CS255146B1 - Způsob preparativní izolace (methyl-3H) thymidinu a (6-3H) thymidinu - Google Patents
Způsob preparativní izolace (methyl-3H) thymidinu a (6-3H) thymidinu Download PDFInfo
- Publication number
- CS255146B1 CS255146B1 CS864275A CS427586A CS255146B1 CS 255146 B1 CS255146 B1 CS 255146B1 CS 864275 A CS864275 A CS 864275A CS 427586 A CS427586 A CS 427586A CS 255146 B1 CS255146 B1 CS 255146B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- thymidine
- methyl
- radioactive
- reaction mixture
- isolation
- Prior art date
Links
Landscapes
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(Metyl '-Jí!) -Thymidj r*, (6- JII) -thymidin jsou používány jako stopovací látky v biochemickém, biologickém a lékařském výzkumu. Cílem řešení je zvýšit výtěžky výše uváděných preparátů, zkrátit separační cyklus a zlepšit kvalitu výrobku. Vyšší účinek spočívá ve využití vysokoúčinné kapalinové chromatografie, což umožňuje získat radiochemicky čisté thymidiny o vyšším výtěžku v kratším separaéním cyklu. Uvedeným postupem bylo dosaženo 90% výtěžku radioaktivních thymidinu o radioohemické čistotě vyšší, jak 97 %.
Description
Vynález se týká preparativní izolace (metyl- H)-thymidinu a (6- H)-thymidinu z reakčních směsí po jejich přípravě enzymatickou syntézou.
Obvyklými způsoby izolace shora uvedených sloučenin z reakčních směsí po jejich enzymatické syntéze jsou metody preparativní papírové chromatografie. Zejména při přípravě (me3 3 tyl- H)-thymidinu respektive (6- H)-thymidinu o vysokých molových aktivitách má tento způsob izolace řadu nedostatků. Především dochází k izolačním ztrátám (až 30 %) a izolovaná sloučenina není chemicky čistá. Při dnešních požadavcích na vysokou molovou aktivitu sloučenin značených radionuklidem nejsou izolační ztráty při aplikaci standardních postupů z ekonomického hlediska již zanedbatelné.
Nízký stupěň chemické Čistoty preparátů, izolovaných preparativní papírovou chromatograf iií, je zapříčiněn zejména přítomnost výluhů z chromatografického papíru, případně nečistoty z rozpouštědel. Tyto nečistoty vadí při aplikacích těchto preparátů v biochemickém, biologické a lékařské výzkumu. Další nedostatek papírové chromatografie spadá do úseku bezpečnosti práce s radioaktivními sloučeninami. Manipulace š radioaktivními látkami při nanášení na chromatografické papíry, autoradiografie a eluce podstatně zvyšují možnost kontaminace osob i prostředí. Nutno ještě konstatovat, že preparativní papírová chromatografie je časově náročnou metodou.
Pro ilustraci uvádíme doposud používaný technologický postup izolace (metyl- H)-thyadi3 minu z reakční směsi po jeho enzymatické přípravě. Izolace (metyl- H)-thymidinu z reakční směsi se provede metodou papírové chromatografie na chromatografickém papíru W-3 v soustavě etylacetát nasycený vodou, thymidinu v této soustavě je 0,45. Identifikace radioaktivních sloučenin na chromatogramech se provede jejich porovnáním s neaktivními standardy. Proužek odpovídající radioaktivnímu thymidinu se vystřihne a eluuje redistilovanou vodou. Protože se nedosáhne požadované radiochemické čistoty, je třeba papírovou chromatografii zopakovat v jiné vyvíjecí soustavě, čímž se opět zvyšují ztráty izolovaného preparátu.
Podstata způsobu preparativní izolace (metyl-3H)-thymidinu o molové aktivitě 1,5-2 TBg/mmol, respektive (6-^)-thymidinu o molové aktivitě 0,060-1,00 TBg/mmol eluČní vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií podle předmětného vynálezu spočívá v tom, že · se směs sloučenin vznikajících při přípravě radioaktivních thymidinů dělí na sloupci hydrofobního specifického'sorbentu. Povrch sorbentu je pokryt oktadecylovými skupinami, s výhodou lze použít tuzemský sorbent SEPARON SIX S 18. K dělení se používá 0,6 % vodný roztok čistého 3 3 athanolu. Eluovaný radioaktivní (metyl- H)-thymidin respektive (6- H)-thymidin se po dozimetrii a stanovení radiochemické čistoty naředí na expediční koncentraci a přímo expeduje.
Výhody nového postupu spočívají v tom, že výtěžek radioaktivních thymidinů je v dlouhodobém průměru o 20 % vyšší, než při jejich izolaci shora uvedeným způsobem preparační papírové chromatografie.
Zásadní výhodou izolace uváděných thymidinů dle předmětného vynálezu je možnost získávání produktů o vysoké radiochemické Čistotě (min. 97-98 %) a bez přítomnosti chemických nečistot. Dále se získávají nazpět příslušné nezreagované. radioaktivní thyminy, které 3 3 se dají opět využít pro přípravu (metyl- H)-thymidinu, respektive (6- H)-thymidinu. Další výhodou je zkrácení doby separace, místo 24 hod. pouze 8 hod. Dělení kapalinovou chromatograf ií probíhá v kapalném prostředí v uzavřené poloautomatizovaném systému. Odpadá autoradiograf ie a sušení chromatografických papírů, kdy snadno může dojít ke kontaminaci.
. 3
Tím se podstatně zvyšuje bezpečnost práce při přípravě (metyl- H)-thymidinu nebo (6- H)-thymidinu.
Pro objasnění je dále uveden příklad separace radioaktivního (mety1-3H)-thymidinu z reakční směsi po jeho enzymatické syntéze.
Q Složení reakčni směsi před zahájením reakce bylo následující:
mg 2-Deoxy- -D-Ribosa-l-fosfát
0,5 mg (metyl- H)-thyminu, t j. 6.600 MBq
0,4 ml redestilované vody
0,2 ml enzymu 'Echerichia coli
Reakce probíhala při teplotě 37 °C ve vodním prostředí při pH 7,4 až 7,8. Průběh reakce byl kontrolován odběrem vzorků a jejich okamžitou analýzou na analytickém kapalinovém chromatografu.
Reakce byla ukončena, když složení reakčni směsi bylo:
71,8 % (metyl-3H)-thymidinu
21,2 % (metyl-3H)-thyminu % látky, jejichž chemickou podstatu se nepodařilo identifikovat.
Baňka s reakčni směsí byla ponořena do horké vody, aby došlo k vyvločkování enzymu, který se z reakčni směsi odstranil odstředěním. Sedlina byla 3x promyta a jednotlivé supernatanty byly spojeny. Celkový objem takto upravované reakčni směsi činil 8 ml. K separačnímu dělení byla použita skleněná kolona 350 x 15 mm, která byla naplněna tuzemským sorbentem SEPARON
SIXC 18. Kolona byla před vnesením vzorku 120 minut promývána 0,6 % vodným roztokem C2H5OH.
Průtok eluentu byl 100 ml/hod. Po vnesení vzorku byl kolona promývána eluentem o stejné rychlosti. Při tomto průtoku se nezreagovaný (metyl- H)-thymin začal eluovat po 87 minutách od začátku promývání. Čas potřebný k eluci radioaktivního thyminu činil 20 minut a získaná látka se nacházela ve 33 ml 0,6 % CoHe0H.
5
Radioaktivní (metyl- H)-thymidin se začal eluovat po 214 minutách (od začátku promývání) doba jeho eluce činila 45 minut, což představuje eluční objem 74 ml. Bylo získáno 4.375 MBq (metyl- H)-thymidinu o radioaktivní čistotě 97 %. Dále se získalo 1.490 MBq nezreagovaného 3 (metyl- H)-thyminu.
Jak jíž bylo dříve uvedeno enzymatická reakce proběhla na 71,8 %. To znamená, že v reakčni směsi bylo 4.738 MBq(metyl-3H)-thymidinu (71,8 % z 6,600 MBq). Bylo získáno 4.375 MBq radioaktivního thymidinu, což představuje výtěžek 92,3 %.
Claims (1)
- Způsob izolace (metyl- H)-thymidinu a (6- H)-thymidinu, z reakčni směsi eluční vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií, vyznačující se tím, že se směs sloučenin, vznikajících 3 3 při enzymatické přípravě (metyl- H)-thymidinu respektive (6- H)-thymidinu dělí na sloupci porézního hydrofóbního iontoměniče na bázi silikagelu, jehož povrch je pokryt oktadecylovými skupinami za použití eluentu 0,6 % vodný roztok čistého ethanolu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS864275A CS255146B1 (cs) | 1986-06-10 | 1986-06-10 | Způsob preparativní izolace (methyl-3H) thymidinu a (6-3H) thymidinu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS864275A CS255146B1 (cs) | 1986-06-10 | 1986-06-10 | Způsob preparativní izolace (methyl-3H) thymidinu a (6-3H) thymidinu |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS427586A1 CS427586A1 (en) | 1987-06-11 |
| CS255146B1 true CS255146B1 (cs) | 1988-02-15 |
Family
ID=5385123
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS864275A CS255146B1 (cs) | 1986-06-10 | 1986-06-10 | Způsob preparativní izolace (methyl-3H) thymidinu a (6-3H) thymidinu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS255146B1 (cs) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1916003A1 (en) * | 2006-10-25 | 2008-04-30 | Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft | Thymidine analogs for imaging |
-
1986
- 1986-06-10 CS CS864275A patent/CS255146B1/cs unknown
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1916003A1 (en) * | 2006-10-25 | 2008-04-30 | Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft | Thymidine analogs for imaging |
| WO2008049644A1 (en) * | 2006-10-25 | 2008-05-02 | Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft | Thymidine analogs for imaging |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS427586A1 (en) | 1987-06-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Pfeuffer et al. | 7-O-Hemisuccinyl-deacetyl forskolin-Sepharose: a novel affinity support for purification of adenylate cyclase | |
| Russell et al. | Separate phosphodiesterases for the hydrolysis of cyclic adenosine 3′, 5′-monophosphate and cyclic guanosine 3′, 5′-monophosphate in rat liver | |
| Wang et al. | Biosynthesis of δ-aminolevulinate in greening barley leaves IV. Isolation of three soluble enzymes required for the conversion of glutamate to δ-aminolevulinate | |
| Henry et al. | Application of a new chemically bonded, superficially porous anion-exchange packing to nucleotide analysis | |
| Dräger | Identification and quantification of calystegines, polyhydroxyl nortropane alkaloids | |
| Cramer et al. | Tandem use of carboxypeptidase y reactor and displacement chromatograph for peptide synthesis | |
| Oates et al. | The use of gas–liquid chromatography in the analysis of neutral monosaccharides in hydrolysates of gastric mucopolysaccharides | |
| CS255146B1 (cs) | Způsob preparativní izolace (methyl-3H) thymidinu a (6-3H) thymidinu | |
| Robinson et al. | Pilot scale affinity chromatography: Purification of β‐galactosidase | |
| Sjövall et al. | General and selective isolation procedures for GC/MS analysis of steroids in tissues and body fluids | |
| Dahlqvist | The separation of intestinal invertase and three different intestinal maltases on TEAE-cellulose by gradient elution, frontal analysis and mutual displacement chromatography | |
| CS255180B1 (cs) | Způsob preparativní izolace (6-3H)-thyminu | |
| McLaughlin et al. | The use of high-performance liquid chromatography in the isolation and analysis of oligoribonucleotides synthesized by the T4 RNA ligase reaction | |
| William Jr et al. | Preparation and purification of carbamylated intermediates of human hemoglobin | |
| CS254823B1 (cs) | Způsob preparativní izolace /methyl-^H/ thyminu eluční vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií | |
| Counis et al. | Adenylate cyclase assay with [α-32P] ATP as substrate: A simple modification for lowering blanks | |
| Turkova et al. | Reversible and irreversible immobilization of car☐ ypeptidase y using biospecific adsorption | |
| Tiselius | A chromatographic separation of the different forms of vitamin B6 | |
| Palla | Isolation and identification of phenolic glucosides in liquid sugars from cane molasses | |
| Pimenov et al. | Simultaneous separation of ribonucleotides, nucleosides and nitrogen bases by ion-pair reversed-phase high-performance liquid chromatography on columns with radial compression | |
| Akiyama et al. | High-performance liquid chromatographic determination of sugars in an infusion and soft drinks using a silica-based 3-morpholinopropyl-bonded stationary phase | |
| CS270774B1 (cs) | Způsob izolace /5- H/uridiriu z reakční směsi | |
| Clonis et al. | High-performance dye-ligand chromatography | |
| Brodelius et al. | The synthesis of 8-(6-aminohexyl)-amino-GMP and its applications as a general ligand in affinity chromatography | |
| Holton et al. | The rapid separation and isolation of mono-and oligo-nucleotides by high speed liquid chromatography: An ion exchange, reversed-phase system |