CS59492A3 - Canglemycin c, process of its preparation, its use, a pharmaceutical and astrain for said canglemycin c preparation - Google Patents

Description

Kanglemycin C, způsob jehoprostředek a kmen pro přípravu k

Oblast techniky príprprvgřr q£ho| použití, farmaceutickýarig L^njyginu 6 CJ 1 ! i_ Zm >o< — -c mN ,1

•JO •o

Vynález se týká kanglemycinu C, který je fyziologicky účin-nou látkou, způsobu jeho přípravy a jeho využití jako farmaceu-tického prostředku. Podrobněji se vynález týká kanglemycinu C,který se používá jako nový imunosupresant pro léčení autoimunit-ní hemolytické anémie, zánětu ledvin i při rejekci pojivové tká-ně, dále se vynález týká způsobu přípravy kangemycinu G a jehofarmaceutického využití.

Dosavadní stav techniky

Nedávno vyvinuté imunosupresanty jsou vysoce selektivně účin-né ve smyslu specificky regulovat podskupinu určitých imunníchbuněk. Cyclosporin A, který zastupuje takové imunosupresanty, se-lektivně inhibuje proliferaci pomocníku T buněčného klonu a pro-to dosahuje pozoruhodných výsledků na poli transplantace orgánů. S úspěchem se cyclosporin A (Agents and Actions, 1976, Vol. 6,468-475) rozsáhle používá v klinikách. Cyclosporin je však do-provázen vedlejšími vlivy jako je akutní (nebo chronická) renál-ní intoxikace, mírný třes, neurální léze, onemocnění dásní, vy-padávání vlasů atd. FK-506 (Journal of Antibiotics, Vol. 40, 1249 (1987)) kterýbyl nedávno objeven je antibiotický makrolid ^44^59^22^ avelmi slibné výsledky na experimentální úrovni. Avšak vzhledemke komplikovanému způsobu jeho procesu je pravděpodobné, že kli-nická aplikace tohoto léku může být omezená.

Podstata vynálezu Předmětem tohoto vynálezu je poskytnutí lépe vyhovujícíhoimunosupresantu, který může překonat nedostatky konvenčních imu-nosupresantů.

Druhým předmětem vynálezu je poskytnutí způsobu přípravyimunosupresantu, který je výhodný z hlediska průmyslové výroby.

Dalším předmětem vynálezu je poskytnutí mikroorganismu, po-užitému k přípravě nového imunosupresantu. 2

Dalším předmětem vynálezu je poskytnutí farmaceutického po-užití nového imunosupresantu.

Autoři vynálezu intenzívně pracovali na studiích, zaměřenýchna získání nového imunosupresantu, u něhož jsou eliminovány ne-výhody, které mají známé imunosupresanty. Výsledkem prací jekanglemycin C, mající extrémně malou relativní molekulovou hmot-nost, který je novým imunosupresantem. Kanglemycin C byl získánfermentací živné půdy kmene náležejícího do rodu Nocardia, kte-rý byl změněn na Amycolatopsis (International Journal of óyste-matic Bacteology, Jan. 1986, p. 29-37) a bylo zjištěno, že ten-to nový imunosupresant má lepší vlastnosti a že může být imuno-supresantem nové nadcházející generace. Toho se dosahuje v tom-to vynálezu.

Vynález především poskytuje fyziologicky účinný kanglemy-cin C, který je charakterizován následujícími fyzikálně chemic-kými vlastnostmi, a jeho soli. 1. relativní molekulová hmotnost (EI-MS): m/z 326 (M+) 2. molekulový vzorec: θθ^ 3. teplota tání: 170 °G (s rozkladem) 4. optická rotace: + 150 0 (C 0,57, MeOH) 5. ultrafialové absorpční spektrum (teeOH): (log£) 232 (4>6l)> 356 (3>93) 6. infračervené absorpční spektrum (KBr) (cm”1): 3400, 1690, 1650, 1640 7. 13G-NMfí (100 MHz, DMSO-dg): 204,02 (s), 160,58 (s), 70,92 (s), 20,47 (t), 195,0 (s), 159,50 (s), 136,66 (d), 134,58 (s), 43,62 (d), 23,75 (q), 123,95 (d), 46,52 (t), 31,47 (t), 44,89 (d), 117,69 (s), 122,68 (d), 118,21 (d), 196,90 (s), 54,93 (d) 8. 1H-NMjR (400 MHz, DMSO-d6) 5,73 (1H, brs), 1,98 (3H, s), 2,79 (1H, d, J = 18,54), 2,35 (1H, d, J = 18,54), 1,47 (2H, m), 1,98 (1H, m), 1,79 (1H, m), 1,93 (1H, t), 7,30 (1H, d), 7,75 (1H, t), 7,55 (1H, d), 2,91 (1H, d), 3,37 (1H, d) - 3 -

Druhým aspektem vynález je poskytnutí způsobu přípravy fy-ziologicky účinného kanglemycinu C a jeho solí, zahrnující kul-tivování mikroorganismu, náležejícího do rodu Nocardia, kterýprodukuje kanglemycin C a získávání fyziologicky účinného kang-lemycinu C fermentací živné půdy. Třetím aspektem vynálezu je poskytnutí mikroorganismu, ná-ležejícího do rodu Nocardia, produkujícího kanglemycin C. Čtvrtým aspektem vynálezu je poskytnutí farmaceutickéhoprostředku pro imunosupresi, zahrnujícího jako účinnou složkufyziologicky účinný kanglemycin C nebo jeho farmaceuticky při-jatelné soli.

Vynález ilustrují obrázky, z nichž obr. 1 ukazuje ultra-fialové absorpční spektrum kanglemycinu C, na obr. 2 je ukázá-no infračervené absorpční spektrum (KBr) kanglemycinu C, naobr. 3 je ukázáno ^C-NMR spektrum (100 MHz, DMSO-dg) kangle-mycinu G a na obr. 4 je ukázáno ^Ή-ΝΜΗ spektrum (400 MHz, DMSO--dg) kanglemycinu C.

Kanglemycin C podle vynálezu má relativní molekulovouhmotnost 326 -j&amp;K 0e uvedeno ve fyzikálně chemických vlastnos-tech na předcházející straně, což je neobyčejně malá hodnotav porovnání s relativními molekulovými hmotnostmi známých imu-nosupresantů.

Optická rotace kanglemycinu C je: + 150° (C 0,57, MeOH)

Kanglemycin 0 prokazuje v methanolu maximum absorpce při 232 nma 356 nm v ultrafialovém absorpčním spektru; v infračervenémabsorpčním spektru prokazuje absorpci při 3400 cm \ 1690 cm ,1650 cm"1, 1640 cm-1, 750 cm“1 atd. Molekulový vzorec^C19H18°5^ byl urSen pomocí elementární analýzy. Tato slouče-nina je rozpustná v polárním organickém rozpouštědle, ale nenírozpustná ve vodě a v nepolárním organickém rozpouštědle. Čiš- -těný kanglemycin G tvoří žlutavé jehličky.

Fyziologicky účinný kanglemycin C podle tohoto vynálezulze získat kultivováním mikroorganismu, náležejícího do roduNocardia, produkujícího kanglemycin C, produkováním a shromaž-áováním kanglemycinu C a získáváním kanglemycinu C z takto zís-kané fermentační živné půdy.

Reprezentativním příkladem mikroorganismu, schopného pro-dukovat kanglemycin C je Nocardia mediterranei var, kanglensis - 4 - 1747-64, náležející do rodu Nocardia a získávaný (sklízený) vČínské lidové republice. Bakteriologické vlastnosti, fyziolo-gické vlastnosti a další, týkající se tohoto kmene, jsou uve-deny dále. 1. iiiiorfologické vlastnosti

Kmen byl pozorován po inkubaci při teplotě 28 °G po dvatýdny. Hyfy byly jednoduché s okrajovou částí zvlněnou nebo smyč-kovitou. Byla pozorována fragmentace spodní vrstvy substrátu my-celia. Netvoří se žádné sporangium ani vír. Povrch spory je hlad-ký nebo drsný a někdy trnitý. Spory jsou válcovité a mají veli-kost 0,6 (Um - 0,8 £im x 0,8 <um - 1,3 £un. Sporu tvoří asi de-set řetězců. 2. Růst v různých prostředích

Stadium růstu při teplotě 28 °C pozorované v různých prost-ředích po dvou týdnech uvádí Tabulka 1

Tabulka 1

Prostředí ..Růst Aeriální mycelium Substrátové mycelium Rozpustný pigment Sacharosa- dusičnanový agar dobrý mírný, bílé až světležlutooranžové světle žlutéaž světleoranžové nahnědlý Glukosa-asparagino-vý agar mírný mírný, bílé až světležlutooranžové světle žlutéaž světleoranžové nažloutlý Glycerin-asparagino-vý agar dobrý mírný, bílé až světležlutooranžové světle žlutéaž světleoranžové hnědý 3krob-anorganickésoli agar mírný mírný, bílé světle žlutéaž světležlutohnědé nahnědlý Tyrosinový agar mírný mírný,bílé světle žlutéaž světležlutohnědé nahnědlý Živný agar mírný mírný, bílé až světležlutooranžové světle žluté ažžlutooranžové žádný Kvasnico-sladový agar mírný mírný, bílé světle hnědé nažloutlý Agar z oves-né mouky mírný mírný, bledě oranžo-vé až světležlutohnědé bledě oranžové nažloutlý Pepton-kvas-nic© železi-tý agar mírný světle žluté žádný f i - 5 - 3· Fyziologické vlastnosti

Optimální teplota při růstu: 27 °C až 37 °CRedukce dusičnanu: negativní

Zkapalňování želatiny (prostředí glukóza-pepton-želatina,20 °C): negativní

Hydrolýza škrobu (škrob-anorganické sůl agarové prostře-dí): negativní

Koagulace sbíraného mléka: pozitivníPeptonizace sbíraného mléka: pozitivníTvorba melanoidového pigmentu: negativní 4. Použité zdroje uhlíku (Pridham-Gottlieb agarové prostředí) L-Arabinosa + D-Xylosa + D-Glukosa + D-Fruktosa + Sacharosa + Inositol + L-Rhamnosa + Rafinosa - D-Mannitol + 5. Kyselina diaminopimelová v buněčné stěně kyselina meso-diaminopimelová

Krátce lze shrnout, že buněčná stěna tohoto kmene je kyse-lina meso-diaminopimelová. Podle způsobu International Strepto-myces Project (zkráceno na I3P) náležejí hyfy tvořící spory dosekce (oddílu):

Rectiflexibles nebo Recticuliaperti; povrch spory je hladký ne-bo drsný; barva dospělé hyfy je ze série bílých barev; kmen ne-tvoří melanaidové pigmenty nebo jiný pigment v prostředí; bar-va substrátového mycelia je světle hnědá nebo světle žlutá;pozoruje se dělení, kterým se vyznačuje; řetězec roste za po-užití zdrojů uhlíku jako je L-arabinosa, D-glukosa, D-frukto-sa, sacharosa, inositol, L-rhamnosa, D-xylosa a D-mannitol,avšak neroste při použití rafinosy.

Na základě předcházejících vlastností se vedlo bakterio-logické šetření podle Bergeys kanual of Determinate Bacterio-logy, 8th edition (1974); výsledky ukázaly, že tento kmen ná-leží do rodu Nocardia. Proto dostal kmen název Nocardia medi-terranei var, kanglensis 1747-64 (zde uváděný jako kmen 1747-64) - 6 -

Tento kmen byl uložen v Committee of Preservation and Controlof Chinese kicroorganism v čínské lidové republice 20. února1991 a je přístupný pod označením No. CGkCC No. 0163. Tentokmen je taká uložen v Permentation Research Institute of theAgency of Industrial Science &amp; Techology of Japan dne 28. led-na 1992 pod Budapest Treaty a je přístupný pod označenímNo. FERk BP-3713.

Kanglemycin C podle tohoto vynálezu lze připravit kultivo-váním mikroorganismu, pradukujíčího kanglemycin C, náležejícíhodo rodu Nocardia a získáváním fyziologicky účinného kanglemyci-nu C fermentací živné půdy.

Jako prostředí pro kultivaci bakterií, produkujících kang-lemycin G, lze použít jakékoliv prostředí, pokud obsahuje při-měřené zdroje živin jež mohou bakterie produkující kanglemycinC, asimilovat. Jako zdroj uhlíku, který lze použít je napřík-lad glycerin, glukosa, maltosa, sacharosa, dextrin, škrob, ole-je a tuky atd. Jako zdroje dusíku, které lze použít, jsou orga-nické látky jako sojová suspenze, očkovaná suspenze ze semínekbavlny, masový extrakt, pepton, sušené droždí, suspenze z drož-Sových kvasinek, drožňový extrakt, roztok z máčené kukuřice atd.anorganické látky jako dusičnan amonný, síran amonný, dusičnansodný, uhličitan vápenatý, chlorid amonný atd.

Pokud je to nezbytné a potřebné, mohou být přidány anorga-nické soli, jako chlorid sodný, chlorid draselný, malaty (jab-lečnany), soli těžkých kovů atd., aminokyseliny a vitaminy.

Aby se předešlo pěnění během fermentace, je vhodné taképřidávat konvenčním způsobem přiměřené odpěňovací prostředky,například silikon, sojový olej atd.

Pro kultivaci je nejvýhodnější způsob hlubokého vzdušné-ho odstřelování, které se konvenčně používá při výrobě anti-biotik.

Teplota při kultivaci není zvláště omezována pokud jdé okanglemycin, může být produkován například při teplotě v roz-mezí od 25 °C do 37 °c, aniž by docházelo k zabraňování růstubakterií, produkujících kanglemycin C. Zvláště výhodné je tep-lotní rozmezí od 27 °C do 32 °C.

Kultivace obecně trvá, dokud se dostatečně akumuluje kan-glemycin C. Doba kultivace kolísá v závislosti na složení kul-tivačního prostředí a na teplotě inkubace. Obvykle se žádanýkanglemycin G získává kultivováním po dobu 20 hodin až 60 hodin. - 7 -

Kultivace se může provádět tak, jak je podrobněji uvede-no dále v Příkladu 1. Kmen 1747-64 je podroben šikmému kul ti —vování v šikmé kultivační půdě , složené ze škrobu, chloridusodného, dusičnanu draselného, agaru atd. Pak se sebere z šik-mé kultivační půdy koláč (vrstva) mycelia a inokuluje se na oč-kovanou kultivační půdu. Očkovaná kultivační půda se skládá zglukosy, drožáového extraktu, sojového extraktu, hydrogenfos-forečnanu draselného, síranu amonného atd. Inkubace trvá naočkované kultivační půdě při teplotě 25 °C až 32 °G od 24 ho-din do 55 hodin. Takto získaná očkovaná fermentační živná pů-da se převede do fermentačního prostředí, kde následuje kulti-vování při teplotě od 25 °C do 32 °C po dobu 68 hodin až 96hodin. Fermentační prostředí je složeno z glukosy, drožSovéhoextraktu, sojové suspenze, peptonu, uhličitanu vápenatého atd. Z takto získané fermentační živné půdy se sklízí kanglemycin C. K izolování kanglemycinu C z takto získané fermentačníživné půdy se používá vhodný přiměřený způsob izolace.

Fermentační živná půda se například filtruje a myceliumse izoluje známými způsoby pro izolování, například odstřeáo-váním. Z kapaliny nad sedlinou se může kanglemycin C izolovat,čistit a získávat extrakcí rozpouštědlem za použití vhodnéhorozpouštědla, chromatograficky s použitím adsorpce nebo schop-nosti iontové výměny, jednoduše nebo v kombinaci.

Kanglemycin C podle tohoto vynálezu má účinek silně inhi-bovat imunní buňky, zvláště konverzi buněk sleziny. Podle to-hoto vynálezu se připravuje imunosupresant, obsahující jakoúčinnou složku kanglemycin C nebo jeho farmaceuticky přijatel-né soli. Imunosupresant podle tohoto vynálezu může být apliko-ván teplokrevným živočichům, včetně lidí, v účinné dávce kang-lemycinu G. Tento imunosupresant může být dáván injekcemi pa-renterálně; alternativně může být tento imunosupresant také po- ..dáván perorálně nebo jiným parenterálním způsobem než injekce-mi. Pávka kanglemycinu C může velmi záviset na subjektu, jemužje podáván nebo na způsobu, jímž je podáván, avšak všeobecněse dávka pohybuje v rozmezí od 0,1 mg/kg/den do 100 mg/kg/den,s výhodou od 0,5 mg/kg/den do 50 mg/kg/den.

Farmaceutické přípravky nejsou nijak zvláště omezeny.Kanglemycin C se připravuje ve formě kapalného nebo pevného pre-parátu, obsahujícího od 0,01 hmotn. % do 50 hmotn. % kanglemy- - 8 - činu C, vztaženo na celkovou hmotnost preparátu, spolu s běžněpoužívanými farmaceutickými aditivy, například nosiči, pomoc-nými prostředky atd. Tento preparát se podává perorálně neboparenterálně.

Jak je uvedeno v předcházejícím popisu, kanglemycin, kterýje nová fyziologicky účinná látka, je možné získat z fermentač-ní živné půdy kmene 1747-64, náležejícího do rodu Nocardia.Kanglemycin C silně inhibuje přeměnu imunních buněk, zvláštěbuněk sleziny a silně inhibuje bujení nádorových buněk. Kromětoho může být kangemycin C výhodně připravován z průmyslovéhohlediska, protože má neobyčejně malou relativní molekulovouhmotnost v porovnání se známými imunosupresanty.

Lze předpokládat, že kanglemycin C je slibným imunisupre-santem příští generace, nebot kanglemycin C eliminuje různé ne-výhody, které jsou spojeny se známými imunosupresanty. Dále je vynález podrobněji popsán v následujících Příkla-dech a v Testovacím příkladu. Příklady provedeni vynálezu Příklad 1

Produkce kanglemycinu C

Kmen 1747-64 se kultivuje a fermentuje. Takto získaná fer-mentační živná půda se extrahuje organickým rozpouštědlem.Kanglemycin C se izoluje a čistí z extraktu pomocí kolonovéchromatografie. Podmínky jsou podrobně uvedeny: 1. šikmá kultivační půda(%): KNO^ 0,1; NaCl 0,5; ^HPO^ 0,05;FeSO^ 0,01; škrob 2; agar 1,7; chladná převařená voda, pH.7,0; inkubace při teplotě 28 °C po dobu 5 až 7 dní; 2. Očkovaná kultivační půda (%): glukosa 2,5; práškové droždí0,5; KC1 0,25; sójová suspenze 0,5; K2HP0^ 0,02; (NH^^SO^0,5; MgSO^. 0,02; CaCO^ 0,5; pitná voda 100 ml; (pH se ne-upravovalo ) ; 3. Složení fermentačního prostředí (%): glukosa 3; práškovýdrožóový extrakt 1, sójová suspenze 0,5; pepton 0,2; CaCOj0,1; pitná voda 100 ml (pH se neupravovalo). Výše popsaná prostředí se všechna sterilizují při teplotě 121 °C po dobu 30 minut v autoklávu a uchovají se pro použití.

Smyčka kultury kmene 1747-64 se inokuluje do třepací láhve oobjemu 250 ml, naplněné 50 ml očkované kultivační půdy a pakse kultivuje při teplotě 28 °C po dobu 48 hodin v rotační tře-pačce (při 130 až 200 otáčkách za minutu). Takto získaná očko-vaná Kultivační živná půda se převede do třepací láhve o obje-mu 500 ml, která obsahuje 50 ml fermentačního prostředí v pomě-ru k 10 &amp; (objemově). Po kultivaci při teplotě 28 °G po dobu72 hodin v rotační třepačce (při 180 až 200 otáčkách za minu-tu) se získá fermentační živná půda.

Takto získaná fermentační živná půda se filtruje a hodno-ta pH filtrátu se upraví na 4 přídavkem anorganické kyseliny.Filtrát se extrahuje butylacetatem. Extrakt se koncentruje aa získaný koncentrát se podrobí chromátografii se silikagelem.Po eluování směsí chloroformu a methanolu (30:1) se aktivnífrakce v eluátu spojí a zkoncentrují. Takto získaný koncentrátse dále čistí na Sephadex LH-20 koloně s ethanolem. Aktivnífrakce eluátu s ethanolem se spojí a koncentrují. Rekrystali-zací z ethanolu se získá čištěný kanglemycin C. Kanglemycin Gtvoří nažloutlé jehličky a rozkládá se při teplotě 170 °C. Re-lativní molekulová hmotnost této látky je 326 a její optickáaktivita je: E<k]2p + 150° (c 0,57, MeOH); maximum absorpčního spektra v ultrafialové oblasti v methanoluje při vlnové délce 232 nm a 256 nm (viz obr. 1); v infračer-veném absorpčním spektru při 3400 cm”'3' , 1690 cm 1650 cm”·3·I64O cm”3-, 750 cm”3" (viz obr. 2). Tato sloučenina je rozpust-ná v polárním organickém rozpouštědle avšak nerozpustná ve vo-dě a v nepolárních organických rozpouštědlech. Příklad 2

Izolace a čištění kanglemycinu G K 33 1 fermentační živné půdy, získané podobným způsobemjako v Příkladu 1, se přidá 20 1 butylacetatu. Hodnota pH té-to směsi se upraví na 4,0 přídavkem 3K-HC1 a extrahuje se. Or-ganická fáze se vysuší do sucha za sníženého tlaku a získá se3,12 g zbytku. Tento zbytek se rozpustí v methanolu a k roz-toku se přidá 30 g silikagelu (vyrobeného v Chingtao Kako Fac-tory) - methanolu, v němž se rozpustí zbytek^se dává 30 ml. 10 - oměs se odpaří do sucha za sníženého tlaku. Zbytek se umístído kolony o objemu S00 ml se silikagelem a s chloroformem. Ko-lona se vyvíjí směsí chloroform:methanol(30:l) a shromažďujíse žádané frakce. Takto se získá 25,3 mg nahnědlého prášku.Tento prášek se rozpustí v ethanolu. Roztok pak prochází kolo-nou se 300 ml Oephadexu Ltí-20 (chráněná značka; vyrábí se vePharmacia Fine Chemicals lne.) a vyvíjí se za pomoci ethanoluŽádané frakce se shromažďují a odpařují do sucha za sníženéhotlaku. Zbytek se rekrystalizuje z malého množství ethanolu atakto se získá 9,5 mg kanglemycinu C ve formě nažloutlých jehliček.

Teplota tání: 170 °C (rozklad) ΞΙ-MS m/z: 326 (M+)

Elementární analýza:

Vypočteno: C 69,93; H 5,55Nalezeno: C 69,5δ; H 5,60 13C-NMR (100 MHz, DMSO-dg) (viz obr. 3): 204,02 (s); 160,58 (s), 70,92 (s); 20,47 (t); 195,0 (s); 159,50 (s); 136,66 (d), 134,58 (a); 43,62 (d); 23,75 (q), 123,95 (d), 46,52 (t); 31,47 (t); 44,89 (d); 117,69 (s); 122,68 (d); 118,21 (d); 196,90 (s); 54,93 (d) ^H-NMR (400 MHz, DlďSO-dg) 5,78 (1H, brs); 1,98 (3H, s); 2,79 (1H, d, J = 18,54); 2,35 (1H, d, J = 18,54); 1,57 (2H, m); 1,98 (1H, m); 1,79 (1H, m); 1,98 (1H, t); 7,30 (1H, d), 7,75 (1H, t); 7,55 (1H, d), 2,91(1H, d); 3,37 (1H, d) HPLC: Kolona: Senshu Pak ODS-2151-A 6x5 x 150 mmTeplota: 35 °CDetekce: UV (232 nm)

Mobilní fáze: CH^CN: Ο,ΙΜ-fosforečnanový tlumivý roztok(pH 6,0) = 4:6

Retenční čas: 7,41 minut (kanglemycin C) 11 -

Testovací příklad

Imunosupresívní účinnost a inhibiční účinnost na růst nádoro-vých buněk , kterou má kanglemycin C a toxicita Při podávání kanglemycinu G v dávce 0,5 /úg/ml dosáhla in-hibiční rychlost přeměny lymřocytů sleziny u myší hodnoty 96,9Když se slezinné buňky myší kultivovaly, neprokazoval kanglemy-cin C toxicitu do hodnoty dávky 40 ^íg/ml, což indikuje, že se ne-projevuje žádná toxicita vůči spermatogenním buňkám v koncentra- *ci do 1 mg/ml. Při intravenózní aplikaci kanglemycinu C myším v dávce2 mg/kg nebylo pozorováno žádné úmrtí. Tím se potvrzuje, že to-xicita je velmi nízká. kanglemycin C inhibuje bujení K562 leukémických buněk přikoncentraci 0,1 ^ig/ml nebo menší a inhibuje bujení HeLa bu-něk při koncentraci 0,1 ^ug/ml. Příklad 3 Příprava tablet

Směs 30 hmotnostních dílů kanglemycinu C, 120 hmotnostníchdílů krystalické laktózy, 147 hmotnostních dílů krystalické ce-lulózy a 3 hmotnostní díly stearátu horečnatého se tabletují zapoužití mísiče ve tvaru V a získají se tak tablety o hmotnosti300 mg.

Claims (9)

12 - 26 (M ) PATENTOVÉ N A R ϋ K Ϊ

1. Relativní molekulová hmotnost (SI-MS) : m/z 3

1. Kanglemycin C, který je fyziologicky účinnou látkou, majícínásledující fyzikálně chemické vlastnosti a jeho farmaceutic-ky přijatelné soli.

2. Způsob přípravy kanglemycinu C podle bodu 1, který je fyzio-logicky účinnou látkou a jeho solí, vyznačujícíse t í m, že se kultivuje kanglemycin C produkující mik-roorganismus, náležející do rodu Nocardia a z fermentačníživné půdy se získává kanglemycin C.

2. Molekulový vzorec: J. Teplota tání: 170 °C (rozklad)

3. Farmaceutický prostředek podle bodu 1,vyznačujícíse t í m, že obsahuje jako účinnou složku kanglemycin Ckterý je fyziologicky účinnou látkou, nebo jeho farmaceutic-ky při jatelnou sůl. "ugd ΛΛ3Γ90V ΑΖ3ΊγΝλΛ avgn OSd Z 6 III '0 ε (ť)T d, J = 18,54)L,98 (1H, m); 13 -

4. Farmaceutický prostředek podle bodu 3, který je vhodný proimunosupresi.

4. Optická aktivita: &amp;t]2D + 150° (c °’57’ ke0H)

5. Kmen, náležející do rodu Nocardia a schopný produkovat kang-lemycin C, který je fyziologicky účinnou látkou.

5. Ultrafialové absorpční spektrum (MeOH): (log£) 232 (4,61), 356 (3,93)

6. Kmen, schopný produkovat kanglemycin G podle bodu 3, který je Nocardia měditerranei var, kanglensis 1747-64 (FERM BF-3718)^

6. Infračervené absorpční spektrum (KBr) (cm~^) 3400, 1690, 1650, 1640 7. 13C-WR (100 MHz, DMSO-dg) : 204,02 (s); 160,58 (s); 70,92 (s) ; 20,47 (t); 195,0 (s); 159,50 (s); 136,66 (d); 134,58 (s); 43,62 (d); 23,75 (q); 123,95 (d) ; 46,52 (t); 31,4744,89 Cd); 117,69 (s) ; 122,68 (d); 118,21 (d); 196,90 (s) ; 54,93 (d). 8. -^-ΝΜΕ (400 MHz, DMSO-dg) 5.78 (1H, brs); 1,98 (3H, s); 2,79 (1H, 2,35 (1H, d, J = 18,54); 1,47 (2H, m); 1.79 (1H, m); 1,98 (1H, t); 7,30 (1H, d); 7,75 (1H,t); 7,55 (1H, d); 2,91 (1H, d); 3,37 (1H, d).

7. Způsob pro imunopresi, vyznačující se tím,že se savcům podává kanglemycin C podle bodu 1, který jefyziologicky účinnou látkou, nebo jeho farmaceuticky přija-telná sůl, a to ve farmakologicky účinném množství.

8. Použití kanglemycinu C, který je fyziologicky účinnou lát-kou, nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, jako farmaceu-ticky účinné ingredience.

9. Použití kanglemycinu G, který je fyziologicky účinnou látkou,nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli, pro přípravu farma-ceutického prostředku pro imunosupresi.