CS254706B1 - Způsob přípravy imunologicky funkčních frakcí z lidských a zvířecích zhoubných nádorů - Google Patents

Způsob přípravy imunologicky funkčních frakcí z lidských a zvířecích zhoubných nádorů Download PDF

Info

Publication number
CS254706B1
CS254706B1 CS84453A CS45384A CS254706B1 CS 254706 B1 CS254706 B1 CS 254706B1 CS 84453 A CS84453 A CS 84453A CS 45384 A CS45384 A CS 45384A CS 254706 B1 CS254706 B1 CS 254706B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
fractions
gel chromatography
column
high pressure
collected
Prior art date
Application number
CS84453A
Other languages
English (en)
Other versions
CS45384A1 (en
Inventor
Anna Jandova
Jiri Coupek
Jaroslav Sanitrak
Karel Motycka
Otakar Mach
Jan Pekarek
Original Assignee
Anna Jandova
Jiri Coupek
Jaroslav Sanitrak
Karel Motycka
Otakar Mach
Jan Pekarek
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Anna Jandova, Jiri Coupek, Jaroslav Sanitrak, Karel Motycka, Otakar Mach, Jan Pekarek filed Critical Anna Jandova
Priority to CS84453A priority Critical patent/CS254706B1/cs
Publication of CS45384A1 publication Critical patent/CS45384A1/cs
Publication of CS254706B1 publication Critical patent/CS254706B1/cs

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Způsob spočívá v tom, že se supernatant po poslední centrifugaci při zatížení 90 až 110 x 10^ g extrahuje fenolem v objemovém poměru 1:0,5 až 1,5 v přítomnosti ionogenního tensidu a 8- -hydroxychinolinu při pH 7 až 7,5 nejméně dvakrát, získaná vodná fáze obsahující směs cytoplazmatických ribonukleových kyselin se rozdělí afinitní chromatografií na koloně plněné celulózou s navázanými oligonukleotidy deoxythimidinu, polyadenylované ribonukleové kyseliny se zachytí na koloně a eluují se vodou, vodný eluát se dále dělí vysokotlakou gelovou chromatografii, sbírají se frakce o mole5 4 kulové hmotnosti 3.10 az 1,5.10 , ktere jsou orgánově specificky aktivní v různých, převážně imunologických testech. Získané frakce jsou použitelné jako antigeny k imunizaci a dále v různých imunologických testech pro buňkami médiovanou imunitu, pro protisměrnou elektroforézu na agarozovém gelu, elektrofokusaci, pro značení radioizotopy, ke studiu hormonálních receptorů, pro experimentální práce v cytogenetice a genetickém inženýrství s cílem pomocí vybraných metod a antigenů stanovit včasnou diagnostiku a monitorování onemocnění.

Description

Vynález se týká zpracování vzorků lidské i zvířecí nádorové a kontrolní takzvané zdravé tkáně. Výsledkem je imunologicky účinná antigenní frakce.
Antigen, který se získává z lidské i zvířecí nádorové tkáně i z tkání zdravých jedinců, se dále používá v různých testech. Literární údaje o způsobu, jakým se antigen připravuje, jsou často rozporné a nejednotné. Liší se a není sjednocen postup odběru materiálu při operaci. Nebývá zajištěn přesný odběr materiálu histopatologem erudovaným v příslušném oboru, například materiál pro antigen plicníbyměl odebírat histopatolog pro obor plicní, pro gynekologické antigeny z oboru gynekologie atd. Vzorky nejsou uloženy v jednotné bance za jednotných podmínek zmražení, pokud nejsou ihned zpracovány. Způsob centrífugace bývá různý (rozličné g). Získané frakce nemají standardně upravené množství proteinů a obsah imuniaktivní složky je v takto připravených preparátech různý.
Podle dosavadní praxe si jednotlivá pracoviště vyrábějí z nádorů tzv. antigeny samostatně a nejednotně. Prozatím nedošlo k dohodě o sjednocení výroby. Výsledky různých testů s takovými antigeny jsou pak sice publikovatelné, ale nesrovnatelné
Způsob přípravy imunologicky funkčních frakcí získaných ze zhoubných nádorů, z šedé kůry mozkové u schizofreniků nebo ze srdečního svalu s infarktem myokardu postupnou centrifugací cytozolu a pomocí vysokotlaké gelové chromatografie podle vynálezu spočívá v tom, ze se suspernatant po poslední centrifugací pri zatizeni 90 az 110 x 10 g extrahuje fenolem v objemovém poměru 1:0,5 až 1,5 v přítomnosti iorogenního tensidu a 8 hydroxychinolinu při pil 7 až 7,5 nejméně dvakrát, získaná vodná táze obsahující směs cytoplasmatických ribonukleových kyselin se rozdělí afinitní chromatografií na koloně plněné celulózou s navázanými oligonukleotidy deoxythimidinu, polyadenylované ribonukleové kyseliny se zachytí na koloně a eluují se vodou, vodný eluát se dále dělí vysokotlakou gelovou chromatografií, sbírají se frakce o molekulové hmotnosti 3.10 až 1,5.10 , které jsou orgánově specificky aktivní v různých testech.
Jako mobilní fáze pro vysokotlakou gelovou chromatografií se používá fyziologický roztok, jako stacionární fáze se používá suspenzní kopolymer 2-hydroxyethylmethakrylátu £ ethylendiroethakrylátem s vylučovacím limitem kolony, vyjádřeným molekulovou hmotností
3.10 , velikost partikuli gelu je 32 az 40 yum, k detekci se používá diferenciální refraktonietr a UV spektrofotometr ε variabilní vlnovou délkou.
Na základě všech dosavadních zkušeností vypracovali autoři vynálezu způsob separace imunologicky aktivních frakcí z lidských i zvířecích zhoubných nádorů, který využívá k přípravě tuzemské dostupné techniky, sjednocuje postup pří manipulaci s tkáněmi a vylučuje příměs proteinů, protože separuje pouze tělu vlastní nebo cizí ribonukleové kyseliny a sice v definovatelném množství (ng na ml).
Způsob podle vynálezu vede k získání materiálu s vyšší selektivitou a imunologickou aktivitou při menší spotřebě biologického výchozího materiálu a významně nižším šumem akcesornich proteinových makromolekul. Na rozdíl od jiných způsobu přípravy imunologicky aktivních frakcí se podle vynálezu získá orgánově specifický antigen.
Získané frakce jsou použitelné jako antigeny k imunizaci a dále v různých imunologických testech pro buňkami mediovanou imunitu, pro protisměrnou elektroforézu na agarozovém gelu, ciektrofokusaci, pro značeni radioizotopy, ke studiu hormonálních receptorů, pro experimentální práce v cytogenetice a genetickém inženýrství s cílem pomocí vybraných metod a antigenů stanovit včasnou diagnostiku a monitorování choroby.
Získané frakce jsou velj.ee časnými (až několik let před vypuknutím onemocnění) pozitivními markéry lidskému tělu . ti. ribonukleové kyseliny, která pravděpodobně kontaminuje lidské i zvířecí nádory, š.-dou kůru mozkovou u schizofreniků, srdeční sval postižený infarktem myokardu, jakož i endometrium žen, které potrácejí z gynekologicky nezjistitelné příčiny a u nichž byla vyloučena jiná virová onemocněni.
Způsob přípravy imunologicky funkčních frakcí je blíže osvětlen v příkladu, který nijak neomezuje předmět vynálezu.
Příprava imunoaktivní frakce z karcinomu mammy.
Biologický materiál se odebere peroperačně za spolupráce histopatologa do sterilní nádoby, uložené v suchém ledu. Po rozmražení se zbaví tuku, eventuálně nekrotických částí, po rozstříhání se homogenizuje a homogenát se třikrát kryolyzuje při -60 a +40 °C. Poté se centrifuguje při zatížení 3,5.10^g při teplotě +4 °C po dobu 40 min. Supernatant se znovu podrobí centrifugaci při zatížení 10 g při teplotě +4 °C po dobu 60 min. Získaný spernatant, který obsahuje bílkoviny, nukleoproteiny, nukleové kyseliny a nízkomolekulární komponenty, se 15 min při teplotě místnosti extrahuje fenolem v objemovém poměru 1:1 v přítomnosti natriumdodecylsulfátu o hmotnostní koncentraci 1 % z 0,01 % hmot. 8-hydroxychinolinu a pH se upraví na 7 až 7,5.
Pomocí centrifugy při zařízení 3.10 g se oddělí vodná fáze, která se opět třepe s fenolem. Získaná vodná fáze obsahující směs cytoplasmatických ribonukleových kyselin se dále dělí na koloně naplněné oligo dT celulózou (celulóza s navázanými oligonukleotidy deoxyth.imidinu), která má afinitu k polyadenylovaným zbytkům, charakteristickým pro informační ribonukleové kyseliny. Na koloně zachycené polyadenylované ribonukleové kyseliny se promyjí vodou, vodný eluát se dále purifikuje vysokotlakou gelovou chromatografii. Kolona je naplněna gelem Separon--Hema-300 glc který je suspenzním kopolymerem 2--hydroxyethyl-methakrylátu 5 a ethylendimethakrylátu s vylučovacím limitem 3.10 .
Detekce se provádí pomocí diferenciálního refraktometru R 043 a UV průtokového spektrofotometru s variabilní vlnovou délkou. Jako mobilní fáze se používá fyziologický roztok. Imunologicky aktivní a orgánově specifický antigen se získá v oblasti odebraného eluátu az 50 cm pri vlnové délce 340 nm.
Stejným způsobem se odebírá materiál z jakékoliv experimentální i lidské nádorové i kontrolní zdravé tkáně, z šedé kůry mozkové schizofreniků i zdravých osob, se srdečního svalu s infarktem myokardu i zdravého, přičemž u potrácejících žen se použije jako antigen materiál zhotovený z lidského karcinomu endometria a stejným způsobem se zpracuje.

Claims (3)

1. Způsob přípravy imunologicky funkčních frakcí z lidských a zvířecích zhoubných nádorů, popřípadě z šedé kůry mozkové schizofreniků nebo ze srdečního svalu s infarktem myokardu, postupnou centrifugaci cytozolu a pomocí vysokotlaké gelové chromatografie, vyzná-3 rující se tím, že se supernatant po poslední centrifugaci při zatížení 90 az 110.10 g extrahuje fenolem v objemovém poměru 1:0,5 až 1,5 v přítomnosti ionogenního tensidu a 8-hydroxychinolinu při pH 7 až 7,5 nejméně dvakrát, získaná vodná fáze obsahující směs cytoplasmatických ribonukleových kyselin se rozdělí afinitní chromatografii na koloně plněné celulózou s navázanými oligonukleotidy deoxythimidinu, polyadenylované ribonukleové kyseliny se zachytí na koloně a eluují se vodou, vodný eluát se dále dělí vysokotlakou gelovou chromatografii a sbírají se frakce o molekulové hmotnosti 3.±0J až 1,5.10^, které jsou imunologicky a orgánově specificky aktivní. 2
2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že jako mobilní fáze pro vysokotlakou gelovou chromatografii se používá fyziologický roztok, jako stacionární fáze se používá suspenzní kopolymer 2-hydroxyethylfliethak.rylátu s ethylendimethakrylátem s vylučovacím limitem
5 1
3 ...Ί0 o velikosti částic gelu 32 až 40 /Um.
CS84453A 1984-01-19 1984-01-19 Způsob přípravy imunologicky funkčních frakcí z lidských a zvířecích zhoubných nádorů CS254706B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS84453A CS254706B1 (cs) 1984-01-19 1984-01-19 Způsob přípravy imunologicky funkčních frakcí z lidských a zvířecích zhoubných nádorů

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS84453A CS254706B1 (cs) 1984-01-19 1984-01-19 Způsob přípravy imunologicky funkčních frakcí z lidských a zvířecích zhoubných nádorů

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS45384A1 CS45384A1 (en) 1987-06-11
CS254706B1 true CS254706B1 (cs) 1988-01-15

Family

ID=5336618

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS84453A CS254706B1 (cs) 1984-01-19 1984-01-19 Způsob přípravy imunologicky funkčních frakcí z lidských a zvířecích zhoubných nádorů

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS254706B1 (cs)

Also Published As

Publication number Publication date
CS45384A1 (en) 1987-06-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Geffen et al. Immunohistochemical localization of protein components of catecholamine storage vesicles
Nachman et al. Characterization of human platelet vascular permeability-enhancing activity
Cook et al. The electrophoretic mobility of normal and leukaemic cells of mice
CA2264277A1 (en) Methods and kits for obtaining and assaying mammary fluid samples for breast diseases, including cancer
JP2001527524A (ja) ヒト乳房腫瘍特異性タンパク質
Wesierska-Gadek et al. Antibodies to nuclear lamins in autoimmune liver disease
Okamoto et al. Expression of human placenta alkaline phosphatase in placenta during pregnancy
IE900589L (en) Pancreatic islet cell antigens obtained by molecular cloning
US4196186A (en) Method for diagnosing malignant gliol brain tumors
DE69933679T2 (de) Darstellung des profils und katalogisierung von exprimierten proteinmarkern
US5616685A (en) snRNP-A antigen and fragments thereof
PIAZOLO et al. Isolation and purification of a calcium-binding protein from human tissues
Lokeshwar et al. Isolation of a Prostate Carcinoma Cell Proliferation-inhibiting Factor from Human Seminal Plasma and Its Similarity to Transforming Growth Factor β] fr1
NO803910L (no) Fremgangsmaate for immunologisk paavisning av kreft i vev hos mennesker.
US4624932A (en) Recognins and their chemoreciprocals
CS254706B1 (cs) Způsob přípravy imunologicky funkčních frakcí z lidských a zvířecích zhoubných nádorů
Ove et al. Separable DNA polymerase activities in host liver and Morris hepatomas
Diederich et al. The effects of mercury and other resgents on Phosphoglycerate mutase− 2, 3− diphosphoglycerate Phosphatase from kidney, muscle and other tissues
Vissac et al. Presence of BRCA1 and BRCA2 proteins in human milk fat globules after delivery
JP2001511019A (ja) 表皮の角質層に発現されるポリペプチドとその用途
EP0007214A1 (en) Product for detecting the presence of cancerous or malignant tumor cells
DE69119591T2 (de) Das von mca-28a32 erkannte antigen
Barraco et al. Paleobiochemical analysis of an Egyptian mummy
US6664378B1 (en) Urogenital carcinoma anti-TLP peptide antibodies, related kits and methods
JP7263574B2 (ja) 角栓形成予防・改善剤のスクリーニング方法