CS270235B2 - Method of carbocyclic purine nicleotides preparation - Google Patents

Method of carbocyclic purine nicleotides preparation Download PDF

Info

Publication number
CS270235B2
CS270235B2 CS88895A CS89588A CS270235B2 CS 270235 B2 CS270235 B2 CS 270235B2 CS 88895 A CS88895 A CS 88895A CS 89588 A CS89588 A CS 89588A CS 270235 B2 CS270235 B2 CS 270235B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
formula
compound
group
solution
multiplet
Prior art date
Application number
CS88895A
Other languages
English (en)
Other versions
CS89588A2 (en
Inventor
Tsunehiko Fukuda
Ryuji Marumoto
Original Assignee
Takeda Chemical Industries Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Takeda Chemical Industries Ltd filed Critical Takeda Chemical Industries Ltd
Publication of CS89588A2 publication Critical patent/CS89588A2/cs
Publication of CS270235B2 publication Critical patent/CS270235B2/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/66—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D233/90—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/28—Oxygen atom
    • C07D473/30—Oxygen atom attached in position 6, e.g. hypoxanthine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F7/00—Compounds containing elements of Groups 4 or 14 of the Periodic Table
    • C07F7/02—Silicon compounds
    • C07F7/08—Compounds having one or more C—Si linkages
    • C07F7/0834—Compounds having one or more O-Si linkage
    • C07F7/0838—Compounds with one or more Si-O-Si sequences
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
    • C07F9/65616—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings containing the ring system having three or more than three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members, e.g. purine or analogs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6564—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms
    • C07F9/6571—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07F9/6574—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/65744—Esters of oxyacids of phosphorus condensed with carbocyclic or heterocyclic rings or ring systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

Tento vynález se týká kerbocyklických nukleotidů, způsobu jejich přípravy a proti virového činidla* zvláště se tento vynález týká cyklopentanových analog purinových nukleotidů užitečných jako činidla při výzkumné práci v oblasti biochemických nebo lékařských věd a použitelnýoh Jako léčiva, jako jsou například protivirová činidla* □e známo, že cyklopentanová analoga purinových nukleosidů, representovaných například aristeromycinem, vykazují zajímavé účinnoati v různých enzymových systémech, v nichž se účastní obvykle purinový nukleotid /Medioinal Research Review 6/1 (1986)·/· DNA obsahující karbooyklický analog 2*-deoxyadenoain má výhodnou vlastnost, pokud jde o techniku genetické rekombinaoe, ve srovnáni a přírodním typem DNA obsahující >
ž'-deoxyedénosin/Nucleic Acida Research, Symposium series č* 16, strana 141 (1985)·/· □ако karbocyklioká analoga nukleotidů jsou známa pouze aristeromyoin-3*, 6*-cyklický fosfát a aristeromycin-6*-fosfát/ Chem· pharm· Bull· 2J, 990 (1979)·/· .
□ak je shora uvedeno, i když z derivátů kyseliny fosforečné s karbocykličkým purinovým nukleotidem jsou známy deriváty aristeromyoinu, nedošlo к žádným podstatným výzkumům derivátů kyseliny fosforečné s jiným karbocyklickým purlnovým nukleotidem·
Na základě shora uvedených okolnosti autoři tohoto vynálezu prováděli rozsáhlé studie přípravy nových · užitečných karbocykllokých purinových nukleotidů podle tohoto vynálezu· ·
Zvláště ae tento vynález týká způsobu přípravy sloučeniny obecného vzorce I
v němž
Y znamená adenin-9-ylovou skupinu, guanin-9-ylovou skupinu nebo 5-amino-4»karbamoy 1-imidazol-l-y 1-ovou skupinu, ... · ··
X znamená atom vodíku nebo hydroxylovou skupinu a tím, že jestliže Y znamená adenin-9-ylovou skupinu, pak X znamená atom vodíku,.
a R2 znamenají nezávisle na sobě atom vodíku nebo skupinu obecného vzorce A
0R~
I
- °>ň »3 o
(A), v němž n znamená číslo od 1 do 3 · R3 znamená atom vodíku nebo uhlovodíkový zbytek a 1 až 14 atomy uhlíku, za předpokladu, že R^ a Rg neznamenají současně atom vodíku, nebo R^ a Rg společně znamenají skupinu obecného vzorce В
P — 0R3
I o
<B)
CS 270235 82 v němž R3 má shora uvedený význam a jestliže existují dvě nebo více skupin R3, pak mohou nezávisle na sobě znamenat různé skupiny, nebo jejích solí, jehož podstata spočívá v tom, že se sloučenina obecného vzorce II
HO
(II),
HO v němž X a Y znamenají jak shora uvedeno, po případné® chránění hydroxylové skupiny v poloze 3* a 6Z fosforyluje fosfóry lačním činidle® obecného vzorce lil
P
v němž Xp X2 a X3 jsou stejné nebo různé a znamenají ato® chloru, hydroxylovou skupinu, dichlorfosfórylovou skupinu, benzyloxyskupinu, fenoxyskupinu, morfolinovou skupinu, β -kyanoethyloxyskupinu nebo benzy1-H-fosfonylovou skupinu, a hydrolyzuje se a popřípadě se sloučenina obecného vzorce I, v němž znanená skupinu obecného vzorce A a R2 znamená atom vodíku а Y а x mají shora uvedený význam nebo r2 znamená skupinu obecného vzorce A a R^ znamená atom vodíku a Y а x nají shora uvedený význam, cyklizuje za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, v němž R^ a znamenají společně skupinu obecného vzorce в a Y а X mají shora uvedený význam· vynález se dále týká protivirového činidla, které obsahuje sloučeninu obecného vzorce 1-1
v němž
Y znamená zbytek purinové báze nebo 5-amino-4-karbamoy1-imidazol-l-ylovou skupinu,
Xzžnamená atom vodíku nebo hydroxylovou skupinu (s tín, že jestliže γ znamená adenin-9-ylovou skupinu, pak X znamená atom vodíku), R1 a R2 nezévisle na sobě znamenají atom vodíku nebo nají současně atom vodíku) skupinu obecného vzorce (Jestliže R1 a R2 neznameorq
I « 0 ín“3 o
CS 270235 02 v němž n znamená číslo od 1 do 3, nebo R^ a Rg společně znamenají skupinu obecného vzorce
P - 0Rq
II o
v němž znamená atom vodíku nebo uhlovodíkový zbytek s 1 až 14 atomy uhlíku a, jestliže existuje dvě nebo více skupin R^, pak tyto mohou nezávisle ne sobě znamenat různé skupiny, в Její soli· '
Ve sloučeninách obecných vzorců I, 1-1 а II zbytek purinové báze jako У znamená různé báze, které mají skelet nazývaný v Oblasti chemie nukleosiďů purlnový kruh· Příklady těchto bází jsou adenin, hypoxanthin, guanin, lsoguanin, xanthin, 3-deaza-adenin, 7-deaza-adenin, 8-aza-adenin, 2,6-diaminopurin.atd· z těchto bází jsou výhodnými purinovými bázemi ty/ které Jaou obsaženy Jako složky v přírodních nukleových kyselinách· Mezi tyto purinové báze patří adenin, hypoxanthin, guanin, xanthin a 2,6-diamonopurin. patří sem takové báze, které v poloze N1 purlnového kruhu mají alkoxymethylovou skupinu (která je zde níže označována jako R^)· V obecných vzorcích i, 1-1 au jsou tyto báze vázány atomem dusíku v poloze 9 pur^nového kruhu·
Ve sloučeninách obecného vzorce I, 1-1, о II zbytky purinové báze mohou mít chránící skupiny· Oako chránící skupiny, tj· chránící skupiny eminové skupiny v poloze 2nebo 6-, se používají ty chránící skupiny, které jsou obvykle použitelné v oblasti chemie nukleosidů· Například jako chránící skupina adeninu se často používá zbytek aromatické karboxylové kyseliny s 5 až 30 atomy uhlíku (například benzylová skupina)· □ako chránící skupina guaninu se často používá zbytek alifatické karboxylové kyseliny se 2 až 10 atomy uhlíku s přímým nebo větveným řetězcem (například асуlová skupina, isobutyrylová skupina a propionylová skupina)·
Ve sloučeninách obecného vzorce I а II se jako chránící skupina, jestliže x znamená chránící skupinu hydroxylové skupiny, používá kterákoliv chránící skupina, která je použitelná jako chránící skupina hydroxylové skupiny v oblasti chemie nukleosidů bez jakéhokoliv zvláštního omezeni· Mezi příklady těchto chránících skupin patří, mimo jiné, alky lsilylová skupina se 3 až 10 atomy uhlíku (např· terč· butyldimethylsily lová skupina), skupina odvozená od alkylcyklického etheru nebo alkoxy-cyklického etheru se 4 až 10 atomy uhlíku (například tetrahydrofuranylové deriváty se 4 až 7 atomy uhlíku, tetrahydropyranylová deriváty a 5 až 8 atomy uhlíku (například nethoxytetrahydropyranylová skupina)), alkoxyalkýlová skupina se 3 až 10 atomy uhlíku (například ethoxyethylová skupina a methoxymethylová skupina), tritylová skupina a její alkoxyderiváty (například monomethoxytritylová skupina a dimethoxytritylová skupina) atd. Oeetliže chránící skupinou je acylová skupino, pak tato асуlová skupina může být ve formě esteru alifatické kyseliny (například s přímým řetězcem nebo s rozvětveným řetězcem s 1 až 10 ato.my uhlíku) nebo esteru aromatické karboxylové kyseliny (například s s až 30 atomy uhlíku)· zavedení nebo odstranění těchto chránících skupin hydroxylových skupin se provádí konvenčními způsoby·
Mezi příklady uhlovodíkových zbytků s 1 až 14 atomy uhlíku R3 v obecném vzorci I a 1-1 patří alkylové skupina s jedním až 6 atomy uhlíku (například skupina methylová, ethylová, propylová, butylová a lsobutylová), popřípadě substituované fenylové skupiny nebo aralkylové skupiny se 7 až 14 atomy uhlíku (například fenethylová a benzylová skupina)· Příklady substituentů fenylových skupin jsou methylová skupina, ethylová skupina, atom chloru, tri fluormethylová skupina, dimethylaminová skupina, aminová skupina, methoxyskupína, ethoxyskupina, hydroxylové skupina atd.
Sloučenina obecného vzorce I se získá tak, že se sloučenina obecného vzorce n fosfóryluje. К tomuto postupu je uvedeno následující vysvětlení.
1) Sloučenina obecného vzorce I, v němž má skupinu obecného vzorce A a Rg znamená atom vodíku (dále zde v některých jednoduše označovaná jako з'-ester kyseliny fosforečné), se může připravit tak, že se nejdříve chrání primární hydroxylová skupina v poloze 6* chránící skupinou, jako je například tritylová skupina, potom se podrobí tosylaci působením vhodného fosforylačního činidla, načež následuje odstranění chránící skupiny v poloze 6*. Fosfory láce se může provádět tak, že se chráněná sloučenina nechá reagovat s fosforylačním činidlem třicet minut až 10 hodin při teplotě +10 až 30 °C, načež následuje hydrolýza v ledové vodě· Obvykle se používá asi 2,5 až Ю-násobek teoretického množství molů fosforylačního činidla.
2) Při přípravě sloučeniny, v níž Rg má skupinu obecného vzorce A a R^ znamená atom.vodíku (dále zde v některých případech jednoduše označované jako 6Z- ester kyseliny fosforečné), se hydroxylová skupina v poloze 6Z může fosforylovat bez toho, aby byla chráněna chránící skupinou i když se fosforylace může provádět až po chránící hydroxylové skupiny v poloze 3*· 3e tomu tak proto, že hydroxylová skupina v poloze 6Z Je primární hydroxylová skupina, která je ve srovnáni se sekundární hydroxylovou skupinou velice citlivá na fosforyláci. Při tomto chránění se v výhodou používají chránící skupiny acylového typu (například acetylová skupina)· Fosforylace se může provádět tak, Že se sloučenina nechá reagovat třicet minut až 10 hodin při teplotě -40 °C až 10 °C s fosfory lačním činidlem, načež následuje hydrolýza v ledové vodě· Obvykle se používá asi 1,2 až 1,5-násobek teoretického množství molů fosforylačního činidla· *
3) Sloučenina, v níž jak tak Rg znamená skupinu obecného vzorce A (dále zde v některých případech jednoduše označovaná 3*, б'-diester fosforečné kyseliny, tj·
3Z, 6z-difosfát), se může připravit tak, že se nechráněná výchozí sloučenina obecného vzorce II fosforyluje nadbytkem (například 2,5 až 10-násobkem teoretického množství v molech) fosforylačního činidla nebo při zvýšených reakčních teplotách (30 až 60 °C) po dobu 30 minut až 10 hodin, načež následuje hydrolýza v ledové vodě·
Mezi příklady fosforylačních činidel, která jsou použitelná pro fosforylaci, patří taková činidla, která přímo zavádějí zbytek kyaellny fosforečné, například oxychlorid fosforečný, pyrofosfory1-chlorid, chlorid fosfority, kyselina polyfosforečná, kyselina metafosforečná atd·, nebo zahrnuji stupně odstraňování chránících skupin kyseliny fosforečné po fosforylačním nebo oxidačním procesu, například dichlorid benzylesteru kyseliny fosforečné, dichlorid morfolinfosforečné kyseliny, dichlorid fenylfosforečné kyseliny, chlorid kyseliny di-beta-kyanoethyl-fosforečné, chlorid dibenzyl fosforečné kyseliny, 0-benzy 1-fos f i t-o,.o-d i feny 1-pyro fosforečnou kyselinu atd· Tato činidla se mohou používat v kterémkoliv shora uvedeném reakčním postupu ad 1) až ad 3)· Výhodnými fosfórylačními činidly pro použití ve fosforylaci podle tohoto vynálezu Jsou chloridy ortofosforečné kyseliny nebo chloridy pyrofosforečné kyseliny.
4) Příprava sloučeniny obecného vzorce I, v němž R^ a Rg spolu dohromady znamenají skupinu obecného vzorce
- P - 0R3
O (v němž R3 znamená Jak shora uvedeno) (dále zde v některých případech označované jednoduše jako 3*, 6z-cyklický fosfát): tato sloučenina se může získat tak, že se cykCS 270235 B2 lizu Je з'-ester fosforečné kyseliny nebo 6*-ester fosforečné kyseliny, získaný podle ad i) až ad 2)· Pro tento způsob cyklizace se může použít jakékoliv reakční činidlo, pokud vede к této cyklizaci. Tato cyklizace se může provádět tak, že se vychází ze 6*-esteru fosforečné kyseliny nebo Jeho reaktivního derivátu v části kyseliny fosforečné podle způsobu přípravy aristeromycin-з',· б'-cyklického fosfátu, který Je popsán v japonské zveřejněné patentové přihlášce č*50-40590, která neprošla průzkumem (postupy Ia2 zde dále uvedené), způsobu analogického způsobu synthesy 3' 4*-cyklického fosfátu, který Je popsán v Chem· Pharm. Ви1Ц 23, 2295 (1975) (Postup 3 zde dále uvedený) nebo Jakéhokoliv Jiného způsobu (postup 4 zde dále uvedený) atd.
Postup i: б'-Ester kyseliny fosforečné se cyklizuje v polohách 3* a 6' kyselinové části přímou dehydratací. Jako dehydratační činidlo se v tomto případě s výhodou používá například dicyklohexylkarbodiimid, cyklohexylisokyanát, inamiňový derivát, například diethy1(fenylethinyl)amln nebo trifenylfosfin spolu в 2,2'-dipyridyldisulfidem, o nichž je známo, že jaou použitelné při'dehydrataci adenosin-б'-fosfátu. Deko typický příklad je zde dále uvedeno podrobné vysvětlení dehydratace б'-esteru kyseliny fosforečné za použití dicyklohexylkarbodilmídu· Эе výhodné, Jestliže ae pyridinový roztok nebo roztok směei pyridinu a dimethylformamidu a nebo pyridinová suspenze amonné soli б'-esteru kyseliny fosforečné (například tri-butyl-amonná sůl nebo morfolino-N,N*-dicyklohexylkarboxyamldiniové sůl) vaří spolu s pyridinovým roztokem alespoň dvou molárních ekvivalentů dicyklohexylkarbodiihídu· Připraví se tak 3*i б'-cyklický ester kyseliny fosforečné. -·· - .....
Postup 2: Reaktivní derivát б'-esteru kyseliny fosforečné na fosfonové skupině se působením báze převede na з', б'-cyklický ester kyseliny fosforečné. Tento proces se může provádět po přípravě adenosin-3*, б'-cyklického fosfátu známým způsobem tím, že se adenosin-5*-fosfát převede na reaktivní derivát, načež následujícím způsobem působením stejné báze se získá adenosin-3*, δ'-cyklický fosfát. V souladu, například, se způsobem, který je popsán v □. Org.Chem· 31> 3247 ež 3253 (1966), se fenol s jednou až dvěma nitroskupinami, například p-nítrofenol, 2,4-dínitrofenol atd·, nechá působit na výchozí sloučeninu· získá se tek б'-nitrofeny1-ester kyseliny fosforečné· Tato sloučenina se deesterifikuje působením báze, jako je například draselná sůl terč· butanolu· připraví se tak 3*, 6*-cyklický ester kyseliny fosforečné· б'-Ester kyseliny fosforečné lze převést na б'-díester kyseliny fosforečné nebo б'-triester kyseliny fosforečné (trifosfát) podobným způsobem, který je znám v oblasti chemie nukleosidů, vyznačující se tím, že se výchozí esterové sloučenina nechá zreagovat s i-fluor-2,4-dinitro-benzenem nebo karbonyldiimidezolem při -20 °C ež 10 °C· Získá se aktivovaná 6*-fosfátová sloučenina· Ta.se podrobí reekei se solí organického aminu s kyselinou orthofosforečnou nebo pyrofosforečnou· Výsledná esterové sloučenina se pak nechá zreagovat sbází, jako je například hydroxid alkalického kovu nebo kovu žíravé zeminy ( například hydroxid sodný, barnatý atd·), nebo se slabou bází (například hydroxid barnatý atd·)· Ziské se tak 3*, β'-cykllcký ester kyseliny fosforečné* Nebo se б'-ester kyseliny fosforečné převede na p*, p^-pyrofosforečnou kyselinu, která se nechá zreagovat s dicyklohexylkarbodiimidem v pyridinu· Získá se tak 3*, б'-cyklický ester kyseliny fosforečné· Nebo se 6*-ester kyseliny fosforečné nechá zreagovat 8 1-fluor-2,4-dinitro-dibenzenem. Výsledný 6-fosforfluoridát se zreaguje s bází, jako je například draselná sůl terč.butanolu, získá se tak 3*, б'-cyklický ester kyseliny fos forečné.
Postup 3: Эе také možné, aby se sloučenina obecného vzorce II nechala reagovat s dichloridem trichlormethanfosfonové kyseliny v rozpouštědle o relativně vysoké polaritě, například v pyridinu, dimethylformamidu, diethylfosfátu, dimethylsulfoxidu, acetonu atd· Výsledný з'-nebo б'-trichlormethylfosfonát se pak může cyklizovat působením silné báze (například draselné soli terciárního butanolu)·
CS 270235 82
Postup 4: Oe také možné, že 3Z- nebo 6*-ester kyseliny fosforečné se převede například na imidazolid, který se pak zkondenzuje s aminovou solí kyseliny pyrofosforečné· Získá se triester kyseliny fosforečné a ten za hydrolytických podmínek poskytne 3Z,6'-cyklický ester kyseliny fosforečné· Tento proces se může provádět známým způsobem /The Journal of Američan Chemical Society 79, 3607 (1957)·/·
Na druhé straně, v případě sloučeniny obecného vzorce I, v němž Y znamená
5-amino-4-karbamoyl-imidazol-l-ylovou skupinu, je možné sloučeninu obecného vzorce II, v němž Y znamená 5-amino-4-karbamoyl-imidazol-l-ylovou skupinu, podrobit stejné reakci jako v případě, kdy má shora uvedený zbytek purinové báze, což vede к cyklické kyselině fosforečné· Oe také možné polohu N1 purinového kruhu sloučeniny obecného vzorce I, v němž Y znamená hypoxanthin-9-ylovou skupinu, alkoxymethýlovat za rozštěpení purinového kruhu sloučeniny obecného vzorce i'
I
0Rx v němž X a znamenají jak shora uvedeno a R^ znamená alkoxymethylovou skupinu, což tedy vede к cyklické kyselině fosforečné·
Alkoxymethylové skupiny obecného vzorce v obecném vzorci 1' jsou obvykle skupiny se 2 až 7 atomy uhlíku, jako je například methoxymethylová skupina, ethoxyethylová skupina, fenoxy-methylová skupina atd·, zvláště výhodnou je methoxymethylová skupina· při shora uvedeném alkalickém zpracování se s výhodou používají alkalické hydroxidy· Alkalické zpracování ae provádí*tak, že к hydrolýze dochází například v O,1M až 5M vodných roztocích hydroxidu sodného nebo hydroxidu draselného nebo ve směsi takového alkalického roztokua neutrálního vodného roztoku organického rozpouštědla (methanol, ethanol, butanol, dioxan, tetrahydrofuran atd·) za teplot v rozmezí od asi 10 °C do 200 °C· Reakční doba se obvykle pohybuje v rozmezí od 10 minut do 50 hodin·
Sloučenina obecného vzorce I, v němž X znamená atom vodíku (tj· sloučenina obecného vzorce 1-1), se může získat také tak, že se sloučenina obecného vzorce II, v němž X znamená chráněnou hydroxylovou skupinu, fosforyluje shora uvedeným způsobem a potom, podle potřeby, se chrání další hydroxylové skupiny, odstraní se chránící skupina hydroxylové skupiny a v poloze X, potom se provede thiokarbonylace nebo se připraví ester fenylthiomravenčí kyseliny, načež radiálovou reakcí za použití organocínatého hydridu dojde ke 2z-deoxyláci· V tomto případě se může použít způsob, který je popsán v □· Org. Chem. 47, 485 (1982)·
Odpovídající deriváty kyseliny fosforečné, které se synthetizují podle shora uvedených reakoí, se mohou čistit (po odsolení na prášku aktivního uhlí) chromátografií na anexovém nosiči (celulosa nebo pryskyřice). Tyto deriváty kyseliny fosforečné se po vyčištění mohou získávat ve volném stavu· Jestliže je to však žádoucí, mohou se získávat jako draselné, sodné, vápenaté, barnaté nebo amonné soli nebo jako soli
CS 270235 02 s organickými aminy· Potom ae zavede uhlovodík R^· Při tomto zavádění se obecně používá alkylační Činidlo· S výhodou ae neohá zreagovat diazoalkan (například diazomethan, diazobenzil apod·) v organickém rozpouštědle nebo ve aměai organického rozpouštědla a vody. *
Naproti tomu aubatituovaná fenylová skupina ae může zavádět reakcí zbytku kyseliny fosforečné aktivované aktivačním činidlem, jako je například mesitylensulfonylchlorid, a fenoly. .
Sloučenina obecného vzorce II, která ·· používá pro přípravu sloučeniny obecného vzorce i podle tohoto vynálezu, ae může získávat způeoby popsanými v Chem· Pharm· Bull· 24, 2624 (1976), Nucleic Acida Symposium Series 16>-141 (1985)·
Estery kyseliny fosforečné získané podle tohoto vynálezu jsou, ve srovnání e příslušnými výchozími sloučeninami, více rozpustné v· vodě, dají se připravit jejich vodné roztoky o relativně vysokých koncentracích, což je výhodné z hlediska Jejich použití, například Jako protlvirová činidla· Sloučeniny obecného vzorce i, Jelikož Jaou fosfóry1ovány, Jsou posunuty do jiné metabolické roviny· Mají tedý možnost presentovat rozmanitost svých fyziologických účinnosti· Sloučeniny podle tohoto vynálezu, ve srovnání s ariateromycin б'-eaterem kyseliny fosforečné nebo 3Z,6*-cyklickým fosfátem, mají nízkou toxicitu, což usnadňuje jejioh použití jako léčiva·
Sloučeniny obecného vzorce I podle tohoto vynálezu jsou karbocyklická analoga esterů nukleosidů a kyselinou fosforečnou, které jsou užitečné jako prostředky pro výzkumné práce v oblasti biochemie, například jako reakční činidla při výzkumné práci, a v oblasti lékařských věd· Tyto sloučeniny se mohou používat Jako protlvirová činidla, fungicidní činidla a antiprotozoální činidla· Kromě toho se očekává, že mají protinádorový účinek·
Sloučeniny obecného vzorce 1-1 podle tohoto vynálezu mají protivirovou účinnost, například na virus herpes typu I nebo II, na adenovirus nebo na vakciniavirus· Tyto sloučeniny se mohou používat jako protlvirová Činidle při léčení nemocí živočichů indukovaných viry, zvláště* při léčení savců (laboratorní zvířata, Jako jsou například králíci, krysy a myši, domácí zvířata, jako jsou například psi a kočky, a lidé)·
Při použití pro shora uvedená léčeni se sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou podávat bu3 orálně nebo Jiným způsobem, buč jako taková nebo v kombinaci s příslušným farmaкоlogicky přijatelným nosičem, excipientem nebo ředidlem, v takových dávkových formách, jako Jsou například prášky, granule, tablety, tobolky, roztoky, masti a injekce· Oako nosiče lze zde uvést laktosu, škrob, minerální olej, želatinu, polyethylenglykol, propylenglykol, solný roztok pro injekce a podobné· Dávkování závisí na druhu viru, na příznacích, na hostiteli, jemuž se sloučenina podává, na cestách podávání a na podobných faktorech· Při léčeni onemocnění dospělých lidí, která Jsou indukována virem herpes, se (například) sloučenina s výhodou podává do žíly v denní dávce asi 1 až 50 miligramů najednou v Jediné dávce nebo ve 3 dávkách po částech. Při orálním podávání se sloučenina podává v dávce asi ю až 100 mg v Jediné dávce najednou nebo ve 3 dávkách po částech·
Sloučenina obecného vzorce 1-1 se může podávat intravenosně ve vyšší koncentraci vzhledem к vyšší rozpustnosti ve vodě diky zavedení fosfátového zbytku. Sloučeniny obecného vzorce 1-1 mají možnost být účinné na resistentní kmen víru herpes simplex. Z těchto sloučenin jsou jako protlvirová činidla výhodné sloučeniny obecného vzoroe
1-1/ v němž X znamená atom vodíku, zvláště výhodné jsou pak ty sloučeniny obecného vzorce 1-1, v němž X zněměná atom vodíku a současně jsou tyto sloučeniny б'-monofosfátem nebo б'-trifosfátem.
Následující příklady, referenční příklady a příklady s testováním ilustrují podrobněji tento vynález. .
CS 270235 02
Příklad 1
2'-Deoxyaristeromycin-3*,β'-cyklický fosfát
2'-Deoxyaristeromycin (249 mg, 1 mmol) se rozpustí v triethylfosfátu (10 ml). К tomuto roztoku se přikape za chlazení ledem oxychlorid fosforečný (0,3 milimetru). Směs se míchá za stejné teploty po dobu dvou hodin. Pak se reakční směs vlije do vody 8 ledem (100 ml), načež se zneutralizuje přidáním triethylaminu. Takto zneutralizovaný roztok se nechá projít kolonou práškovaného aktivního uhlí (3 g). Kolona se pak promyje vodou a eluuje se směsí vody s ethanolem a triethylaminem v poměru 10 : 9 : 1, 500 ml). Eluát se zahustí dosucha. Koncentrát se rozpustí v pyridinu. Tento roztok se azeotropickou destilací zbaví vody. Takto získaná triethylamonná sůl 2z-deoxyaristeromyoin-monofosfátu se rozpustí v pyridinu (100 ml). Tento roztok se během dvou hodin přikape k roztoku DCC (820 mg, 4 mmoly) ve vroucím pyridinu (100 ml). Tato směs se vaří další hodinu. Reakční směs se zahustí dosucha. Koncentrát se rozpustí ve směsi vody s etherem (1:1, 200 ml), vodná vrstva se oddělí a extrahuje se dvakrát etherem (100 ml). Vodná vrstva se za sníženého tlaku zahustí na objem 80 ml. Koncentrát se naplaví na kolonu DEAE-celulosy (v HC03-formě, 80 ml). Kolona se promyje vodou (500 ml), načež se eluuje 0,05 molárním hydrogenuhličitanem amonným (500 ml). Eluát se zahustí dosucha. Koncentrát se rozpustí v malém množství methanolu. К roztoku se přidá aceton. Vysrážený bílý prášek (180 mg) se odfiltruje a vysuší. Pro θ17Η19Ν604·Η20 (molekulární hmotnost 420,35) vypočteno: 48,57 % C, 5,03 % H, 19,99 % N, 7,36 % P, nalezeno: 48,32 % C, 5,48 % H, 19,41 % N, 7,04 % P. UV spektrum ( fflax při pH 7): 259 nm.
Tato sloučenina se převede na 2'-deoxyaristeromycin-monofosfát působením cyklické AMP fosfodiesterásy z mozku krav.
Příklad 2
Karbocyklický guanosin-3*,6'-cyklický fosfát
9-/(lR,2S,3R,4R)-4-hydroxymethyl-2,3-dihydroxycyklopentan-l-yl7-guanin (263 mg, 1 mmol) se podrobí stejné reakci jako tomu bylo v příkladu 1. Získá se triethylamonná sůl karbocyklického guanosin-3*,6*-cyklického fosfátu* který se rozpustí ve vodě (50 ml). Roztok se nechá projít kolonou IR-120 (v Na*-formě, 10 ml) a za sníženého tlaku se zahustí dosucha. odparek se rozpustí v methanolu. К tomuto roztoku se přidá aceton. Vysrážeriý prášek (280 mg) se odfiltruje. Pro C^^H^NgO^PNa. 1/2 H20 (mol. hm. 374,25) vypočteno: 35,30 % С, 3,76 % H, 18,71 % N, 8,28 % P, nalezeno: 34,87 % C, 4,21 % H, 18,47 % N, 8,03 % P. UV spektrum ( max při pH 7): 252 nm.
л· .. . . .
příklad 3
Karbocyklický 2*-deoxyguanosin-3*,6*-cyklický fosfát
9-/{lR,3S,4R)-4-hydroxymeťhyl-3-hydroxycyklopentan-l-yl7guanin (247 mg, 1 mmol) se podrobí stejné reakci jako tomu bylo v příkladu 1. Získá se odpovídající amonná sůl, která se rozpustí ve vodě (30 ml). pH tohoto roztoku se přidáním 1N kyseliny chlorovodíkové upraví na hodnotu 2. Při tom se vysrážejí bezbarvé krystalky (150 mg). Pro CUH14N3O5P (mol. hm. 327,26) vypočteno: 40,37 % C, 4,31 % H, 21,39 % N, 9,47 % P, nalezeno: 40,01 % C, 4,53 % H, 20,84 % N, 9,03 % P. UV spektrum ( max , pH « 7): 252 nm.
Vlastnosti odpovídající triethylamonná soli jsou následující: teplota tání: 285 až 287 °C. Pro C17H2gN605P (mol. hm. 428,46) vypočteno: 47,65 % C, 6,82 % H, 19,61 % N, nalezeno: 47,33 % C, 6,96 % H, 19,47 % N.
Příklad 4
Karbocyklický AICA.ribosid-3*,6z-cyklický fosfát
Aristeromycin-3Z,6'-cyklický fosfát (327 mg, 1 mmol) se rozpustí v kyselině octové (40 ml). К tomuto roztoku se přidá dusitan sodný (2 g) a směs se nechá stát 20 hodin za teploty 20 °C. К reakční směsi se přidá voda (50 ni). Směs se nechá projít kolonou aktivního uhlí (10 g). Kolona se promyje vodou (SOO.ml), načež následuje eluce stejným rozpouštědlem (600 ml) jako v příkladě l.Eluát ee zahustí dosucha. Koncentrát se suspenduje v pyridinu (10 ml), ke kterému se přidá anhydrid kyseliny octové (1,5 ml). Směs se míchá za teploty místnosti 20 hodin tak, aby sCvZÍskel roztok. Reakč. ní roztok se zahustí dosucha. Odparek se rozpustí v 50% ethanolu· Roztok se nechá projít kolonou IR-120 (v NH*-formě, io ml), procházející roztok se zahustí dosucha. Koncentrát se rozpustí ve směsi dioxanu s dimethy1formámidem (v poměru 3 : 1) (10 ml). К roztoku se přidá hydrid sodný (60 mg) v proudu dusíku. Ke směsi se za chlazení ledem přidá methoxymethylchloríd (90 mikrolitrů) a směs se míchá za teploty místnosti dvě hodiny. Reakční roztok se zahustí dosucha. Koncentrát se rozpustí v dlchlormethanu. Roztok se promyje O,1M triethylamoníumhydrogenkarbonátem. Dichlormethanová vrstva se zahustí dosucha.«Koncentrát se rozpustí v ethanolu (15 ml), к roztoku se přidá 1M hydroxid sodný (5 ml) a směs se míchá 40 hodin při teplotě 25 °C. Reakční směs se neutře Lizu je a přidá se k ní voda (100 ml). Směs se nechá adsorbovat ne koloně DEAE celulosy (v HCO^ formě, 80 ml)· Kolona se promyje vodou (500 ml)· Hlavní frakce se eluují o,05M hydrogenuhličitanem amonným, spojí se e odpaří ee dosucha. Koncentrát se rozpustí v melám množství methanolu. К roztoku se přidá aceton. Vyarážený bílý prášek K (105 mg) se odfiltruje, pro Cí0 H18N5°6p * 2 H2° í·01· hau 371*28> vypočteno:
32,35 % C, 5.96 % H, 18,86 % N, 8,35 % P, nelezeno: 31,87 % C, 5,99 % H, 18,42 % N, 6,07 % P. UV spektrum ( λ .ввх při pH 7): 268 nanometrů.
Příklade
Karbocyklický guanoaln-6*-trifostát '
9-Z(lR,2S,3R,4R)-4-hydroxymethyl-2,3-dihydro-cyklopentan-l-yl/guanin (26 mg, 0,1 mmolu) ae podrobí stejná reakci jako je tomu v příkladu 1, načež následuje čištění ne koloně DEAE celulosy· Získá so tak ester 6*-fosforečné kyseliny (0,07 mmolu). Tento produkt se suspenduje v hexamathylfosforamidu (5 ml), к suspenzi se přidá karbonyldiimidezol (50 mg) a smět ae míohá do tá doby, než ee vše úplně rozpustí. Po 4 hodinách se k roztoku přidá methane1 (20 mikrolitrů) a roakoe se suspenduje, к výsledná suspenzi se přidá hexamethylfosforamídový roztok (5 ml) tetrakis(tributylemonium)pyrofosfátu (300 mg) e směs so míchá 40'hodin za teploty místnosti. Reakční roztok se vlije do vody (100 ml). Tento roztok ae nechá adsorbovat na DEAE oelulose (1,5 cm x 10 cm), načež následuje promytí vodou. Frakce (320 mikromolú) se oluuje 0,3M triethylemomiumhydrogenkarbonátom (TEAB), tato frakce se odpaří dosucha· Lyofilizací se získá práěkovaný produkt· Pro C35H78Nd013P3 . 2 H2O (mol. hm. 961,97) vypočteno: 9,65 % P, nalezeno: 10,24 % P. UV spektrum (% pro pH · 1 : 256 nm, pro pH · • 7 : 252 nm. pro pH » 12 : 258 nm·
Příklad 6
Karbocyklický guanosin-3*-cyklický fosfát
Karbocyklický guanosin-6z-trifosfát, který se získá podle příkladu 5, se nechá reagovat pří teplotách v rozmezí od O °C do 120 °C ve vodném roztoku hydroxidu hornatého nebo у oethanoličko-pyridinovém roztoku hydroxidu sodného způsobem, který je popsán v příkladu 2· Získá se látka, která jé popsána v příkladu 2, výtěžek produktu: 30 %.
Přiklad 7
Karbocyk1ický 2Z-deoxyguanos in-6*-mono fos fát
9-/*(lR,3S,4R)-4-hydroxymethyl-3-hydroxy-cyklopentan-l-yl7guenin (40 mg) se fosforyluje podobným způsobem,jako je to popsáno v příkladu 1, působením triethy1fosfátu (1 ml) a fosfóryloxychlorIdu (15 mikrolitrů), načež následuje vyčištění na deae celuloee (průměr 1,5 x 10 cm), eluce O,1M TEABem· Získá se tak o,04 mmolů karbocyklického 2'-deoxyguanosin-6'-monofosfátu, teplota tání: 283 až 285 °C. Pro сцн 18^507 р (mol· hm· 363,25) vypočteno: 36,37 % C, 4,99 % H, 19,27 % N, 8,52 % P, nalezeno: 35,94 % C, 5,32 % H, 19,63 % N, 8*10 % P·
Příklad 8
Karbocyklický 2*-deoxyguanosin-6*-trifosfát
Karbocyklický 2*-deoxyguanosin-6*-monofosfát (80 mg) se rozpustí v hexamethylfosforamidu (1 ml), ke kterému de přidá karbonyldiimidazol (36 mg* 0,22 mmolů)· Reakce se nechá probíhat čtyři hodiny· Potom ee přidá methanol (25 mikrolitrů)* aby se reakce suspendovala a reakce se nechá probíhat stejným způsobem jako tomu bylo v příkladu 5, čímž se získá 6*-trifosfát. vyčištěním tohoto produktu na DEAE celulose se získá žádoucí produkt (0,025 mmolů) (elucí asi 150 mililitry 0,2M TEABu). Pro C35H73N9012P3 · 3 H20 (mol hm· 964,02) vypočteno: 9,64 % P, nalezeno: 9*21 % P·
Příklad 9
Karbocyklický 2*-deoxyguanosin-3*,6*-cyklický fosfát
Karbocyklický 2'-deoxyguanosin-6*-trifosfát, který se získá podle příkladu 8* se nechá reagovat stejným způsobem, jako je to popsáno v příkladu 6· Získá se stejný produkt* jako byl získán v příkladu 3·
Příklad 10
1) Tablety s protivIrovým prostředkem podle tohoto vynálezu pro orální podávání se připravují podle následujícího příkladu: V methanolu se míchá karbocyklický 2*-deoxyguanosin-6*-monofosfát (20 mg* sloučenina.podle příkladu 7)* 250 mg laktosy, 50 mg škrobu a 2 mg stearanu hořečnatého· po odstranění methanolu ze směsi zahřátím se ze směsi připravují tablety· *
2) Mast s protivínovým prostředkem se připravuje podle následujícího příkladu· Smíchá se karbocyklický 2'-deoxyguanosin-6*-monofosfát (0*1 g* sloučenina podle příkladu 7), 40,0 g bílé vaseliny, 18,0 ethanolu, 5,0 g seskvioleátu sorbitanu, 0*5 g etheru polyoxyethylenlaurylalkoholu, 0,1 g methy1-para-hydroxybenzoátu a 36,3 g vyčištěné vody· Připraví se tak 0,1% mast·
3) Injekční prostředek: Karbocyklický 2*-deoxyguanosin-5'-monofosfát (0,1 g) se rozpustí v apyrogenním sterilním fosfátovém pufru (pH 8,0, 10 ml)· Přes mikroporézní filtr se roztok přenese do ampulky a zataví se· ,
Referenční příklad 1
Synthesa 9-211R,2S,3R,4R)-4-methyl-2-hydroxy-3,6-(tetraisopropyldisilokanyl)dioxy-cyklopentan-l-yl/hypoxanthinu
Ve 200 mililitreoh bezvodého dimethylformamidu se rozpustí c-analog inosinu (10 g, 37,5 mmolů)· К roztoku se přidá 1,3-dichlor-l,1,3,3-tetraisopropyl-disiloxan (13 ml* 41'mmolu) a imidazol (11*3 g* 165 mmolů)· Směs se míchá dvě a půl hodiny za teploty místnosti· Reakční roztok se přikape ke 2 litrům vody· Výsledná sraženina se odfiltruje, promyje se vodou, rychle se promyje diethyletherem a vysuší se· Získá se tak bílá práškovitá sloučenina (17*2 g)· část této sloučeniny se překrystalizuje z dichlormethanu· Získá se krystalický produkt s teplotou tání 135 až 138 °C·
Referenční příklad 2
Synthese 9-/(lR,2S,3R,4R)-4-methy1-2-benzoylthiokarbonyl-oxy-3,6-(tetraieopropyldisiloxanyl)dioxycyklopentan-l-yl7-hypoxanthinu
Sloučenina, která se získá podle referenčního příkladu 1, (11,2 g, 22,3 mmolu) se rozpustí ve 300 ml bezvodého acetonitrilu· к roztoku se přidá dimethylaminopyridin (15,8 g, 53,5 mmolu) a fenoxythiokarbonylchlorid (5 g, 29 mmolů). Směs se míchá 7 hodin za teploty místnosti. Rozpouštědlo se odstraní z reakční směsi za sníženého tlaku. Odparek se rozpustí ve 250 ml chloroformu· Roztok se promyje 0,5M roztokem dlhydrogenfosforečnanu draselného (2 x 250 ml), potom vodou (200 ml), vysuší se nad « bezvodým síranem sodným a za aníženého tlaku ae oddeatiluje rozpouštědlo· Získá se tak žlutá sirupovitá sloučenina· Vyčištěním této látky ohromatografií,na koloně silikagelu (90 g, rozpouštědlo: ohloroform a chloroform a methanolem v poměru 50 : 1) se , získá světle žlutá sklovité sloučenina (13,0 g)· XH NMR apektrum (60 MHz, CDClg, ppm): 1,0 až 1,23 (28H, multiplet), 2,13 až 2,43 (3H, multiplet, 4*-H a 5'-H), 3,93 až 4,10 (2H, multiplet, б'-Н), 4,80 ež 5,20 (2H, multiplet, 1*-н а з'-Н), 6,00 až 6,20 (1H, multiplet, 2*-H), 7,03 až 7,50 (5H, multiplet), 7,87 (1H, ainglet), 8,13 (1H, alnglet). ‘
Referenční příklad 3 syntheaa 9-ZTlR,3S,4R)-4-methy 1-3,6-(tetraiaopropyldiaoloxanyl)-dioxy-cyklopentan-l-yl/hypoxanthinu
Ke sloučenině (13,0 g, 20 mmolů), která se připraví podle referenčního příkladu 2, ae přidá 30 ml bezvodého toluenu· Roztok ae zahuatí za aníženého tlaku· Koncentrát ae rozpuatí ve 300 ml bezvodého toluenu· Roztokem ae po dobu dvaceti minut probublává plynný duaík· К výslednému roztoku se přidá tributylcínhydrid (11 ml, 40 mmolů)· Ke směsi ae přidá za zahřívání na 80 °C 820 mg krystalů alfa, alfa'-azobisisobutyronitrilu (AIBN) během 15 minutových intervalů ve čtyřech dávkách, směa se míohá tři hodiny· Potom se rozpouštědlo odatrani za aníženého tlaku· Zůstane olejovitá látka, která ae vyčistí chromátografií na ailikagelu (80 g, rozpouštědlo: chloroform a chloroform a methanolem v poměru 60 : 1 a 30 t 1)· Získá se tak bezbarvá aklovitá sloučenina (10,4 g)· čáat této aloučeniny ae překrystaliije z ethanolu· Zíakají ae bezbarvé jehličky o teplotě tání 200 až 202 °C· XH NMR apektrum (60 MHz instrument, СОСЦ, ppm): 0,93 až 1,20 (28 protonů, alnglet), 1,97 až 2,53 (5H, multiplet, 2*-H, 4*-H a 5*-H), 3,80 až 4,07 (2H, multiplet, б'-Н), 4,43 až 5,27 (2H, multiplet, l'-H, 3*-H), 7,87 (1H, alnglet), 8,20 (jeden proton, alnglet)·
Referenční příklad 4
Syntheaa 9-/(lR,3S,4R)-4-(monomethoxythyroxy)-methyl-3-hydroxy-cyklopentan-l-y 1/-(methoxy-methylhypoxanthin)u.
Sloučenina, která se získá podle referenčního příkladu 3 (98 g, 19,8 mmolu) se rozpustí ve 240 ml bezvodého dioxanu· К tomuto roztoku ae rychle, za míchání a za chlazení leden, přidá hydrid sodný (880 mg, 21,8 mmolu)· Tato směs se, po tom, 00 se teplota navrátí na teplotu místnosti, míchá 1,5 hodiny, následuje rychlé přidání (opět za chlazení ledem) methoxymethylchloridu (2 ml, 21,8 mmolu)· Tato směa ae míohá 3 hodiny za teploty místnosti, z reakční směsi ae za aníženého tlaku odstraní rozpouštědlo. zůstane olejovitá látka, která ae rozpuatí ve 200 ml chloroformu· Tento chloroformový roztok ae promyje pufrem O,1M triethylhydrogenkarbonátu (TEAB) (pH 7,5, 2 x 100 ml), potom vodou (200 ml) a vysuší ae nad bezvodým síranem sodným· Výsledný roztok se zahustí za sníženého tlaku· Získá se sirupovitá látka· Tato sirupovitá látka se vyčistichromatografií na ailikagelu (průměr 5,3 x 7,0 om, rozpouštědlo; aceton s vodou 55 % až 80 %)· Získá ae bezbarvá aklovitá sloučenina (8,5 g)·
CS 270235 Θ2
Tato sloučenina (8,0 g) se rozpustí ve 32 ml tetrahydrofuranu (THF). К tomuto roztoku se přidá trihydrát tetrabutylamoniumfluoridu (TBAF.3H2o) (10 g) a směs se míchá půl hodiny za teploty místnosti· z reakční směsi se za sníženého tlaku oddestiluje rozpouštědlo· Zůstane olejovitá látka· Tato olejovitá látka se rozpustí ve 100 •1 vody· vodný roztok se promyje diethyletherem (2 x 100 ml)· Tetrabutylamoniová sůl se eliminuje adsorbováním na Dowexu 50 (pyridinová forma, 60 ml)· Projitý rožtok a vody promyté pryskyřicí (240 ml) se spojí a zahustí· Koncentrát se azeotropicky destiluje s pyridinem (třikrát), aby se koncentrát odvodnil· výsledný roztok se rozpustí ve 100 ml pyridinu. К tomuto roztoku se přidá monomethoxytritylchlorid (MMTrCl) (5,4 g)· Směs se míchá čtyři hodiny při teplotě 37 °C· Rozpouštědlo se za sníženého tlaku oddestiluje· zůstane olejovitá látka, která se přidá к Ο,ΙΜ TEAB pufru (50 ml) a chloroformu (100 ml)· organická vrstva se dále promyje vodou (100 ml), vysuší se nad bezvodým síranem sodným a za sníženého tlaku se zahustí· Koncentrát se azotropÍčky destiluje a toluenem, získá se bezbarvá sirupovitá látka· Roztok O,1M TEAB pufru a promývací vody se spojí a zahustí· Isoluje se ne-monomethoxytritylovená sloučenina· Tato sloučenina se zahustí/vyčistí na pryskyřici HP-20 (190 ml, rozpouštědlo: voda a 30% vodný ethanol)· Získaný eluát se zahustí· Koncentrát se azotropicky destiluje s pyridinem· Podobným způsobem jako výše se provede monomethoxytrity láce· Po spojení obou shora získaných látek se směs vyčistí chromatografií na silikagelu (80 g, eluce rozpouštědlem: chloroformem s methanolem v poměru 100 : 1, 60 : 1 a 50 ; 1). Získá se bezbarvá sklovitá sloučenina (6,1 g)· část této sloučeniny se rozpustí v dichlorethanu· Tento roztok se přikape к hexanu· Získá se tak bílý práškovaný produkt·
NMR spektrum (60 MHz, COCl^, ppm): 1,87 až 2,70 (5H, multiplet, 2*-H, 4*-H a 5'-H), 3,20 až 3,40 (2H, multiplet, б'-Н), 3,43 (3H, singlet, CH30CH2), 3,80 (3H, singlet), 4,30 až 4,57 (1H, multiplet, з'-Н), 4,87 až 5,10 (1H, multiplet, l'-H), 5,47 (2H, singlet, CH30CH2-N), 6,73 až 6,97 (2H, multiplet), 7,17 až 7,53 (12H, multiplet), 7,73 (1H, singlet), 7,98 (1H, singlet).
Referenční příklad 5
Synthesa i-/’(lR/3S,4R)-4-(monomethoxytrityloxy)-methy1-3-hydroxy1-cyklopentan-l-yl/-(4-karbamoyl-5-aminoimidazol)u
Sloučenina, která byla získána podle příkladu 4 (6,1 g, 10,7 mmolu), se rozpustí ve 490 ml ethanolu· К tomuto roztoku se rychle přidá za zahřívání pod zpětným chladičem 130 ml 5M vodného roztoku hydroxidu sodného předem zahřátého. Ve vaření pod zpětným chladičem se pokračuje po dobu 40 minut· Rozpouštědlo se za sníženého tlaku odstraní· zůstane olejovitá látka, která se rozpustí ve 200 ml chloroformu, promyje se vodou (2 x 100 ml), potom O,1M TEAB pufrem 2 x 100 ml) a nasyceným vodným solným roztokem (100 ml)· Po vysušení nad bezvodým síranem sodným a zahuštění se za sníženého tlaku získá sirupovitá látka. Tato látka se vyčistí chromatografií na silikagelu (90 g, rozpouštědlo: chloroform s methanolem v poměru 100 : 1 až 20 : 1). Získá se bezbarvá sklovitá sloučenina (3,2 g)· část této sloučeniny se rozpustí v chloroformu· Tento roztok se přikape к pentanu za míchání, Čímž se získá bílá práškovitá sloučenina· Pro C30H32N4°4*0'5 H2° (ЮО1· hn· 521,616) vypočteno: 69,08 % C, 6,38 % H, 10,74 % N, nalezeno: 69,14 % C, 6,09 % H, 10,54 % N. 1H NMR spektrum (100 MHz, СОСЦ, ppm): 1,36 až 2,52 (5H, multiplet), 3,00 až 3,40 (3H, multiplet), б'-Н, OH), 3,77 (3H, singlet), 4,12 až 4,60 (2H, multiplet, l'-H, з'-Н), 4,80 až 5,28 (2H, široký pás, NH2), 5,64 až 6,44 (2H, široký pás, NH2 ), 6,76 až 6,94 (3H, multiplet), 7,14 až 7,48 (12H, multiplet)·
Referenční příklad 6
Synthesa l-/,(lR,3S,4R)-4-hydroxymethyl-3-hydroxy-cyklopentan-l-yl7-(4-karbamoyl-5-aminoimidazol)u
Sloučenina, která ee získá podle referenčního příkladu 5 (2,3 g, 4,4 smolu), se rozpustí v 50 ml 80% kyselině octové· Roztok se míchá 7 hodin při teplotě 40 °C· Roztok se za sníženého tlaku zkoncentruje a koncentrát se azeotroplcky destiluje s toluenem a pak s ethanolem· Odparek se rozpustí ve 12 nl ethanolu. Tento roztok se přikape za míchání ke 130 ml směsi hexanu s etherem (1:1, objemové díly)· Získá se sirupovitá látka· Tato látka se vyčistí chromátografií na c1& silikagelu (10 g, rozpouštědlo: voda a 5% aceton s vodou)· Rozpouštědlo se pak za sníženého tlaku odstraní· Rekrystalizací z ethanolu se získá žádaná sloučenina (0,93 g) podle tohoto referenčního příkladu, teplota tání 162 až 163 °C· UV spektrum ( % Μχ): (v 234 sh, (v H*) 244, 269, (v H~) 267,5 nm· NMR spektrum (60 MHz, 0MS0-dg s D20, ppm): 1,67 až 2,67 (5H, multiplet)', 3,43 až 3,60 (2H, multiplet, 6*-H), 3,90. až 5,00 (2H, multiplet), 7,23 (1H, singlet, 2-H)J (v DMSO-de): 5,77 (2H, široký singlet, NH2), 6,63 (2H, široký singlet, NH2)· Pro cioH16N4°3 (mol· hm· 240,262) vypočteno: 49,99 % C, 6,71 % H, 23,32 % N, nalezeno: 49,32 % C, 6,34 % H, 22,92 % N.
Referenční příklad 7
Synthesa l-/XiR,3S,4R)-4-(monomethoxytrityloxy)methyl-3-hydroxy-cyklopentan-l-yl7-/karbamoyl-5-(N-benzoyl-S-methyl-lsothio-karbamoyl)aminoimidazolu7
Sloučenina, která se získá podle referenčního příkladu 5 (0,88 g, 1,7 arnolu), se rozpustí ve 25 ml bezvoděho acetonu, к tomuto roztoku se přidá za zahřívání pod zpětným chladičem acetonový roztok (8 ml) benzoylisothiokyanátu (260 mikrolitró, 1,9 mmolu) a to během 10 minut, načež se reakční směs vaří 50 minut pod zpětným chladičem· Rozpouštědlo ss za sníženého tlaku odstraní· Získá se světle žlutá sklovitá látka, která se vyčistí chromátografií na silikagelu (15 g, eluce rozpouštědlem: chloroform s methanolem v poměru 50 : 1 až 30 t 1)· Získá se světle žlutá sklovitá sloučenina (0,87 g)· К této sloučenině (0,84 g, 1,2 mmolu) se přidá malý objem oacetonu· К takto připravené sirupovité látce se přidá 12,5 ml 0,2N hydroxidu sodného· Směs se zpracuje ultrazvukem· Získá se homogenní roztok· К roztoku se ze míchání přidá dlmethyleírová kyselina (130 mikrolitró, 1,4 mmolu)· Směs se jednu hodinu intensivně míchá za teploty místnosti· Reakční směs se extrahuje chloroformem (2 x 15 ml)· Organická vrstva se promyje roztokem ο,ΙΜ TEAB pufru (3 x 15 ml), potom nasyceným vodným solným roztokem (20 ml) a vysuší se nad bezvodým síranem sodným· Koncentrát, který se získá zahuštěním za sníženého tlaku, se vyčistí chromatografií na silikagelu (15 g, eluce směsi chloroformu snmthanolem v poměru 100 : 1 až 60 : 1)· К takto získané sklovité látce se přidá malé množství dichlormethanu. Směs se přikope do hexanu· Vysrážená látka se isoluje odstředováním· vysušením se získá sloučenina podle tohoto příkladu (400 mg) jako práškovaný produkt· Pro C3gH3gNa05S (mol· hm· 689,835) vypočteno: 67,90 % C, 5,70 % H, 10,15 % N, nalezeno: 67,45 % C, 5,45 % H, 9,89 % N· ХН NMR spektrum (100 MHz,CDCl3, ppm):1,34 až 2,60 (5H, multiplet), 2,52 (3H, singlet, SCH3), 3,04 sž 3,44 (2H, multiplet, 6*-H), 3,79 (3H, singlet, 0CH3), 4,08 až 4,44 (1H, multiplet, з'-Н), 4,60 sž 5,00 (1H, multiplet, Г-Н), 5,64 (1H, široký singlet, NH2), 6,72 až 6,94 (3H, multiplet), 7,12 až 7,52 (15H, multiplet), 7,80 aí 7,9б (2H, multiplet), 11,35 (1H, široký singlet, NH)·
Referenční příklad 8
Synthesa l-/(lR,3S,4R)-4-hydroxymethyl-3-hydroxy-cyklopentan-l-yJ7-^r-karbamoyl-5-(N-benzoyl-S-methylisothiokarbamoyl)-aminoimidazoJ7u
Sloučenina, která se získá podle referenčního příkladu 6 (815 mg, 3,4 mmolu), se nechá zreagovat s 1,1 ekvivalentem benzoylisothiokyanatanu v acetonu· Rozpouštědlo
CS 270235 82 se za sníženého tlaku odstraní· К odparku se přidá 15 ml směsi acetonu s chloroformem (2:1, objemové díly)· Ke směsi se přidá ether· Výsledná sraženina se odfiltruje a vysuší. získá se tak 1,4 g práškovaného produktu· Tento produkt se rozpustí ve 35 ml 0,2N hydroxidu sodného· к roztoku se přidá dimethylsulfát (340 mikrolltrů) a směs se míchá za teploty místnosti 1 hodinu, к reakční směsi se za chlazení ledem přidá kyselina octová (pH 4 až 5). Výsledný bíle zakalený reakční roztok se extrahuje butanolem (3 x 20 ml)· Získá se reakční produkt, který se promyje vodou (2 x 10 ml), načež se za sníženého tlaku odstraní rozpouštědlo· Tento produkt se vyčistí chromatografií na silikagelu (silikagel Clg, 10 g, eluce vodou a potom 30% acetonem ve vodě). Získá se světle žlutá sklovitá látka (920 mg), která se překrystaluje z vody. Tím se získá sloučenina podle tohoto referenčního příkladu jako bezbarvé krystalky (570 mg) s teplotou tání 119 až 120 °C. Pro θ19 Η23Ν5δ04· 0/3 H2° <mo1· hm· 422,886) vypočteno: 53,96 % C, 5,62 % H, 16,56 % N, 7,58 % S, nalezeno: 54,03 % C, 5,49 % H, 16/44 % N, 7,53 % S, 1HNMR spektrum (100 MHz, DMS0-d6, ppm): 2,52 (3H, singlet, CH3), 7,34 až 7,94 (6H, multiplet), 11,85 (1H, široký singlet, NH) potvrzuje tuto strukturu·
Referenční příklad 9
Synthesa 9-/lR,3S,4R/-4-«ionomethoxytrityloxymethyl-3-hydroxy-cyklopentan-l-ylz7guaninu Sloučenina, která se získá podle referenčního příkladu 7 (360 mg, 0,53 mmolu), se přidá k 18 ml žahřátého 6N hydroxidu sodného· Směs se zahřívá jednu hodinu pod zpětným chladičem· Reakční produkt ae extrahuje chloroformem· Extrakt se promyje roztokem 0,1М ТЕАВ pufru (30 ml), potom nasyceným vodným roztokem chloridu sodného (30 ml) a vysuší nad bezvodým síranem sodným· vyčištěním ohromatografií na silikagelu (8 g, rozpouštědlo: chloroform s methanolem v poměru 40 : 1 až 6 : 1) se získá sklovitá látka. Tato látka se smíchá s malým objemem acetonu· Směs se přikape k pentanu· Výsledná sraženina se odcentrifuguje a vysuší· Získá se tak 20 mg žádané sloučeniny ve formě prášku, pro C31h31N504 * 1/0 HgO (mol. h®. 555,633) vypočteno: 67,01 % C, 5,99 % H, 12,60 % N, nalezeno: 67,01 % C, 5,69 % H, 12,42 % N. XHNMR spektrum (100 MHz, DMSO-dg, ppm): 1,50 až 2,60 (5H, multiplet), 3,01 (2H, široký singlet), 3,98 až 4,20 (1H, multiplet), 4,70 až 4,96 (2H, multiplet), 6,37 (2H, široký singlet, nh2), 6,82 až 7,46 (14H, multiplet), 7,68 (1H, singlet), 8-H), 10,60 (1H, široký singlet, NH).
Referenční příklad 10
Synthesa 9-/flR, 3S, 4R)-4-hydroxymethyl-3-hydroxy-cyklopentan-l-yl7guaninu
Sloučenina (180 mg, 0,33 mmolu), která se získá podle příkladu 9 (referenční příklad), se rozpustí v 10 ml 80% kyseliny octové. Roztok se míchá 4,5 hodiny při 40 °C. Rozpouštědlo se za sníženého tlaku oddestiluje. zbytek se azeotroplcky dvakrát destiluje s vodou, načež se přidá 10 ml vody· Směs se promyje etherem (2 x 10 ml). Voda se pak odstraní za sníženého tlaku. Získá se tak 41 mg bezbarvých krystalů Žádané sloučeniny s teplotou tání 246 až 248 °C, /óŮ/q5 ж * 7,7° (с « 0,5, dimethylformamid)·.UV spektrum ( maK / HgO, nm); 255, 278sh, (H*): 257, 282, (OH-): 256sh, 273. Pro CuH15N503 . 0,5 H20 · 0,1 CgHgOH (mol. hm. 278,886): vypočteno: 48,24 % C, 6,00 % H, 25,11 % N, nalezeno: 48,61 % C, 6,41 % H, 25,40 % N.
Referenční příklad 11
Synthesa 9-/(lR, 3S, 4R)-nonomethoxytrityloxymethy1-3-hydrpxy1-cyklopentan-l-yl/isoguaninu
Sloučenina (585 mg, 0,85 mmolu), která se získá podle referenčního příkladu 7, se rozpustí v 10 ml ethanolu. К roztoku se přidá 6 ml 1N-N80H a 44 ml vody. Směs se pak zahřívá 2 hodiny pod zpětným chladičem. К této reakční směsi se dále přidá 60 ml
0,1 N hydroxidu sodného a směs se zahřívá další dvě hodiny pod zpětným chladičem.
CS 270235 02
Tento reakčni roztok ae zneutralizuje 1N kyselinou chlorovodíkovou. Reakčni produkt ae extrahuje chloroformem, promyje ae vodným nasyceným roztokem chloridu sodného a vodou. Za sníženého tlaku se oddestiluje chloroform. Získá se sirupovitá látka, která ae nechá atát přes noc. Získají se tak bílé krystalky žádané sloučeniny, teplota tání 245 až 247 °C (200 mg). Filtrát se dále vyčistí chromatografií na ailikagelu (10 g, eluce směsí 50 až 90 % acetonu ve vodé). Pro %χΗ3χΝ504 (mol. hm. 537,618) vypočteno: 69,26 % C, 5,81 % H, 13,03 % N, nalezeno: 69,80 % C, 5,86 % H, 12,60 % N.
ΣΗ NMR spektrum (100 MHz, DMS0-d6, ppm): 1,46 až 2,46 (5H, multiplet, 2 x 2*-H, 2 x 5*-H a 4'-H), 3,00 až 3,38 (4H, multiplet), 3,75 (3H, singlet, CH3), 3,96 až 4,16 (1H, multiplet, з'-Н), 4,68 (až 4,94 (2H, multiplet), 6,38 (1H, široký singlet, NH), 6,80 až 7,50 (14H, multiplet), 7,77 (1H, singlet, 8-H).
Referenční příklad 12
Synthesa 9-/X1R, 3S, 4R)-4-hydroxymethyl-3-hydroxycyklopentan-l-yl7isoguaninu
Sloučenina (148 mg, 0,27 mmolu), která se připraví podle referenčního příkladu 12, se rozpustí v 11 ml 80% kyseliny octové. Roztok se míchá šest hodin při teplotě 45 °C. Rozpouštědlo se oddestiluje za sníženého tlaku. Zbytek se azeotropicky destiluje s vodou, zbylý vodný roztok se promyje etherem (2 x 10 ml). Voda se odstraní oddestilováním za sníženého tlaku. Získá se sklovitá látka, která se suspenduje v ethanolu. Připraví se tak žádaná sloučenina (69 mg) s teplotou tání 162 až 165 °C (rozkl·). Pro C11HÍ5N5°3 · °'5 H2° ‘ O'1 C2H 50H (Mol. hm. 278,887) vypočteno:
48,24 % C, 6,00 % H, 25,11 % N, Ml.Z.nOt 47,92 % C, 6,05 % H, 24,89 % N. UV «pektrum (\ax, n» H2°>‘ 249» 253 ,h» 23β» 242ah» 283 a 285. *H NMR apektru.
(100 MHZ, OMSO-de ♦ 020, pp.)t 1,10 .2 2,50 (5H, multiplet, 2 X 2'-H, 2 X 5'-H, 4'-H), 3,40 až 3,60 (2H, multiplet, 2 x б'-Н), 4,00 až 4,20 (1H, multiplet, З'-Н), 4,60 až 5,10 (1H, multiplet, l'-H), 7,90 (1H, βinglet, 8-H).
Referenční příklad 13
Synthesa sloučeniny podle referenčního příkladu 10 (jiná metoda)
Sloučenina (420 mg), které se připraví podle referenčního příkladu 2, se rozpustí v io ni 6N hydroxidu sodného. Roztok se rychle zahřeje a vaří se jednu hodinu pod zpětným chladičem. Teplota reakčni směsi se upraví.na teplotu místnosti. Roztok se pak zneutralizuje IN kyselinou chlorovodíkovou. Reakčni roztok se vyčistí chromatografil na HP-20 (190 ml, rozpouštědlo: voda a 10% vodný ethanol). zahuštěním se získají bezbarvé krystaly (174 mg) s teplotou tání 246 až 248 °C.
Referenční příklad 14
Synthesa 9-/(lR,2S,3R,4R)-4-monomethoxytrityloxymethyl-2,3-(dimethylmethylen)dioxy-cyklopentan-l-yl7hypoxanthinu
C-Ana log inosinu (10 g, 37,6 mmolu) se suspenduje ve 380 ml acetonu, к suspenzi se přidá 23 ml 2,2-dimethoxypropanu a kyselina p-tosylová (9,3 g). Směs se míchá 3 hodiny při teplotě 37 °C. К této směsi se přidá za oblezení ledem 40 ml koncentrovaného vodného aaoniaku. Směs se za sníženého tlaku zahustí. Výsledný nerozpustný materiál se odfiltruje. Následuje vyčištění chromatografií na koloně C& ailikagelu (průměr 5,0 x 6,5 cm, eluce rozpouštědlem; 5 % acetonu ve vodě). Produkt překrystalováním z ethanolu poskytne 8,4 g krystalické sloučeniny. Matečné louhy po krystalizaci se vyčistí chromatografií na ailikagelu (60 g, eluce směsí chloroformu s methanolem v poměru 25 : 1 až 5 : 1). Získá se další množství sirupovité sloučeniny.
Shora uvedené krystaly (8,4 g, 27 mmolu) se suspendují v malém množství pyridinu. Suspenze se azeotropicky destiluje za sníženého tlaku, aby došlo k dehydrataci.
Odparek se rozpustí ve 150 ml bezvodého pyridinu. К roztoku se přidá monomethoxytri16 tylchlorid (9 g) a směs se nechá stát 13 hodin za teploty místnosti· К výsledné směsi se přidá 20 ml methanolu· Rozpouštědlo se za sníženého tlaku oddestiluje· zbytek se rozpustí ve 150 ml chloroformu· Tento roztok se promyje 0ДМ TEABem (pufr, 2 x 100 ml), vodou (100 ml) a vysuší se nad bezvodým síranem sodným· Zahuštěním za sníženého tlaku, pří němž se odstraňuje chloroform, se získají krystaly žádané sloučeniny (9,4 g) s teplotou tání 194 až 195 °C· Podobným způsobem ee monomethoxytrityluje také shora uvedený sirup a spojí se se shora uvedenými matečnými louhy· směs se rozpustí v 70 ml chloroformu· Tento roztok se přikape do jednoho litru hexanu· Výsledná vysrážená látka se odfiltruje· vysušením se získá 10,3 g žádané sloučeniny podle tohoto referenčního příkladu jako práškovaný produkt·
Referenční příklad 15
Synthesa 9-/XlR,2S,3R,4R)-4-monomethoxytrityloxymethyl-2,3-dimethylmethylen)dioxy-cyklopentan-y17-(l-methoxymethyl-hypoxanthinu)
Sloučenina (19,1 g, 33 mmolů), která se získá podle referenčního příkladu 14, se rozpustí ve 360 ml směsi dioxanu s dimethylformamidem (OMF) (3 : 1, objemové díly)· К roztoku se přidá za chlazení ledem 1,47 g hydridu sodného (60%, olej)· Teplota se ihned upraví opět zpět na pokojovou teplotu· Směs se míchá jednu hodinu· Ke směsi se za chlazení ledem přidá 3*2 ml methoxymethylchloridu· Celá směs se dále míchá 4 hodiny za chlazení ledem· Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku· odparek se rozpustí ve 200 ml chloroformu· Roztok se promyje O,1M TEABem (2x 200 ml), vodou (200 ml) a vysuší nad bezvodým síranem sodným· Rozpouštědlo se pak za sníženého tlaku oddestiluje· Získá se sklovitá sloučenina· Tato látka se zhruba vyčistí chromatografií na silikagelu (100 g, eluce směsí chloroformu s methanolem v poměru 100 : 1 až 10 : 1), následuje vyčištění chromatografií na silikagelu C& (průměr 5,3 x 7,0 cm, eluce směsí 55 % až 90 % acetonu s vodou)· Získá se tak 16,8 g sklovité sloučeniny, t.t. 97 až 102 °C· XH NMR spektrum (90 MHz, CDC13, ppm): 1,28 (3H, singlet, CH3), 1,54 (3H, singlet, CH3), 2,33 až 2,60 (3H, multiplet, 4*-H a 5'-H), 3,10 až 3,40 (2H, multiplet, б'-Н), 3,43 (3H, singlet, CH2OCH3), 3,79 (3H, singlet, -C6H4-0CH3), 4,47 až 5,07 (3H, multiplet, l'-H, 2'-H а з'-Н), 5,46 (2H, singlet, N-CH2-0), 6,79 (1H, singlet), 6,88 (1H* singlet), 7*13 až 7,57 (12H, multiplet), 7*82 (1H* singlet), 8,04 (1H, singlet)·
Referenční příklad 16
Synthesa 1-/{1R,2S,3R,4R)-4-monomethoxytrityloxymethy1-2,3-(dimethylmethylen)dioxy-cyklopentan-l-yl/-(4-karbamoyl-5~aminoimidazolu)
Sloučenina (16,8 g, 26,5 mmolu), která se získá podle referenčního příkladu 15, se rozpustí v ethanolu (685 ml)· К tomuto roztoku se rychle přidá (za zahřívání pod zpětným chladičem) 137 ml 5M hydroxidu sodného zahřátého na asi 80 °C· Směs se vaří dalších 20 minut pod zpětným chladičem· Ethanol se za sníženého tlaku oddestiluje· Reakční produkt se extrahuje 300 ml chloroformu· Extrahovaný roztok se promyje vodou (2 x 300 ml), O,1M pufrem TEAB (300 ml), nasyceným vodným roztokem chloridu sodného (300 ml) a vysuší se nad bezvodým síranem sodným· Výsledný produkt se zhruba vyčistí chromatografií na silikagelu (100 g, eluce směsí chloroformu s methanolem v poměru 100 : 1 až 50 : l)«Tato látka se podobným způsobem chromátografuje 4 x na silikagelu· Získá se 7*9 g bezbarvé sklovité sloučeniny s teplotou tání 107 až 112 °C· *H NMR spektrum (90 MHz, СОСЦ* ppm): 1*27 (3H* singlet), 1,58 (3H, singlet), 1,90 až 2,67 (3H, multiplet), 3,23 až 3,40 (2H, multiplet), 3,80 (3H, singlet), 4,07 až 4,50 (3H, multiplet), 5,54 (2H, široký singlet,,NH2), 6,80 (1H, singlet), 6,21 (2H, singlet), 7,20 až 7,57 (13H, multiplet)·
CS 270235 82
Referenční příklad 17
Syntheas 1-/(1R,2S,3R,4R)-4-hydroxymethy1-2,3-(dimethylmethylen)dioxy-cyklopentan-1~yl7“(4~k®Pbamoyl-5-aminoimi(iazolu) (sloučenina podle referenčního příkladu 17-1) a synthesa l-/(lR,2S,3R,4R)-4-hydroxymethyl-2,3-dihydroxy-cyklopentan-l-yl7-(4-karbamoyl-5-aminoimida201u) (sloučenina podle referenčního příkladu 17-2)
Sloučenina (7,9 g, 13,9 mmolů), která se připraví podle referenčního příkladu 16, se rozpustí ve 120 ml 80% kyseliny octové· Tento roztok se míchá 7 hodin za teploty 40 °C· Roztok se zahustí za sníženého tlaku· Ke koncentrátu se přidá voda a směs se několikrát azeotropicky destiluje· Odparek se roztřepe mezi vodu a ether· Vodná fáze se promyje etherem, zahustí se za sníženého tlaku a vyčistí chromátografií na εθ silikagelu. Frakce, která se eluují vodou a 5% vodným acetonem, se spojí a rozpouštědlo se za sníženého tlaku oddestlluje. odparek se dvakrát azeotropicky destiluje a ethanolem. Získají ae vysrážené krystalky sloučeniny podle tohoto referenčního příkladu 17-2 (0,34 g, teplota tání 212 až 214 °C)·
Frakce, které ae vyeluují 15% vodným acetonem, se spojí a rozpouštědlo se za sníženého tlaku oddestlluje· odparek se azeotropicky destiluje s ethanolem· získá se 1,85 krystalů shora uvedené sloučeniny podle tohoto referenčního příkladu 17-1, teplota tání 169 až 171 °C. Vlastnosti sloučeniny podle referenčního příkladu 17-1: Pro Ci3H20N404 · 0,20 H20 (mol· hm· 299,928) vypočteno: 52,06 % C, 6,86 % H, 18,68 % N, nalezeno: 52,18 % C,6,60 % H, 18,63 % N, XH NMR spektrum (100 MHz, DMS0-d6, ppm): 1,26 (3H, singlet), 1,50 (3H, signlet), 1,70 až 2,40 (3H, multiplet), 3,40 až 3,60 (2H, multiplet), 4,16 až 4,82 (4H, multiplet, *-H), 2'-H, з'-Н, OH), 5,72 (2H, široký singlet, NH2), 6,65 (2H, široký singlet, NH2), 7,26 (1H, ainglet, H2)·
Vlastnosti sloučeniny podle referenčního příkladu 17-2:
Pro C1qH16N404 · 0,2 C2H50H · 0,5 H20 (Mol. hm· 274,482) vypočteno: 45,50 % C, 6,63 % H, 20,42 % N, nalezeno: 45,98 % C, 6,32 % H, 20,07 % N. XH NMR spektrum (100 MHz, OMSO-dg, ppm): 1,00 až 2,40 (3H, multiplet, 4*-H a 5Z-H), 3,38 až 3,54 (2H, multiplet, б'-Н), 3/58 až 4,34 (3H, multiplet, l'-H, 2'-H а з'-Н), 4,56 až 5,00 (3H, multiplet, OH), 5,69 (2H, Široký singlet, NH2), 6,63 (2H, široký singlet, NH2), 7,22 (1H, singlet,
2-H).
Referenční příklad 18
Synthesa 1-/11R,28,3R,4R)-4-hydroxymethy1-2,3-(dimethyl-methylen)dioxy-cyklopentan—1—уl/-/4-karbamoy1-5-(N-benzoyl-S-methylthio-karbamoy1)am ino im idazolu
Sloučenina (300 mg, 1 mmol), která se připraví podle referenčního příkladu 17-1, se suspenduje v 18 ml acetonu· к suspenzi se přikape (za zahřívání к varu pod zpětným chladičem) 5 ml acetonového roztoku, který obsahuje 150 yul benzoylisothiokýanátu, během 10 minut· Reakční směs ae další hodinu vaří pod zpětným chladičem, potom se rozpouštědlo oddestlluje za sníženého tlaku a odparek se rozpustí v 5 ml směsi chloroformu s acetonem (1 t 1, objemové díly)· Tento roztok se za míchání vkape do 100 ml hexanu· Výsledná vysrážená látka se odstředí, vysuší a získá se tak světle žlutá práškovaná sloučenina· Tato sloučenina se rozpustí v 10 ml O,1N hydroxidu sodného· κ tomuto roztoku se přidá 110 ^ul diaethylsulfátu a směs se míchá 1,5 hodinu· Ke směsi se přidá (za chlazeni ledem)* několik kapek kyseliny octové* (pH 6 až 7)· Výsledné nerozpuštěné látky, se extrahují chloroformem (2 x 10 ml) a extrakt se promyje vodou (3 x 20 ml), po vysušení a vyčištěni chromatografií na silikagelu (11 g, eluce směsi chloroformu s methanolem v poměru 100 : 1 až 40 : 1*) se získá bezbarvá sklovitá látka, která se rozpustí v djchlormethanu· Tento roztok se za míchání vlije do íoo ml hexanu. Vysrážené látky se odstředí a vysuší· Získá se tak 320 mg bílé práškovité sloučeniny· Pro C22H27N5°5S · 0/5 H2° 482,561) vypočteno: 54,76 % C, 5,85 % H, 14,51 % nalezeno; 54,75 % C, 5,40 % H, 14,35 % N. UV spektrum ( Λ max, nm, ethanol)»329, 321sh, (H*)s 247, 305eh, (OH“)s 264sh. XH NMR spektru· (ÍOO MHz, COClg, ppm): 1,30 (3H, ainglet, CH3), 1,54 (3H, slnglet, CH3), 2,0 až 2,52 (3H, nultlplet, 4-H a δ'-Η), 2,58 (3H, slnglet, S-CH3), 3,75 (2H, dublet, б'-Н), 4,48 až 4,96 (3H, nultlplet, l'-H, 2'-H а З'-Н), 5,85 (1H, široký slnglet, NH), 7,58 (1H, slnglet, NH), 7,26 (4H, nultlplet), 7,80 až 7,94 (2H, multiplet).
Referenční příklad 19
Syntheea 9-/(lR,2S,3R,4R)-4-hydroxymethyl-2,3-(dimethylmethylen)dioxy-cyklopentan-1-yl/guaninu
Sloučenina (820 mg, 1,75 mmolu), které ae získá podle referenčního příkladu 18, se přidá ke 14 ml 6N hydroxidu sodného· Směs ae rychle zahřeje za míchání, aby ae složky rozpustily· V zahřívání se pokračuje jednu hodinu pod 2pětným chladičem· Výsledný roztok se zneutralizuje 1N kyselinou chlorovodíkovou za chlazení ledem· Produkt se zhruba vyčistí chromatografii na clg silikagelu (10 g, eluce směsí 20 % асе· ton ve vodě, když před tím ae začalo 8 Čistou vodou)· Vodný roztok se promyje chloroformem, zahustí se za sníženého tlaku a krystaluje se z vody· získá se 410 mg produktu, teplota tání 287 až 288 °C· Pro ci4HigN5°4 · 0,80 HgO (Mol· hm· 335,747) vypočteno: 50,08 % C, 6,18 % H, 20;86 % N, nalezeno: 50,28 % C, 5,89 % H, 20,86 % N· UV spektrum (% max, nm, voda): 254, 274 sh, (H*): 256, 281, OH*): 258sh, 270· XH NMR spektrum (100 MHz, DMSO-d6 + 020) (ppm): 1,26 (3H, slnglet, CH3), 1,51 (3H, slnglet, CH3), 1,84 až 2,40 (3H, multiplet, 4*-H a 5*-H), 3,53 (2H, dublet, б'-Н), 4,46 až 5,04 (ЗИ, multlplet, l'-H, 2*-H а ’з'-Н), 7,86 (1H, slnglet, 8-H)J (v OMSO-d6, 100 MHz, ppm): 3,31 (1H, široký slnglet, OH), 6,63 (2H, slnglet, NH2), 10,85 (1H, široký slnglet, NH)·
Referenční příklad 20
Syntheea 9-/(lR,2S,3R,4R)-4-hydroxymethy1-2,3-dlhydroxy-cyklopentan-l-yl/guaninu
Sloučenina (150 mg, 0,46 mmolu), která se získá podle referenčního příkladu 19, se rozpustí ve 20 ml 0,05N kyseliny chlorovodíkové· Roztok se zahřívá 20 minut na teplotu 70 °C· Reakční roztok se zneutralizuje 1N hydroxidem sodným za chlazení ledem· Získají se krystaly (91 mg) žádané sloučeniny, teplota tání 268 až 270 °c (rozkl·), /рС /§5 · -31,4° (c · 0,67, dimethylformámid)· Pro CuH15N504 · 0,7 H20 (mol· hm· 293,882) vypočteno 44,96 % C, 5,62 % H, 23,82 % N, nalezeno: 45,19 % C, 5,95 % H, 23,65 % N·
Referenční příklad 21
Syntheea 9-/(lR,3S,4R)-4-hydroxymethyl-3-hydroxy-cyklopentan-l-y 1/hypoxanthinu
12,37 g 9-/e(lR,3S,4R)-4-methyl-3,6-(tetraisopropyldÍ8ioxanyl)dioxy-cyklopentan-1-y1/hypoxanthlnu se rozpustí ve 200 ml toluenu· к tomuto roztoku se přidá 10 g tetrabutylamoniumfluoridu· Směs se míchá dvě hodiny při 75 °C· Reakční roztok se odpaří dosucha· Koncentrát se rozpustí ve vodě· Roztok se nechá adsorbovat na koloně s aktivním uhlím (30 g)· Látka se eluuje jedním litrem 50% ethanolické vody a rekrystaluje z methanolu, do kterého byl přidán ether· Získá se tak 2,6 žádané sloučeniny jako krystaly, teplota tání 170 °C. Pro · H2° vypo^no: 49,25 % c,
6,01 % H, 20,88 % N, nalezeno: 49,08 % C, 5,86 % H> 20,81 % N.
CS 270235 02
Příklad testování
Inhibiční účinek protivínových sloučenin na virus herpes simplex typ 1, kmen HF
sloučenina I050a> (/ug/ml) cytotoxicita (/uo/ml) b)
karbocyklický 2*-deoxy-guanosin-6'-monofosfát 0/2 50
karbocyklický 2*-deoxy-guanosin-б*-trifosfát 0,4 50
Buňky VĚRO se naočkují 100 TCIOgo (50% tissue-culture infected do·es) viru a kultivují se za přítomnosti různých koncentrací sloučenin· Třetí den po podání se zjistí protivirová účinnost I050 (dávka způsobující 50% inhibici), při čemž kontrolní kultura bez jakékoliv sloučeniny vykazuje 100% oytopathogenní účinnost· Ve stejnou dobu se zjišluje cytotoxicita s neinfikovanou kontrolní kulturou·
a) Koncentrace, která je potřeba pro snížení virového oytopathogenního efektu o 50 %·
b) Minimální koncentrace sloučenin, která způsobí viditelnou poruchu normální buněčné morfologie·

Claims (4)

  1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU
    1. Způsob přípravy karbocyklických purlnových nukleotidů obecného vzorce i v němž
    Y znamená adenin-9-ylovou skupinu, guanin-9-ylovou skupinu nebo 5-amino-4-karbamoyl-imidazol-l-y1-ovou skupinu, .
    X znamená atom vodíku nebo hydroxylovou skupinu s tím, že jestliže Y znamená adenin-9-ylovou skupinu, pak X znamená atom vodíku,
    Rj a r2 znamenají nezávisle na sobě atom vodíku nebo skupinu obecného vzorce A η - °>н—R 3 o
    v němž n znamená číslo od 1 do 3 a R^ znamená atom vodíku nebo uhlovodíkový zbytek s 1 až 14 atomy uhlíku, za předpokladu, že a Rg neznamenají současně atom vodíku, nebo R^ a r2 společně znamenají skupinu obecného vzorce в — P - 0R3(B),
    r.
    v němž R~ má shora uvedený význam a jestliže existují dvě nebo více skupin Ro pak oo, mohou nezávisle na sobě znamenat různé skupiny, nebo jejích solí, vyznačující se > tím, Že se sloučenina obecného vzorce II (IX),
    HO X v němž X a Y znamenají jak shora uvedeno, po případném chránění hydroxylové skupiny v poloze 3* a 6* fosforyluje fosforylačnío Činidlem obecného vzorce III (ΙΠ), v němž Xp X2 a X3 jeou stejné nebo různé a znamenají atom chloru, hydroxylovou skupinu, dichlorfosfórylovou skupinu, benzyloxyskupinu, fenoxyskupinu, morfolínovou skupinu, β - kyanoethyloxyskupinu nebo benzyl-H-fosfonylovou skupinu, a hydrolyžuje ae a popřípadě se sloučenina obecného vzorce I, v němž R^ znamená skupinu obecného vzorce A a Rg znamená atom vodíku a Y а X mají shora uvedený význam nebo Rg znamená skupinu obecného vzorce A a R^ znamená atom vodíku a Y а X mají shora uvedený význam, cyklizuje za'vzniku sloučeniny obecného vzorce I, v němž R^ a Rg znamenají společně skupinu obecného vzorce В a Y а X mají shora uvedený význam a získané sloučeniny se případně převedou na své sole·
  2. 2· Způsob podle bodu 1 pro přípravu sloučeniny obecného vzorce I, v němž znamená skupinu obecného vzorce a a Rg znamená atom vodíku а У а X mají v bodě 1 uvedený význam, vyznačující se tím, že se sloučenina obecného vzorce li, v němž Y а X mají v bodě 1 uvedený význam, po případném chránění hydroxylové skupiny v poloze 6* fosforyluje při teplotě 10 až 30 °C fosfórylačním činidlem obecného vzorce lil, v němž X *2 a хз гоа^ v boc^ 1 uvedený význam, v množství 2,5 až 10-násobku teoretického množství v molech a hydrolýzuje se ledovou vodou·
  3. 3· Způsob podle bodu 1 pro přípravu sloučeniny obecného vzorce I, v němž Rg znamená skupinu obecného vzorce A a R^ znamená atom vodíku a Y а X mají v bodě 1 uvedeCS 270235 B2 ný význam, vyznačující ee tím, že ae sloučenina obecného vzorce II, v něsž Y а X mají v bodě 1 uvedený význam, po případném chránění hydroxylové skupiny v poloze 3*fosfory lu Je při teplotě -40 °C až 10 °C fosforylačním činidlem obecného vzorce ni, v němž Xp X? a X3 mají v bodě 1 uvedený význam, v množství 1,2 až 1,5-násobku teoretického množství v molech a hydrolyžuje se ledovou vodou.
  4. 4. Způsob podle bodu 3 pro přípravu karbocyklického 2z-deoxyguanosin-6z-monofosfátu, vyznačující se tím, Že se 9-/XlR,3S,4R)-4-hydroxymethyl-3-hydroxy-cyklopentan-l-y!7guanin fosforyluje působením fosforyloxychloridu.
CS88895A 1987-02-12 1988-02-12 Method of carbocyclic purine nicleotides preparation CS270235B2 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP3000187 1987-02-12
JP33156787 1987-12-25

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS89588A2 CS89588A2 (en) 1989-10-13
CS270235B2 true CS270235B2 (en) 1990-06-13

Family

ID=26368254

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS88895A CS270235B2 (en) 1987-02-12 1988-02-12 Method of carbocyclic purine nicleotides preparation

Country Status (11)

Country Link
EP (1) EP0278501A3 (cs)
CN (1) CN88100826A (cs)
AU (1) AU1164588A (cs)
CS (1) CS270235B2 (cs)
DK (1) DK64688A (cs)
FI (1) FI880628A (cs)
HU (1) HUT48885A (cs)
IN (1) IN166499B (cs)
NO (1) NO880606L (cs)
PL (1) PL270564A1 (cs)
YU (1) YU28488A (cs)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8813148D0 (en) * 1988-06-03 1988-07-06 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB9204015D0 (en) * 1992-02-25 1992-04-08 Wellcome Found Therapeutic nucleosides
EP0577558A2 (de) * 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
US5874578A (en) * 1992-07-13 1999-02-23 Bristol-Myers Squibb Process for preparing guanine-containing antiviral agents and purinyl salts useful in such process
CN102603652A (zh) * 2011-12-27 2012-07-25 河南师范大学 5-甲酰基嘧啶碳环核苷及制备方法
CN104211748B (zh) * 2013-11-15 2017-05-31 南京济群医药科技股份有限公司 6‑羟基双脱氧鸟嘌呤核苷磷酸酯制备和用途
CN104558080A (zh) * 2015-02-03 2015-04-29 西安新通药物研究有限公司 环状磷酸酯合成的新方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5040590A (cs) * 1973-07-30 1975-04-14
US4383114A (en) * 1977-02-09 1983-05-10 Regents Of The University Of Minnesota Adenosine deaminase resistant antiviral purine arabinonucleosides

Also Published As

Publication number Publication date
CN88100826A (zh) 1988-09-14
YU28488A (en) 1989-10-31
IN166499B (cs) 1990-05-19
NO880606D0 (no) 1988-02-11
EP0278501A2 (en) 1988-08-17
CS89588A2 (en) 1989-10-13
FI880628A0 (fi) 1988-02-11
FI880628A (fi) 1988-08-13
DK64688D0 (da) 1988-02-09
EP0278501A3 (en) 1991-01-02
AU1164588A (en) 1988-08-18
NO880606L (no) 1988-08-15
HUT48885A (en) 1989-07-28
DK64688A (da) 1988-08-13
PL270564A1 (en) 1988-12-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU596400B2 (en) Carbocyclic purine nucleosides, their production and use
JP4083691B2 (ja) 抗レトロウィルス性エナンチオマー性ヌクレオチドアナログ
US6211158B1 (en) Desazapurine-nucleotide derivatives, processes for the preparation thereof, pharmaceutical compositions containing them and the use thereof for nucleic acid sequencing and as antiviral agents
CA2001715C (en) Carbocyclic nucleosides and nucleotides
US8153609B2 (en) Purine nucleotide derivatives
US5733896A (en) N-(3-fluoro-2-phosphonylmethoxypropyl) derivatives of purine and pyrimidine heterocyclic bases, their preparation and use
JPS62161797A (ja) ２′−フルオロ−アラビノフラノシルプリンヌクレオシド
HU182597B (en) Process for preparing 5-substituted 1-/2&#39;-deoxy-2&#39;-substituted-beta-d-arabinofuranosyl/-pyrimidine nucleosides
IE36478L (en) 1,2, 4-triazole nucleosides
EP0138656B1 (en) Cyclic pyrophosphates of purine and pyrimidine acyclonucleosides, their preparation and their application in anti-viral compositions
US8288545B2 (en) Reactive pyrophosphoric and bisphosphonic acid derivatives and methods of their use
US5459256A (en) Lipophilic, aminohydrolase-activated prodrugs
CS270235B2 (en) Method of carbocyclic purine nicleotides preparation
EP0219838A2 (en) Carbocyclic purine nucleosides, their production and use
US2482069A (en) Preparation of adenylic and thio-adenylic acid
Seita et al. The synthesis of nucleoside and nucleotide analogs
Goldman et al. Synthesis and Reactions of 3'-Amino-3'-deoxyribosides of 6-Chloropurine
JPS58177999A (ja) 新規アゾ−ルジヌクレオチド化合物およびその製造方法
US5420115A (en) Method for the treatment of protoza infections with 21 -deoxy-21 -fluoropurine nucleosides
JPS6338360B2 (cs)
EP0270885A1 (en) Synthesis of purin-9-ylalkylenoxymethyl phosphonic acids
JPH07103149B2 (ja) シトシン誘導体の製造法
EP0355899B1 (en) Nucleotide derivatives
Schirmeister‐Tichy et al. Nucleotides, Part LIX, Synthesis, Characterization, and Biological Activities of New Potential Antiviral Agents:(2′–5′) Adenylate Trimer Analogs Containing 3′‐Deoxy‐3′‐(hexadecanoylamino) adenosine at the 2′‐Terminus
JPH02188A (ja) ヌクレオチド類縁体およびその製造法，ならびに抗ウイルス剤