CS265772B1 - Spdsob odstraňovania heparínu z krvi in vitro - Google Patents

Description

265772 2

Vynález sa týká spósobu odstraňovania heparínu z krvi, najma krvnej plazmy, in vitro.

Pri liečbe tromboembolických onemocnění heparínom je nutné robit u pacienta komplexněhemokoagulačné testy, ktoré charakterizujú zdravotný stav pacienta a ukazujú úspěšnost,resp, neúspěšnost liečebného procesu. Heparín přítomný v odobratých vzrokách krvi všaktieto testy značné skresluje. Preto je potřebná rýchla a spolahlivá metoda na jeho odstrá-nenie bez akýchkolvek vedíajších efektov na krvnú plazmu. Heparín sa bežne v klinickejpraxi neutralizuje s protamínom [ J. G. Allen a kol.: J. Lab. Clin. Med. 34, 473 (1949); H. A. Perkins a kol.: J. Lab. Clin. Med. 48, 223 (1956)J, avšak titráciu sťažuje skutočnost,že v odobratej krvnej plazme pacientov sa nevie dostatočne presne hladina heparínu. Vyplývá z toho, že prebytok protaminu v plazme zostáva nedetegovaný resp. v krvnej plazme zostanenezneutralizovaný heparín, čo negativné ovplyvňuje výsledky hemokoagulačných testov. Vosvojej práci J. S. Wright a kol. už poukázali na tieto problémy [j. S. Wright a kol.: J.Cardiovas. Surg. 5, 244 <1964)3. Za účelom vyhnúť sa uvedeným problémom použili Thompsona kol. [_A. R. Thompson, R. B. Counts: J. Lab. Clin. Med. 88, 922 (1976)3 kolónovú chromato-grafiu na zachytenie heparínu a protaminu zo vzoriek krvnej plazmy. Použili stredne zásaditýanex na báze celulózy k zachyteniu heparínu a na karboxymetylcelulóze sa adsorboval protamín.Použitie kolónovej chromatografie je časovo náročné a vyžaduje odborné skúsenosti v chromato-grafii. Ďalej, část krvnej plazmy sa zachytí na stlpcoch ionomeničov, čo je nevýhodou pripediatrických prípadoch, kde sa na testovanie používá malé množstvo plazmy.

Uvedené nevýhody v podstatnéj miere elminuje spósob odstraňovania heparínu z krvi,najmá z krvnej plazmy, in vitro podlá vynálezu, ktorého podstata spočívá v tom, že k 0,5až 3 obj. dielom krvi *lebo krvnej plazmy sa přidá prípravok, s výhodou vo formě tablety,obsahujúci 5 až 150 hmot. dielov aspoň jedného v krvi nerozpustného derivátu polysacharidus naviazanými terciárnymi alebo kvartérnymi aminoskupinami s výměnnou kapacitou 0,3 až I, 3 mmol.g-!, nechá sa napučať aspoň po dobu 1 minúty, zmes sa intenzivně mieša alebo nechástát, až kým sa heparín naadsorbuje, pevný podřel sa oddělí a krvná plazma sa použije natesty. Prípravok přidávájúci sa ku krvi, alebo krvnej plazme, obsahuje navýše mikrokryštalickúcelulózu v množstve až 12 hmot. dielov vztiahnuté na 1 hmot. diel derivátu polysacharidu.Derivát polysacharidu sú s výhodou deriváty celulózy alebo deriváty škrobu. Derivát celulózyje vybratý zo skupiny: dietylaminoetyl celulóza, dimetylaminoetyl celulóza, trimetylamónium-atyl celulóza, dietylaminopropyl celulóza, trietylamóniumpropyl celulóza, dimetylamino-propyl celulóza, trimetylamóniumpropyl celulóza, dietylamino-2-hydroxypropyl celulóza,polyetylénimín celulóza, trietylamónium-2-hydroxypropyl celulóza, dimetylamino-2-hydroxy-propyl celulóza, celulóza sieťovaná zmesou epichlórhydrínu a dietylamínu v alkalickomprostředí, imidazólio-N,N'-diyl-bis-/2-hydroxy-3-propyl/-ový éter celulózy, chlorid dimetyl-amino-bis-/2-hydroxy-3-propyl/-ový éter celulózy, benzyldimetylamónium-2-hydroxypropylcelulóza. Derivát škrobu je vybratý zo skupiny: dietylaminoetyl sietovaný škrob, dimetyl-aminoetyl sieťovaný škrob, trietylamóniumpropyl sietovaný škrob, dimetylaminopropyl sietovanýškrob, trimetylamóniumpropyl sietovaný škrob, dietylamino-2-hydroxypropyl sietovaný škrob,polyetylénimín sietovaný škrob, trietylamónium-2-hydroxypropyl sietovaný škrob, dimetylamino--2-hydroxypropyl sietovaný škrob, trimetylamóniummetyl sietovaný škrob, dietylaminopropylsletovaný škrob, škrob sietovaný zmesou epichlórhydrínu a dietylamínu v alkalickom prostředí,imidazólio-N,N'-diyl-bis-/2-hydroxy-3-propyl/-ový éter sletovaného škrobu, chlorid dimetyl-amino-bis-/2-hydroxy-3-propyl/-ový éter sletovaného škrobu, benzyldimetylamonium-2-hydroxy-propyl sietovaný škrob. Derivát polysacharidu pozostáva z částic o velkosti 50 až 300 um,avšak je možné použit i derivát polysacharidu s menším alebo vSčším rozmerom. Výhodou navrhovaného spósobu odstraňovania heparínu z vyšetřovanéj krvi resp. krvnejplazmy in vitro je, že využívá progresívny spósob testovaciu tabletku, ako rýchlu a jednoduchámetodu na dokonalé odstránenie klinických hladin heparínu z krvnej plazmy pri stanoveniskutočného hemostatického potenciálu a monitorovaní iných koagulačných porúch u vyšetřova-ných pacientov. Ďalšou výhodou je, že testovací prípravok s adsorbovaným heparínom sa doko-nale oddělí v plazme, takže nemóže ovplyvnit následné hemokoagulačné testy na rozdiel odpredošlých spósobov. 3 265772 Příklad 1 <· K 0,5 ml krvnej plazmy v skúmavke (12x95 mm) sa přidá tableta obsahujúca 5 mg chloridimidazólio-N,N'~diyl-bis/2-hydroxy-3-propyl/-ového éteru celulózy s výměnnou kapacitou1,3 mmol.g 1 a 6Ό mg mikrokryštalickej celulózy a nechá sa napučať 0,5 min pri teplote20 °C. Potom sa obsah skúmavky intenzívně zamieša na vibrátore, až kým sa čiastočky tabletyrovnoměrně rozložia v plazme a mieša sa dalej na miešadle 10 min pri teplote 20 °C. Tabletovásubstancia s adsorbovaným heparínom sa odstředí na laboratórnej centrifúge (1 200xg, 5 min)a příslušné alikvóty plazmy sa použijú na hemokoagulačné testy. Příklad 2 K 1 ml krvnej plazmy v skúmavkem (12x95 mm) sa přidá tableta obsahujúca 20 mg chloridimidazólio-N,N'-diyl-bis/2-hydroxy-3-propyl/-ového éteru celulózy s výměnnou kapacitou0,7 mmol.g 1 a 60 raj mikrokryštalickej celulózy a nechá sa napučať aspoň 1 min pri teplote 22 °C.Potom sa obsah skúmavky intenzívně zamieša na vibrátore až kým sa tabletová substranciarovnoměrně rozloží v plazme a mieša sa dalej na magnetickom miešadle 10 min pri 22 °C.Tabletová substancia s adsorbovaným heparínom sa odstředí na laboratórnej centrifúge(1 200xg, 5 min) a příslušné alikvóty plazmy sa použijú na hemokoagulačné testy. Příklad 3 K 3 ml krvnej plazmy v skúmavke (12x95 mm) sa přidá tableta obsahujúca 30 mg chloridimidazólio-N,N'-diyl-bis/2-hydroxy-3-propyl/-ového éteru celulózy s výměnnou kapacitou1,3 mmol.g 1 a 150 mg mikrokryštalickej celulózy a nechá sa napučať 2 min pri teplote22 °C. Potom sa obsah skúmavky intenzívně zamieša na vibrátore, až kým sa tabletová substanciarovnoměrně rozloží v plazme a nechá sa stáť pri teplote 22 °C po dobu 15 min. Tabletovásubstancia s adsorbovaným heparínom sa odstředí na laboratórnej centrifúge a příslušnéalikvóty plazmy sa použijú na hemokoagulačné testy. Přikládá

Postupuje sa ako v příklade 3 s tým rozdielom, že sa použije 150 mg tableta chloridimidazólio-N,N'-diyl-bis/2-hydroxy-3-propyl/-ového éteru celulózy s výměnnou kapacitou0,3 mmol.g 1. Příklad 5

Postupuje sa ako v příklade 1 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 5 mgdietylaminoetyl celulózy s výměnnou kapacitou 1 mmol.g-1 a 60 mg mikrokryštalickej celulózy.

Príklad6

Postupuje sa ako v příklade 2 a tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 20 mgtrimetylamóniumetyl celulózy s výměnnou kapacitou 0,7 mmol.g-1 a 60 mg mikrokryštalickejcelulózy. Příklad 7

Postupuje sa ako v příkladě 3 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 30 mgtrietylamóniumpropyl celulózy s výměnnou kapacitou 0,7 mmol.g-1 a 150 mg mikrokryštalickejcelulózy. Příklad 8

Postupuje sa ako v příklade 4 s tým rozdielom, že sa přidá 150 mg tableta dietylamino--2-hydroxypropyl celulózy s výměnnou kapacitou 0,3 mmol.g 1. 265772 4

Postupuje sa ako v příklade 1 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 5 mg aktivněj látky pripravenej reakciou celulózy, epichlórhydrínu a dietylamínu v alkalickom prostředí s výměnnou kapacitou 1,3 mmol.g 1 a 60 mg mikrokryštalickej celulózy. Příklad 9 Příklad 10

Postupuje sa ako v příklade 2 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 20 mgpolyetylénimín celulózy s výměnnou kapacitou 0,6 mmol.g 1 a 60 mg mikrokryštalickej celulózy. Příklad 11

Postupuje sa ako v příklade 3 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 30 mgdimetylaminoetyl celulózy s výměnnou kapacitou 0,7 mmol.g 1 a 150 mg mikrokryštalickejcelulózy. Příklad 12

Postupuje sa ako v příklade 4 s tým rozdielom, že sa přidá 150 mg tableta trietylamónium--2-hydroxypropyl celulózy s výměnnou kapacitou 0,3 mmol.g 1. Příklad 13 postupuje sa ako v příklade 1 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 5 mgtrimetylamóniumpropyl celulózy s výměnnou kapacitou 0,6 mmol.g-1 a 60 mg mikrokryštalickejcelulózy. Příklad 14

Postupuje sa ako v příklade 2 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 20 mgchlorid dimetylamino-bis/2-hydroxy-3-propyl/-ového éteru celulózy s výměnnou kapacitou0,6 mmol.g-1 a 60 mg mikrokryštalickej celulózy. Příklad 15

Postupuje sa ako v příklade 3 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 30 mgbenzyldimetylamónium-2-hydroxypropyl celulózy s výměnnou kapacitou 0,6 mmol.g 1 a 150 mgmikrokryštalickej celulózy. Příklad 16 í;

Viv

Postupuje sa ako v příklade 1 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 5 mgchlorid imidazólio-N,N'-diyl-bis/2-hydroxy-3-propyl/-ového éteru sletovaného škrobu s výměn-nou kapacitou 1,3 mmol.g-1 a 60 mg mikrokryštalickej celulózy. Příklad 17

Postupuje sa ako v příklade 2 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 10 mgdietylaminoetyl celulózy a 10 mg dietylaminohydroxypropyl celulózy s výměnnou kapacitou0,7 mmol.g-1 a 60 mg mikrokryštalickej celulózy. Příklad 18

Postupuje sa ako v příklade 3 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 15 mgchlorid imidazólio-N,N'-diyl-bis-/2-hydroxy-3-propyl/-ového éteru celulózy a 15 mg chlorid

Claims (5)

1. 5 265772 imidazólio-Ν,Ν -diyl-bis/2-hydroxy-3-propyl/-ového éteru sletovaného škrobu s výměnnoukapacitou 1,3 mmol.g 1 a 150 mg mikrokryštalickej celulózy. Příklad 19 Postupuje sa ako v příklade 2 s tým rozdielom, že sa přidá tableta obsahujúca 10 mgdietylaminoetyl sletovaného škrobu a 10 mg dietylaminohydroxypropyl sletovaného škrobus výměnnou kapacitou 0,7 mmol.g”1 a 60 mg mikrokryštalickej celulózy. Vynález má použitie v medicíně, najma hematologii pri vyšetřovaní pacientov, užívajúcichheparín na reálny hemostatický potenciál. Ďalej všade tam, kde sa vyžaduje jednoduchý arýchly spósob odstránenia heparínu z krvi alebo krvnej plazmy. PREDMET VYNÁLEZU

   1. Spfisob odstraňovania heparínu z krvi, najmS z krvnej plazmy in vitro vyznačgjúcisa tým, že k 0,5 až 3 obj. dielom krvi alebo krvnej plazmy sa přidá prípravok, s výhodou vo formě tablety, obsahujúci 5 až 150 hmot. dielov aspoň jedného v krvi nerozpustného derivátupolysacharidu s naviazanými terciárnymi kvartérnymi aminoskupinami s výměnnou kapacitou0,3 až 1,3 mmol.g 1, nechá sa napučať aspoň po dobu 1 minúty, zmes sa intenzívně miešaalebo nechá stát až kým sa heparín naadsorbuje, pevný podiel sa oddělí a krvná plazma sapoužije na testy.
2. 2. Spósob odstraňovania heparínu, podlá bodu 1, vyznačujúci sa tým, že prípravok pridá-vajúci sa ku krvi alebo krvnej plazme, obsahuje navýše mikrokryštalickú celulózu v množstveaž 12 hmot. dielov vztiahnuté na 1 hmot. diel derivátu polysacharidu.
3. 3. Spósob odstraňovania heparínu, podlá bodu 1 a 2, vyznačujúci sa tým, že derivátompolysacharidu sú s výhodou deriváty celulózy alebo deriváty škrobu.
4. 4. Spósob odstraňovania heparínu, podlá bodu 3, vyznačujúci sa tým, že deriváty celulózyje vybratý zo skupiny: dietylaminoetyl celulóza, dimetylaminoetyl celulóza, trimetylamónium-etyl celulóza, dimetylaminopropyl celulóza, trimetylamóniumpropyl celulóza, dietylamino-2--hydroxypropyl celulóza, polyetylénimín celulóza, trietylamónium-2-hydroxypropyl celulóza,dimetylamino-2-hydroxypropyl celulóza, celulóza sieťovaná zmesou epichlórhydrínu a dietyl-amínu v aikalickom prostředí, imidazólio-N,N'-diyl-bis-/2-hydroxy-3-propyl/-ový éter celulózy,chlorid dimetylamino-bis-/2-hydroxy-3-propyl/-ový éter celulózy, benzyldimetylamónium-2--hydroxypropyl celulóza, dietylaminopropyl celulóza, trietylamóniumpropyl celulóza.
5. 5. Spósob odstraňovania heparínu, podlá bodu 3, vyznačujúci sa tým, že derivát škrobuje vybratý zo skupiny: dietylaminoetyl sieťovaný škrob, dimetylaminoetyl sieťovaný škrob,trietylamóniumpropyl sieťovaný škrob, dimetylaminopropyl sieťovaný škrob, trimetylamónium-propyl sieťovaný škrob, dietylamino-2-hydroxypropyl sieťovaný škrob, polyetylénimín sieťovanýškrob, trietylamónium-2-hydroxypropyl sieťovaný škrob, dimetylamino-2-hydroxypropyl sieťovanýškrob, škrob sieťovaný zmesou epichlórhydrínu a dietylaminu v aikalickom prostředí, imidazólio--N,N'-diyl-bis/2-hydroxy-3-propyl/-ový éter sieťovaného škrobu, chlorid dimetylamino-bis-/2--hydroxy-3-propyl/-ový éter sieťovaného škrobu, benzyldimetylamónium-2-hydroxypropyl sieťovanýškrob, trimetylamóniumetyl sieťovaný škrob, dietylaminopropyl sieťovaný škrob.