CS258203B1 - Spósob izolácie zvieracieho albuminu - Google Patents

Description

258203 2

Vynález sa týká spůsobu izolácie zvieracieho albuminu.

Doteraz v priemyselnom měřítku zvierací albumin z plazmy alebo séra sa izoloval bu3vysolovanim vhodnými solami alebo frakciou organických rozpúštadiel najma etanolom (CohnE. J. et al.: J. Amer. Chem. Soc., 68, 459 (1946); Nitschmann H. et al.: Helv. Chim. Acta, 37, 866 (1954)). Nevýhodou uvedených technologických postupov je dlhý technologický cyklus,energetická náročnost a náročné technologické zariadenia. Známe sú tiež tepelno-denaturačnémetody izolácie albuminu (Hoch H., Chanutin: Arch. of Biochem. and Biophys., 51, 27, 1954;Lundblad J. I.: Vox sang., 5 122, 1971; Schneider W. et al.: Folia haematol., 104, 116, 1977).

Avšak nevýhoda týchto je v tom, že balastné bielkoviny sú denaturované pri vysokýchteplotách (+70 °C), čo má nepriaznivý vplyv na nativitu a výtažnost albuminu. Taktiežizolácia albuminu pri výrobě Plazbionu vychádza zo supernatantu po oddělení imunoglobulínov,využívá taktiež poměrně vysokú denaturačnú teplotu (60 °C) a dlhú dobu denaturácie balastnýchbielkovín (dve hodiny) a napokon dosahuje poměrně nízku elektroforetiokú čistotu (max. 80 %) a výtažnost konečného výrobku.

Vynález rieši izoláciu albuminu zo zvieracej plazmy, resp. séra jednostupftovým techno-logickým úkonom, pri ktorom dochádza k denaturácii všetkých plazmatických bielkovin mimoalbuminu. Přednost uvedeného postupu oproti doteraz používaným je v tom, že mimo skráteniavýrobného cyklu a nižšej denaturačnej teploty sa dosahuje výtažnost cca o 30 % vyššia.

Podstata izolácie zvieracieho albuminu spočívá v tom, že ku krvnej plazme, resp.séru sa přidá 0,04 M Na-kaprylátu a 0,04 M N-acetyl-DL-tryptofánu. Po dfikladnej homogenizáciisa hodnota pH upraví 1 M kyselinou octovou na hodnotu 6,0 až 6,1. Za stálého miešaniasa po kvapkách přidává 96% etanol do koncentrácie 12 až 18 objemových percent. Potomsa roztok za stálého miešania zahrieva pri teplotě 45 až 55 UC po dobu 10 minút. NatopH zmesi sa upraví na hodnotu 5,0 až 5,1 a schladí na teplotu +18 až +20 °C. Vzniklý pre-cipitát sa odstředí a supernatant sa filtruje a lyofilizuje. Přiklad č. 1 K 3 800 ml hovSdzej plazmy bol přidaný stabilizátor do výslednéj koncentrácie 0,04 MNa-kaprylátu a 0,04 M N-acetyl-Dl-tryptofánu a pH upravené 1 M kyselinou octovou na pH 6,0. K zmesi za stálého miešania bol přidaný 96% etanol v množstve 720 ml a roztok bol zohrie-vaný pri teplote 45 °C po dobu 10 minút. Potom pH roztoku bolo upravené 1 M kyselinouoctovou na hodnotu 5,1 a následné roztok bol schladený na teplotu 18 °C. Vzniklý precipitátbol separovaný na centrifúge. Supernatant bol filtrovaný a lyofilizovaný. Váha lyofilizo-vaného produktu 72 g, elektrorofetická čistota 95,8. Příklad č. 2 K 3 800 ml hovSdzej plazmy bol přidaný stabilizátor do výslednéj koncentrácie 0,04 MNa-kaprylátu a 0,04 M N-acetyl-Dl-tryptofánu a pH upravené 1 M kyselinou octovou na 6,1. £ zmesi za stálého miešania bol přidaný 96% etanol v množstve 480 ml a roztok bol zohrie-vaný pri teplote 55 °C po dobu 10 minút. Potom pH roztoku bolo upravené 1M kyselinou octovouna hodnotu 5,1 a následné roztok bol ochladený na teplotu 20 °C. Vzniklý precipitát bolseparovaný na centrifúge. Supernatant bol filtrovaný a lyofilizovaný. Váha lyofilizovanéhoproduktu 68 g, elektroforetická čistota 96,1.

Claims (1)

1. 3 258203 PREDMET VYNALEZU Spůsob izolácie zvieracieho albuminu, vyznačujúci sa tým, že zvieracia plazmaalebo sérum sa stabilizuje 0,04 M Na-kaprylátom a 0,04 M N-acetyl-DL-tryptofánom, upravísa pH na 6,0 až 6,1, přidává sa 96% etanol do 12 až 18 % objemových, roztok sa zahrievana teplotu 45 až 55 °C po dobu 10 minút, potom sa upraví pH na hodnotu 5,0 až 5,1, ochladísa na teplotu +18 až +20 °C, vzniklý precipitát sa odstředí a supernatant sa filtrujea lyofilizuje.