CS259231B1 - Myši lymfocytámy hybridóm produkujúci monoklonálnu protilátku inhibujúcu hemaglutinačnú aktivitu virusu Newcastleskej choroby - Google Patents
Myši lymfocytámy hybridóm produkujúci monoklonálnu protilátku inhibujúcu hemaglutinačnú aktivitu virusu Newcastleskej choroby Download PDFInfo
- Publication number
- CS259231B1 CS259231B1 CS861486A CS148686A CS259231B1 CS 259231 B1 CS259231 B1 CS 259231B1 CS 861486 A CS861486 A CS 861486A CS 148686 A CS148686 A CS 148686A CS 259231 B1 CS259231 B1 CS 259231B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- acid
- disease virus
- newcastle disease
- monoclonal antibody
- hemagglutination activity
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Očelom riešenia je příprava izotypovo a idiotypovo homogénnej protilátky o vysokej čistotě. Uvedeného účelu sa dosiahne použitím myšieho lymfocytárneho hybridomu NDV-NTP-3, produkujúceho monoklonálnu protilátku inhibijúcu hemaglutimačnú aktivitu virusu Newcastleskej choroby. Myší lymfocytámy hybridóm má použitie vo veterinárnej medicíně.
Description
Vynález sa týká myšleho lymfocytárneho hybridómu produkujúceho monoklonálne protilátky proti virusu Newcastleskej choroby s hemaglutinačnoinhibičnou aktivitou.
Doposial sa protilátky proti virusu Newcastleskej choroby pripravujú tak, že sa virus injikuje pokusným zvieratám, najmS králikom a ovciam. Vzhladom na to, že nestač! jedna dávka virusu pre vyvolanie dostatočne vysokej protilátkovej odpovede, je potřebné ho injikovať viackrát opakované v různých dávkách a časových intervaloch. Sérum takto imunozovaných zvierat slúži ako zdroj protilátok najmS pri diagnostickém vyšetřeni chovov hydiny. Zmienený postup imunizácie má niekoíko nevýhod.
Získává sa heterogénna zmes protilátok, ktorej rozloženie sa v organizme producenta mění, je velmi různorodé, kvalitativně a kvantitativné kolíše od jedného odběru po druhý a je neopakovatelné. Okrem toho sérum obsahuje vela protilátok proti nežiadúcim prímešiam, ktoré sa nachádzajú vo vírusovom materiáli použitom pre imunizáciu. V dósledku toho je potřebné séra upravovat zložitými postupmi, čím získáváme heterogénne a neštandardné preparáty.
Využitelnost takto připraveného diagnostického séra je znižená aj tým, že jeho Specifické polyklonálne protilátky sú z hlediska interakcie s vírusom velmi róznorodé. Naviac příprava virusu pre imunizačné účely je nákladná.
Hybridóm NDV-NTP-3 bol připravený známým spósobom, klonováním skupiny hybridómov v mSkkom agare, vzniklých fúziou buniek myšej 2-amino-6-hydroxy-8-azapurín /8-azaguanín/ rezistentnej myelómovej linie označenéj NSO a slezinových buniek inbrédnej linie myší ΒΑΧ,Β/c, imunizovaných purifikovaným vírusom NDV, kmeň L Kansas /G. Kóhler, C. Milstein, G. W. Butcher, J. C. Howard: Nátuře 286, 550 /1977//.
Uvedené nevýhody v podstatnéj miere odstraňuje vynálezu, ktorého podstata spočívá v myšom lymfocytárnom hybridóme NDV-NTP-3, produkujúcom monoklonálnu protilátku podtriedy IgGl, kappa, inhibujúcu hemaglutinačnú aktivitu virusu Newcastleskej choroby.
Výhodou hybridómu je, že produkuje izotypovo a idiotypovo homogénnu špecifickú protilátku, tzv. monoklonálnu protilátku, ktorá Specificky inhibuje hemaglutinačnú aktivitu virusu Newcastleskej choroby a tým je ho možné použiť na jeho identifikáciu vo vyšetřovaných vzorkách z róznych chovov hydiny. Jednobunkový lymfocytárny hybridóm NDV-NTP-3 rastie in vivo v peritoneálnej dutině BALB/c myší za súčasnej tvorby ascites. Rastie aj in vitro v kultivačných médiach vhodných pre živočišné buňky.
Taktiež pozmrazení a uložení v tekutom dusíku a po opStovnom rozmraženi si zachovává svoju schopnost produkovat monoklonálnu protilátku viažucu virus Newcastleskej choroby. Neobsahuje na rozdiel od konvenčných antisér nevhodné, balastné protilátky.
Příklad 1
Pre přípravu hybridněj buňkovéj linie sa použije 2.10 buniek myšej 2-amino-6-hydroxy-8-azapurin (8-azaguanín/ rezistentnej myelómovej bunkovej linie, ktoré sa pomocou 1 ml p
% hmot. polyetylénglykolu spoja s 1.10 slezinových lymfoidných buniek myši imunizovanéj 10 jug virusu. V priebehu 14 dní vyrastú pod selektívnym tlakom kyseliny 4-amino-pteroylglutámovej /aminopterínu/ hybridně, buňkové linie, ktoré produkujú monoklonálne protilátky proti virusu Newcastleskej choroby, ktoré sa s ním viažu a ovplyvňujú jeho biologickú aktivitu. Tieto buňky potom klónujú tak, že sa zmieša 0,5 % hmot. agaru s 5.10® až 10.10® myších slezinových buniek v médiu RPMI 1 640, ktoré obsahuje 100 mg.ml-1 tetrahydrátu dusičnanu -1 -1 -1 vápenatého, 2 000 mg.ml D-glukózy, 100 mg.ml heptahydrátu síranu horečnatého, 400 mg.ml chloridu draselného, 1 512 mg.ml-1 hydrogenfosforečnanu sodného, 6 000 mg.ml1 monohydrátu dihydrogenfosforečnanu sodného, 100 mg.ml-1 kyseliny 2-amino-5-guanidínovalérovej /arginínu/, mg.ml-1 kyseliny 2-aminosukcínamovej /asparagínu/, 20 mg.ml-1 kyseliny 2-aminojantárovej /kyseliny asparágovej/, 50 mg.ml-1 kyseliny 3',3'-ditiobis/2-aminopropánovej / /cystínu/, mg.ml-1 kyseliny 2-aminoglutárovej /kyseliny glutamovej/, 300 mg.ml-1 kyseliny 2-aminoglutarámovej /glutamínu/, 1 mg.ml-1 kyseliny 2-aminoglutaraminyl-2-merkaptopropionyl-aminooctovej /glutationu tj. glutaminyl-cysteinyl-glycínu/, 10 mg.ml-1 kyseliny aminooctovej /glycínu/, 15 mg.ml kyseliny alfa-amino-l-imidazol-4-propiónovej /histidínu/, 50 mg.ml-1 kyseliny 2-amino-3-metylvalérovej /izoluecínu/, 50 mg.ml-1 kyseliny 2-amino-4-metylvalérovej /leucínu/, 40 mg.ml-1 kyseliny 2,6-diaroinohexánovej /lyzínu/, 15 mg.ml-1 kyseliny 2-amino-4-/metyltio/-raaslovej /metioninu/, 15 mg.ml kyseliny 2-amino-3-fenylpropiónovej /fenylalanínu/, 20 mg.ml-1 kyseliny 2-pyrolidínkarboxylovej /prolinu/, 30 mg.ml-1 kyseliny 2-amino-3-hydroxypropiónovej /serínu/, 20 mg.ml-1 kyseliny 2-amino-3-hydroxymaslovej /treoninu/, mg.ml-1 kyseliny 2-amino-3-/3-indolyl/propiónovej /tryptofánu/, 20 mg.ml-1 kyseliny 2-amino-3-/4-hydroxyfenyl/-propiónovej /tyrozínu/, 20 mg.ml-^ kyseliny 2-amino-3-metylmaslovej /valínu/, 0,2 mg.ml 1 kyseliny 5-/2-oxoimidazolidíno/4,5-c/tiol-2-yl/pentánovej /biotínu/,
0,005 mg.ml-1 kobalt alfa/alfa-/5,6-dimetylbenzimidazolyl//-kobalt-beta-kyanokobamid vitamínu B12/, 0,250 mg.ml 1 D-N-/2,4-dihydroxy-3,3-dimetylbutyryl/-beta-2-aminopropionát vápenatý /pantotenát vápenatý/, 3 mg.ml-^ 2-hydroxyetyltrimetylamóniumohlorid /cholinchlorid/, mg.ml-1 kyseliny N-/2-amino-4-hydroxypteridín-6-ylmetyl/-p-aminobenzoovej /kyseliny listovej/, 35 mg.ml-^ /1,2,3,5/4,6/oyklohexándexol/ /myoinozitolu/, 1 mg.ml-1 pyridin-3-karboxyamidu /nikotfnamidu/, 1 mg.ml * kyseliny 4-aminobenzoovej /kyseliny p-aminobenzoovej/, 1 mg.ml”^ 3-hydroxy-4,5-bis/hydroxymetyl/-2-metylpyridínchloridu /pyridoxínchloridu/, 0,2 mg.ml”^ 7,8-dimetyl-10-/l'D-ribityl/izoaloxazínu /riboflavinu/, 1 mg.ml-1 3-/4-amino-2-metyl-pyrimidyl-’ -5-metyl/-5-/2-hydroxyetyl/-4-metyltiazolu /tiamínchloridu/, 2 000 mg.ml 1 hydrogenuhličitanu sodného doplnenom s 2 mmol kyseliny 2-aminoglutarámovej /glutamínu/, 5.10-5 mol 2-merkaptoetanolu, 100 jug.ml 0-alfa-L-2-deoxy-2-/metylamino/-glukopyranozyl-/l-2/-0-alfa-L-deoxy-3-C-formyllyxofuranozy1-/1-4/-1,3-deoxy-l,3-diguanidoscyloinožitsulfátu /streptomycínsulfátu/, 100 jednotiek na mililiter kyseliny 6-/N-fenylacetoamido/-penicilánovej /pěnici- ' línu G/, 1 mmol kyseliny N-2-hydroxyetylpiperazin-N'-2-etán sulfónovej /Hepesu/ sa rozpustí v třikrát redestilovanej vodě a doplní trikrát redestilovanou vodou na objem 900 ml roztoku, ktorý sa doplní 100 ml normálneho inaktivovaného koňského séra.
Výsledné pH takto připravovaného kultivačného média je 7,2. Po zatuhnutí agaru sa na vrstvu 0,5 % hmot. agaru nanesie 100 hybridných buniek v 0,25 % hmot. agaru. Po 10 dňoch vyrastú kolonie, ktoré sa pomnožia v médiu RPMI 1 640 doplnenom s 2 mmol kyseliny 2-aminoglutarámovej -5 -1 /glutamínu/, 5.10 mol 2-merkaptoetanolu, 100 jug.ml 0-alfa-L~2-deoxy-2-/metylamino/-glukopyranozyl-/1-2/-0-alfa-L-deóxy-3-C-formyllyxofuranozy1-/1-4/-1,3-deoxy-l,3-diguanidoscyloinozitsulfátu /streptomycínsulfátu/, 100 jednotiek naimililiter kyseliny 6-/N-fenylacetamido/~ -penicilánovej /penicilínu GZ, 1 mmol kyseliny N-2-hydroxyetylpiperazín-N-2-etánsulfónovej /Hepesu/ sa rozpustí v trikrát redestilovanej vodě a doplní trikrát redestilovanou vodou na objem 900 ml roztoku, ktorý sa doplní 100 ml normálneho inaktivovaného koňského séra.
Výsledné pH takto připraveného kultivačného média je 7,2. V 1 ml kultivačného média sa nachádza 350 až 700 tisíc hybridómov NDV-NTP-3 produkujúcich 10 až 100 jug monoklonálnej IgGl, kappa, protilátky.
Příklad 2
Postupuje sa ako v příklade 1 s tým rozdielom, že sa v kultivačnom médiu použije nepredtestované běžné telacie fetálne sérum. Do takto připraveného kultivačného prostredia přenesené buňky po fúzii nie sú schopné rásť a produkovat monoklonálne protilátky.
Myší lymfocytárny hybridóm NDV-NTP-3 sa kultivuje pri teplote 37 °C. Stredný generačný čas je 22,4 h, modálny počet chromozómov je 24 mesiacov po fúzii 70 chromozómov. Produkovaná monoklonálna protilátka je myší imunoglobulín triedy IgGl, kappa.
Monoklonálna protilátka produkovaná myším lymfocytárnym hybridómom NDV-NTP-3 móže byť použitá vo veterinárněj praxi pre zisťovanie virusu Newcastleskej choroby v chovoch hydiny.
Claims (1)
- MySi lymfocytárny hybridem NDV-NTP-3,' produkujúci monoklonálnu protilátku inhibujúcu hemaglutinaSná aktivitu virusu Newcastleskej choroby, podtriedy IgGl kappa.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS861486A CS259231B1 (sk) | 1986-03-04 | 1986-03-04 | Myši lymfocytámy hybridóm produkujúci monoklonálnu protilátku inhibujúcu hemaglutinačnú aktivitu virusu Newcastleskej choroby |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS861486A CS259231B1 (sk) | 1986-03-04 | 1986-03-04 | Myši lymfocytámy hybridóm produkujúci monoklonálnu protilátku inhibujúcu hemaglutinačnú aktivitu virusu Newcastleskej choroby |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS148686A1 CS148686A1 (en) | 1988-02-15 |
| CS259231B1 true CS259231B1 (sk) | 1988-10-14 |
Family
ID=5349392
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS861486A CS259231B1 (sk) | 1986-03-04 | 1986-03-04 | Myši lymfocytámy hybridóm produkujúci monoklonálnu protilátku inhibujúcu hemaglutinačnú aktivitu virusu Newcastleskej choroby |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS259231B1 (sk) |
-
1986
- 1986-03-04 CS CS861486A patent/CS259231B1/sk unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS148686A1 (en) | 1988-02-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4350683A (en) | Antibody production from hybrid cell line | |
| Goding | Antibody production by hybridomas | |
| US5204095A (en) | Monoclonal antibodies against hepatitis B virus | |
| US4636463A (en) | Antibodies to human interleukin-2 induced by synthetic polypeptides | |
| EP0359063B1 (en) | Antibody having high affinity to methamphetamine and immunogen for obtaining the same | |
| EP0038642B1 (en) | A monoclonal antibody against hepatitis b and its production, a hybridoma producing the monoclonal antibody and compositions containing it, the propagation of the hybridoma and the monoclonal antibody for use as an antiviral agent against hepatitus b and in isolating hepatitus b surface antigen from a sample | |
| EP0550528A1 (en) | Active site of interleukin-8: polypeptide analogs and antibodies | |
| US5233025A (en) | Amphetamine protein complex as immunogen for obtaining antibodies specific to methamphetamine | |
| Piechaczyk et al. | Production and characterization of monoclonal antibodies against human thyroglobulin | |
| CA2015888A1 (en) | Monoclonal antibodies specific for an immunoglobulin isotype | |
| US4473493A (en) | Hybridoma antibody which inhibits interleukin 2 activity | |
| EP0093775A1 (en) | Monoclonal antibodies against brugia malayi | |
| FI90988B (fi) | Monoklonaaliset vasta-aineet natriumdiureesia lisääviä nisäkkäiden sydäneteisen peptidejä kohtaan | |
| CS259231B1 (sk) | Myši lymfocytámy hybridóm produkujúci monoklonálnu protilátku inhibujúcu hemaglutinačnú aktivitu virusu Newcastleskej choroby | |
| Hadas et al. | Production of monoclonal antibodies: The effect of hybridoma concentration on the yield of antibody-producing clones | |
| Schultz et al. | Production and characterization of monoclonal antibody against infectious hematopoietic necrosis virus | |
| CS260264B1 (sk) | Myší lymfocytárny hybridom produkujúci monoklonálne protilátky neutralitujúce virus Newcastleskej choroby | |
| JP5058403B2 (ja) | Ｃｋ−ｍｂ活性測定法およびｃｋ−ｍｂ活性測定試薬 | |
| CS259232B1 (sk) | Myáf lymfocytámy hybridóm produkujúci monoklonálnu protilátku proti povrchovým antigóňom lymfocytov hydiny | |
| CS259230B1 (sk) | Myší lymfocytámy hybridóm produkujúci monoklonálne protilátky proti virusu Newcastleskej choroby | |
| CS259233B1 (sk) | Myší lymfocytámy hybridóm produkujúci monoklonálnu protilátku proti MSBI íymfoblastoidnej bunkovej linii | |
| CS261508B1 (sk) | Myší lymíocytárny liybridóm produkujúci monoklonálnu protilátku pro specifickému nádorovému antigénu bunkovej linie MSB1 | |
| CS265305B1 (sk) | Hybridómy produkujúce monoklonálne protilátky rozlišujúce virusy komplexu kliešfovej encefalitidy | |
| USRE33252E (en) | Hybridoma antibody which inhibits Interleukin 2 activity | |
| JPS61212600A (ja) | ヒト銅，亜鉛ス−パ−オキシドジスムタ−ゼに対するモノクロ−ナル抗体及びその製造方法 |