CS269952B2 - Method of enduracidine production - Google Patents
Method of enduracidine production Download PDFInfo
- Publication number
- CS269952B2 CS269952B2 CS817970A CS797081A CS269952B2 CS 269952 B2 CS269952 B2 CS 269952B2 CS 817970 A CS817970 A CS 817970A CS 797081 A CS797081 A CS 797081A CS 269952 B2 CS269952 B2 CS 269952B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- enduracidin
- fluoro
- tyrosine
- broth
- strain
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 5
- 241000971005 Streptomyces fungicidicus Species 0.000 claims abstract description 27
- VIIAUOZUUGXERI-UHFFFAOYSA-N 3-fluorotyrosine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(F)=C1 VIIAUOZUUGXERI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 19
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 abstract description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 24
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 21
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 21
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 16
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 11
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 10
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 9
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 9
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 9
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 9
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 9
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 7
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 7
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 6
- 239000002585 base Substances 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 108010012631 enduracidin A Proteins 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 4
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 3
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N Lactic Acid Natural products CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 2
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- -1 inorganic acid salts Chemical class 0.000 description 2
- 229910052816 inorganic phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 description 2
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 description 2
- 229940099607 manganese chloride Drugs 0.000 description 2
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- SRKQWNFPTBNUKE-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-1,2-dinitroguanidine Chemical compound [O-][N+](=O)N(C)\C(N)=N/[N+]([O-])=O SRKQWNFPTBNUKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000001599 direct drying Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- NJCUSQKMYNTYOW-MWUYRYRWSA-N enramicina Chemical compound O.N1C(=O)NC(=O)C(C=2C=C(Cl)C(O)=C(Cl)C=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC2N=C(N)NC2)NC(=O)C(CCCNC(N)=O)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(C=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(C=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)N(CCCCN)C(=O)C(C=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(O)=O)NC(=O)/C=C/C=C/CCCCC(C)CC)C(C)OC(=O)C(C=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(C)NC(=O)C1CC1CNC(N)=N1 NJCUSQKMYNTYOW-MWUYRYRWSA-N 0.000 description 1
- 108700041171 enramycin Proteins 0.000 description 1
- 229950003984 enramycin Drugs 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-N ethanesulfonic acid Chemical compound CCS(O)(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- PHZLMBHDXVLRIX-UHFFFAOYSA-M potassium lactate Chemical compound [K+].CC(O)C([O-])=O PHZLMBHDXVLRIX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001521 potassium lactate Substances 0.000 description 1
- 235000011085 potassium lactate Nutrition 0.000 description 1
- 229960001304 potassium lactate Drugs 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 239000007362 sporulation medium Substances 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N tetraphosphorus decaoxide Chemical compound O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K11/00—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K11/02—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof cyclic, e.g. valinomycins ; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/886—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Mycology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Tento vynález se týká výroby enduracidinu. Zvláště se tento vynález týká způsobu výroby enduracidinu, který zahrnuje kultivaci mikroorganismu produkujícího enduracidin, patřícího do rodu Streptomyces a majícího schopnost vylučovat enduracidin nebo rezistentního vůči m-fluor-DL-tyrosinu, nebo majícího obě tyto schopnosti, až vytvoření významného množství enduracidinu v živném prostředí a jeho izolaci z tohoto prostředí. Tento vynález dále poskytuje nové mikroorganismy produkující enduracidin patřící do rodu Streptomyces, nebo jejich biologicky čisté kultury mající výše uvedené vlastnosti.
Antibiotikum enduracidin (=enramycin) má široké antimikrobiální spektrum vůči grampozitivním bakteriím a je vhodným antibiotikem polypeptidového typu sloužícího mimo jiné jako přísada do krmiv.
Enduracidin je generický název analogů enduracidinovýdh analogů a zahrnuje enduracidin А, В, C a D. Z nich enduracidin А а В tvoří hlavní složky enduracidinu poskytovaného mikroorganismy a jejich chemická struktura byla správně stanovena (Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 6(1970); Centrál Patent Index, Basic Abstract Journal Section B: 42389R-BCD/R24 = Japanese Patent Publication 701715Θ).
Oosud známý způsob výroby enduracidinu zahrnuje použití Streptomyces fungicidicus B-5477 (IF0-12439, ATCC-21013) a Streptomyces fungicidicus B-5477-m (IFO-12440, ATCC21014) (USA patent 37B6142; Journal of Antibiotics, 21, 126(1968)).
Byl proveden rozsáhlý výzkum za účelem získání účinnějšího mikroorganismu produkujícího enduracidin a zjistili, že mikroorganismus produkující enduracidin -mající schopnost vylučovat enduracidin nebo vykazující rezistenci vůči m-fluor-DL-tyrosinu nebo mající obě tyto vlastnosti, je schopný produkovat několikanásobné výtěžky enduracidinu ve srovnání s mateřským kmenem. ·
Způsob výroby enduracidinu spočívá podle vynálezu v tom, že se kultivuje mutant produkující enduracidin odvozený ze Streptomyces fungicidicus, který má schopnost vylučovat enduracidin nebo je rezistentní vůči m-fluor-DL-tyrosinu nebo má obě tyto vlastnosti a je zvolený ze skupiny zahrnující Streptomyces fungicidicus GAB-453 (IF0-14036), Streptomyces fungicidicus Emt 36-3 (IF0-14037) a Streptomyces fungicidicus Emt 2-140 (IG0-14088), v živné půdě s hodnotou pH 6 až 9 obsahující zdroje asimilovaného uhlíku, využitelné dusíkaté zdroje a soli anorganických kyselin při teplotě 20°C až 37°C až do nahromadění významného množství antibiotika v Živné půdě, ze které se pak enduracidin izoluje.
Konkrétní vysvětlení týkající se použití mikroorganismů v tomto vynálezu je uvedeno níže:
Podstatné množství enduracidinu poskytované známými, enduracidin produkujícími kmeny, je obvykle shromažďováno intracelulárně a to jak v pevném, tak v kapalném živném prstředí.
Zde míněné enduracidin vylučující mikroorganismy jsou ty, které přešly к vylučování nebo propustné difúzi enduracidinu do okolí kolonií v pevném prostředí za podmínek, že kolonie mateřských kměnů nevylučují nebo neumožňují propustnou difúzi enduracidinu extracelulárně.
Tyto enduracidin vylučující mutanty lze získat například nanesením spor nebo fragmentů mycelia, zpracovaných běžnými způsoby působícími mutaci, jako je ozáření ultrafialovými paprsky, působením N-methyl-řP-nitro-N-nitrosoguanidinu nebo ozářením rentgenovými paprsky, na bujon-agarové plotny tak, aby vzniklo deset až několik desítek kolonií na jedné plotně (9 cm). Po dostatečném nárůstu kolonií, tj. po 4 až 6 dnech kultivace při 28°C, se každá plotna pokryje vrstvičkou řídkého agaru obsahujícího spory testovaného kmene Bacillus subtilis PCI 219.
Enduracidin vylučující mutanty se získají tak, že převrstvené plotny se inkubují při 37°C po dobu 16 hodin a pak se vyhledají kolonie, okolo kterých se tvoří inhibiční zóna testovacího mikroorganismu. Tyto mutanty se objevují v počtu jedné až tří kolonií z deseti tisíc kolonií podrobených ozáření ultrafialovými paprsky. Takto získané enduracidin
CS 269 952 82 vylučující mikroorganismy mají vyšší výtěžnost enduracidinu ve srovnání s materskými, kmeny. Zejména v živných půdách s přídavkem anorganických fosforečnanu dosahuje výtěžnost enduracidinu těmito mikroorganismy asi dvojnásobku vzhledem к materským kmenům. Příkladem takto výhodně použitelného kmene je Streptomyces fungicidicus GAB-453 (IF0-14036; FERM P-5728; ATCC-31729).
Naproti tomu vůči m-fluor-DL-tyrosin rezistentní mikroorganismy lze získat následujícím postupem.
Mateřský kmen 8-5477 nemůže růst na plotně základní agarové půdy s přídavkem m-fluor01-tyrosinu v koncentraci 3/tim/Ml nebo vyšší, přičemž uvedená plotna obsahuje IX glukózy. 0,2% síranu amonného, 0,1% dihydrogenfosforečnanu draselného, 0,1% chloridu sodného, 0,1% síranu hořečnatého, 0,2% uhličitanu vápenatého, 1 ppm síranu železnatého, Г ppm chloridu manganu, 1 ppm síranu železnatého, 1 ppm chloridu manganu, 1 ppm síranu zinečnatého a 2,0% agaru. Proto se mikroorganismy se získanou schopností růstu na plotně výše uvedeného základního agaru obsahujícího koncentraci 3/ug/ml nebo vyšší m-fluor-DL-tyrosinu buď spontánní mutací nebo mutací mateřských kmenů běžnými mutagenními způsoby nazývající mfluor-Dl-tyrosin-resistentní mutanty. Jelikož tyto mikroorganismy produkují enduracidin velmi účinně, jsou výhodné ty, které jsou schopny dostatečného růstu v pudě základního agaru obsahující koncentraci 60^-200ft,/ml m-fluor-DL-tyrosinu. Tyto mikroorganismy lze získat inokulací základní agarové půdy obsahující 60^až 200^/ml m-fluor-DL-tyrosinu . suspenzí obsahující spory mateřského kmene bez nebo po mutagenním ošetření, poté inkubací inokulované půdy při 28°C po dobu 5 až 7 dní a izolací kolonií.
Mezi mutageny lze zařadit vedle ozařování ultrafialovými paprsky běžné způsoby jako je ošetření M-methyl-N»-nitro-N-nitrosoguanidinem, kyselinou methylmethansulfonovou nebo rentgenovými paprsky. · četnost získaných m-fluor-DL-tyrosin-rezistentních kmenů se obvykle pohybuje mezi 0,00001 až 0,0001 procenty. Výtěžnost enduracidinu většiny takto získaných m-fluor-DL.tyrosin-rezistentních kmenů je asi dvakrát tak vysoká než výtěžnost kmene Streptomyces fungicidicus Emt 36-3 příkladem kmene výhodně využitelného.
Schopnost mikroorganismů podle vynálezu vylučovat enduracidin a jejich rezistence vůči m-fluor-Dl-tyrosinu slouží к aditivnímu nebo synergickému zvýšení výtěžnosti enduracidinu, takže u dvojitých mutantů, majících obě tyto vlastnosti, byla nalezena několikrát vyšší výtěžnost enduracidinu než u mateřského kmene.
Tyto výše uvedené dvojité mutanty lze získat vhodnou kombinací výše zmíněného postupu pro získání enduracidin vylučujících mutantů a výše uvedeného postupu pro získání mfluor-DL-tyrosin-rezistentních mutantů.
Konkrétněji se nejprve získají z mateřského kmene mutanty vylučující enduracidin a z nich se selektivním způsobem získají kmeny rezistentní vůči m-fluor-DL-tyrosinu výše uvedeným postupem. Příkladem takového výhodně využitelného kmene získaného z dříve uvedeného kmene Streptomyces fungicidicus GAB-453 je kmen Streptomyces fungicidicus Emt 2-140 (IF0-14088, FERM P-5730, ATCC-31731). Naopak také kmeny rezistentní vůči m-fluor-OL-tyrosinu mohou mít schopnost vylučovat enduracidin к získání dvojitých mutantů. Dále mohou být tyto dvojité mutanty vybrány ze spontánních mutantů.
Mikrobiologické vlastnosti takto získaných mikroorganismů jsou s výjimkou schopnosti vylučování enduracidinu A/nebo rezistence vůči m-fluor-DL-tyrosinu zcela shodné s vlastnostmi mateřského kmene Streptomyces fungicidicus B-5477 (IFO-12439; ATTC-21013) jak je uvedeno v US patentu 3786142 a Journal of Antibiotics, 21, 126(1968).
Pro kultivaci těchto mutantů se užívají živné půdy obsahující vhodné živiny, jako jsou zdroje asimilovatelného uhlíku, využitelné dusíkaté zdroje, soli anorganických kyselin a/nebo sole organických kyselin, které se běžně užívají ke kultivaci mikroorganismů. Jako zdroje uhlíku mohou být například použity uhlohydráty jako je škrob, dextrin, laktcCS 269 952 B2 za nebo maltóza nebo oleje a tuky, jako je sojový olej, chicekn oll nebo vepřové sádlo, samostatně nebo ve vzájemné kombinaci.
Jako zdroj dusíku mohou být použity například organické nebo anorganické látky jako je například kukuřičná lepková mouka, kukuřičný extrakt, odtučněná moučka z bavlníkových semen, močovina nebo síran amonný. Vhodně lze také použít anorganické látky jako je draslík, sodík, hořčík, zinek, kobalt, železo, mangan nebo kyselina fosforečná. Dále se s výhodou užívají soli organických kyselin, například draselná nebo sodná sůl kyseliny mléčné, vinné nebo maleinové.
Kultivace se výhodně provádí za aerobních podmínek, tj. za třepání nebo míchání při současném vzduchování, obvykle při teplotě 20°C až 37°C, přičemž je žádoucí úprava pH na hodnotu 6 až 9.
Kultivace po dobu 5 až 9 dní za výše uvedených podmínek poskytuje enduracidin nahromaděný v živné půdě ve vysoké dávce.
Jako příklad je uvedeno v Tabulce 2 srovnání s použitím mateřského kmene, přičemž byly použity dva druhy fermentačního prostředí, jejichž složení je uvedeno v Tabulce 1.
Jak je zřejmé z Tabulky 2, je výtěžnost enduracidinu u mutantů vyměšujících enduracidin lepší, než u mateřského kmene, zejména v prostředí A obsahujícím dihydrogenfosforečnan sodný a výtěžnost enduracidinu u mutantů rezistentních vůči m-fluor-OL-tyrosinu je lepší než u mateřského kmene v prostředí В neobsahujícím žádné doplňkové anorganické fosforečnany. Dále z Tabulky vyplývá, že dvojité mutanty mající oba druhy vlastností, mají 5 až 8krát vyšší výtěžnost enduraciclinu než mateřské kmeny.
Tabulka 1
Fermentačnf prostředí
Prostřed! A Prostředí В
| kukuřičná moučka | 5,0% | 8,0% |
| kukuřičná lepková moučka | 4,0 | 3,0 |
| kukuřičný extrakt | 0,5 | 0,5 |
| dihydrogenfosforečnan sodný | 2,6 | - |
| chlorid sodný | 0,5 | 0,1 |
| síran amonný | 0,3 | 0,3 |
| chlorid zinečnatý | 0,01 | 0,01 |
| laktóza | 1,0 | 1,0 |
| chicken oil | 1,4 | 1,4 |
| mléčnan draselný | 0,1 | 0,5 |
| pH | 6,7 | 6,7 |
Tabulka 2
Výtěžnost enduracidinu u mateřského kmene a jeho mutantů
Množství vytvořeného enduracidinu*
Prostředí В (/ug/Ml)
Prostředí A
| mateřský kmen | ||
| (St. fungicidicus B-5477) | 530 | 550 |
| vylučující mutant | ||
| (St. fungicidicus GAB-453) | 1730 | 1240 |
mutant rezistentní vůči m-fluor-DL-tyrosinu
| (St. fungicidicus Emt 36-3) | 1190 | 2560 |
| mutant vylučující enduracidin a rezistentní vůči | ||
| m-fluor-DL-tyrosinu | ||
| (St. fungicidicus Emt 2-140) | 2020 | 4340 |
CS 269 952 B2
Podmínky kultivace jsou shodné s podmínkami uvedenými v příkladu 2. ^Biologické stanovení obsahu způsobu uvedeným před příkladem 1-(1).
Je známo, že enduracidin vytvořený mateřským kmenem je nahromaděn hlavně v myceliu. (The Journal of Antibitics, 21., 126(1968).
Také v případě použití enduracidin vylučujících a/nebo vůči m-fluor-OL-tyrosinu rezistentních mutantů je větší Část vytvořeného enduracidinu obsažena v myceliu odděleném filtrací živné půdy nebo v sedimentu získaném odstředěním živné půdy.
Za předpokladu, že volná báze enduracidinu je velmi málo rozpustná ve vodě, oddělí se enduracidin vyloučený z mycelia mutantů filtrací nebo se shromáždí v sedimentu společně s myceliem nebo a pevnými látkami v živné půdě. Proto lze izolaci enduracidinu vyprodukovaného výše uvedenými mutanty provést pomocí různých známých izolačních postupů užívaných pro izolaci enduracidinu vyprodukovaného mateřským kmenem (US patent 3786142, The Journal of Antibiotics, 21, 138(1968)).
Výhodné postupy zahrnují například extrakci enduracidinu ze zbytku po filtraci zbytku obsahujícího mycelium vodným methanolem nebo acetonem okyseleným kyselinou chlorovodíkovou, následující přečištění adsorpcí na aktivním uhlí, adsorpcí na syntetické adsorpční pryskyřici, výměna iontů na výměnné pryskyřici, extrakci organickým rozpouštědlem, odsolení, zahuštění nebo lyofilizaci. Je-li pro další použití dostačující enduracidin poměrně nízké čistoty, jako například v případě použití jako přísady do krmiv, může postačovat oddělení mycelia filtrací, promytí vodou a přímé vysušení (v sušárně).
Vynález je dále objasněn pomocí následujících příkladů, tyto příklady však vynález nikterak neomezují. Enduracidin nashromážděný v živné půdě byl kvantitativně stanovován biologickým způsobem po předchozí extrakci ze živné půdy 70% acetonem okyseleným kyselinou chlorovodíkovou za použití Bacillus subtilis PCI 219 jako testovacího mikroorganismu a za použití krystalického monohydrochloridu enduracidinu (Enduracidin Λ : Enduracidin В = 58:42) jako standardu.
Příklad 1-(1) šikmý agar v testovací zkumavce obsahující 8 ml sporulačního media (1% rozpustného škrobu, 0,2% extraktu z kvasnic, 2,0% práškového agaru, pH 7,0) byl inokulován Streptomyces fungicidicus B-5477 (IF0-12439, ATCC-21013) a inkubován při 28°C po dobu 10 dní ke tvorbě sporulace. Takto vzniklé spory byly shromážděny platinovou kličkou a suspendovány o
v 5 ml sterilní vody. Tato suspenze obsahovala 5,lxl0°/ml spor. Suspenze byla zfiltrována přes skleněný filtr číslo 2 (40 až 50/um). Tato zfiltrovaná suspenze obsahovala 2,6 x ΙΟθ/ml spor. 4 ml této suspenze byly pak převedeny na skleněnou misku (Petriho misku; průměr 9 cm) a bylo provedeno ozařování ultrafialovými paprsky (10W, pasterizační lampa) ze vzdálenosti 40 cm po dobu 10 minut za současného třepání miskou, přičemž bylo 99,8% spor usmrceno. Takto ošetřená suspenze byla zředěna sterilní vodou tak, aby obsahovala 30 až 50 životaschopných spor v 0,1 ml. 0,1 ml tohoto zředění bylo naneseno na agarovou plotnu (0,5% pepton, 0,5% masový extrakt, 0,5% chlorid sodný, 2% práškový agar, pH 7,2) a byla provedena inkubace při 28°C po dobu čtyř dnů. Plotna, na které se vytvořilo 30 až 50 kolonií, byla převrstvena 5 ml řídkého bujon-agarového media (koncentrace agaru 0,7%) obsahujícího asi 1 x 10^/ml spor Bacillus subtilis PCI 219, a byla inkubována při 37°C po dobu 16 hodin. Mezi asi 21000 takto získanými koloniemi vytvářelo devět kolonií okolo sebe inhibiční zóny (15 až 23 cm2) růstu Bacillus subtillus PCI 219. Těchto devět kolonií bylo přečištěno použitím bujon-agarové plotny a pak převedeno na výše zmíněný šikmý agar pro tvorbu spor. Použitím této šikmé kultury byla připravena suspenze spor, která byla nanesena ná bujon-agarovou plotnu tak, aby vzniklo 10 až 20 kolonií na plotně a byla provedena inkubace při 28°C po dobu čtyř dnů. Takto inkubované médium byla převrstveno řídkou bujon-agarovou půdou obsahující stejný počet spor Bacillus subtilis PCI 219, byla provedena inkubace při 37°C po dobu 16 hodin a pak byl změřen průměr vzniklých kruhových
CS 269 952 B2 zón, vykazujících inhlbici růstu Bacillus subtilis PCI 219. Tři z uvedených devíti kmenů nevykázaly tvorbu těchto kruhových zón a pět z nich vykázalo tvorbu kruhových zón o průměru 15 až 20 mm. Zbývající kmen vykázal tvorbu největší kruhové zóny (24 mm průměr) к inhibicl růstu Bacillus subtilis PCI 219. Tento kmen byl nazván Streptomyces fungicidicus GAB-453.
Příklad l-(2) O
Jedna desetina ml suspenze spor (1,2 x 10 /ml ) kmene Streptomyces fungicidicus B-5477 (IF0-12439, ATCC-21013), kde se suspenze připraví stejným způsobem jako v příkladu 1-(1), byla nanesena na plotnu obsahující 15 ml základní agarové půdy s přídavkem 125/ug/ml m-íluor-OL-tyrosinu a byla provedena inkubace při 28°C po dobu 6 dní. Vytvořilo se asi 200 kolonií na plotně. Z nich byly vybrány kolonie relativně největší velikosti a naneseny na stejnou základní půdu (asi 1,5 - 2,0 mm, asi 10/plotnu). Půdy s přenesenými koloniemi byly inkubovány při 28°C po dobu 5 dní a pak byly izolovány kmeny vyrostlé na tomto mediu jakožto rezistentní vůči m-flpor-DL-tyrosinu. Takto izolovaných 125 kmenů bylo inkubováno při 2B°C po dobu asi osmi dnů na mediu В uvedeném v Tabulce 1 a bylo provedeno stanovení jejich vzájemné síly. Kmen, který byl nejmohutnější byl nazván Streptomyces fundlcidicus Emt 36-3. .
Příklad l-(3) · o
Stejným způsobem jako v příkladu 1-(1) byla připravena suspenze spor (2,1 x 10 /ml) z kmene Streptomyces fungicidicus GAB-453, který byl získán postupem uvedeným v příkladu 1-(1). Pět mililitrů masového vývaru obsahujícího*200^//ml N-methyl-N'-nitro-N-nitroguanidinu bylo inokulováno 1 ml suspenze spor a protřepáváno Čtyři hodiny při 28°C. Tímto ošetřením bylo asi 734 spor usmrceno. Takto ošetřená suspenze byla odstředována při 3000 otáčkách za minutu. Sediment obsahující spory byl oddělen a suspendován v 1 ml sterilní vody. Jedna desetina ml této suspenze spor byla nanesena na plotnu (průměr 9 cm) obsahující 15 ml základního agaru s přídavkem 60^v//ml m-fluor-DL-tyrosinu a byla provedena inkubace při 2B°C po dobu 6 dní. Po šesti dnech dosáhl počet kolonií asi 180 na plotnu. Z nich byly vybrány kolonie relativně největší velikosti (asi l,5mm až 2,0mm, asi 10/plotnu) a přeneseny na základní agarovou půdu stejného složení obsahující 60^u/ml m-fluor-OL-tyrosinu. Plotny s přenesenými koloniemi byly inkubovány při 28°C po dobu šesti dnů. Pak byly vyrostlé kmeny přeneseny na šikmé agary ke sporulaci, jakožto kmeny rezistentní vůči m-fluor-DLtyrosinu, odvozené od kmene Streptomyces fungicidicus GAB-453. Takto získaných 75 kmenů bylo inkubováno při 2B°C po dobu osmi dní v mediu В uvedeném v Tabulce 1, načež bylo provedeno stanovení jejich vzájemné mohutnosti. 68 kmenů vykázalo vyšší mohutnost než maleřti ký kmen Streptomyces fungicidicus GAB-453. Z těchto 68 kmenů byl nejsilnější kmen nazván Streptomyces fungicidicus Emt 2-140. U tohoto kmene bylo provedeno stanovení obsahu způsobem podle příkladu 1-(1), spočívající ve vzniku kruhových inhibičních zón růstu Bacillus subtilis (průměr 24 mm) bez změny schopnosti vylučování enduracidinu.
Příklad 2 ml očkovací živné půdy obsahující 3,54 kukuřičného extraktu, 2,54 kukuřičné moučky, 0,54 kukuřičné lepkové moučky, 3,04 uhličitanu vápenatého a 0,054 protipěnivé přísady Actocol, o pH 6,2, bylo odpipetováno do Erlenmayerovy baňky o objemu 200 ml a umístěno do autoklávu na 15 minut při 120°C. Takto sterilizovaná očkovací živná půda byla inokulována ·
jedním ml suspenze obsahující asi 2x10 spor kmene Streptomyces fungicidicus Emt 2-140 (IF0-140B8) získaného postupem uvedeným v příkladu l-(3) a byla provedena inkubace za třepání při 28°C po dobu 24 hodin. Oo Erlenmayerovy baňky o objemu 200 ml bylo pak odpipetováno 30 ml media В uvedeného v Tabulce 1 a byla umístěna do autoklávu na 30 minut při 120°C. Do této baňky bylo pak přidáno 2,5 ml výše uvedené očkovací kultury a byla provedena inkubace za třepání při 2B°C po dobu osmi dnů. Takto získaná fermentační půda obsahovala 4330/ug/ml enduracidinu. Ke dvěma litrům této fermentační půdy bylo přidáno 40 g Hyflo Super Cel к usnadnění filtrace a směs byla zfiltrována sáním přes Buchnerovu nálevku o průměru 30 cm opatřenou filtračním papírem (Toyo Roshi No 2 ). Filtrací takto získaná
CS 269 952 B2 mycelíální frakce byla pak promyta šesti litry deionizované vody a znovu zfiltrována. 480 g takto získané mokré myceliální frakce bylo pak pomocí jednoho litru deionizované vody převedeno do kaše, do které byly přidány dva litry methanolu. К této směsi bylo dále přidáno 5N kyselina chlorovodíková a směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu tří hodin za udržování hodnoty pH směsi kolem 3-4 a poté byla směs zfiltrována a bylo získáno 2810 ml filtrátu (obsah enduracidinu 2460/ug/ml). Hodnota pH tohoto kyselého extraktu byla upravena pomocí ION hydroxidu sodného na 6, bylo přidáno 30 g Hyflo Super Cel a vzniklá amorfní sraženina byla odfiltrována. 2700 ml takto získaného neutralizovaného extraktu bylo vneseno na kolonu aktivního uhlí (500 ml). Tato kolona byla promyta 500 ml 60¾ methanolu a jedním litrem deionizované vody a pak následovala eluce enduracidinu 70¾ vodným acetonem obsahujícím 0,02N HC1. 1,3 1 (4610/ug/ml) takto získané frakce obsahující rozpuštěný enduracidin bylo zahuštěno při teplotě 45 °C nebo nižší za sníženého tlaku na objem 500 ml. К zahuštěnému roztoku bylo přidáno 200 ml methanolu a směs byla znovu zahuštěna za sníženého tlaku na objem 500 ml. Tento postup byl ještě jednou opakován, načež následovalo odstranění acetonu destilací. К 540 ml takto získaného koncentrátu bylo přidáno 90 ml vody, 1100 ml methanolu, 12,5 g chloridu sodného a přídavkem 10N hydroxidu sodného byla provedena úprava pH na hodnotu 7. Vznikající amorfní sraženina byla odstraněna filtrací a bylo získáno 2530 ml filtrátu (2173/ug/ml). Tento roztok se nechal projít kolonou obsahující 700 ml Amberlitu XAO-2 předem promytého 4 1 70¾ methanolu obsahujícího 0,01N HC1 a 3 1 50¾ methanolu. Tato kolona byla promyta 2 1 50¾ methanolu obsahujícího 5¾ chloridu sodného a pak byla provedena eluce enduracidinu 50¾ methanolem obsahujícím 0.006N HC1. К 650 ml takto získané frakce obsahující enduracidin (7530/tig/ml) byly přidány 2 g aktivního uhlí, směs byla míchána 30 minut a pak bylo aktivní uhlí odfiltrováno a bylo získáno 620 ml čirého roztoku. Tento vyčeřený roztok se nechal postupně projít kolonami obsahujícími vždy 90 ml Amberlitu IR-120 (H forma) a IR-45 (OH forma) к odsolení. Tyto kolony byly promyty vždy 90 ml 50¾ methanolu a promývací roztoky byly připojeny к odsolenému roztoku, celkem bylo získáno 650 ml roztoku. Část roztoku byla zředěna 0,lN HC1 а и takto zředěného roztoku bylo provedeno stanovení absorbance. Z absorbance při 272 nm bylo stanoveno množství enduracidinu odpovídající 3,92 g. pH tohoto roztoku bylo upraveno pomocí 2N HC1 na hodnotu 4 a bylo provedeno zahuštění za sníženého tlaku na objem asi 120 ml. Tento koncentrát byl ochlazen v ledové lázni a pH bylo upraveno pomocí 10N NaOH na hodnotu 9. Vzniklá volná báze enduracidinu byla oddělena odstředěním a promyta asi 20 ml chladného vodného methanolu.
Promytá volná báze enduracidinu byla suspendována ve 40 ml methanolu a rozpuštěna přídavkem ekvimolárního množství 1N HC1 (1,6 ml). Dále byla upravena hodnota pH na 7. Tento roztok byl zahuštěn za sníženého tlaku na objem asi 15 ml za tvorby bílých krystalů. Tanto zahuštěný roztok byl ponechán v klidu při 5 °C po dobu 2 dnů, načež byly krystaly odděleny filtrací přes skleněný filtr (č. 4). Takto oddělené mokré krystaly byly suspendovány ve směsi 3 ml vody a 26 ml methanolu. Suspenze byla zahřáta na 50 až 55 °C к rozpuš tění. К tomuto roztoku bylo přidáno 30 mg práškovitého aktivního uhlí a směs byla míchána při 40 °C po dobu 20 minut, načež se aktivní uhlí odstranilo filtrací přes Milipore filter (FH). Takto získaný filtrát byl zahuštěn za sníženého tlaku na objem asi 15 ml za tvorby krystalů. Krystaly byly uchovány po dobu dvou dnů při teplotě 5 °C a pak odděleny filtrací přes skleněný filtr. Pak byly krystaly vysušeny při 50 °C po dobu 15 hodin a bylo získáno 2,62 g bílých krystalů hranolovitého tvaru monohydrochloridu enduracidinu, teplota tání 240 až 245 °C (za rozkladu).
Elementární analýza (4): *
Nalezeno: C 52,56 + 0,5; H 6,20 + 0,3 ‘
N 14,70 + 0,5; Cl 4,20 + 0,6
Optická otáčivost Cc< J + 87 0 + 10 /с=0,5, dimethylformamid/ Ultrafialová absorbance: max^ nm /E^m/ = 231 /220+10/,
CS 269 952 B2
272 /123д10/.
Obsah enduracidinu:
enduracidin A: enduracidin В = 62 : 38, dále byl obsažen enduracidin C v množství asi 1¾ a stopy enduracidinu 0 ( pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie).
Příklad 3
500 ml očkovací živné půdy o stejném složení jako v příkladu 2 bylo vloženo do 2 litrové Sakaguchiho lahve a autoklavováno 30 minut při 120°C. Takto sterilizovaná půda
Q byla inokulována 2 ml suspenze spor (asi 10 spor) kmene Streptomyces fungicidicus
Emt 2-140 získaného postupem uvedeným v příkladu l-(3). Inokulovaná půda byla inkubována za třepání při 28°C po dobu 24 hodin. 500 ml takto získané očkovací kultury bylo převedeno do fermentační nádoby o kapacitě 50 1 obsahující 30 1 očkovací živné půdy o stejném složení jako je uvedeno výše a byla provedena inkubace při 28°C po dobu 28 hodin za vzduchování (30 1/min) a za míchání (280 ot/min). Osm litrů takto inkubované očkovací půdy bylo převedeno do fermentační nádoby o kapacitě 200 1 obsahující 100 1 media В uvedeného v Tabulce 1 a byla provedena inkubace při 28°C po bodu 8 dní za vzduchování (180 1/min) a za míchání (180 ot/min). Takto získaná fermentační půda (88 1) obsahovala 4530/ug/ml enduracidinu.
Příklad 4 ml očkovací půdy o stejném složení jako v příkladu 2 vnesených do Erlenmayerovy banky o objemu 200 ml bylo inokulováno. 1 ml suspenze spor (asi 1,5.10 ) kmene Streptomyces fungicidicus GAB-453 získaného postupem uvedeným v příkladu 1-(1) a byla provedena inkubace za třepání při 28°C po dobu 24 hodin. Oo další 200 ml Erlenmayerovy baňky bylo odpipetováno 30 ml media A uvedeného v Tabulce 1 a sterilizovaného v autoklávu při 120°C podobu 30 minut. К takto vysterilizovanému mediu v baňce bylo přidáno 2,5 ml výše uvedené očkovací kultury a byla provedena inkubace za třepání při 28°C po dobu osmi dnů. Takto získaná fermentační půda obsahovala 1870/Ug/ml enduracidinu.
Přiklaď 5 ml očkovací půdy stejného složení jako v příkladu 2 vnesených do 200 ml Erlenmayerovy banky bylo inokulováno 1 ml suspenze spor (asi 3 x 10 ) kmene Streptomyces fungicidicus Emt 36-3, získaného postupem uvedeným v příkladu l-(2) a byla provedena inkubace za třepání při 28°C po bodu 24 hodin. Další 200ml Erlenmayerova baňka obsahující 30 ml media В uvedeného v Tabulce 1 s upraveným obsahem kukuřičné moučky na 6,0¼ byla sterilizována v autoklávu při 120°C po dobu 30 minut. К takto vysterilizovanému mediu v baňce bylo přidáno 2,5 ml výše uvedené očkovací kultury a byla provedena inkubace za třepání při 2B°C po dobu В dní. Takto získaná fermentační půda obsahovala 3100 yug/ml enduracidinu. Příklad 6
Hodnota pH 2 1 fermentační půdy získané v příkladu 3 byla upravena na 5,5 a půda pak byla zahřáta na 70°C po dobu 30 minut. К usnadnění filtrace bylo pak к této půdě přidáno 40 g Hyflo Super Cel a směs byla zfiltrována sáním na Biichnerově nálevce průměru 30 cm s filtračním papírem (Toyo Roshi č. 2).
Takto získaná myceliální frakce byla promyta šesti litry deionizované vody. Takto získaná promytá mokrá myceliální frakce (570 g) byla sušena 6 hodin při 55°C za sníženého tlaku a pak dále sušena v exsikátoru nad fosforpentoxidem při teplotě místnosti po dobu tří dnů. Získaný vysušený materiál byl rozdrcen ve třecí misce a bylo získáno 106 g světle hnědého suchého prášku obsahujícího mycelium (obsah enduracidinu 73,4 mg/g).
Claims (4)
1. Způsob výroby enduracidinu, vyznačující se tím, že se kultivuje mutant produkující enduracidin odvozený z Streptomyces fungicidicus, který má schopnost vylučovat enduracidin nebo je rezistentní vůči m-fluor-DL-tyrosinu nebo má obě tyto vlastnosti a je zvolený ze skupiny zahrnující Streptomyces fungicidicus GAB-453 (IF0-14036), Streptomyces fungicidicus Emt 36-3 (IF0-14037) a Streptomyces fungicidicus Emt 2-140 (IF0-14088), v živné půdě s hodnotou pH 6 až 9 obsahující zdroje asimilovatelného uhlíku, využitelné dusíkaté zdroje a soli anroganických kyselin při teplotě 20°C až 37°C až do nahromadění významného množství antibiotika v živné půdě, ze které se pak enduracidin izoluje.
2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že použitým mutantem je mutant mající schopnost vylučovat enduracidin.
3. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že použitým mutantem je mutant rezistentní vůči m-fluor-DL-tyrosinu.
4. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že mutant má jak schopnost vylučovat enduracidin, tak rezistenci vůči m-fluor-DL-tyrosinu.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55154393A JPS6038120B2 (ja) | 1980-10-31 | 1980-10-31 | 抗生物質エンジユラサイジンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS797081A2 CS797081A2 (en) | 1989-09-12 |
| CS269952B2 true CS269952B2 (en) | 1990-05-14 |
Family
ID=15583152
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS817970A CS269952B2 (en) | 1980-10-31 | 1981-10-29 | Method of enduracidine production |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4465771A (cs) |
| EP (1) | EP0055809B1 (cs) |
| JP (1) | JPS6038120B2 (cs) |
| KR (1) | KR870001987B1 (cs) |
| BG (1) | BG44208A3 (cs) |
| BR (1) | BR8107049A (cs) |
| CA (1) | CA1187016A (cs) |
| CS (1) | CS269952B2 (cs) |
| DE (1) | DE3170169D1 (cs) |
| ES (1) | ES506711A0 (cs) |
| HU (1) | HU190358B (cs) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4980283A (en) * | 1987-10-01 | 1990-12-25 | Merck & Co., Inc. | Renin-inhibitory pepstatin phenyl derivatives |
| CN101597578B (zh) * | 2009-07-01 | 2011-08-31 | 南京工业大学 | 一种安来霉素产生菌及利用大孔树脂提取的方法 |
| CN102391363B (zh) * | 2011-09-26 | 2013-11-13 | 浙江升华拜克生物股份有限公司 | 一种恩霉素的提取方法 |
| CN103013977A (zh) * | 2012-12-12 | 2013-04-03 | 安徽丰原发酵技术工程研究有限公司 | 一种离子束诱变杀真菌素链霉菌选育恩拉霉素菌株的方法 |
| JP2020500509A (ja) * | 2016-12-06 | 2020-01-16 | インターベット インターナショナル ベー． フェー． | 改変ストレプトマイセス・フンジシディカス分離株およびその使用 |
| JP7086984B2 (ja) | 2016-12-06 | 2022-06-20 | オレゴン ステイト ユニバーシティ | Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｆｕｎｇｉｃｉｄｉｃｕｓの遺伝子組換え株におけるエンデュラシジンの産生を増強するための組成物及び方法 |
| CN109266594B (zh) * | 2018-09-25 | 2021-10-26 | 天津科技大学 | 一种恩拉霉素高产菌株及其构建方法 |
| CN110157757B (zh) * | 2019-02-15 | 2022-11-25 | 河北圣雪大成制药有限责任公司 | 恩拉霉素单组分的产量提高方法、培养基以及分离方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1617881C2 (de) * | 1965-10-13 | 1984-07-05 | Takeda Chemical Industries, Ltd., Osaka | Antibiotikum Enduracidin und seine Herstellung |
| US3697647A (en) * | 1967-01-25 | 1972-10-10 | Takeda Chemical Industries Ltd | Feed containing enduracidin |
-
1980
- 1980-10-31 JP JP55154393A patent/JPS6038120B2/ja not_active Expired
-
1981
- 1981-10-20 CA CA000388357A patent/CA1187016A/en not_active Expired
- 1981-10-22 BG BG053919A patent/BG44208A3/xx unknown
- 1981-10-24 DE DE8181108853T patent/DE3170169D1/de not_active Expired
- 1981-10-24 EP EP81108853A patent/EP0055809B1/en not_active Expired
- 1981-10-29 HU HU813175A patent/HU190358B/hu unknown
- 1981-10-29 CS CS817970A patent/CS269952B2/cs unknown
- 1981-10-30 BR BR8107049A patent/BR8107049A/pt unknown
- 1981-10-30 US US06/316,901 patent/US4465771A/en not_active Expired - Lifetime
- 1981-10-30 ES ES506711A patent/ES506711A0/es active Granted
- 1981-10-31 KR KR1019810004188A patent/KR870001987B1/ko not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA1187016A (en) | 1985-05-14 |
| KR830007830A (ko) | 1983-11-07 |
| DE3170169D1 (en) | 1985-05-30 |
| KR870001987B1 (ko) | 1987-10-24 |
| JPS6038120B2 (ja) | 1985-08-30 |
| BG44208A3 (en) | 1988-10-14 |
| CS797081A2 (en) | 1989-09-12 |
| EP0055809A1 (en) | 1982-07-14 |
| JPS5779896A (en) | 1982-05-19 |
| ES8302097A1 (es) | 1983-01-01 |
| BR8107049A (pt) | 1982-07-20 |
| ES506711A0 (es) | 1983-01-01 |
| HU190358B (en) | 1986-08-28 |
| EP0055809B1 (en) | 1985-04-24 |
| US4465771A (en) | 1984-08-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU624458B2 (en) | Macrolide compounds | |
| US5620874A (en) | Process for producing parasiticidal milbemycin derivatives by culturing streptomyces | |
| EP0001709B1 (en) | Deoxynarasin antibiotics, their production and use | |
| CS269952B2 (en) | Method of enduracidine production | |
| JP2594778B2 (ja) | 新規抗生物質 | |
| KR960012063B1 (ko) | 글리콜펩티드 항생물질 pa-45052 및 그의 제조방법 | |
| US3914158A (en) | Antibiotic production | |
| US4174404A (en) | Deoxynarasin antibiotics | |
| GB2084158A (en) | Peptide and production thereof | |
| US4927810A (en) | Efomycin G and it's use as yield promoter in animals | |
| KR20030017067A (ko) | 변이주 액티노플라네스 테이코마이세티커스 지안네시스 및이로부터 테이코플라닌을 생산하는 방법 | |
| US4100171A (en) | Antibiotic X-14547 | |
| DK144658B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af antibiotikum c-15003 p-4 | |
| EP0042172B1 (en) | Antibiotic compounds, pharmaceutical compositions containing such compounds, process for production thereof | |
| US4230692A (en) | Ravidomycin and process of preparation | |
| US4181573A (en) | Process for the production of antibiotic X-14547 | |
| US4204039A (en) | Process for producing deoxynarasin antibiotics | |
| KR100515186B1 (ko) | 테이코플라닌 고생산 변이주 에티노플레네스 테이코마이세티쿠스를 이용한 테이코플라닌의 발효 제조방법 | |
| US4427655A (en) | Antibiotics-875A and production thereof | |
| US4600691A (en) | R-(Z)-4-amino-3-chloro-2-pentenedioic acid, novel antibacterial agent | |
| US4262002A (en) | Discovery of A73A, a new efrotomycin-like antibiotic in fermentation broth | |
| US3901880A (en) | (s)-alanyl-3-(+60 -(s)-chloro-3-(s)-hydroxy-2-oxo-azetidinylmethyl)-(s)-alanine | |
| US4317812A (en) | Polynitroxin antibiotics produced by Nocardiopsis mutabilis Shearer sp. nov. ATCC 31520 | |
| US4830967A (en) | Process for producing antibiotic A80438 | |
| JPH0674B2 (ja) | 化合物ｕｋ−６１，６８９の製法及び該化合物産生菌 |