨质疏松症药物中的应用

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4889851A (en) * 1986-11-21 1989-12-26 Fujisawa Pharmaceutical Co, Ltd. Benzothiadiazine compounds, and pharmaceutical composition comprising the same
JP2724396B2 (ja) * 1987-12-18 1998-03-09 武田薬品工業株式会社 骨粗鬆症予防治療剤
JPH05508386A (ja) * 1989-02-10 1993-11-25 ワシントン　リサーチ　ファンデション 免疫調整剤
JPH06192272A (ja) * 1992-12-24 1994-07-12 Japan Tobacco Inc 新規なトリアゾロベンゾチアジアジン及びトリアゾロベンゾチアジアゼピン誘導体
US5280040A (en) * 1993-03-11 1994-01-18 Zymogenetics, Inc. Methods for reducing bone loss using centchroman derivatives
EP0716086A1 (en) * 1994-12-09 1996-06-12 Boehringer Mannheim Gmbh Malonic acid based matrix metalloproteinase inhibitors
WO1998017267A1 (en) * 1996-10-23 1998-04-30 Zymogenetics, Inc. Compositions and methods for treating bone deficit conditions
DE69734832T2 (de) * 1996-12-13 2006-08-31 Zymogenetics, Inc., Seattle Zusammensetzungen und verfahren zum stimulieren von knochenwachstum

Also Published As

Publication number Publication date
NO981810D0 (no) 1998-04-22
PL327617A1 (en) 1998-12-21
CN1201393A (zh) 1998-12-09
AU7471096A (en) 1997-05-15
HUP9802319A2 (hu) 1999-02-01
WO1997015308A1 (en) 1997-05-01
HUP9802319A3 (en) 1999-12-28
AU706262B2 (en) 1999-06-10
JP2000513324A (ja) 2000-10-10
BR9611210A (pt) 1999-12-28
NO981810L (no) 1998-06-22
EP0866710A1 (en) 1998-09-30
EP0866710A4 (en) 2001-07-11
KR19990067010A (ko) 1999-08-16
EA199800393A1 (ru) 1998-12-24
CA2235481A1 (en) 1997-05-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ115398A3 (cs) Přípravky a způsoby pro léčbu deficitních stavů kostí
US6153631A (en) Compositions and methods for treating bone deficit conditions
US5990169A (en) Compositions and methods for treating bone deficit conditions
US5994358A (en) Compositions and methods for treating bone deficit conditions
US5919808A (en) Compositions and methods for treating bone deficit conditions
US6342514B1 (en) Compositions and methods for treating bone deficit conditions
US5922753A (en) Methods for treating bone deficit conditions with benzothiazole
US5948776A (en) Compositions and methods for treating bone deficit conditions
US5965573A (en) Compositions and methods for treating bone deficit conditions
US6251901B1 (en) Compositions and methods for treating bone deficit conditions
US6080779A (en) Compositions and methods for stimulating bone growth
EP0944312B9 (en) Compositions and methods for stimulating bone growth
US6413998B1 (en) Compositions and methods for treating bone deficit conditions
WO1997015308A9 (en) Compositions and methods for treating bone deficit conditions
US7101907B2 (en) Topical administration of statins for treatment of bone disorders
CA2337988C (en) Inhibitors of proteasomal activity for stimulating bone and hair growth
WO1998025460A9 (en) Compositions and methods for stimulating bone growth
AU750816B2 (en) Piperazine derivatives for treating bone deficit conditions
US5939444A (en) Compositions and methods for treating bone deficit conditions
US6017940A (en) Compositions and methods for treating bone deficit conditions
WO2003059277A2 (en) Methods and compositions for stimulating bone growth using inhibitors of microtubule assembly
EP1609469A2 (en) Compositions and methods for stimulating bone growth
MXPA98003131A (en) Compositions and methods for the treatment of deficitary conditions of hue