CS254823B1 - Způsob preparativní izolace /methyl-^H/ thyminu eluční vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií - Google Patents
Způsob preparativní izolace /methyl-^H/ thyminu eluční vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií Download PDFInfo
- Publication number
- CS254823B1 CS254823B1 CS859675A CS967585A CS254823B1 CS 254823 B1 CS254823 B1 CS 254823B1 CS 859675 A CS859675 A CS 859675A CS 967585 A CS967585 A CS 967585A CS 254823 B1 CS254823 B1 CS 254823B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- methyl
- thymine
- liquid chromatography
- preparative
- insulation
- Prior art date
Links
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
/methyl-^H/ thymin je používán jako
stopovací látka v biologickém, biochemickém
a lékařském výzkumu, dále^jako výchozí
látka pro syntézu složitějších biologicky
aktivních látek, ti. /methyl-^H/ thyadinu,
resp. 5 -fosfátu /methyl-lH/ thymidinu.
Cílem řešení je zajistit vyšší výtěžky
/methyl-^H/ thyminu, zlepšit kvalitu výsledného
produktu a snížit časovou náročnost
Ž
eho preparativní izolace, při využití eluní
vysokoúčinné kapalinové chromatografie.
Uvedeným postupem bylo dosaženo radioaktivního
výtěžku 85 až 90 % /methyl-3H/ thyminu,
vztaženo na radioaktivitu výchozí reakční
směsi· Radiochemická a chemická čistota
je 98 %.
Description
Vynález se týká způsobu praparativní izolace /methyl- H/ thyminu metodou eluční vysokoúčinné kapalinové chromatografie.
Dosud známá metoda izolace uvedené sloučeniny z reakční směsi po její syntéze je metoda preparativní papírové chromatografie (Hais I.M., Macek K. a kol. : Papírová chromatografie, NĚSAV Praha 1959, str. 532 - 535). Zejména při přípravě /methyl- H/ thyminu o vysoké molové aktivitě má tento způsob izolace řadu nedostatků. Především dochází k izolačním ztrátám (30 % hmotnostních) a izolovaná sloučenina není chemicky čistá. Příprava /methyl-^H/ thyminu a dosud používaná metoda jeho izolace je popsána v AO 192 238. Nízký stupeň chemické čistoty preparátů izolovaných preparativní papírovou chromatografií je zapříčiněn přítomností výluhu z chromatografického papíru, případně nečistoty z rozpouštědel. Při případné aplikaci /methyl-^H/ thyminu, obsahující chemické nečistoty, na př. pro enzymatickou syntézu /methyl- H/ thymidinu,
3 /methyl- H/ thymidin monofosfátu a /methyl- H/ thymidin trifosfátu nelze vyloučit úplnou ztrátu katalytické účinnosti enzymových preparátů (Výzkumná zpráva ÚVVVR, Ing.3.Filip, Ing.L.Boháček, 1979). Další nedostatek papírové chromatografie spadá do oblasti bezpečnosti práce s radioaktivními látkami. Manipulace s radioaktivními sloučeninami při nanášení na chromatografické papíry vlastní chromatografie, autoradiografie a eluce zvyšují možnost kontaminace prostředí i osob.
Dosud používaný technologický způsob izolace /methyl-'5H/ thyminu z reakční směsi se provede metodou papírové chromatografie na chromatografickém papíru Whatmann-3 v soustavě butanol - propanol - amoniak - voda (7:5:7:2), rozdělovači koeficient Rp thyminu v této soustavě je 0,45. Identifikace radioaktivních sloučenin na chromatogramech se provede jejich porovnáním s neaktivními standardy. Pruh odpovídající radioaktivnímu thyminu se vystřihne a eluuje redestilovanou vodou. Protože se nedosáhne požadované radiochemické čistoty, je třeba papírovou chromatografii zopakovat v jiné vyvíjející soustavě, čímž se dále zvyšují ztráty izolovaného preparátu.
Výše uvedené nedostatky nená způsob preparativní izolace /methyl-^H/ thyminu metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie, jehož podstata spočívá v tom, že se směs sloučenin, vznikajících při přípravě radioaktivního /methyl-^H/ thyminu dělí na sloupci hydrofobního sférického sorbentů za použití vodného roztoku čistého etanolu o objemové koncentraci jako eluentu.
- 2 284 «23
Povrch silikagelu (kyselina tetrahydrokřemičitá H^SiO^) je pokryt oktadecylovými skupinami a zbytkové silanoly jsou blokovány methylovými skupinami. Eluovaný radioaktivní /methyl-^H/ thymin se po dozimetrii a stanovení radiochemické čistoty naředí na expediční koncentraci a přímo expeduje, respektive se použije pro další chemické syntézy.
Výhody nového postupu spočívají v tom, že výtěžek radioaktivního produktu je v dlouhodobém průměru o 20% vyšší než při izolaci výše uváděným způsobem preparativrií papírové chromatografie.
Přínosem vynálezu je nalezení takového postupu, který umožňuje získat produkt o vysoké radiochemické čistotě (minimálně 97%) a bez přítomnosti chemických nečistot. K přínosu vynálezu patří i to, že výchozí substráty při přípravě /methyl-^H/ thyminu chemickou syntézou (na př. formyluracil) se získávají zpět bez chemické kontaminace. Dělení kapalinovou chromatografií probíhá v kapalném prostředí v uzavřeném poloautomatizovaném systému. Odpadá autoradiografie a sušení chromatografických papírů, při nichž snadno může dojít ke kontaminaci radioaktivitou, tím se podstatně zvyšuje bezpečnost práce při přípravě /methyl-^H/ thyminu.
Kde není v textu uvedena bližší specifikace u výrazu %, jedná se o radiochemickou čistotu. Radiochemická čistota je vyjádřena poměrným vztahem mezi skutečným a teoretickým obsahem stanovované látky.
Příklad :
Jedná se o izolaci /methyl-^H/ thyminu z reakční směsi po hydrogenaci neaktivního 5 mg formyluracilu v prostředí 0,4 ml 0,1 M HC1, plynným tritiem. Jako katalyzátoru se používá 10% Pd na aktivním uhlí (AO 192 238). Kromě uvedených látek obsahuje reakční směs ještě vzniklý hydroxymethyluracil. Po chemické syntéze se z reakční směsi odstředí katalyzátor s aktivním uhlím. K reak ční směsi se přidá 0,1 M HaOH pro úpravu pH na hodnotu 6-7. Takto upravená reakční směs v objemu 5 ml se vnášecím zařízením vnese na kolonu 15 x 450 mm. Kolona je plněna tuzemským sorbentem SEPAROH SIX-C-18. Po vnesení vzorku se kolona promývá vodným roztokem čistého etanolu v objemové koncentraci 1,5% a průtoku 100 ml/hod. Při takto nastaveném průtoku se po 50 - 52 minutách
254 823 od začátku promývání začíná eluovat neaktivní formyluracil. Tato látka se eluuje 7 minut v objemu 14 ml. Po 60 minutách od začátku promývání se eluuje neaktivní hydroxymethyluracil, který se uluuje též 7 minut v objemu 14 ml.
Po 102 minutách se začíná eluovat /ιηεΐΓψΙ-^Η/ thymin. Jeho doba eluce činí 14 minut. Radioaktivní /methyl-5H/ thymin se eluuje v objemu 28 ml. Radiochemická čistota takto získaného /methyl-'5H/ thyminu je 98%. Ha kolonu byla nanesena reakční směs o radioaktivitě 15 760 MBq. Z kolony bylo získáno 14 170 MBq /methyl-^H/ thyminu, což představuje výtěžek 89,9%.
Tř
Claims (1)
- Způsob preparativní izolace /methyl- H/ thyminu eluční vysokoučinnou kapalinovou chromatografií s etanolem jako rozpouštědlem, vyznačený tím, že se směs sloučenin vznikajících při přípravě radioaktivního /methyl-^H/ thyminu dělí na sloupci porézního hydrofóbniho iontoměniče na bázi silikagelu, jehož povrch je pokryt oktadecylovými skupinami, při čemž se eluce provádí za použití vodného roztoku čistého etanolu v objemové koncentraci
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS859675A CS254823B1 (cs) | 1985-12-21 | 1985-12-21 | Způsob preparativní izolace /methyl-^H/ thyminu eluční vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS859675A CS254823B1 (cs) | 1985-12-21 | 1985-12-21 | Způsob preparativní izolace /methyl-^H/ thyminu eluční vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS967585A1 CS967585A1 (en) | 1987-06-11 |
| CS254823B1 true CS254823B1 (cs) | 1988-02-15 |
Family
ID=5446008
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS859675A CS254823B1 (cs) | 1985-12-21 | 1985-12-21 | Způsob preparativní izolace /methyl-^H/ thyminu eluční vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS254823B1 (cs) |
-
1985
- 1985-12-21 CS CS859675A patent/CS254823B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS967585A1 (en) | 1987-06-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wall | Simultaneous separation of purines, pyrimidines, amino acids, and other nitrogenous compounds | |
| US4245005A (en) | Pellicular coated support and method | |
| US4430496A (en) | Strong anion exchange composition and methods | |
| US4138287A (en) | Purifying and isolating method for hepatitis virus to use in preparing vaccine | |
| Schultz et al. | [2] Separation and purification of cyclic nucleotides by ion-exchange resin column chromatography | |
| Branchini et al. | A convenient affinity chromatography-based purification of firefly luciferase | |
| CS254823B1 (cs) | Způsob preparativní izolace /methyl-^H/ thyminu eluční vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií | |
| Jergil et al. | Biospecific affinity chromatography of an adenosine 3′: 5′-cyclic monophosphate-stimulated protein kinase (protamine kinase from trout testis) by using immobilized adenine nucleotides | |
| Robinson et al. | Pilot scale affinity chromatography: Purification of β‐galactosidase | |
| WO2003037914A3 (en) | High throughput isolation of proteins by charge induction chromatography | |
| Zolotarev et al. | Resolution of tritium-labelled amino acid racemates by ligand-exchange chromatography: II. l-hydroxyproine-and l-phenylalanine-modified resins for the resolution of common α-amino acids | |
| Abi et al. | Continuous enzymatic production and adsorption of laminaribiose in packed bed reactors | |
| CS255146B1 (cs) | Způsob preparativní izolace (methyl-3H) thymidinu a (6-3H) thymidinu | |
| Chandler et al. | Studies on the de novo biosynthesis of NAD in Escherichia coli: II. Quantitative method for isolating quinolinic acid from biological materials | |
| CS255180B1 (cs) | Způsob preparativní izolace (6-3H)-thyminu | |
| WALSH et al. | CHARACTERIZATION OF A CHEMICALLY CONJUGATED β‐GALACTOSIDASE BIOREACTOR 1 | |
| US5843731A (en) | Method for purifying plasmid DNA on calcium phosphate compound | |
| Bernofsky et al. | Liquid chromatography of pyridine nucleotides and associated compounds and isolation of several analogs of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate | |
| CS270774B1 (cs) | Způsob izolace /5- H/uridiriu z reakční směsi | |
| Turkova et al. | Reversible and irreversible immobilization of car☐ ypeptidase y using biospecific adsorption | |
| Counis et al. | Adenylate cyclase assay with [α-32P] ATP as substrate: A simple modification for lowering blanks | |
| Holton et al. | The rapid separation and isolation of mono-and oligo-nucleotides by high speed liquid chromatography: An ion exchange, reversed-phase system | |
| Burton | Affinity chromatography | |
| Sada | Engineering aspects of bioaffinity separation | |
| Bresler et al. | Adsorption chromatography of viruses |