CS259592B1 - Fungicide - Google Patents

Description

Vynález sa týká fungicídneho prostriedku,ktorý ako účinnú látku Obsahuje halogén-derivát kyseliny kójovej. Z literatury a ipraxe sú známe početnéskupiny organických zlúčenín vhodných akofungicidy. Ide například o: karbamáty, izokarbamáty, alkylén-bis-ditiokarbamidany, tiuramy, amidy, dikarboximidy, diaziny, triazoly, chinolíny a dalšie. (Zoznam povolených prípravkov na o-chranu rastlín 1986, Pesticide Manual 1985),využívané v praktickej ochraně rastlín anapříklad o skupiny zlúčenín na báze imi-dazolových derivátov, derivátov kyselinyundecylovej, ďalej mucidín, clotrimazol,nystatín, hexachlorofén a pod. využívanýchv dermatológii.

Doteraz nie sú známe fungicídne pro-striedky na báze kyseliny kójovej. Samotnákyselina kójová nemá fungicídne účinky. Jeto však látka bioorganického póvodu, do-konale degradabilná, bez nežiadúcich účin-kov na jednotlivé zložky biocenózy. Súčasný světový trend v oblasti výskumunových fungicídnych prostriedkov sa orien-tuje prioritně na také látky, ktoré okremfungicídneho účinku neprispievajú k narú-šaniu ekosystému. V tejtO' súvislosti sa zistilo, že derivátykyseliny kójovej obecného vzorca

kde 'Rl znamená —CH2CI, —CH2J alebo—CHžBr sa vyznačujú fungicídnymi účinka-mi. Syntéza derivátov kyseliny kójovej samůže vykonávat různými spůsobmi, ktoré súpopísané napr. (F. Kipnis, H. Soloway, J.Ornfelt, J. Amer. Chem. Soc. 75, 1953, strana>3 608; Takashi Kotani, Itsko Ichimoto, ChujiTatsumi: J. Fermet. Technol. 51, 1973, strana66, G. Choux, R. L. Benoit: J. Org. Chem. 32,1967, str. 3 974). Účinné látky podl'a vynálezu sa vyznaču-jú oproti váčšine používaných fungicídovtým, že okrem výborných fungicídnych ú-činkov sú bioorganického původu a nespů-sobujú znečisťovanie ekosystému a majú ši-roké spektrum účinku.

Použité účinné látky je možné upravovatna obvyklé prostriedky, ako sú roztoky, e-mulzie, suspenzie, prášky, pěny, pasty, gra-nuláty, aerosoly, prírodné a syntetické látkyimpregnované účinnými látkami a pod. Tie-to prostriedky sa pripravujú známými spů-sobmi, například zamiešaním účinnej látkys pomocnými látkami, ako sú kvapalné roz-púštadlá, pevné nosné látky, připadne zapoužitia povrchovo aktívnych činidiel, na-příklad emulgátorov, dispergátorov a spev-ňovacích činidiel. Pri použití vody ako roz-púšťadla je možné použit ako pomocné roz-púšťadlo i organické rozpúšťadlá.

Ako kvapalné rozpúšadlá prichádzajú doúvahy najmá aromáty, ako xylén, toluén,chlórované aromáty alebo chlórované alifa-tické uhlovodíky, například chlórbenzény,chlóretylény, alkoholy, ako metanol a gly-kol, silné polárné rozpúšťadlá, ako napří-klad dimetylformamid a dimetylsulfoxid, akoi voda.

Ako pevné nosné látky sa používajú napr.kaolín, oxid hlinitý, mastek, krieda, vysoko-disperzná kyselina křemičitá a silikáty. E-mulgátory sa můžu použit neiónogénne ale-bo anionické, napr. polyoxyetylestery mast-ných kyselin, polyoxyetylénétery, ako súalkylarylpolyglykoléter, alkylsulfonáty a a-rylsulfonáty. Ako dispergátory prichádzajúdo úvahy naipr. lignin, sulfitový výluh a me-tylcelulóza. Účinné látky můžu byť použité v přísluš-ných prostriedkoch v zmesi s inými známý-mi účinnými látkami.

Zlúčeniny podlá vynálezu je možné po-užit buď vo formě koncentrátov, alebo akoroztoky, emulzie, suspenzie, prášky, pasty agranuláty. Aplikovat ich možno postrekom,mořením, zálievkou, zapravením do půdy,na nadzemné, resp. podzemně časti rastlína semená, připadne na neživé substráty apodobné.

Fungicídne prostriedky podlá vynálezu jemožné používat pri ochraně polnohospodár-skych kultúr, najma proti fytopatogénnymfytomycétam, mikromycétam z rodov Alter-naria sp., Botrytis sp., Fusarium sp., Tilletiafoetida a Tilletia carries. Okrem toho fungi-cídne prostriedky na báze účinných látokje možné využívat’ v terapii proti patogén-nym mikromycétam v oblasti humánnej aveterinárnej medicíny. Předpokládá sa ichvyužitie v boji proti mikrobiálnej korózii,pri ochraně dřeva, textilii, papiera a pod.Příklad 1 Příprava kyseliny kójovej ako východiskovejlátky

Na tekutej živnej půdě s obsahom asimilo- vatelného uhlíka, dusíka a živných solí sa kultivuje kmen Aspergillus tamarii mutant VIII (CCM F — 781), alebo Aspergillus ta- marii mutant III (CCM F — 780) jednotlivo, . ‘ . . . -uA..i.£á 259592 5 alebo v zmesi a kyselina kójová sa izolujezahuštěním ujtrafiltrovaného média s ná-slednou kryštalizáciou. Získá sa kyselinakójová vo výtažku 35 g na 100 g cukru. Příklad 2 Příprava kyseliny chlórkójovej (2-chlórme-tyl-5-hydroxy-4-pyrón ] 0,01 molu (1,42 g) kyseliny kójovej sazmieša v 15 ml chloroformu s 0,02 mólu(2,4 g) čerstvo predestilovaného SOCÍ2 di-chloridu kyseliny siričitej a refluxuje sa 1hodinu. Po ochladení sa vylúčená zrazeninaodsaje a prekryštalízuje z vody. Výíažok 85percent, t. t. 185 °C. Připravené podfa F.Kipnis, H. Soloway, J. Ornfelt, J. Amer. Chem.Soc. 70, 4 264 (1948). Příklad 3 Příprava kyseliny jódkójovej (2-jódmetyl-5--hydroxy-4-pyrón j 0,015 mólu (2,5 g) kyseliny chlórkójovejsa rozpustí v 20 ml acetonu a za trepaniasa zmieša s 0,015 mólu (2,2 g) jodidu sod-ného rozpuštěného v. acetone. Reakčná zmessa mieša pol hodiny, vylúčená zrazenina saodsaje a zvyšok sa vákuovo zahustí. Krys-talizuje z etanolu. Výtažek kyseliny jódkó-jovej je 1,8 g (49 %j a teplota topenia 180až 181 °C. Připravená podfa literatury: G.Choux, R. L. Benoit: J. Org. Chem. 32, 3 974(1967). Příklad 4 Příprava kyseliny brómkójovej (2-brómme-tyl-5-hydroxy-4-pyrón j 0,02 mólu (2,84 g) kyseliny kójovej sarozpustí v 6 ml koncentrovanej kyseliny sí-rovej a za chladenia 1'adom sa přidá 6 ml48 %-nej kyseliny brómovodíkovej. Reakčnázmes sa zahrieva 2 až 3 hodiny na 70 °C aza horúca sa vyleje na Tad. Vylúčené krys-talky sa prekryšízlizujú z etanolu. Výťažokje 45 %. teplota topenia 180 až 183 °C. Připravené podfa Takashi Kotani, ItskoIchimoto, Chuji Tatsumi: J. Ferment. Tech-nol. 51, 66 (1973). Příklad 5

Stanovenie antifungálnej aktivity na Phy-tophtora investans, Botrytis cinerea, Fusa-rium nivale, Alternaria solani difúznou me-todou na agarových platniach δ

Na sterilný papierový disk (WhatmanNo 1], 0 10. mm sa nanesie 1Ó μ\ z 1 %-néhoroztoku testovanej zlúčeniny vo vhodnompřehavom organickom rozpúšťadle. Po- od-paření rozpúšťadla sa disk položí do středusterilnej Petriho misky 0 100 mm a zalejesa suspenziou spór testovaného organizmuv optimálnom živnom agarovom médiu vpomere 1:4 (2,5 ml vodná suspenzia spórz 21-dňovej kultury: 10 ml živné médium/45 °C/j. Po stuhnutí živnej pódy uloží saPetriho misky do termostatu a kultúry mik-romycét sa inkubujú pri optimálnej teploterastu (Alternaria solani, Botrytis cinerea —— 24 °C, Fusarium nivale — 21 °C, Phy-tophora infestans — 17 °C prvých 24 hodin,následná inkubácia — 20 °C). Súčasťou tes-tu ako jedna z variant je zaradenie štan-dardného komerčného preparátu —· účin-nost standardu reprezentuje objektivitu tes-tu.

Antifungálna aktivita zlúčeniny sa ipreja-vila vznikom sterilnej inhibičnej zóny, kto-rú vytvára citlivý testovací organizmus 0-kolo centra difúzie. vznik sterilnej inhibičnej zóny ;-j-(látky antifungálne aktivně) zóna nevzniká — (látky bez antifungálnej aktivity] Příklad 6

Stanovenie antifungálnej aktivity na Tille-tia foetida difúznou metódou

Petriho misky 0 100 mm sa naplnia 40 gjemne preosiatej a vysterilizovanej zeminy(hlinito-piesočnatá preosiata na site s 0 ok2 mm). Zemina sa urovná a zvlhčí pomocouatomizéra pri tlaku 0,08 MPa sterilnou des-tilovanou vodou (17 ml). Povrch zeminy sainokuluje vodnou suspenziou chlamydospórTilletia foetida (1,5 ml/1 Petriho miska) po-mocou atomizéra. Do středu Petriho misky,na povrch zeminy sa aplikuje 100 μΐ z 0,1--percentnej vodnej suspenzie, resp. emulzietestovanej zlúčeniny. Po 10-dňovej inkubáciipri 10 °C sa zisťuje aktivita zlúčeniny, ktorása prejaví vznikom sterilnej inhibičnej zónyv okolí centra difúzie. Příprava suspenzie chlamydospór: Z klasov napadnutých Tillotia foetida saoddelia jednotlivé zrná, v trecej miske sarozdrvia a preosejú cez síto (0 ok 0,5 mm).Získané chlamydospóry sa dokonale premie-šajú v homogenizátore so sterilnou destilo-vanou vodou (1 g chlamydospór + 15 mlΉ2Ο), takto připravená suspenzia sa použijena inokuláciu zeminy.

Tabulka 1

Kvalitativně stanovenie účinnosti Účinná látka (množstvo účinnej látky 100 ^g/disk)

Antifungálna účinnostPhyto- Alterna- Botrytisphtora ria so- cienerea infestans lani

Fusa- Tilletia rium foetida sol ani

Ri kyselina kójová —CH2OH — kyselina chlórkójová —CHŽC1+ — kyselina jódkójová —CH2J + kyselina brómkójová —CH2Br +

Dithane M-45 ,+ + ,+ ,+ mankozeb komplexmaneibu a Zn iónovmaneb-etylén-1,2- -g -bis-ditiokarbamidan « mangánatý tí Euparen 5 (dichlórfluanid] N,N-dimetyl- N‘-dichlórfluórmetyltio- g -N‘-fenylsulfamid —

o Fundazol 50 WP (benomyl) 1- (N-butyíkarbamoyl) -2- -metoxykarboxamidobenzimid- azol — + určitý stupeň účinku je len pri dávke 100 ^g/disk Příklad 7

Kvantitativné stanovenie antifungálnej účin-nosti iproti Phytophtora inestans, Botrytiscinerea, Alternaria solani a Fusarium niva-le in vitro K 13,5 ml živného agarového média (45stupňov Celzia) sa přidá 1,5 ml vodnéj e-mulzie, resp. suspenzie testovanej zlúčeninyv odstupňovaných koncentráciách účinnejlátky. Po dokonalom premiešaní sa homo-genát vyleje do Petriho misiek 0 100 mm.Po stuhnutí živnej pOdy sa umiestni do jejstředu hubový inokulát 0 10 mm, vykroje-ný z okraja rastúcej kolonie príslušnej mik-romycéty. Inkubácia sa uskutodňuje v ter-mostate pri optimálnej teplote rastu mikro-mycéty. Periodicky sa sleduje rast modelo- vej mikromycéty pri různých koncentráciáchúčinnej látky v médiu.

Kritérium antifungálnej aktivity je inhibí-cia radiálneho rastu kolónie huby vo· vztahuk rastu huby na živnom médiu s absenciouinhibitore. Pře výpočet biologickej účinnosti použí-váme Abbottov vztah U = * = 100

K U = biologická účinnost (%) K = 0 kolónie mikromycéty bez inhibítorav živnom médiu F = 0 kolónie mikromycéty s inhibítoromv živnom médiu g 10

Tabulka 2

Kvantitativné stanovenie účinnosti

Modelový organizmus Koncentráciaúčinnej látkyv médiuí^ug. ml“1) Biologická účinnost (%) kyselina jódkójová Dithane M-45 Phytophtora infestans 50 100 100 10 100 100 1 13,3 28,8 0,1 6,6 20 Alternaria solani 100 26 42 50 16 30 10 8 12 Euparen Botrytis cinerea 100 100 100 50 13,3 72 10 8 48 1 6,6 28 Fundazol WP 50 Fusarium nivale 100 47 100 50 28 100 10 23 72 5 6 38 Modelový Koncentrácia Biologická účinnost (%) organizmus účinnej látkyv médiu(fzg.ml-1) Kyselina brómkójová Dithane M-45 Phytophtora infestans 100 100 100 50 100 100 10 100 76,6 5 100 34,4 Alternaria solani 1 73,3 16 100 100 37,1 50 100 16 Botrytis cinerea 10 7,1 10 Euparen 50 70 73,8 10 22,4 63,5 5 0 37,5 Fundazol Fusarium nivale 100 100 100 50 45 100 10 19 55 5 14 26 Příklad 8

Stanovenie účinnosti proti Phytophtora in-festans in vivo na rajčinách

Rajčiny odrody „Imun“ sa postriekajúvodnou suspenziou, resp. emulziou testova-ných zlúčenín v odstupňovaných koncentrá-ciách účinnej látky, pomocou atomizéra pritlaku 0,08 MPa v postrekovom boxe s otoč-ným tanierom — 10 ml postrekovej tekuti-ny/3 rastliny. (Na testovanie sa používájúrastliny dopestované do stádia 5 listov po dekapitácií a po odstránení 2 prvých listovpodlá genetickej spirály.)

Postriekané rastliny sa po 2 hodinách ino-kulujú vodnou suspenziou zoospór Phytop-htora infestans — 4,5 ml/3 rastliny — pomo-cou atomizéra. Nainfikované rastliny sa in-kubujú v klimatizačně] kóji pri teplote 18stupňov Celzia + 1 °C a RVV = 100 %, podizolátormi zo skla, resp. polyvinylchloridu.

Antifungálna účinnost sa hodnotí po 6 dňoch od inokulácie v čase, keď kontrolně neošetrené rastliny sú 75 až 100 % napad- nuté patogénom podlá uvedenej stupnice: 11 12

Trieda

O 1 2 3 4 5 252392

Napadnutá listová plocha (%) P = index napadnutia n = počet listov v príslušnej triede 0 v = trieda napadnutia 5 N = celkový počet listov 10 5 = najvyššia trieda napadnutia 15 25 Antifungálna účinnost (U) sa vyhodnotí 50 a viac podlá Abbottovho vzorca

Zo získaných hodnĎt-Heubergera sa vypočítá(P): pódia Townsend-index napadnutia (n^v)_ 5 Ň

u = K-_L_. lo0K K — index napadnutia kontrolných neoše-trených rastlín P — index napadnutia rastlín ošetřenýchtestovanou zlúčeninou

Tabulka 3

Biologická účinnost’ kyseliny brómkójovej po aplikácii postrekom na list — Phytoph-tora infestans. Solanum lycopersicum (rajčiny)

Prípravok Koncentrácia účinnej látky(l(ug. ml"1) Biologická účinnost (%) Dithane M-45 1 000 100,0 465 95,5 216 100,0 Kuprikol 50 1 000 98,3 (oxychlorid-Cu) 465 95,2 zásaditý CuCl2 216 88,2 Kyselina brómkójová 1000 92,3 465 91,8 216 87,4 Kontrolně neošetrené rastliny — 0 Tabulka 4 Biologická účinnost kyseliny jódkójovej po aplikácii postrekom na list — Phytophtora infes- tans: Solanum lycopersicum Prípravok Koncentrácia účinnej látky Biologická účinnost (°/o) (fig. ml"1) Dithane M-45 1 000 100 465 100 216 96 Kyselina jódkójová 1000 88 465 68 216 60

Kontrolně neošetrené rastliny 0 13 2S9292 14 Příklad 9

Stanovenie antifungálnej účinnosti protiPhytophtora infestans in vivo na zemiakoch(Solanum tuberosum)

Zemiaky — odroda „Radka“ vypěstova-né v Mitscherlichových nádobách do stádiaT a b u 1' k a 5 dokonale vyvinutého trsu (výšky cca 45 cm)sa postriekali vodnou suspenziou testova-ných zlúčenín pomocou atomizéra pri tla-ku 0,08 MPa (50 ml postrekovej tekutiny//zemiakový trs). Sposob inokulácie (množ-stvo inokula zvýšené úměrně k biomase),inkubácia a spósob hodnotenia účinnosti sapoužili ako v příklade 8.

Biologická účinnost zlúčeniny kyseliny brómkójovej po aplikácii postrekom na list— Phytophtora infestans: Solanum tuberosum (zemiaky).

Prípravok Koncentrácia Biologická účinnost účinnej látky (%) (ííg. ml“1)

Dithane 1000 M — 45 465 standard 216 100 Kuprikol 1000 50 465 štandard 216 100 Kyselina 1000 brómkójová 465 216 100

Kontrolně neošetrené rastliny Příklad 10 20 hmot. dielov účinné) látky sa rozpus-tí v zmesi, ktorá pozostáva zo 75 hmot. die-lov xylénu a dimetylformamidu v pomere1:1a přidá sa 5 hmot. dielov emulgátora(Emulsogen). Rozptýlením 5 hmot. dielovemulzného koncentrátu v 1000 hmot. die-loch vody sa získá základná vodná emulzia,ktorá obsahuje 1000 ^g.ml-1 účinnej lát-ky. Příklad 11

Stanovenie antifugálnej aktivity naMicrosporum persicolor,

Microsporum langeroni,

Trichophyton mentagrophytes v. inter-digitale,

Trichophyton mentagrophytes v. gra-nulosum,

Microsporum canis,

Scopulariopsis,

Trichophyton tonsurans,

Microsporum gypseum,

Trichophyton quinckeanum,Trichophyton equinum,

Trichophyton terrestre,

Microsporum cookei,

Trichophyton megninii,

Trichophyton gallinae,

Trichophyton ajelloi, 91,1 98.5 96.6 89,4 100 75.2 92.2 50,8 81,4 97,0 70.6 90.6 0

Emmonsia crescens,

Ctenomyces serratus,

Chrysosporium keratinophilum,Chrysosporium evolceani aTrichophyton rubrum difúznou meto-dou na agarových platniach.

Do Petriho misky o priemere 10 cm sa při-dalo 15 ml horúcej Sabouroudovej pody,ktorá obsahovala v 1000 ml destilované)vody 20 g oxidu agaru, 10 g peptónu, 40 gglukózy, 0,5 g cykloheximidu a 0,05 gchloramfenikolu. Agarový gél sa nechalstuhnúť ipri laboratórnej teplote. Na povrchagarovej platné sa naniesol 1 ml suspenziespor (350 000 spor. ml-1) z 21 dňovej kul-túry skúmaného druhu huby v 0,9 % chlo-ride sodnom. Na takto připravené agaro-vé platné sa umiestnili kovové cylindríky spriemerom 6 mm a výškou 10 mm, do kto-rých sa naplnilo 0,2 ml roztoku účinnej lát-ky o koncentrácii 10 ,ug. ml-1 v 1 % dime-tylsulfoxide. Agarové platné sa inkubovali vtermostate pri 25 °C, 72 hodin. Počas tejtodoby účinná látka difundovala z priestorucylindríkov do· agarovej platné. Antifungál-na aktivitě účinnej látky sa prejavila vz,ni-kom sterilnej inhibičnej zóny, ktorú vytvo-řil citlivý testovací organizmus okolo cen-tra difúzie za 14 dní inkubácie v termostatepri 25 °C.

Claims (1)

1. stanovenie účinnosti zlúčenín kyseliny kójovej při koncentrácii 10 ^g . Priemer inhibičnej zóny (cm) 1 % 1 % dimetylsulfoxid dimethyl- Rí ' Rl Rl sulfoxid —CH2—Cl — CH2—Br —CHž—I 259292 Tabulka 6 15 16 Kvalitativně. ml-1. Dermatoíyty aplesňové huby Microsporum percicolor 0 3.13 2.00 0 Microsporum langeroni 0 2.00 0 0 Trichophyton mentagrophytes 0 4.00 0 4.00 v, interdigitale Trichophyton mentagro- 0 3.00 0 2.00 phytes v. granulosum Microsporum canis 0 3.00 0 0 Scopulariopsis 0 3.00 2.25 2.50 Trichophyton tonsurans 0 2.25 0 0 Microsporum gypseum 0 2.00 4.20 0 Trichophyton quinckeanum 0 3.00 2.00 0 Trichophyton equinum 0 4.00 2.50 0 Trichophyton terrestre 0 3.25 2.50 0 Microsporum cookei 0 0 0 2.60 Trichophyton megninii 0 0 3.50 0 Trichophyton gallinae 0 3.00 2.25 0 Trichophyton ajelloi 0 2.90 2.75 2.45 Emmonsia crescens 0 0 3.75 0 Ctenomyces serratus 0 2.70 0 0 Chrysosporium keratino- philum 0 3.00 0 0 Chryosporium evolceani 0 2.50 0 0 Trichophyton rubrum 0 2.00 3.00 0 Účinné látky pódia vynálezu pri aplikácii in vivo, najma v humánnej a veterinárnejmedicíně sa upravia ako masti, pasty, gely, aerosoly, roztoky, suspenzie, emulzie, tab-lety, čípky, mydlá alebo zásypy. PREDMET Fungicídny prostriedok vyznačujúci satým, že ako účinnú látku obsahuje derivátkyseliny kójovej všeobecného vzorca VYNALEZU kde Ri znamená skupinu —1CH2— Cl—CH2—J alebo —CH2—Br. HO

   Ό R,< Severografla, n. p. závod 7, Most Cena 2,40 KCs