CS274030B1 - Method of yeast /1-3/-beta-d-glucan purification - Google Patents
Method of yeast /1-3/-beta-d-glucan purification Download PDFInfo
- Publication number
- CS274030B1 CS274030B1 CS3889A CS3889A CS274030B1 CS 274030 B1 CS274030 B1 CS 274030B1 CS 3889 A CS3889 A CS 3889A CS 3889 A CS3889 A CS 3889A CS 274030 B1 CS274030 B1 CS 274030B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- glucan
- beta
- alpha
- yeast
- purified
- Prior art date
Links
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 title claims abstract description 12
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 title claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 title abstract description 3
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 claims abstract description 19
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 claims abstract description 3
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 claims abstract description 3
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 10
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 9
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 9
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 4
- 230000003625 amylolytic effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 claims description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 3
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 claims description 2
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 claims description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 claims description 2
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 claims 2
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 claims 2
- 108010021511 Aspergillus oryzae carboxyl proteinase Proteins 0.000 claims 1
- 206010011985 Decubitus ulcer Diseases 0.000 claims 1
- 208000004210 Pressure Ulcer Diseases 0.000 claims 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 claims 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 claims 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 108010001062 polysaccharide-K Proteins 0.000 abstract 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 9
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 8
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- FYGDTMLNYKFZSV-WFYNLLPOSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,3s,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-WFYNLLPOSA-N 0.000 description 3
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 3
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 3
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 3
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 108010019077 beta-Amylase Proteins 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
1 cs 274030 Bl
Vynález sa týká sposobu purifikácie kvasinkového (1—>3, -beta-D-glukánu znečistěnéhoalfa-D-glukánmi.
Kvasinkový (1—>3)-beta-D-glukán sa získává bud z nedezintegrovaných buniek / J. D.MANNERS, A. J. MASSON, J. C. PATTERSON, J. Gen. Microbiol. 80, 411 (1974); A. MISAKI, J. JOHNSON, S. KIRKWOOD, J. V. SCALETTI, F. SMITH, Carbohydr. Res. 6, 150 (1968); CS270103/ alebo z dezintegrovaných buniek /CS 243173/, ktoré sa viacnásobne extrahujúzriedenými alkáliami a zriedenými organickými i anorganickými kyselinami, připadne zapoužitia zmáčadiel. Získaný zvyšok představuje nerozpustný stěnový (1—»3)-beta-D-glukánkvasiniek. Týmito sposobmi připravený beta-D-glukán m3že v niektorých prípadoch - závislých odvýběru kmeňa a spSsobu jeho kultivácie - obsahovat' alfa-D-glukány, ktoré v značnéj miereznižujú jeho imunomodulačnú aktivitu.
Zistilo sa, žé taký polysacharidový preparát, ktorý okrem (1—^3)-beta-D-glukánu obsa-huje aj nežiadúci alfa-D-glukán, je možné purifikovať sp&sobom podl'a vynálezu. Podstatavynálezu spočívá v tom, že polysacharidový preparát sa tepelne upraví do homogenizovanejformy, ktorou je gél, event. v případe pólysacharidového preparátu, ktorý gél netvoří,vodná suspenzia, přidá sa k němu fosfořečňanový tlmivý roztok a amylolytický enzým. Zisti-lo sa, že ako amylolytický enzým sa máže použiť čistá alfa-amyláza, Specificky hydrolyzu-júca (1-}4)-alfa-D-glukány alebo zmes enzýmov (komerčně dostupné technické preparáty) sú-častíou ktoréj sú připadne enzýmy s beta-amylázovou aktivitou alebo s (1—>3)-alfa-D-gluko-zidázovou aktivitou. Amylolytický enzým sa pri teplote 25 až 50 *C nechá posobiť až dorozloženia nežiadúcich alfa-D-glukánových příměsi na rozpustné dextríny, ktoré sa odstrá-nia filtráciou reakčnej zmesi a nerozpustný beta-D-glukán sa izoluje, premyje (vodou aorganickým rozpúšť adlom) a vysuší. Prítomnosť, resp. nepřítomností znečistíujúcich polysa-charidov (alfa-D-glukány) sa zisťuje IČ připadne 1^C-NMR spektroskopiou.
Hlavnou výhodou postupu je Specifické odstránenie znečistí ujúcich alfa-D-glukánov bezatakovania a modifikácie připravovaného (1—»3)-beta-D-glukánu, ktorý v purifikovanej forměmá vyššiu imunomodulačnú účinností ako povodný znečistěný (1—*3)-beta-D-glukán.
Uvedené příklady ilustrujú, ale neobmedzujú predmet vynálezu. Příklad 1 Získanie kvasinkového (1—>3)-beta-D-glukánu 100 g pekárského droždia (Saccharomyces cerevisiae) sa suspenduje v 150 ml 6 % hmot.hydroxidu sodného a pri 60 "C sa mieša 4 h. Suspenzia sa zriedi 100 ml 60 "C teplej vodya odstředí. Sediment sa suspenduje v 150 ml 3 % hmot. hydroxidu sodného, mieša pri 80 až100 *C 2 h a odstředí. Sediment sa trikrát premyje vodou a extrahuje trikrát 20 ml 4 Shmot. kyselinou chlorovodíkovou za miešania pri teplote miestnosti 2 h a odstředí. Sedi-ment sa premýva vodou dovtedy, až supernatant je číry a reaguje neutrálně. Získaný stěno-vý glukán sa lyofilizuje. Výťažok 4,5 až 5,4 % hmot. počítané na sušinu kvasiniek. Glukánneobsahuje dusík a obsah popola je 0,3 až 0,6 % hmot. IČ spektrum obsahovalo okrem ab-sorbčného pásu pri 890 cm“1 charakteristického pre beta-glykozidové vazby aj pásy pri 720až 725 a 920 až 935 cm"1 a v 1^C-NMR spektre boli signály s chemickým posunom 100,9 a83,2 ppm charakteristické pre (l—>4)-alfa- príp. (1—>3)-alfa-D-glykozidové vazby. Příklad 2 2 g beta-D-glukánu z příkladu 1 sa zahrejú v 100 ml HjO na vriacom vodnom kúpeli tak,aby sa vytvořil gél. Po vychladnutí sa přidá 10 ml fosforečňanového tlmivého roztokupH = 6,0, obsahujúceho 10 mg alfa-amylázy s pH optimom v oblasti 5,9 až 6,5. Enzým sa ne-chá pri laboratórnej teplote posobiť 72 h za občasného premiešania.
Potom sa nerozpustný polysacharid oddělí na frite, trikrát premyje vodou 50 ‘c teplou
Claims (2)
- « «- CS 274030 B1 a acetónom a nechá vysušiť na vzduchu. Výťažok 1,5 g. IČ spektrum produktu nevykazujeabsorbčné pásy charakteristické pre alfa-D-glukány. Příklad 3 Gél polysacharidového preparátu, připravený ako v příklade 2 sa termostatuje na tep-lotu 35 'C, přidá sa fosforečňanový tlmivý roztok o hodnotě pH 4,5 až 6,5, ktoré vyhovu-je pH optimu oboch použitých enzýmov, přidá sa roztok alfa-amylázy a gluko-amylázy v množ-stve, aby poměr sumy enzýmov ku substrátu bol 1 : 100. Enzýmy sa nechájú posobiť za mie-šania 2 dni a reakčná zmes sa spracuje ako v příklade
- 2. IČ spektrum produktu nevykazujeabsorbčné pásy charakteristické pre alfa-D-glukány. Příklad 4 Peptidácia polysacharidového preparátu sa uskutoční 3 h miešaním v pufrovanej vodnejsuspenzii o hodnotě pH, ktoré vyhovuje pH optimu použitého enzýmu. Potom sa přidá roztoktechnického amylázového preparátu (takadiastáza, rohamyláza, bolamyláza) o rovnakom pHako polysacharidová suspenzia. Po dvojdňovom působení pri 45 ’C sa reakčná zmes ochladía přefiltruje. Nerozpustný zvyšok sa premyje vodou, metanolom a acetónom. IČ spektrumpurifikovaného glukánu nevykazuje absorbčné pásy odpovedajúce alfa-D-glykozidovým vaz-bám. Purifikovaný kvasinkový (1—>3)-beta-D-glukán sa móže použití pri terapii popálenin,dekubitov, nehojacích sa vredov, ako adjuvans a na přípravu Specifických imunostimulač-ných preparátov. PREDMET VYNÁLEZU Spdsob purifikácie kvasinkového (1—>3)-beta-D-glukánu znečistěného alfa-D-glukánmi,vyznačujúci sa tým, že polysacharidový preparát obsahujúci vedl'a (l-> 3)-beta-D-glukánualfa-D-glukány, tepelne upravený do homogenizovanej formy, sa po přidání fosforečňanové-ho tlmivého roztoku inkubuje pri teplote 25 až 50 "c s amylolytickými enzýmami až do roz-loženia znečistí ujúcich polysacharidov na rozpustné dextríny a zo zmes i sa izoluje fil-tráciou reakčnej zmesi nerozpustný (1-ř3)-beta-D-glukán v purifikovanej formě.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS3889A CS274030B1 (en) | 1989-01-02 | 1989-01-02 | Method of yeast /1-3/-beta-d-glucan purification |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS3889A CS274030B1 (en) | 1989-01-02 | 1989-01-02 | Method of yeast /1-3/-beta-d-glucan purification |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS3889A1 CS3889A1 (en) | 1990-08-14 |
| CS274030B1 true CS274030B1 (en) | 1991-04-11 |
Family
ID=5331874
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS3889A CS274030B1 (en) | 1989-01-02 | 1989-01-02 | Method of yeast /1-3/-beta-d-glucan purification |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS274030B1 (cs) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI20080665A0 (fi) | 2008-12-18 | 2008-12-18 | Glykos Finland Oy | Luonnollisen tyyppiset sakkaridikoostumukset |
-
1989
- 1989-01-02 CS CS3889A patent/CS274030B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS3889A1 (en) | 1990-08-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69631471T3 (de) | Verfahren zur verflüssigung von stärke | |
| DE2538322A1 (de) | Verfahren zur herstellung von dextrose unter verwendung von immobilisierten enzymen | |
| US3931146A (en) | Hydrogenated pullulan | |
| US3039936A (en) | Production of dextrose from starch | |
| SU1230469A3 (ru) | Способ получени содержащего фруктозу продукта из сахарозы | |
| US3042584A (en) | Treatment and use of enzymes for the hydrolysis of starch | |
| DE3851022T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von verzweigten Fructo-Oligosacchariden. | |
| DE2209834C3 (de) | Herstellung von Saccharase-Inhibitoren | |
| DE69022909T2 (de) | Enzymatische Oxidation von Ceph C zu Glutaryl-7-Aminocephalosporansäure. | |
| Chiba et al. | Comparative Biochemical Studies of α-Glucosidases: Part I. Substrate Specificity and Transglucosidation Action of an α-Glucosidase of Brewer’s Yeast | |
| EP0164933B1 (en) | Process of enzymatic conversion | |
| CS274030B1 (en) | Method of yeast /1-3/-beta-d-glucan purification | |
| CN85101178B (zh) | 淀粉水解液和高含量果糖糖浆的制作方法 | |
| US4327183A (en) | Method for purifying fatty acid esters of saccharide | |
| DE2424833C3 (de) | Verfahren zur Herstellung von Maltose | |
| EP1397389B1 (en) | A method of isolation of immunostimulating glucan from oyster mushroom | |
| US2871235A (en) | Process for obtaining polysaccharide material from plants of the genus cecropia | |
| DE2614393C3 (de) | Aminozucker-Derivate und diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel | |
| US3101302A (en) | Purification and recovery of fungal amylases | |
| JPH0662852A (ja) | フコイダン分解酵素 | |
| US3630845A (en) | Process for preparing dextrose containing syrups | |
| DE1953189A1 (de) | An Cellulosederivate chemisch gekuppelte Amylasen und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
| JP3486665B2 (ja) | イソプリメベロシドとその製造方法、及び利用酵素 | |
| DE4407699C2 (de) | Enzymatisches Oxidationsverfahren zur Umsetzung von Cephalosporin C in Glutaryl-7-aminocephalosporansäure | |
| TWI805271B (zh) | 靈芝類細胞壁組成物之純化方法 |