CS267551B1 - Pharmaceutical agents for asthma treatment and method of effective substance production - Google Patents

Description

Vynález se týká derivátů kyselin alkylhydroxamových. Tyto sloučeniny mají, jako látky brzdící účinnost lipoxygenázy, cenné farmakologické vlastnosti, zejména antiastmatické, antianafvlaktické, antithrombotické a protizánětlivé účinky a je možno je užít v lidském i veterinárním lékařství к léčbě astmatu a dalších alergických onemocnění, к léčbě zánětlivých onemocnění různého původu а к léčbě trombózy.

Způsob výroby hydroxamových kyselin z derivátů karboxylových kyselin a z hydroxylaminu je z literatury známý, například z publikace L. Bauer a 0» Exner, Angew. Chem. 86, 419 (1974)· Při tomto způsobu výroby však nejsou dosažené výtěžky a nutné reakční doby uspokojivé.

Farmakologický účinek kyseliny salicylhydroxamové byl poprvé popsán v roce 1976 v publikaci Opperoes a další. Exp. Parasitol 40, 198 (1976). Kyselina ealicylhydroxamcvá má trypanocidní účinky, je účinná například proti africké spavé nemoci, Chagasově nemoci v Jižní Americe a proti onemocnění Nagana u tropických hospodářských zvířat. Kyselina 4-aminosalicylhydroxamová má protiplísnové vlastnosti, jak bylo popsáno v britském patentu č. 744 307. Některé kyseliny OJ(2*-naftoxy) alkylhydroxamové je možno užít jako fungicidní a baktericidní látky, jak bylo popsáno v NBR patentovém spisu č. 141 253 a jako sloučeniny, brzdící účinek ureázy, jak bylo popsáno v NLR patentovém spisu č. 149 505, v zemědělství. Je znáno také použití kyselin hydroxynaftylhydrcxaaových ve fungicidních a baktericidních prostředcích, například z NDR patentového spisu č. 140 836. Až dosud však nebylo popsáno použití těchto sloučenin ve farmaceutických prostředcích v lidském ani veterinárním lékařství.

Nyní bylo zjištěno, že je možno využít svrchu uvedených derivátů hydroxanových kyselin в antiastmatickým účinkem a s dalšími cennými faraakologickými účinky, zejména nové kyseliny OJ (2*-naftoxy) alkylhydroxamové a jejich soli ve farmaceutických prostředcích к léčbě nejrůznšjších onemocnění.

Kyselinu hydroxamovou a její deriváty je možno vyjádřit obecným vzorcem X

R - CO - NH - CH (I) kde

R znamená 2-hydroxyfenyl, 2-hydroxy-l-naftyl, l-hydroxy-2-naftyl, nebo

UJ (2' -maftoxy) - alkyl obecného vzorce II

(II) kde v případě, že n = 1, znamená

R^ vodík alkylový zbytek 8 přímým nebo rozvětveným řetězcem o 1 až 9 atomech uhlíku nebo fenyl a v případě, že n = 2 až 9, znamená R¹ atom vodíku.

Tyto sloučeniny mají cenné farmakologické vlastnosti, zejména antiastmatické, antialergické, protizánětlivé a antithrombotické a je možno je užít jako účinnou složku farmaceutických prostředků se svrchu uvedeným účinkem.

CS 267 551 Bl

Předmětem vynálezu je tedy farmaceutický prostředek к léčbě astmatu a všech oetatních bronchckonstriktorických stavů a alergických a zánětlivých onemocnění různého původu včetně revmatických onemocnění různého původu а к léčbě thrcmbóz, vyznačující se tím, Že jako účinnou látku obsahují sloučeniny obecného vzorce I

R - CO - NH - CH (I) kde

R znamená ?-hydroxyfenyl, 2-hydroxy-l-naftyl, l-hydroxy-2-naftyl, nebo£<l(2^z-naftoxy) alkyl obecného vzorce II

kde v případě, že n = 1, znamená

R^ vodík, alkylový zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem o 1 až 9 atomech uhlíku nebo fenyl a v případě, že n = 2 až 9» znamená

R¹ atom vodíku.

Předmětem vynálezu je rovněž způsob výroby kyselin (2*-naftoxy)-alkylhydroxamových obecného vzorce I tak, že se uvede do reakce ester nebo amid karboxylové kyseliny obecného vzorce III

kde
R1 a n	mají význam, uvedený v	obecné·	vzorci II a
R3	znamená skupinu -CCH^,	-oc2h5.	-OCHpCN, -OC6H5NO? nebo -NH?,

s hydroxylaminem nebo jeho solí v zásaditém prostředí v rozpouštědle při teplotě v rozmezí 20 až 100 °C a popřípadě se takto získaná výsledná sloučenina obecného vzorce I převede na sůl reakcí s anorganickou zásadou. Reakční doba je 20 minut až 15 hodin.

Vhodným rozpouštědlem jsou organická rozpouštědla, inertní za reakčních podmínek, například nižší alkoholy, acetonitril nebo chloroform. Dále je možno užít aceton, diethylether, di-n-butylether, ethyleeter kyseliny octové, 1,?-dichlorethan, dimethylformamid, dimethylsulfoxid, 1,4-dioxan, methylenchlorid, nitromethan, petrolether, tetrachlorethylen, tetrachlormethan nebo trichlorethylen a také benzen, nitrobenzen, pyridin nebo toluen.

CS 267 551 BI

- 3 Volba výhodného rozpouštědla také závisí na povaze použité výchozí látky. Je například ta c žne provádět reakci nižšího alkylesteru nebo amidu kyseliny vzorce III v nižším alkoholu, 8 výhodou methanolu. Při reakci aktivovaného eeteru vzorce III se užije například acetonitril, chloroform, dimethylforaaaid nebo ethylester kyseliny octové® Svrchu uvedené amidy a estery karboxylových kyselin obecného vzorce III se uvádějí v reakci s hydroxylaminem nebo jehc solí ve stechiometrickém množství nebe při použití přebytku hydroxylaminu, в výhodou při použití 2 až 10-náeobného přebytku. Při reakci uvedených derivátů karboxylových kyselin se solemi hydroxylaminu je možno užít v přebytku zásadu, silnější než hydroxylamin®

Z amidů kyselin obecného vzorce III se s výhodou užije sloučenina, která obsahuje nesubstituovaný amidový dusík. Jako ester kyseliny vzorce III se s výhodou užije nižší alkylester. Z aktivovaných esterů je možno užít například p-nitrobenzylester, ethoxykarbonylmethylester, methoxymethylester, p-nitrothiofenylester a s' výhodou kyanomethylester nebo p-nitrofenylester karboxylové kyseliny vzorce III.

Při reakci nižších alkylesterů nebo amidů karboxylových kyselin vzorce III se užije zásada, například alkoholát sodný nebo alkoholový roztok hydroxidu sodného nebo draselného v ekvivalentním množství nebo s výhodou v dvoj až čtyřnásobném přebytku, vztaženo na eůl hydroxylaminu.

V případě reakce aktivovaných esterů, například kyanomethylesteru nebo p-nitrofenylesteru karboxylové kyseliny obecného vzorce III se užije terciární zásada, například triethylamin nebo pyridin v alespoň dvojnásobném množství, vztaženo na hydroxyl aminhydrochlorid .

Nižší alkylestery je možno získat například reakcí naftolátu alkalických kovů s estery halogenkarboxylových kyselin v nižších alkoholech nebo v aromatickém rozpouštědle přímo nebo eeterifikací odpovídající kyseliny vzorce III nebo alkoholýzou odpovídajícího nitrilu. Ze získaných nižších alkylesterů je možno po reakci 8 amoniakem získat známým způsobem odpovídající amidy.

Sloučeniny vzorce I, kde R značí zbytek vzorce II je popřípadě možno převést známým způsobem reakcí s anorganickou zásadou nebo reakcí a’kovovou solí na příslušnou sůl ·

Ke tvorbě solí sloučenin vzorce I je možno užít hydroxidy alkalických kovů, například hydroxid sodný nebo draselný, hydroxidy kovů alkalických zemin, například hydroxid vápenatý nebo odpovídající halogenidy alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin.

Nyní bylo neočekávaně zjištěno, že sloučeniny obecného vzorce I mají příznivé farmakologické vlastnosti. Je možno je užít v lidském i veterinárním lékařství к léčbě astmatu a dalších alergických onemocnění, к léčbě zánětů a thrombos.

Použití se vztahuje také na soli sloučenin vzorce I. S. výhodou se užívá solí, které se dobře snáiejí. Jde zejména o soli se zásadami, jejichž kationty nevyvolávají v použitých dávkách nežádoucí účinky a neruší farmakologický účinek. Dále je výhodné, aby tyto eoli dobře krystalizovaly a nebyly nebo byly jen málo hygroskopické. Ke tvorbě solí se sloučeninami obecného vzorce I je možno užít například anorganickou zásadu jako roztok hydroxidu alkalického kovu nebo kovu alkalických zemin ve vodě nebo ve směsi vody a alkoholu.

Sloučeniny obecného vzorce I mají cenné vlastnosti, jde zejména o antiastmatické, antialergické, antithrombotické a protizánětlivé účinky.

CS 267 551 B1

Při pokusu na izolovaném proužku plic morčete je možno pozorovat vyjádřený antiastmatický účinek. Tento pokus se provádí zásadně způsoby, které jsou známy z literatury, popřípadě v jejich modifikacích, postupy byly popsány zejména v publikacích (J.M. Dražen a další, J. Clin. Invest. 63, 1 /1979/; M.V. Schneider a J.M. Dražen, Amer. Rev. Resp. Dis. 121, 835, /1980/; S.S. Yen a W. Kreutner, Agente Acticns 10, 274 /1980/; S.S. Yen, proetaglandine 22, 183 /1981/).

Sloučeniny obecného vzorce I brání křeči průdušek, která byla vyvolána kyselinou arachidonovou v koncentraci 1,5 x 10 M na preparátu morčecích plic. Tento postup je uveden také v příkladu 6. Po přidání látky, blokující cyklooxygenázu k měřicímu systému zůstává tento účinek nezměněn a je možno jej prokázat. Tento výsledek vede k závěru, Že v případě sloučenin obecného vzorce I běží o látky, které brzdí lipoxygenázovou cestu využití kyseliny arachidonové a svrchu uvedené farmakologické účinky jscu založeny na tomto mechanismu.

Ke stejnému závěru vedlo také přímé sledování vysoce čištěné lipoxygenázy z retikulocytú králíka, jak bude uvedeno v příkladu 7. Lipoxygenáza z retikulocytú králíka byla získána způsobem podle publikace S.M. Rapoport a další, Methods in Enzymology 71, 430 (1961) v elektroforeticky a imunologicky čisté formě. Stanovení aktivity lipoxygenázy bylo prováděno při teplotě 25 °C polarografickým měřením spotřeby kyslíku Clarkovou elektrodou v standartizovaném systému.

Sloučenina obecného vzorce I způsobovala v konečné koncentraci 10”^M 1GC% inhibici. Změnami koncentrace této látky byly získány titrační křivky pro inhibici a tím i potřebné koncentrace sloučeniny I pro dosažení inhibice.

Například pro kyselinu 2-hydroxy-l-naftyl-hydroxamovou byla získána hodnota 1^0 1>6/UM pro kyselinu 2-(2*-naftoxy) acethydroxamovou byla získána hodnota I^_c 2,5/uM a pro kyselinu 2-(2*-naftoxy)-2-n-noaylacethydroxamovou hodnota Ι^θ 1,5/uM.

Sloučeniny, vyrobené způsobem podle vynálezu vysoce převyšují svým účinkem sloučeniny, které až dosud byly známy, například BV 755C, t.j. 3-®mino-N-(3'-trifluormethylfenyl)pyrazolin(2), který je až dosud nejznámějším antiastmatikem, inhibujícím lipoxygenázu, má však za’námi užitých podmínek hodnotu Ι^θ pouze 20/uM.

Protože inhibice lipoxygenázy byla identifikována jako důležitý ukazatel molekulárního působení nových léčiv, byl podrobněji sledován její účinek na shlukování thrombocytú. Základní úlohou lipoxygenázové cesty pro irreversibilitu shlukování thrombocytů je uveden v publikaci C.E. Dutilh a další, Prostaglandins and Medicine 6, 111 (1981). Ireversibilita shlukování thrombocytú hraje při vzniku thrombotických onemocnění klíčovou úlohu. Tento poznatek má výjimečný význam proto, že sloučeniny obecného vzorce I shlukování thrombocytú buň úplně brzdí nebo je po použití této sloučeniny reversibilní. Tento postup bude dále uveden v příkladu 8. Při pokusech byly shluky thrombocytú kyselinou arachidonovou nebo aktivačním faktorem pro destičky (PAE-Acether) vyvolány před použitím účinné látky.

Inhibice shlukování thrombocytú j· nutné hledat v inhibici lipoxygenázy v těchto buňkách. Bylo prokázáno, že aktivita arachidonat-lipoxygenázy v lysátu lidského koncentrátu thrombocytú je brzděna 0,25yuM kyseliny salicylhydroxamové na 100 %. Mimoto je také možno prokázat, že celá řada dalších lipoxygenáz je rovněž inhibována popsanými hydroxamovými kyselinami. Nejméně citlivá je lipoxygenáza ze sojových bobú, kde při použití 1/uM kyseliny ealicylhydroxamové dochází při pH 7,4 k inhibici na 60 % a při použití 0,4 mM kyseliny 2-hydroxy-l-naftyl-hydroxamové k inhibici na 54 %. Při použití lipoxygenázy z hrachu, která je svými vlastnostmi blízká lipoxygenázám ze zvířat, byly získány následující hodnoty Ι^θ: kyselina salicylhydroxamová 5/uM, kyselina

CS 267 551 B1 kyselina 2-hydroxy-l-naftylhydroxaaová 2kyselina 2-(2 *-naftoxy) acethydroxamová 2/uM. Déle je možno prokázat, že tvorba lipoxygenázových produktů kyseliny arachidonové je brzděna 0,1 mM kyseliny 2-hydroxy-l-naftylhydroxnnové in vitro při použití buněk aortálního endothelu telete. Výsledky ukazují, že popsané hydrcxamové kyseliny jsou univerzálním prostředkem pro inhibici lipoxygenázy, čímž je možno vysvětlit jejich farmakologické účinky.

Protizánětlivý účinek sloučenin obecného vzorce I je možno proká3«t například na inhibici karegeninového edému krysí končetiny, jak bude uvedeno v příkladu 9.

Antialergický (antianafylaktický) účinek sloučenin obecného vzorce I je možno prokázat na рокиби s pasivní kožní anafylaxí. Po nitrokožním podání způsobovaly některé sloučeniny inhibici přibližně 40 %, t.j. v míře, která je v literatuře udávána pro selektivní inhibitory lipoxygenázy, jak je uvedeno v publikaci J. Morley a další, Agents Actions 11, 585 (1981).

Svrchu uvedené pokusy je možno považovat za modely biologického typu pro antiastmatický, antialergický, antithrombotický a protizánětlivý účinek.

Svrchu uvedené sloučeniny je tedy možno užít v lidském i veterinárním lékařství v následujících indikacích:

1. Všechny formy bronchiálního astmatu, včetně forem způsobených infekcí (vnitřní astma), astma, vyvolané vnějšími alergickými vlivy typu I, II а IV podle klasifikace Coomba a Gella, která je uvedena v publikaci R.R.A. Coombs a P.G.H. Gell: The classification of allergic reactions responsible for clinical hypersensitivity and disease. V: Clinical aspects of imeunology, vydáno P.G.H. Gell and R.R.A. Coombs, str. 575, Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1966, je možno je ulít také u astmatu, které bylo vyvoláno použitím látek proti bolestem (aspirinové astma), astmatu, které bylo vyvoláno zatížením (cvičením), chladem, podrážděním nebo psychickými vlivy.

2. Astmoidní bronchitis a obstruktivní rozedma plic a všechny stavy, při nichž dochází ke křečím průdušek jako vedlejšímu příznaku u jiných onemocnění nebo jako vedlejšímu příznaku při léčebných zákrocích, například jako komplikace narkózy nebo jako vedlejší účinek při použití -adrenergních blokujících látek.

3. Alergická onemocnění v širším smyslu, zejména

- atopické dermatitis

- alergická rýma (sezónní rýma, každoroční rýma, ale také vasomotorická rýna)

- kopřivka

- edém, způsobený cévní příčinou

- kontaktní dermatitis (kontaktní ekzém)

- alergická onemocnění zažívacího ústrojí.

4. Všechny formy thrombózy, a to jak u již vzniklé thrombózy (thromboflebitidy), tak u

- chronického ischemického srdečního onemocnění

- doléčení infarktu myokardu

- chronické recidivující thrombózy

- chronické thromboflebitidy.

5. Použití proti zánětům jako nestereoidní protizánětlivé látky, přičemž v tomto případě je možno sloučeniny vzorce I užít především u takových zánětlivých pochodů, u nichž známé protizánětlivé látky, například kyselina acetylosalicylová, salicyláty apod., jejichž způsob účinku závisí na lipoxygenáze, nemají dostatečný léčebný účinek, zejména v případě hnisavých zánětů a revmatických onemocnění.

CS 267 551 B1

Sloučeniny obecného vzorce I jsou vhodné jako účinné látky pro perorální, rektální, parenterální nebo kožní podání, ale také jako aerosoly к léčbě různých forem bronchiálního astmatu a také trombózy, revmatického zánětu kloubů a dalších zánětlivých onemocnění.

Vzhledem к jejich zvláště dobrým farmakologickým vlastnostem je nutno uvést zejména následující sloučeniny: kyselina salicylhydroxamová kyselina 2-hydroxy-1-naftylhydroxamová kyselina l-hydroxy-2-naftylhydroxamová kyselina 2-( 2'-naftoxy)-асеthydroxamová kyselina 2-(2'-naftoxy)-2-methy1-acethydroxamová kyselina 2-(2'-naftoxy)-2-ethyl-acethydroxamová kyselina ?-(2'-naftoxy)-?-propyl-acethydroxamová kyselina 2-(2*-naftoxy)-2-i-propylасеthydroxamová kyselina 2-( 2'-naftoxy)-2-n-butylacethydroxamová kyselina 2-(2'-naftoxy)-2-n-pentylacethydroxamová kyselina 2-(?'-naftoxy)-?-n-hexylacethydroxamová kyselina 2-(2 '-naftoxy)-2-n-nonylacethydroxamová kyselina 2-(2*-naftoxy)-2-fenylacethydroxamová kyselina 2-(2*-naftoxy)-2-propylhydroxamová kyselina 4-(2*-naftoxy)-butylhydroxamová kyselina 5-(2'-naftoxy)-valerylhydroxamová kyselina 7-(2 í-naftoxy)-heptylhydroxamová kyselina 8-( 2'-naftoxy)-oktylhydroxamová

Sloučeniny, vyrobené způsobem podle vynálezu, je možno zpracovávat na farmaceutické prostředky, které obsahují kromě účinné látky ještě netoxické, inertní farmaceutické nosiče.

Tyto nosiče mohou být pevné, polotuhé nebo kapalné a může jít o ředidla, plnidla a další pomocné látky.

Výhodqým farmaceutickým prostředkem jsou tablety, dražé, kapsle, pilulky, granuláty, čípky, roztoky, suspenze a emmlze, pasty, masti, gely, krémy, lociony, pudry, spraye a aerosoly.

Tablety, dražé, kapsle, pilulky a granuláty mohou kromě účinné látky a běžných nosičů obsahovat další pomocné látky, jako a) plnidla a zahušlovadla, například mléčný cukr, třtinový cukr, glukózu, mannit a kyselinu křemičitou, b) pojivá, jako karboxymethy1celulózu, algináty, želatinu a polyvinylpyrrolidon, c) zvlhčující látky, například glycerol, d) agar-agar, uhličitan vápenatý nebo hydrogenuhličitan sodný, e) látky, zpomalující rozpouštění, například parafin, f) látky, zvětšující vstřebávání, například kvarterní amoniové sloučeniny, zesilující činidla, jako cetylalkohol, glycerinmonostearát, h) absorpční prostředky, například kaolin nebo bentonit a i) kluzné látky, například mastek, stearan vápenatý a hořečnatý a pevné polyethylenglykoly nebo směsi látek, uvedené v odstavcích a) až i).

Tablety, dražé, kapsle, pilulky a granuláty je možno opatřit povlakem, popřípadě leštěným a mohou být také upraveny tím způsobem, že se účinná látka nebo alespoň její určitá část uvolňuje až ve střevech, popřípadě zpomaleným způsobem, přičemž se jako materice obvykle užívají polymerní látky a vosky.

Účinné látky se mohou zpracovávat při použití jednoho nebo většího počtu nosičů také na mikrokapele.

CS 267 551 B1

- 7 čípky mohou obsahovat krom? účinné látky běžné ve vodě rozpustné nebo nerozpustné nosiče, například polyethylenglykoly, tuky, například kakaové máslo a vyšší estery (například estery alkoholu o 14 atomech uhlíku s karboxylovou kyselinou o 16 atomech uhlíku) nebo směsi svrchu uvedených sloučenin.

Masti, pasty, krémy a gely mohou obsahovat kromě účinné látky také běžné nosiče, například živočišné a rostlinné tuky, vosky, parafiny, škroby, tragant, deriváty celulózy, polyethylenglykoly, silikon, bentonit, mastek, kyselinu křemičitou a kysličník zinečnatý nebo směsi těchto látek.

Spraye a pudry mohou rovněž obsahovat kromě účinné látky běžné nosiče, například mléčný cukr, mastek, kyselinu křemičitou, hydroxid hlinitý, křemičitan vápenatý a práškovaný polyamid nebo směsi těchto látek. Spraye kromě toho obsahují běžné nosné plyny, například chlorované a fluorované uhlovodíky.

Roztoky a emulze obsahují kromě účinné látky běžné nosiče, například rozpouštědla, pomocná rozpouštědla a emulgátory, například vodu, ethylalkohol, isopropylalkohol» ethylkarbonát, ethylacetát, benzylalkohol, benzylbenzoát, prcpylenglykol, 1,3-butylenglykol, dimethylformamid, oleje, zejména olej z bavlníkových semen, arašídový clej, olej kešú, olej z kukuřičných klíčků, olivový olej, ricinový olej a sezamový clej, glycerol, glycerinformal, tetrahydrofurfurylalkohol, polyethylenglykoly a estery alifatických kyselin se sorbitanem nebo směsi těchto látek.

Pro parenterální podání je možno užít sterilní roztoky a emulze, které jsou popřípadě isotonické s krví.

Suspenze mohou obsahovat kromě účinné látky běžné nosiče, například obvyklá ředidla, jako jsou voda, ethylalkohol, propylenglykol, činidla, napomáhající vzniku suspenze, například ethoxylovaný isostearylalkohol, estery polyoxyethylensorbitanu a sorbitanu, mikrokrystalickou celulózu, metahydroxid hlinitý, bentonit, agar-agar nebo tragant nebo směsi těchto látek.

Svrchu uvedené lékové formy mohou obsahovat také barviva, konzervační látky, chulové látky a silice, například peprmintový olej nebo eukaliptový olej a sladidla, například sacharin.

Léčebně účinné sloučeniny mají být obsaženy ve svrchu uvedených farmaceutických prostředcích v koncentracích obvykle 0,1 až 99»5 a výhodou 0,5 až 95 hmotnostních %, vztaženo na celkovou hmotnost směsi.

Svrchu uvedené farmaceutické prostředky mohou obsahovat kromě účinných látek, vyrobených způsobem podle vynálezu, ještě další farmaceuticky účinné látky.

Svrchu uvedené farmaceutické prostředky se vyrábějí známým způsobem, například tak, že se účinná látka smísí s příslušným nosičem.

Farmaceutické prostředky в obsahem účinných látek, vyrobených způsobem podle vynálezu, a popřípadě dalších účinných látek, je možno užít v lidském i veterinárním lékařství к léčbě, zlepšení a nebo zhojení svrchu uvedených onemocnění.

Účinné látky nebo farmaceutické prostředky, které tyto látky obsahují, je možno podávat místně, perorálně, parenterálně, intraperitoneálně a nebo rektálně, s výhodou perorálně, zejména ve formě aerosolu.

Obecně je možno uvést, že se sloučeniny, vyrobené způsobem podle vynálezu podávají v celkovém množství 10 až 300, s výhodou 50 až 200 mg/kg za ?4 hodin, popřípadě ve formě několika jednotlivých dávek.

V některých případech může být zapotřebí se odchýlit od svrchu uvedených dávek. Obecně je možno uvést, že se dávky určují podle hmotnosti léčeného objektu, podle

CS 267 551 BI povahy a závažnosti onemocnění, podle typu farmaceutického přípravku a podle způsobu jeho podání i podle Časových období, v němž se přípravek podává. V některých příkladech může být doetatečné podat nižší než svrchu uvedené množství účinné látky, v jiných případech věak může být zapotřebí svrchu uvedené množství překročit.

Vynález bude osvětlen následujícími příklady.

Základní údaje o nových kyselinách (2*-naftoxy)alkylhydroxamcvých jsou uvedeny v následující tabulce 1:

Tabulka 1

Kyselina (2*-naftoxy)alkylhydroxamová

R1	n	teplota tání	výroba podle	analysa
		(°C)	příkladu	vypoč. С H 5 nalez. C Η íí

- Cýl7(n)	1	olej (nedeetiluje)	4	69,54 6,58 69,63 6,53	5,38 5,26
- C4H9(n)	1	141 (Z)	2	70,3? 6,98	5,08
				70,19 6,91	5,17
- C4H9(i)	1	olej	2	70,32 6,98	5,08
		(nedestiluje)		70,42 7,05	4,92
- C5Hll(n)	1	144 (Z)	2	71,14 7,38	4,88
				71,2? 7,34	4,82
- C?H15(n)	1	152 (Z)	2	72,43 8,02	4,36
				72,2? 7,96	4,48
“ C8H17^n^	1	158 (Z)	?	72,87 8,31	4,32
				72,71 8,34	4,46
- H	4	130-1 (Z)	1	69,54 6,58	5,38
				69,58 6,63	5,3?
- H	5	127 (Z)	p	70,3’ 6,98	5,08
				70,18 7,05	5,14
- П	7	125-6 (Z)	2	71,76 7,67	4,58
				71,84 7,59	4,67
- H -	9	122-3 (Z)	3	72,87 8,31	4,3?
				72,65 8,37	4,46

Z = za rozkladu

CS 267 551 B1

- 9 Tabulka ?

u krys kmane Wistar při intraperitonaálnía podání

sloučenina	LD^q(mg/kg) samice	samci
kyselina salicilhydroxamová	713 (604-841)	749 (653-858)
kyselina 2-(? -naftoxy)acethydroxamová	932 (Θ3Ο-1Ο46)	1421 (1371-1473)
kyselina l-hydrcxy-2-naftylhydroxamová	) 500.	) 500
kyselina 2-hydroxy-l-naftylhydroxamová	>500	>500
kyselina 2-(2'-naftoxy)-methylасеthydroxamová	>500	) 5CC
kyselina 2-(2'-naftoxv)- -2-ethvlасеthydroxamová	) 500	}500
kyselina 2-(2'-naftoxy)- -1-propylacethydroxamová	)500	) 500
kyselina 2-(2'-naftoxy)-2-n-propy1ac e thydroxamová	>500	} 500
kyselina 2-(2'-naftoxy)-2-n-hexylacethydroxamová	)500	) 500
kyselina 2-(2'-naftoxy)-2-n-oktylacethydroxamová	)500	)50C
kyselina 2-(2'-naftoxy)-2-n-nonylacethydroxamová	) 500	) 500

Příklad 1

Způsob výroby kyseliny 5-(2'-naftoxy)valerylhydroxamcvé

К absolutnímu methanolovému roztoku 4,6 g sodíku a 6,9 g hydroxylaminhydrochloridu se po kapkách přidá za stálého míchání ?5>9 g methylesteru kyseliny 5-(2'-naftoxy) valerové, získaný z kyseliny 5-(2'-naftoxy)valerové a methanolu, teplota varu při 200 Га je 171 - 2 °C, v roztoku v 30 ml absolutního methanolu, a výsledná směs ее zahřívá na teplotu varu pod zpětným chladičem 60 minut. Pak se směs zchladí a rozpouštědle se odpaří ve vakuu při teplotě místnosti· К odparku se přidá 5C0 ml vody а 1CC ml etheru, směs se míchá ještě 20 minut, pak se vhodný roztok oddělí a pH se upraví kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu v kyselé oblasti, užije se kyseliny o koncentraci 6 M. Suspenze se extrahuje třikrát vždy 100 ml etheru, etherový roztok se promyje 50 ml vody а 5C ml nasyceného roztoku chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Po překrystalování ze směsi vody a methanolu se tímto způsobem získá 15>8 g kyseliny 5-( 2'~naf“toxy)valerylhydroxamové o teplotě tání 130 až 131 °C za rozkladu.

1С

CS 267 551 BI

Příklad ?

Způsob výroby kyseliny 2-(2^z-naftoxy)-2-n-oktylacethydroxamové

a) Ethylester kyseliny ?-(2'-naftoxy)-2-n-oktyloctové

2,3 g sodíku se rozpustí ve 100 ml absolutního alkoholu, přidá se 14,4 g 2-naftolu a směs se zahřívá ve vakuu až do konstantní hmotnosti. Pak se přidá 150 ml absclutního toluenu, a nakonec 37 g ethylesteru kyseliny 2-bromdekanové.

Reakční směs se pak zahřívá na teplotu 150 až 160 °C pod zpětným chladičem až do neutrální reakce, smísí se s vodou a organická fáze se extrahuje etherem. Etherový roztok se promyje hydrogenuhličitanem sodným, vysuší se síranem hořečnatým a rozpouštědle se odpaří. Po frakcionaci odparu se získá 26,8 g ethylesteru kyseliny 2-(2'-naftcxy)-°-n-oktyloctové jako světležlutý olej o teplotě varu 186 - 187 °C při tlaku 66 Pa.

b) Způsob výroby kyseliny ?-(?^z-naftoxy)-2-n-oktylacetylhydroxamové

К absolutnímu alkoholovému roztoku 2,3 g sodíku a 6,9 g hydroxy1aminhydrochloridu se přidá 3,7 g ethylesteru kyseliny 2-(?^z-naftoxy)-?-n-oktyloctové a směs se míchá 8 hodin při teplotě 40 °C. Pak se směs míchá ještě hodinu na vroucí vodní lázni a alkohol se odstraní ve vakuu při teplot? místnosti. Odparek se nechá týden stát a pak se oddělí filtrací za odsávání. Odparek se pak promyje vodou a získaná hydroxamová kyselina se usuší. Tímto způsobem se po překrystalování ze směsi vody a ethanolu získá 2,9 g kyseliny 2-(2^z-naftoxy)-2-m-oktylacethydroxamové o teplotě tání 158 °C za rozkladu .

Příklad 3

Způsob výroby kyseliny 10—(2*-naftoxy)dekanhydroxamové

a) Kyanmethylaster kyseliny 10-(2*-naftoxy)-děkanové

Směs 8,5 g kyseliny 10-(2'-naftoxy)-děkanové o teplotě tání 144 °C po překrystaIcvání ze směsi etheru a petroletheru, 2,3 g chloracetonitrilu a 3 g triethylaminu v 50 ml ethylesteru kyseliny octové se míchá 10 hodin při teplotě 60 °C, pak se směs zchladí a oddělí od vyloučeného triethylaainhydrochloridu. Filtrát se promyje 10 ml IN kyseliny chlorovodíkové, dvakrát vždy 15 ml roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 15 ml vody. Pak se roztok vysuší síranem sodným a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu při teplotě 30 °C. Tímto způsoben se získá 3,8 g kýanmethy1esteru kyseliny 10—(2^z-naftexv) děkanové o teplotě tání 121 a 12? °C po překrystalování z methanolu.

b) Kyselina 10-(2^z-naftoxy)dekanhydroxamová

Směs 3,5 g kyanmethyleeteru kyseliny 10-(2'-naftoxy)děkanové a 0,7 g hydroxylaminhydrochloridu ve 30 ml acetonitrilu se smísí s 2 kapkami ledové kyseliny octové a 1,05 g triethylaminu. Směs se míchá 30 minut při teplotě místnosti, pak ее znovu smísí s 0,35 g hydroxylaminhydr o chloridu a 0,5 g triethylaminu a míchá se dalších 12 hodin při teplotě místnosti. Pak se směs odpaří při teplotě 40 °C při použití vodního vakua, odparek se mísí s 30 ml vody a promyje se dvakrát 50 ml ethylesteru kyseliny octové, organická vrstva se oddělí a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Odparek se rozpustí ve 100 ml etheru a etherový roztok se extrahuje 10 ml IN hydroxidu sodného, čímž se vyloučí krystalická sodná sůl kyseliny 10-(2^z-naftoxy)dekanhydroxamové. Krystaly se oddělí filtrací, uvedou se do suspenze ve 30 ml absolutního etheru a suspenze se za chlazení smísí s bezvodým chlorovodíkem. Po několikanásobném protřepání se etherový rozrok zfiltruje a ether se odpaří ve vakuu. Tímto způsobem se získá 2,8 g kyseliny lC-(2*-naftexy)dekanhydroxamové o teplotě tání 122 - 123 °C za rozkladu.

CS 267 551 В]

Příklad 4

Způscb výroby kyseliny ?-(2 *-naftoxy)-2-n-propylасеthydroxamcvé

a) ?-(?* -naftoxy)-2-n-propylacetaiiid

Směs 7,5 g ethylesteru kyseliny 2-(2'-naftoxy)-2-n-propyloctové c teplot? varu

111 až 112 °C při tlaku 26 Pa а 1CC ni kapalného amoniaku se míchá 4 dny v autcklávu při teplot? místnosti. Pak amoniak odstraní a odparek se vysuší v sušicí peci. Po překrystalování ze směsi ethanolu a vody se tímto způsobem získá 5,1 g 2-(2'-naftoxy)-2-n-propylacetamidu o teplotě tání 126 až 127 °C.

b) Kyselina 2-(2'-naftoxy)-2-n-propylacethydroxanová

К roztoku 1,84 g sodíku v 50 ml absolutního methanolu se přidá při teplot?

°C rcztok 1,82 g hydroxylaminhydrochloridu ve 30 ml absolutního methanolu. Směs se nechá zchladnout a vyloučený chlorid sodný se oddálí. Pak se roztok smísí s roztokem 5»1 g 2-(2'-nafloxy)-2-n-propylacetamidu v 50 ml methanolu a směs se 16 hodin vaří pod zpětným chladičem. Pak se roztok zchladí a odpaří při teplot? místnosti ve vakuu dc sucha. Odparek se protřepe s 50C ml vody a 100 ml etheru. Vodná fáze se odd?lí a okyselí 2N kyselinou chlorovodíkovou. Pak se vodná fáze třikrát extrahuje vždy 50 ml etheru, etherové roztoky se vysuší síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu.

Tímto způsobem se získá 4,2 g krystalické amorfní kyseliny 2-(?'-naftoxy)-2-n-propylacethydroxamové.

Analýza:

vypočteno 69,54 % C, 6,58 % H, 5,38 % N; nalezeno 69,63 % C, 6,53 % H, 5,26 % N.

’ Příklad 5

Stanovení akutní toxicity

Akutní toxicita sloučenin podle vynálezu byla sledována po jednorázovém intraperitoneálním podání u krys kmene Wistar, a to u samců i samic o hmotnosti 20C g. Krysy byly chovány za běžných podmínek při umělém světle (12 hodin : 12 hodin) při teplot? místnosti přibližně 2? °C ve skupinách nejvýše IC zvířat v klecích z plastické hmoty o rozměrech 56,5 x 37,5 cm^f в mřížkou na dřevěných hoblinách. Krmivém pro zvířata byly běžné pelety a voda z vodovodu podle libosti. Pokusné sloučeniny byly podány ve formě 10% suspenze v 5% vodném roztoku tylózy 4 000 P pomocí injekční stříkačky a kanyly č. 1 jednorázově intrapeřitoneálně. Před výrobou suspenze byly zkoumané látky mlety 65 hodin v kuličkovém mlýnu a pak byly ještě rozmělněny na prášek v porcelánovém htnoždýři 10 minut. Průměrná velikost částic těchto látek byla 3/uM. Bezprostředně po podání zkoumané látky, pak po 0,5 hodinách, 2 hodinách, 4 hodinách, 24 hodinách a pak denně byl po dva týdny sledován stav zvířat, byly zaznamenávány příznaky a vyhodnocován počet uhynulých zvířat. Hodnota a meze spolehlivosti při pravděpodobnosti 5 % byly stanoveny pomocí počítače, který prováděl regresní analýzu po empirické transformaci.

Hodnoty jsou uvedeny v tabulce 2 (str. 26 až ?6b). Z hodnot je zřejmé, 'že sloučeniny podle vynálezu jsou snášeny v poměrně vysokých dávkách a mají tedy nízkou akutní toxicitu ve srovnání s léČobnými dávkami.

CS 267 551 B1

Příklad 6

Inhibice kontrakcí, vyvolaných kyselinou arachidonovou na proužcích norčecí plicní tkání a na prstencích morčecí průdušnice

Zkoušky sloučenin, vyrobených způsobem podle vynálezu na antiastmatickou účinnost byly prováděny na izolovaných proužcích plic a izolovaných prstencích průdušníce morčete způsobem, známým z literatury v modifikované formě. Měření bylo prováděno v termostatické isotonické orgánové lázni při měření kontrakcí pomocí pisátka se zesilovačem (induktivní měření pomocí vysokofrekvenčního obvodu).

Láznička byla provzdušňována vzduchem. Roztok měl následující složení: 39,46 g NaCl, 2,2 g KC1, 6,07 g tris-pufru, 1,0 g CaCl_2> 9,9 g glukózy, 1,0 ml nasyceného roztoku MgCl_?, 43 ml IN HC1; pH 7,4.

a) Účinek na exogenně vyvolaný spasmus působením kyseliny arachidcvé na proužcích plicní tkáně morčete

Spasmus se vyvolá stoupající koncentrací kyseliny arachidové (koncentrovaný roztok v ethanolu, skladovaný v dusíkové atmosféře) a kumulativně se měří. Pro koncentraci kyseliny arachidonové, vyvolávající křeč, byla získána hodnota ΕΏ^θ v rozmezí 10/uM a EDq^ v oblasti 25/uM, také v závislosti na použitém proužku plicní tkáně. Účinné látky vyvolávají statisticky vysoce významné posuny křivky závislosti pro arachidonovou kyselinu do prava, což znamená vysoké zvýšení hodnot Εϋ^θ a ^84* ^Tento účinek je možno vyjádřit následujícím indexem účinnosti:

ED^ (účinná látka) - ED^q (^^оп^го1а) l₅₀ =

ED^o (kontrola)

Analogickým způsobem se z příslušně naměřených hodnot získá také index Í34·

účinná látka	Чо	*84
3-terc.butyl-4-hydroxyanisol (známá), lOO^uM	4,6	3,6
kyselina nordihydrogujaretová (známá), 50/uM	6,3	6,5
kyselina salicylhydroxamová 100/uM ·	1,9	8,5
kyselina ?-(2*-naftoxy)acethydroxamová, lOO^uM	5,8	7,1

Mimo to účinné látky způsobují vyjádřenou inhibici maximální amplitudy kontrakce, jak je zřejmé z následující tabulky 3b.

Tabulka 3b

Inhibice kontrakcí proužku plicní tkáně, vyvolané působením kyseliny arachidonové účinná látka inhibice v % maximální isotonické kontrolní kontrakce koncentrace účinné látky v lázničce

3-terc,butyl-4-hydroxyanisol
(známá kontrolní sloučenina)	45	100/uM
kyselina nordihydroguajařetová (známá kontrolní látka)	70	50/UM
BW 755 C	45	50/uM
kyselina ?-(?'-naftoxy)-acethydroxamová	66	1/uM

CS ?67 551 B1

o) Účinek na křeč morčecí průduŠnice vyvolanou carbacholem

Křeč byla vyvolána 3,9/Ulí carbacholu. Po následné aplikaci zkoumaných látek dožin к silnému až velni silnému rozšíření průdušky, které bylo možno pozorovat při nás-

kyselinv nordihydroguajaretové, 50/uM kyseliny 2-(?'-naftoxy)acethydroxamové.

c) Účinek na základní napětí proužku plicní tkán? morčete

К prostředí byly přidány stoupající koncentrace účinných látek. Došlo к rozšíření průdušky, které bylo měřeno kumulativně. Z křivek závislosti dávky na účinku byly získány následující údaje:

účinná látka ED^ ^50

3-terc.butyl-4-hydroxyanisol 130/uM 61yuM ?-(2^#-naftoxy)acethydroxamová kyselina

Příklad 7

Inhibice účinnosti u lypoxigenázy z retikulocytů králíků.

Zkoušky sloučenin, vyrobených způsobem podle vynálezu na antiastmatickou, antialergickou, antithrombotickou a protizánětlivou účinnost na základě inhibice lipoxygenázové reakce v metabolismu kyseliny arachidonové byly prováděny na molekulárním farmakologickém pokusném systému. Vhodnost tohoto objektu к uvedenému účelu byla prokázána tím, že celá řada účinných látek, známých z literatury jako účinné látky téhož principu, například kyseliny polyacetylenkarboxylové a pyrazolinové deriváty poskytují tytéž výsledky při použití v uvedeném systému. Oproti komplexním systémům má molekulární pokusný systém tu výhodu, že umožňuje sledovat účinek na receptorů nezávisle na různých bariérách permeatibility a na metabolismu účinné látky, takže tímto způsobem je možno doplnit a zpřesnit výsledky, získané podle příkladu 6. Lipoxygenáza z retikulocytů králíka byla získána způsobem, známým z literatury v elektroforeticky a imunologicky čisté formy. Stanovení aktivity lipoxygenázy se provádí při teplotě 25 °C polarografickým měřením spotřeby kyslíku při použití Clarkovy elektrody v následujícím systému: O,1M fosforečnanu draselného a pH 7,4 s 0,2 % cholátu sodného a 0,53 mbí kyseliny linolové.

Koncentrace enzymů ve vzorku byla 25 nM. Zkoumaná látka byla rozpuštěna v methylglykolu (čerstvě destilovaném ve vakuu), byla předem inkubována 15 minut při měřicí teplotě v nepřítomnosti cholátu sodíku a kyseliny linolové. Ředění bylo prováděno tak, aby konečná koncentrace methylglykolu před inkubací nepřekročila 2 %. Za těchto podmínek nedojde к žádné inhibici v kontrolních vzorcích. Enzymatická reakce byla zahájena přidáním cholátu sodíku a kyseliny linolové. Změnami koncentrace účinné látky byly získány titrační křivky pro inhibici a tím i koncentrace pro 5θ % a 34 % inhiUci (£₅₀ a Χθ₄).

CS 267 551 B1

Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce:

Tabulka 4

Inhibice lipoxygenázv z retikulocytů králíka

sloučenina ·	I5O(/UM)	I84(/uM)
kyselina nordihydroguajaretová (známá)	C,5	1,6
3-terc.butyl-4-hydroxyanisol (známá)	160	600
4-nitrocatechol (známá)	4,6	16
kyselina 5»8,11-eicosatrinovd (známá)	1.3
kyselina sálicylhydroxamová	20	60
kyselina l-hydroxy-2-naftylhydroxamová	47 ’	500
kyselina ?-hydroxy-l-naftylhydroxamová	1,6	5.2
^kyselina 2-(1*-naftoxy)acethydroxamová	25	6C
kyselina 2-(1 *-naftoxy)-2-ethylacethydroxamovd	42	130
kyselina 2-(2'-naftoxy)acethydroxamová	?,5	9
kyselina ?-(2'-naftoxy)-2-methylacethydroxamová	40	120
kyselina 2-(2'-naftoxy)-2-ethylácethydroxamovd	3?
kyselina 2-(2'-naftoxy)-i-propylacethydroxamová	27
kyselina 2-(2'-naftoxy) -2-n-prop.ylacethydrcxamová	24
kyselina 2-(2 *-naftoxy)-2-n-butylacethydroxamovd	19
kyselina 2-(2'-naftoxy)-2-n-hexylacethydroxamcvá	11
kyselina 2-(2'-naftoxy)-2-fenylacethydroxamová	40
kyselina 2-(2'-naftoxy)-2-n-oktylacethydroxamová	2,3	7
kyselina 2-(2'-naftoxy)-2-n-nonylacethydroxamová	1.5	4,8
kyselina 3-(2'-naftoxy)-n-propylhydroxamová	7	15
kyselina 4-(2*-naftoxy)-n-butylhydroxamová	4	7,5
kyselina 5-(2'-naftoxy)valerylhydroxamová	3.5	6,5
kyselina 8-( 2 '-naftoxy)oktylh.vdroxamová	%1	4,6

Příklad 8

Inhibice shlukování thrombocytů, které bylo vyvoláno kyselinou arachidoncvcu nebe PAF.

Zkoušky sloučenin na antithrombotickou a thrcmbolytickcu účinnost byly prováděny na autentickém systému lidských buněk in vitro. Plasma, bohaté na thrombocyty, odebraná zdravým dárcům, byla získána odstředěním. Měření shluků thrombocytů bylo převáděno příslušným přístrojem na základě průchodu světla nebo jeho absorbce vznikajícími shluky

CS 261 551 B1 buněk. Plasma, bohatá na thrombocyty, byla předem inkubována 3 minuty při teplotě 37 ^cC s účinnými látkami. Pak bylo vyvoláno shlukování thrombccitů přidáním 0,8 mU kyseliny arachidonové nebo 1/^UM aktivačního faktoru krevních destiček (PAF-acether). Pak byly vzorky míchány rychlostí 800 otáček za minutu. Podle užité koncentrace účinné látky došlo buď к silnému zpomalení nebo к úplné zábraně shlukování thrombocytů.

Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce:

Tabulka 5

Inhibice shlukování thrombocytů, vyvolaného kyselinou arachidonovou

sloučenina	zpomalení У 2 min ( yUM)	úplná inhibice (/UM)
4-nitrocatechol (známá)	40	60
3-terc.butyl-4-hydroxyanisol (známá)	16	40
kyselina salicylhydroxamová	0,8	2
kyselina 2-hydroxy-l-naftylhydroxamová	6.5	7
kyselina 2-(2*-naftoxy)асеthydroxamová	30	60

Při shlukování, které bylo vyvoláno РЛЕ-асetherem byly účinné všechny sloučeniny, uvedené v tabulce 5 v koncentraci 40 při této koncentraci rozrušovaly již vytvořené shluky buněk. Stejný účinek bylo možno pozorovat v případě, že v promyté suspenzi thrombocytů bylo shlukování vyvoláno přidáním 16 mM kyseliny arachidonové.

Z výsledků je zřejmé, že sloučeniny, vyrobené způsobem podle vynálezu, působí inbibicí lipoxygenázy i inhibicí shlukování thrombocytů v reversibilní fázi a jsou tedy i thrombolvticky aktivní.

Příklad 9

Inhibice otoku krysí končetiny, vyvolaného karageninem

Karageninový edém je v mezinárodní literatuře modelovým systémem pro zánítlivé pochody a umožňuje zkoumat in vivo sloučeniny в protizánětlivým účinkem.

Kyselina ?-( 2 *-naftoxy)acethydroxamová byla podána perorálně 10 krysám v dávce ?0G mg/kg a současně bylo aplikováno 0,1 ml 1% roztoku karageninu každému zvířeti. Rozměr otoku byl měřen každou hodinu a srovnáván s kontrolní skupinou. Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce:

Tabulka 6

Inhibice karageninového edému působením kyseliny 2-(?*-naftoxy)acethydroxamové dcba v hodinách inhibice v %

CS ?67 551 BI

27,3

27.3

20,2⁺

35,3⁺⁺

21.4 ⁺⁺ význanné při P </ 0,01 významné při P < 0,05

Příklad 10

Působení kyseliny u mcrčat.

-naftoxyacethydroxamové na modelu brcnchokonstrikce in vivo

Uvedené účinky byly sledovány po perorálním podání na morčatech v šesti na sobě nezávislých serie serie sériích pokusů in vivo na morčatech podle následujícího schématu: bronchokonstrikce byla vyvólána působením histaminu vyvoláno zúžení bronchú ných morčatech bylo vaječným albuminem na eensibilizovaserie zúžení bronchú ných morčatech bylo vyvoláno vaječným albuminem na sensibilizovaserie zúžení bronchú ných morčatech bylo vyvoláno vaječným albuminem na sensibilizovaserie zúžení bronchú ných morčatech bylo vyvoláno vaječným albuminem na senBibilizovaprováděna kontrolní sledování na kontrolní skupiny. V sérii 3 bylo provedeno srovnání účinnosti se známou sloučeninou aminofyllinem.

Pokusy byly prováděny na sensibilizovaných morčecích samcích o hmotnosti 350 až 600 g. Zvířata byla narkotizována intraperitoneální injekcí 20 % urethana, celková dávka narkotika byla 1,3 g/kg

V každé sérii byla současně hmotnosti zvířete.

ohebný katetr do Véna jugularis dextra a tracheální kapřipravená zvířata byla uložena na hřbet do respirační

Pak byl zvířatům zaveden nila s průměrem 2,8 mm. Takto

Po relaxaci svalů Pavulenem v dávce 2 mg/kg nitrožilně bylo zavedeno umělé rytmickým podtlakem v komoře s frekvencí 16 dechů za minutu při tlaku 2 kPa, : 1.

komory, dýchání I:E = 1 tracheální kanilu byla připevněna fleischova tryska o průměru 2,8 mm, 1 = která byla spojena s pneumotachografem (Hertl, Lengenfeld). Tímto přístrojem

Na = 40 mm, je možno měřit rychlost proudění V a dechový objem. Primární údaje byly zaznamenány 12ti kanálovým zaznamenávacím zařízením (Messgeratewerk Zwonitz), podrobné vysvětlení funkce tohoto zařízení bylo uvedeno v publikacích G. Merker a další, Annestesiol. Reanimat. 6, 157 (1981) a A. Oddoy a další, Z. Erkr. Atm. Org. 159. 183 (1982).

CS 267 551 B1

Vyhodnocení bylo možno omezit na signál pro objem, protože dechový objem bvl při standardním dýchání representativní hcdnctou pro charakteristiku změn mechaniky dýchání. Střední dechový objem po 3 minutách dýchání byl považován za výchozí hodnotu V^A* Dále byla odečtena minimální hodnota dechového objemu V?, Pro kontrolu životnosti zvířat bylo užito nestandardizovaného svodu EKG, který byl veden na monitor a registrován společně s dýcháním. Zúžení průdušek bylo vyvolání nitrcžilní injekcí histaninu nebe vaječného albuminu. ·

Před vyvoláním první křeče průdušek byla zvířata ošetřena jednotlivými účinnými látkami. Pro statistické vyhodnocení byl užit U-test podle Manna a Whitneye s mezemi spolehlivosti 5 %.

Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce:

Tabulka 7

Parametry dýchání při křeči průdušek, vyvolané histaminem (H) nebo vaječným albuminem (0) u sensibilizovaných morčat, jimž byla předem podána kyselina ?'-naftoxyacethvdrcxamové.

serte	vyvolání	skupina	n	dávka	forma	doba	Vtí S.3.M.
	křeče			mg/kg	podání	(min)	(v %

1	Η	kontrolní léčená	5 5	200	p.o.	120 -	73,8 71,2	+ 26 t 19
?	Η	kontrolní	5				81,8	+ 15
		léčená	4	20	i.p.	60-120	87,5	i 8
	Η (ΙΟχ)	kontrolní	5					i 2,7
		léčená	4			60-120	5,2	í 7
3	0	kontrolní	3				C
		léčená	3	200	p.o.	70- 90	64,5	t 41
4	0	kontrolní	4				13	t 21
		léčebná	δ			120-180	36,8	í 35
			z	toho
			5	100	p.o.		45,5	í 47
			3	З00	p.o.		59	t 52
5	0	kontrolní	5				44,9	t 15
		léčebná	5	2x?0	i.p.	7°C; 60 ‘	65,8	+ 44
6	0	kontrolní	13				C,8	t 2
		léčebná	3	50	i .v.	5	64	t ?4
		léčebná	3	20	i .v.	10	69,6	t 35

Pokusy byly vyhodnoceny, z vyhodnocení vyplývaly následující závěry pokusů:

1. Podání kyseliny 2*-naftoxyacethydroxamové nevedlo ve dvou nezávislých pokusných sériích v dávkách 200 mg/kg perorálně a 20 mg/kg intraperitoealnř к žádné nebo malé inhibici zúžení bronchů, které bylo vyvoláno histaminem na morčatech s umělým dýcháním. '

CS 267 551 B1

2. V případě, že u čtyř nezávislých pokusných sérií morčat s umělým dýcháním po sensíbilisaci byla podána před podáním alergenu uvedená kyselina, bylo možno pozorovat vyjádřený ochranný účinek proti zúžení bronchů, které bylo vyvolání alergickou reakcí u sensibilisovaných morčat in vivo.

Tento účinek bylo možno doložit přesným záznamem důležitých dýchacích vunkcí na plethysmografu. Při perorální aplikaci byl ochranný účinek sloučeniny, vyrobené způsobem podle vynálezu lepší než účinek aainofyllinu, který je v současné době široce užívaným lékem proti astmatu. Dobrý ochranný účinek bylo možno pozorovat při percrálním podání v dávce 100 mg/kg, při intraperitoneálním podání v dávce 2 x 20 mg/kg a při nitrožilním podání v dávce 20 mg/kg.

Claims (2)

1. Předmět vynálezu

   1. Farmaceutické prostředky к léčbě astmatu a všech ostatních bronchokcnstriktorických stavů a alergických a zánětlivých onemocnění různého původu včetně revmatických onemocnění různého původu а к léčbě thrombóz, vyznačující se tím, že jako účinnou látku obsahují sloučeniny obecného vzorce I

   R - CO - NH - ОН (I) kde

   R znamená 2-hydroxyfenyl, 2-hydroxy-l-naftyl, 1-hydroxy-2-naftyl nebo (?'-naftoxy)alkyl obecného vzorce II kde v případě, že n = 1, znamená

   R^ alkylový zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem o 1 až 9 atomech uhlíku, fenyl nebo atom vodíku a v případě, že n - 2 až 9, znamená

   R¹ atom vodíku.
2. 2. Způsob výroby kyselin 2*-naftoxy)-alkylhydroxamových obecného vzorce kde R znamená zbytek vzorce II podle bodu 1, v němž na R^ mají výše uvedený význam,účinných vyznačující se tím, že se uvede do reakce ester nebo amid karboxylové kyseliny obecného vzorce III (III)

   CS 267 551 Bl

   - 19 kde

   R* a n mají význam, uvedený v bodu 1 a

   R^ znamená skupinu -OCHp -OC^H^, -OCH?CN, -OC^H^NO? nebo -NH^i s hysroxylaminem nebo jeho solí v zásaditém prostředí v rozpouštědle při teplotě v rozmezí °0 až 100 °C a popřípadě se takto získaná výsledné sloučenina obecného vzorce I převede na svou sůl s anorganickou zásadou.