CS255180B1 - Způsob preparativní izolace (6-3H)-thyminu - Google Patents
Způsob preparativní izolace (6-3H)-thyminu Download PDFInfo
- Publication number
- CS255180B1 CS255180B1 CS863318A CS331886A CS255180B1 CS 255180 B1 CS255180 B1 CS 255180B1 CS 863318 A CS863318 A CS 863318A CS 331886 A CS331886 A CS 331886A CS 255180 B1 CS255180 B1 CS 255180B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- thymine
- thymidine
- reaction mixture
- radioactive
- preparative
- Prior art date
Links
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 title claims abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 12
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title claims description 7
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims abstract description 9
- RWQNBRDOKXIBIV-FUPOQFPWSA-N 5-methyl-6-tritio-1H-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1[3H] RWQNBRDOKXIBIV-FUPOQFPWSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 2
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-LJTCTKOTSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methyl-6-tritiopyrimidine-2,4-dione Chemical compound [3H]C1=C(C)C(=O)NC(=O)N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-LJTCTKOTSA-N 0.000 abstract 1
- FEYHMSUYKIMUAL-UNYLCCJPSA-N 5,6-dihydrothymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 FEYHMSUYKIMUAL-UNYLCCJPSA-N 0.000 abstract 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 abstract 1
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 abstract 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 abstract 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 9
- NBAKTGXDIBVZOO-UHFFFAOYSA-N 5,6-dihydrothymine Chemical compound CC1CNC(=O)NC1=O NBAKTGXDIBVZOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000004816 paper chromatography Methods 0.000 description 7
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 3
- QVKKJQJSCCOXHP-UHFFFAOYSA-N 6-bromo-5-methyl-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound CC1=C(Br)NC(=O)NC1=O QVKKJQJSCCOXHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-VMNATFBRSA-N 6-deuterio-5-methyl-1H-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound [2H]c1[nH]c(=O)[nH]c(=O)c1C RWQNBRDOKXIBIV-VMNATFBRSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- BCMSGKCOTZUCKB-UHFFFAOYSA-N O.N.C(CC)O.C(CCC)O Chemical compound O.N.C(CC)O.C(CCC)O BCMSGKCOTZUCKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910004283 SiO 4 Inorganic materials 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 238000004980 dosimetry Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 1
- 150000004819 silanols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- -1 tetrapotassium silicic acid Chemical compound 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(6- H)-thymin je používán jako stopovací látka v biochemickém, biologickém a lékařském výzkumu. Dále slouží jako výchozí látka pro syntézu složitějších biologicky aktivních látek, tj. (6-3H)-thymidinu, resp. 5'-fosfátů (6- H)-thymidinu. Cílem řešení bylo zajistit výtěžky (6-3H)-thyminu, zkrátit separačnf cyklus a zlepšit kvalitu výsledného produktu. Vyšší účinek spočívá ve využití vysokoúčinné kapalinové chromatografie, což umožňuje získávat radioohemioky čistý (6-3H)-thymin o vyšším výtěžku v kratším výrobním cyklu. Uvedeným postupem bylo dosaženo výtěžku 85 až 90 % (6-3H)-thyminu, vztaženo na obsah této látky v reakčni směsi. Radiochemická čistota a chemická čistota je 97 až 98 %.
Description
Vynález se týká způsobu preparativní izolace (6- H)-thyminu z reakční směsi po jeho přípravě chemickou syntézou (ěs. AO 192 238).
Obvyklými způsoby izolace uvedené sloučeniny z reakčních směsí po její syntéze jsou me3 tody preparativní papírové chromatografie. Zejména při přípravě (6- H)-thyminu o vysoké molové aktivitě má tento způsob izolace řadu nedostatků. Především dochází k izolačním ztrátám (30 %) a izolovaná sloučenina není chemicky čistá. Při dnešních požadavcích na vysokou molovou aktivitu sloučenin značených radionuklidem nejsou izolační ztráty při aplikacích standardních postupů z ekonomického hlediska již zanedbatelné. Nízký stupeň chemické čistoty preparátů izolovaných preparativní papírovou chromatografií je zapříčiněn zejména přítomností výluhů z chromatografického papíru, případně nečistoty z rozpouštědel. Při aplikaci takto přípravováného (6- H)-thyminu v enzymatických syntézách (6- H)-thymidinu, (6- H)-thymidinu-5'-monoO fosfátu a (6- H)-thymidinu-5’-trifosfátu nelze vyloučit úplnou ztrátu katalytické účinnosti enzymových preparátů.
Další nedostatek papírové chromatografie spadá do úseku bezpečnosti práce s radioaktivními látkami. Manipulace s radioaktivními sloučeninami při nanášení na chromatografické papíry, vlastní chromatografie, autoradioohromatografie a eluce v podstatě zvyšují možnost kontaminace prostředí i osob. Navíc nutno konstatovat, že preparativní papírová chromatografie je časově náročná metoda.
Doposud používaný technologický způsob izolace (6- H)-thyminu z reakční směsi po jeho chemické syntéze se provádí metodou papírové chromatografie na chromatografickém papíru Whatmann-3 v soustavě butanol-propanol-amoniak-voda (7:5:7:2), Rf,thyminu v této soustavě je 0,45. Identifikace radioaktivních sloučenin na ohromatogramech se provede jejich porovnáním s neaktivními standardy. Proužek, odpovídající radioaktivnímu thyminu, se vystřihne a eluuje redestilovanou vodou. Protože se nedosáhne požadované radiochemické čistoty, je třeba papírovou chromatografií zopakovat v jiné vyvíjecl soustavě, čímž se dále zvyšují ztráty izolovaného preparátu.
o
Podstata způsobu preparativní izolace (6- H)-thyminu (o molové aktivitě vyšší než 0,8 GBq/ /mmol eluční vysokoúčinnou chromatografií podle předmětného vynálezu spočívá v tom, že se 3 směs sloučenin vznikajících při přípravě radioaktivního (6- H)-thyminu děli na sloupci hydrofobního specifického sorbentu, za použiti 0,6% vodného roztoku čistého etanolu jako eluentu. Povrch silikagelu (kyselina tetrahýdrokřemičitá H^SiO^) je pokryt oktadecylovými skupinami a zbytkové silanoly jsou blokovány methylovými skupinami. S výhodou lze použít sorbent SEPARON SIX-C-18.
Eluovaný radioaktivní (6-3H)-thymin se po dozimetrii a stanovení radiochemické čistoty naředí na expediční koncentraci a přímo expeduje, popřípadě se použije pro další chemické syntézy.
Výhody nového postupu spočívají v tom, že výtěžek radioaktivního produktu je v dlouhodobém průměru o 20 % vyšší než při jeho izolaci shora uváděným způsobem preparační papírové chromatografie.
□
Zásadní výhodou izolace (6- H)-thyminu podle předmětného vynálezu je možnost získání produktu o vysoké radiochemické čistotě (min. 97 %) a bez přítomnosti chemických nečistot. To umožňuje aplikovat takto izolovaný (6- H)-thymin jako výchozí radioaktivní substrát pro pří3 3 právu (6r H)-thymidinu a (6- H)-5-fosfátů thymidinu vhodnými enzymatickými postupy, aniž dochází k inhibici katalýzujících enzymů. Další výhodou je zkrácení doby výrobního cyklu separace .
Dělení kapalinovou chromatografií probíhá v kapalném prostředí v uzavřeném poloautomatizovaném systému. Odpadá autoradiografie a sušení chromatografických papírů, přičemž snadno může dojít ke kontaminaci radioaktivitou. Tím se podstatně zvyšuje bezpečnost práce při přípravě (6-2H)-thyminu.
□
Pro objasnění je dále uveden přiklad postupu izolace radioaktivního (6- H)-thyminu z reakční směsi po hydrogenaci neaktivního 6-bromthyminu (30 mg) v prostředí 1M KOH (0,4 ml) plynným tritiem (185 GBq). Jako katalyzátor se používá 4 mg 10% Pd na aktivním uhlí. Po chemické syntéze se z reakční směsi lyofilizací odstraní labilně vázané tritlm. Katalyzátor se odstraní odstředěním. K reakční směsi se přidá 1M HC1 tak, aby konečná hodnota pH byla 6-7. Celková radioaktivita takto připraveného vzorku by byla 65 285 MBq, z toho 91,2 % (6-3H)-thyminu. Chemické složení této směsi bylo: 38,4 % thyminu, 56,3 % 6-bromthyminu, 5,3 % neidentifikovatelné látky. Vzhledem ke kapacitě dělicí kolony byla reakční směs rozdělena na 3 díly a každý dil byl vždy zvlášt separován. Kolona byla plněna tuzemským sorbentem SEPARON SIX-C-18 a před vnesením vzorku byla 120 minut promývána 0,6% vodným roztokem CjH^OH o průtoku 100 ml/h. Po vnesení vzorku se kolona promývá stejným roztokem o stejném průtoku. Při takto nastaveném průtoku se po 36 minutách začala eluovat radioaktivní látka neznámého složení, která absorbovala v oblasti UV 254 nm. Po 50 minutách se začala eluovat druhá radioaktivní látka neznámého složení, která též absorbuje v oblasti UV 254 nm. Po 87 minutách se začal eluovat (6- H)-thymin, jehož doba eluce trvala 23 minut. Radioaktivní (6- H)-thymin se eluoval v objemu 40 ml. Po 3 skončení eluce (6- H)-thyminu se kolona začala promývat 96% C2H5OH. Tento eluent vytěsnil nezreagovaný 6-bromthyrain po 187 minutách od začátku promývání. Průměrná radiochemická čistota 3 3 (6- H)-thyminu byla 97,3 %. Bylo získáno 52 052 MBq (6- H)-thyminu, což představuje výtěžek 87,4 %.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUZpůsob preparativní izolace (6- H)-thyminu z reakční směsi eluční vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii vyznačující se tím, že se směs sloučenin, vznikajících při přípravě (6-3H)-thyminu dělí na sloupci porézního iontoměniče na bázi silikagelu, jehož povrch je pokryt oktadecylovými skupinami za použiti 0,6% vodného roztoku čistého etanolu jako eluentu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS863318A CS255180B1 (cs) | 1986-05-07 | 1986-05-07 | Způsob preparativní izolace (6-3H)-thyminu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS863318A CS255180B1 (cs) | 1986-05-07 | 1986-05-07 | Způsob preparativní izolace (6-3H)-thyminu |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS331886A1 CS331886A1 (en) | 1987-06-11 |
| CS255180B1 true CS255180B1 (cs) | 1988-02-15 |
Family
ID=5372879
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS863318A CS255180B1 (cs) | 1986-05-07 | 1986-05-07 | Způsob preparativní izolace (6-3H)-thyminu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS255180B1 (cs) |
-
1986
- 1986-05-07 CS CS863318A patent/CS255180B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS331886A1 (en) | 1987-06-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fredman et al. | Separation of gangliosides on a new type of anion-exchange resin | |
| Wells et al. | The use of Sephadex for the removal of nonlipid contaminants from lipid extracts | |
| Dills Jr et al. | Purification of rabbit skeletal muscle protein kinase regulatory subunit using cyclic adenosine-3′: 5′-monophosphate affinity chromatography | |
| EP0064833B1 (en) | High pressure liquid affinity chromatography | |
| Pfeuffer et al. | 7-O-Hemisuccinyl-deacetyl forskolin-Sepharose: a novel affinity support for purification of adenylate cyclase | |
| US4138287A (en) | Purifying and isolating method for hepatitis virus to use in preparing vaccine | |
| Hearn et al. | Application of 1, 1′-Carbonyldiimidazone-activated agarose for the purification of proteins: II. The use of an activated matrix devoid of additional charged groups for the purification of thyroid proteins | |
| JPS6361056B2 (cs) | ||
| Ogino et al. | Isolation of an activator for prostaglandin hydroperoxidase from bovine vesicular gland cytosol and its identification as uric acid | |
| Jergil et al. | Biospecific affinity chromatography of an adenosine 3′: 5′-cyclic monophosphate-stimulated protein kinase (protamine kinase from trout testis) by using immobilized adenine nucleotides | |
| CS255180B1 (cs) | Způsob preparativní izolace (6-3H)-thyminu | |
| Ramseyer et al. | Purification of the cAMP receptor protein by affinity chromatography | |
| Hall et al. | Production of platelet thromboxane A2 inactivates purified human platelet thromboxane synthase | |
| EP1280592B1 (en) | Separation of glyco-containing entities | |
| DE2614405B2 (de) | Mit modifizierten silanen gepfropfte anorganische traegermaterialien | |
| Guest et al. | Methyl derivatives of folic acid as intermediates in the methylation of homocysteine by Escherichia coli | |
| CS255146B1 (cs) | Způsob preparativní izolace (methyl-3H) thymidinu a (6-3H) thymidinu | |
| JPS60992B2 (ja) | コホルマイシンおよび関連物質の分離法 | |
| CS254823B1 (cs) | Způsob preparativní izolace /methyl-^H/ thyminu eluční vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií | |
| Turkova et al. | Reversible and irreversible immobilization of car☐ ypeptidase y using biospecific adsorption | |
| Karube et al. | Photocontrol of affinity chromatography: I. Trypsin purification by photosensitive soybean trypsin inhibitor (STI) gel | |
| Dakour et al. | Detection and isolation of oligosaccharides with Lea and Leb blood group activities by affinity chromatography using monoclonal antibodies | |
| SU979354A1 (ru) | Способ получени сорбента | |
| Clonis et al. | High-performance dye-ligand chromatography | |
| CA2450231A1 (en) | System and method for the large scale labeling of compounds with radiohalogens |