CS254706B1 - Process for preparing immunologic functional fractions from humon and animal tumors - Google Patents
Process for preparing immunologic functional fractions from humon and animal tumors Download PDFInfo
- Publication number
- CS254706B1 CS254706B1 CS84453A CS45384A CS254706B1 CS 254706 B1 CS254706 B1 CS 254706B1 CS 84453 A CS84453 A CS 84453A CS 45384 A CS45384 A CS 45384A CS 254706 B1 CS254706 B1 CS 254706B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- fractions
- gel chromatography
- column
- high pressure
- collected
- Prior art date
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims description 6
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 title abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 14
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 claims abstract description 9
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 6
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims abstract description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000005725 8-Hydroxyquinoline Substances 0.000 claims abstract description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims abstract description 3
- 229960003540 oxyquinoline Drugs 0.000 claims abstract description 3
- MCJGNVYPOGVAJF-UHFFFAOYSA-N quinolin-8-ol Chemical compound C1=CN=C2C(O)=CC=CC2=C1 MCJGNVYPOGVAJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 239000002563 ionic surfactant Substances 0.000 claims abstract 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 claims description 4
- 230000000698 schizophrenic effect Effects 0.000 claims description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 claims description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 3
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 3
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 claims description 2
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 claims description 2
- STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol dimethacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCOC(=O)C(C)=C STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000007863 gel particle Substances 0.000 claims description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 claims description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 claims 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 claims 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 claims 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 4
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 abstract description 2
- 230000002559 cytogenic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 abstract description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 abstract description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 abstract description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 abstract description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 abstract description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 abstract description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 abstract 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 abstract 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N Hydroxyethyl methacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCO WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 108091008039 hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Způsob spočívá v tom, že se supernatant po poslední centrifugaci při zatížení 90 až 110 x 10^ g extrahuje fenolem v objemovém poměru 1:0,5 až 1,5 v přítomnosti ionogenního tensidu a 8- -hydroxychinolinu při pH 7 až 7,5 nejméně dvakrát, získaná vodná fáze obsahující směs cytoplazmatických ribonukleových kyselin se rozdělí afinitní chromatografií na koloně plněné celulózou s navázanými oligonukleotidy deoxythimidinu, polyadenylované ribonukleové kyseliny se zachytí na koloně a eluují se vodou, vodný eluát se dále dělí vysokotlakou gelovou chromatografii, sbírají se frakce o mole5 4 kulové hmotnosti 3.10 az 1,5.10 , ktere jsou orgánově specificky aktivní v různých, převážně imunologických testech. Získané frakce jsou použitelné jako antigeny k imunizaci a dále v různých imunologických testech pro buňkami médiovanou imunitu, pro protisměrnou elektroforézu na agarozovém gelu, elektrofokusaci, pro značení radioizotopy, ke studiu hormonálních receptorů, pro experimentální práce v cytogenetice a genetickém inženýrství s cílem pomocí vybraných metod a antigenů stanovit včasnou diagnostiku a monitorování onemocnění.The method involves the supernatant after the last centrifugation under load 90-110 x 10 µg extracted with phenol in a volume ratio of 1: 0.5 to 1.5 in the presence of ionic surfactant and 8- -hydroxyquinoline at pH 7 to 7.5 at least twice, the obtained aqueous phase containing a mixture of cytoplasmic ribonuclei acids are separated by affinity chromatography on cellulose-filled column deoxythimidine oligonucleotides polyadenylated ribonucleic acids collected on the column and eluted with water, aqueous the eluate is further divided by high pressure gel chromatography, mole 5 fractions are collected 4 spherical mass 3.10 to 1.5.10, which are organ specific in different predominantly immunological tests. The fractions obtained are useful as antigens for immunization and further in various immunological tests for cells by media immunity, for antisense electrophoresis on agarose gel, electrofocusing, pro radioisotope labeling, to study hormonal receptors, for experimental work in cytogenetics and genetic engineering with the help of selected methods and antigens provide early diagnosis and monitoring disease.
Description
Vynález se týká zpracování vzorků lidské i zvířecí nádorové a kontrolní takzvané zdravé tkáně. Výsledkem je imunologicky účinná antigenní frakce.The invention relates to the processing of samples of human and animal tumor and control so-called healthy tissues. The result is an immunologically active antigen fraction.
Antigen, který se získává z lidské i zvířecí nádorové tkáně i z tkání zdravých jedinců, se dále používá v různých testech. Literární údaje o způsobu, jakým se antigen připravuje, jsou často rozporné a nejednotné. Liší se a není sjednocen postup odběru materiálu při operaci. Nebývá zajištěn přesný odběr materiálu histopatologem erudovaným v příslušném oboru, například materiál pro antigen plicníbyměl odebírat histopatolog pro obor plicní, pro gynekologické antigeny z oboru gynekologie atd. Vzorky nejsou uloženy v jednotné bance za jednotných podmínek zmražení, pokud nejsou ihned zpracovány. Způsob centrífugace bývá různý (rozličné g). Získané frakce nemají standardně upravené množství proteinů a obsah imuniaktivní složky je v takto připravených preparátech různý.The antigen, which is derived from human and animal tumor tissue as well as from tissues of healthy individuals, is further used in various assays. The literature on how antigen is prepared is often contradictory and inconsistent. The procedure for material removal is different and it is not unified. Accurate collection of material by a histopathologist skilled in the art is not assured, for example, lung antigen material should have been collected by a lung histopathologist, gynecological antigens from the gynecology field, etc. Samples are not stored in a single bank under uniform freezing conditions unless processed immediately. The method of centrifugation is different (different g). The fractions obtained do not have a standardized amount of proteins and the content of the immuniactive component varies in the preparations thus prepared.
Podle dosavadní praxe si jednotlivá pracoviště vyrábějí z nádorů tzv. antigeny samostatně a nejednotně. Prozatím nedošlo k dohodě o sjednocení výroby. Výsledky různých testů s takovými antigeny jsou pak sice publikovatelné, ale nesrovnatelnéAccording to current practice, individual workplaces produce so-called antigens from tumors separately and inconsistently. There is no agreement on unification of production yet. The results of various tests with such antigens are then publishable, but incomparable
Způsob přípravy imunologicky funkčních frakcí získaných ze zhoubných nádorů, z šedé kůry mozkové u schizofreniků nebo ze srdečního svalu s infarktem myokardu postupnou centrifugací cytozolu a pomocí vysokotlaké gelové chromatografie podle vynálezu spočívá v tom, ze se suspernatant po poslední centrifugací pri zatizeni 90 az 110 x 10 g extrahuje fenolem v objemovém poměru 1:0,5 až 1,5 v přítomnosti iorogenního tensidu a 8 hydroxychinolinu při pil 7 až 7,5 nejméně dvakrát, získaná vodná táze obsahující směs cytoplasmatických ribonukleových kyselin se rozdělí afinitní chromatografií na koloně plněné celulózou s navázanými oligonukleotidy deoxythimidinu, polyadenylované ribonukleové kyseliny se zachytí na koloně a eluují se vodou, vodný eluát se dále dělí vysokotlakou gelovou chromatografií, sbírají se frakce o molekulové hmotnosti 3.10 až 1,5.10 , které jsou orgánově specificky aktivní v různých testech.A method for the preparation of immunologically functional fractions derived from malignant tumors, from cerebral cortex in schizophrenics or from myocardial infarction heart muscle by successive centrifugation of cytosol and by high pressure gel chromatography according to the invention is characterized in that the suspernatant after final centrifugation is 90 to 110 x 10 g is extracted with phenol in a volume ratio of 1: 0.5 to 1.5 in the presence of iorogenic surfactant and 8 hydroxyquinoline at pH 7 to 7.5 at least twice, the aqueous phase obtained containing a mixture of cytoplasmic ribonucleic acids is separated by affinity chromatography on a packed cellulose column deoxythimidine oligonucleotides, polyadenylated ribonucleic acids are collected on the column and eluted with water, the aqueous eluate is further separated by high pressure gel chromatography, fractions having molecular weights of 3.10 to 1.5.10 are collected, which are organ specific activity in various assays.
Jako mobilní fáze pro vysokotlakou gelovou chromatografií se používá fyziologický roztok, jako stacionární fáze se používá suspenzní kopolymer 2-hydroxyethylmethakrylátu £ ethylendiroethakrylátem s vylučovacím limitem kolony, vyjádřeným molekulovou hmotnostíSaline is used as the mobile phase for high pressure gel chromatography, and a suspension copolymer of 2-hydroxyethyl methacrylate-ethylenediroethacrylate with a molecular weight exclusion limit is used as the stationary phase.
3.10 , velikost partikuli gelu je 32 az 40 yum, k detekci se používá diferenciální refraktonietr a UV spektrofotometr ε variabilní vlnovou délkou.3.10, gel particle size is 32 to 40 µm, differential refractonieter and UV spectrophotometer ε of variable wavelength are used for detection.
Na základě všech dosavadních zkušeností vypracovali autoři vynálezu způsob separace imunologicky aktivních frakcí z lidských i zvířecích zhoubných nádorů, který využívá k přípravě tuzemské dostupné techniky, sjednocuje postup pří manipulaci s tkáněmi a vylučuje příměs proteinů, protože separuje pouze tělu vlastní nebo cizí ribonukleové kyseliny a sice v definovatelném množství (ng na ml).Based on all the experience so far, the inventors have developed a method for separating immunologically active fractions from human and animal malignancies, which it uses to prepare domestic available techniques, unifies the procedure for tissue manipulation and excludes the admixture of proteins by separating only the body's own or foreign ribonucleic acids. in definable amounts (ng per ml).
Způsob podle vynálezu vede k získání materiálu s vyšší selektivitou a imunologickou aktivitou při menší spotřebě biologického výchozího materiálu a významně nižším šumem akcesornich proteinových makromolekul. Na rozdíl od jiných způsobu přípravy imunologicky aktivních frakcí se podle vynálezu získá orgánově specifický antigen.The method of the invention results in a material with higher selectivity and immunological activity with less consumption of biological starting material and significantly lower noise of accessory protein macromolecules. In contrast to other methods for preparing immunologically active fractions, an organ specific antigen is obtained according to the invention.
Získané frakce jsou použitelné jako antigeny k imunizaci a dále v různých imunologických testech pro buňkami mediovanou imunitu, pro protisměrnou elektroforézu na agarozovém gelu, ciektrofokusaci, pro značeni radioizotopy, ke studiu hormonálních receptorů, pro experimentální práce v cytogenetice a genetickém inženýrství s cílem pomocí vybraných metod a antigenů stanovit včasnou diagnostiku a monitorování choroby.The obtained fractions are useful as antigens for immunization and further in various immunological tests for cell-mediated immunity, for agarose gel counter electrophoresis, ciektrofocusing, for radioisotope labeling, for hormone receptor study, for experimental work in cytogenetics and genetic engineering using selected methods and antigens to establish early diagnosis and monitoring of the disease.
Získané frakce jsou velj.ee časnými (až několik let před vypuknutím onemocnění) pozitivními markéry lidskému tělu . ti. ribonukleové kyseliny, která pravděpodobně kontaminuje lidské i zvířecí nádory, š.-dou kůru mozkovou u schizofreniků, srdeční sval postižený infarktem myokardu, jakož i endometrium žen, které potrácejí z gynekologicky nezjistitelné příčiny a u nichž byla vyloučena jiná virová onemocněni.The obtained fractions are largely early (up to several years before disease outbreak) positive markers for the human body. ti. ribonucleic acid that is likely to contaminate human and animal tumors, gray cortex in schizophrenics, heart muscle affected by myocardial infarction, as well as the endometrium of women who abort for a gynecologically undetectable cause and in whom other viral diseases have been excluded.
Způsob přípravy imunologicky funkčních frakcí je blíže osvětlen v příkladu, který nijak neomezuje předmět vynálezu.The preparation of immunologically functional fractions is illustrated in more detail by the following non-limiting example.
Příprava imunoaktivní frakce z karcinomu mammy.Preparation of immunoactive fraction from mammary carcinoma.
Biologický materiál se odebere peroperačně za spolupráce histopatologa do sterilní nádoby, uložené v suchém ledu. Po rozmražení se zbaví tuku, eventuálně nekrotických částí, po rozstříhání se homogenizuje a homogenát se třikrát kryolyzuje při -60 a +40 °C. Poté se centrifuguje při zatížení 3,5.10^g při teplotě +4 °C po dobu 40 min. Supernatant se znovu podrobí centrifugaci při zatížení 10 g při teplotě +4 °C po dobu 60 min. Získaný spernatant, který obsahuje bílkoviny, nukleoproteiny, nukleové kyseliny a nízkomolekulární komponenty, se 15 min při teplotě místnosti extrahuje fenolem v objemovém poměru 1:1 v přítomnosti natriumdodecylsulfátu o hmotnostní koncentraci 1 % z 0,01 % hmot. 8-hydroxychinolinu a pH se upraví na 7 až 7,5.The biological material is collected peroperatively in collaboration with a histopathologist into a sterile container stored in dry ice. After thawing, it is freed of fat or possibly necrotic parts, after shearing it is homogenized and the homogenate is cryolyzed three times at -60 and +40 ° C. It is then centrifuged at a load of 3.5 x 10 < 6 > g at +4 [deg.] C. for 40 min. The supernatant is again centrifuged at a load of 10 g at + 4 ° C for 60 min. The resulting supernatant, which contains proteins, nucleoproteins, nucleic acids and low molecular weight components, is extracted for 15 min at room temperature with 1: 1 by volume phenol in the presence of 1% w / w sodium dodecyl sulfate at 0.01% w / w. The pH is adjusted to 7 to 7.5.
Pomocí centrifugy při zařízení 3.10 g se oddělí vodná fáze, která se opět třepe s fenolem. Získaná vodná fáze obsahující směs cytoplasmatických ribonukleových kyselin se dále dělí na koloně naplněné oligo dT celulózou (celulóza s navázanými oligonukleotidy deoxyth.imidinu), která má afinitu k polyadenylovaným zbytkům, charakteristickým pro informační ribonukleové kyseliny. Na koloně zachycené polyadenylované ribonukleové kyseliny se promyjí vodou, vodný eluát se dále purifikuje vysokotlakou gelovou chromatografii. Kolona je naplněna gelem Separon--Hema-300 glc který je suspenzním kopolymerem 2--hydroxyethyl-methakrylátu 5 a ethylendimethakrylátu s vylučovacím limitem 3.10 .The aqueous phase is separated with a 3.10 g centrifuge and shaken again with phenol. The obtained aqueous phase containing a mixture of cytoplasmic ribonucleic acids is further separated on a column packed with oligo dT cellulose (cellulose with attached deoxyth.imidine oligonucleotides) having an affinity for the polyadenylated residues characteristic of the ribonucleic acid information. The column of captured polyadenylated ribonucleic acids is washed with water, and the aqueous eluate is further purified by high pressure gel chromatography. The column is packed with Separon-Hema-300 glc gel which is a suspension copolymer of 2-hydroxyethyl methacrylate 5 and ethylene dimethacrylate with an exclusion limit of 3.10.
Detekce se provádí pomocí diferenciálního refraktometru R 043 a UV průtokového spektrofotometru s variabilní vlnovou délkou. Jako mobilní fáze se používá fyziologický roztok. Imunologicky aktivní a orgánově specifický antigen se získá v oblasti odebraného eluátu az 50 cm pri vlnové délce 340 nm.Detection is carried out using differential refractometer R 043 and UV flow spectrophotometer with variable wavelength. Saline is used as the mobile phase. The immunologically active and organ-specific antigen is obtained in the region of the collected eluate up to 50 cm at a wavelength of 340 nm.
Stejným způsobem se odebírá materiál z jakékoliv experimentální i lidské nádorové i kontrolní zdravé tkáně, z šedé kůry mozkové schizofreniků i zdravých osob, se srdečního svalu s infarktem myokardu i zdravého, přičemž u potrácejících žen se použije jako antigen materiál zhotovený z lidského karcinomu endometria a stejným způsobem se zpracuje.In the same way, material is taken from any experimental and human tumor and control healthy tissue, from the cerebral cortex of schizophrenics and healthy persons, from myocardial infarction and healthy heart, and in abortive women, material made from human endometrial cancer and the same process.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS84453A CS254706B1 (en) | 1984-01-19 | 1984-01-19 | Process for preparing immunologic functional fractions from humon and animal tumors |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS84453A CS254706B1 (en) | 1984-01-19 | 1984-01-19 | Process for preparing immunologic functional fractions from humon and animal tumors |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS45384A1 CS45384A1 (en) | 1987-06-11 |
| CS254706B1 true CS254706B1 (en) | 1988-01-15 |
Family
ID=5336618
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS84453A CS254706B1 (en) | 1984-01-19 | 1984-01-19 | Process for preparing immunologic functional fractions from humon and animal tumors |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS254706B1 (en) |
-
1984
- 1984-01-19 CS CS84453A patent/CS254706B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS45384A1 (en) | 1987-06-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kapprell et al. | Identification of a basic protein of Mr 75,000 as an accessory desmosomal plaque protein in stratified and complex epithelia. | |
| Cook et al. | The electrophoretic mobility of normal and leukaemic cells of mice | |
| CA2264277A1 (en) | Methods and kits for obtaining and assaying mammary fluid samples for breast diseases, including cancer | |
| JP2001527524A (en) | Human breast tumor specific protein | |
| Raju et al. | Characterization of a chemoattractant for endothelium induced by angiogenesis effectors | |
| Wesierska-Gadek et al. | Antibodies to nuclear lamins in autoimmune liver disease | |
| Okamoto et al. | Expression of human placenta alkaline phosphatase in placenta during pregnancy | |
| US4196186A (en) | Method for diagnosing malignant gliol brain tumors | |
| DE69933679T2 (en) | PRESENTATION OF THE PROFILE AND CATALOGIZATION OF EXPRESSED PROTEIN MARKERS | |
| KR850001770B1 (en) | Method for producing specific antibody against human cancer antigen | |
| US5616685A (en) | snRNP-A antigen and fragments thereof | |
| PIAZOLO et al. | Isolation and purification of a calcium-binding protein from human tissues | |
| Lokeshwar et al. | Isolation of a Prostate Carcinoma Cell Proliferation-inhibiting Factor from Human Seminal Plasma and Its Similarity to Transforming Growth Factor β] fr1 | |
| US4624932A (en) | Recognins and their chemoreciprocals | |
| CS254706B1 (en) | Process for preparing immunologic functional fractions from humon and animal tumors | |
| Ove et al. | Separable DNA polymerase activities in host liver and Morris hepatomas | |
| Diederich et al. | The effects of mercury and other resgents on Phosphoglycerate mutase− 2, 3− diphosphoglycerate Phosphatase from kidney, muscle and other tissues | |
| Vissac et al. | Presence of BRCA1 and BRCA2 proteins in human milk fat globules after delivery | |
| JP2001511019A (en) | Polypeptide expressed in stratum corneum of epidermis and its use | |
| EP0007214A1 (en) | Product for detecting the presence of cancerous or malignant tumor cells | |
| DE69119591T2 (en) | THE ANTIQUE DETECTED BY MCA-28A32 | |
| RU2022559C1 (en) | Process for manufacture of oncoovarian alpha-1-globulin preparation | |
| US6664378B1 (en) | Urogenital carcinoma anti-TLP peptide antibodies, related kits and methods | |
| JP7263574B2 (en) | Screening method for keratotic plug formation preventive/improving agent | |
| JP7263573B2 (en) | Screening method for keratotic plug formation preventive/improving agent |