CS247055B2

CS247055B2 - Preparation method of microbial cultivation product

Info

Publication number: CS247055B2
Application number: CS805920A
Authority: CS
Inventors: Shinei Kashiwayama
Original assignee: Shinei Kashiwayama
Priority date: 1979-09-01
Filing date: 1980-08-29
Publication date: 1986-11-13
Also published as: UA6318A1; WO1981000723A1; DE3069020D1; PH22011A; EP0024738B1; EP0024738A2; ATE9100T1; FI68079B; DK157035B; US4554161A; JPS6143033B2; SU1327791A3; DE24738T1; HU186767B; ES494636A0; US4503041A; MX6444E; FI68079C; FI802690A7; AR228434A1

Description

(54) Způsob přípravy produktu mikrobiální kultivace

Nový kmen Trichosporon Kashiwayama poskytuje produkt kultivace vhodný pro kosmetické prostředky. Kultivace se provádí aerobně v živném prostředí s běžnými zdroji uhlíku, dusíku a dalších esenciálních živin při pH 4 až 6 a při teplotě 20 až 40 °C.

Vynález se týká způsobu výroby produktu mikrobiální kultivace, upotřebitelného do kosmetických prostředků a sestávajícího pouze ze sterilního supernatantu vzniklého filtrací a sterilizací tekuté kultury nového kmene, kmene Trichosporon Kashiwayama (uloženého u FRI pod depozitním číslem 4 821), který lze identifikovat obvyklými způsoby jako kmen náležející rodu Geotricum nebo Endomycopsis, nebo sestávající z koncentrátu nebo suchého produktu vzniklého z uvedeného sterilního supernatantu obvyklými způsoby.

O mikroorganismu, kterého se používá podle vynálezu, totiž o kmenu Trichosporon Kashiwayama se má za to, že náleží mezi kvasinky, avšak kmen je někdy klasifikován jako náležející mezi fungi imperfecti. Podle toho· je možno konstatovat, že kmen lze identifikovat jako kmen náležející do rodu Geotricum nebo Endomycopsis, což se * zakládá na vědeckém pojetí odborníků.

Jak lze vidět z připojených schematických nákresů, kmen, kterého se používá podle vynálezu, se vyznačuje tím, že má korálkovité arthrospory a pseudomycelia.

Kmen se kromě toho vyznačuje tím, že fermentační produkt kmene, tj. supernatant kultivační tekutiny, má sám o sobě prominentní léčebný účinek, na lidskou pokožku.

Účinná látka, která vyvolává kosmetický účinek, je dosud neznámá. Avšak použije-li se sterilního supernatantu fermentační tekutiny kmene nebo jeho koncentrátu, popřípadě suchého produktu jako takového, nebo poté, kdy byl smíchán s vhodným nosičem a upraven na přípravek vhodný к použití na lidskou pokožku, například mast, lze docílit následujících kosmetických účinků.

1) Fermentační tekutina je slabě kyselá (má hodnotu pH od 4,5 do 5,0), je netoxická к pokožce a podporuje ochranný účinek tukové membrány na pokožku, zejména antibakteriólní kontrolní účinek vlastní tukové membráně.

2) Zabraňuje nadbytečnému odlupování částic karatininu z rohovité vrstvy a současně se v rohovité vrstvě udržuje přiměřený obsah vody a lze tudíž udržovat v dobrém stavu vlastnosti pokožky jako takové, například vlhkost a pružnost.

3) Je kontrolován metabolismus epidermálních buněk, aby byla podporována přiměřená tvorba keratinu a hladká propagace a diferenciace epidermálních buněk.

4) Zejména u mastné pokožky je kontrolováno nadbytečné vylučování tuku a zabraňuje se vzrůstu tloušťky tukové membrány. Podporuje se difúze tuku z vlasových foliklů na povrch pokožky a dociluje se ochranného účinku před tukovou dermatitidou, například akné.

5) Protože vlákna kolagenu síťovitého stavu jsou zesilována nebo botnají, aby udržela přiměřený obsah vody v horních vrstvách, v pokožce je udržována dobrá a normální tvrdost a pružnost.

6) Protože se zlepšuje krevní oběh, urychluje se metabolismus pokožky a přenos odpadního materiálu z pokožky do žil a jeho vylučování. Současně je urychlováno vylučování melaninového barviva mimo tělo.

7) U poruch pokožky, způsobených oxidací při aktivním záření, fermentační tekutina nebo její sterilní supernatant, působí na tukovou membránu jako antioxidační činidlo a urychlují odbarvení abnormálně ukládaného melaninového barviva v kožních skvrnách a podobně. Když se použije fermentační tekutiny nebo jejího sterilního supernatantu v kombinaci s působením infračervených paprsků nebo orální aplikací vitamínu E, lze docílit preventivního synergického účinku u kontaktní dermatitidy, kožních skvrn a abnormálního ukládání barviva způsobeného heliosensitivitou.

V dalším budou popsány mykologické. vlastnosti kmene Trichosporon Kashiwayama, uloženého u FRI pod depozitním číslem 4 821, kterého se používá v tomto vynálezu.

(1) Morfologické vlastnosti:

1) Tvar a velikost; tekutá půda se sladovým extraktem po třech dnech kultivace při teplotě 25 °C lze pozorovat buňky obdélníkového nebo vejčitého tvaru o velikosti 4 až 3 μπι krát 3 až 20 μΐη, a jestliže se kultivace provádí po dobu pěti dní nebo déle, tvar buněk se stává nepravidelným a posléze se buňky stávají myceloidními.

2) Tvorba pseudomycelia (povrchová kultura na agarovém živném prostředí s bramborovým extraktem):

Buňky mají pseudohyfový nebo pseudomyceliální charakter a mají charakteristické klikaté arthrospory, nikoliv však konidie.

3) Askospory:

Buňky nemají askospory.

4) Balhistospory:

Buňky nemají balhistospory.

(2) Charakteristické vlastnosti živné půdy:

1) Kolonie na agarové živné půdě: (sladový extrakt — MY agarová kultivační půda):

matný, bezbarvý, vlasovitý a hrubý povrch, .s velice měkkým nevypouklým, avšak plochým, obrveným okrajem.

2) Film na tekuté živné půdě (MY tekutá živná půda se sladovým extraktem): Tvoří se bílý, chlupatý, vločkovitý a tuhý filnj.

6 (3) Fyziologické vlastnosti:

1) Zkvašovánítschsridů:

Nejsou zkvsšovány glukózs, gslsktózs, tschsrózs, lsktózs, trehsrózs, rsffinózs, inulin.

2) Využití tschsridů (stimilsce):

D-glukózs +, D-galaktózs +, msltózs —, rsffinózs —, tschsrózs —, lsktózs —, mléčnsn todný +, D-xylózs +, erythrit —, D-mannit +, L-sorbózs +, inotit —, trshsrózs —, D-arsbinózs —, L-arsbinózs —, jsntsrsn todný +, citrsn todný +, octsn todný +, inulin —, rozputtný škrob ethsnol +, glycerol +, cellobiózs —.

Poznámks:

+: využíváno — : nevyužíváno

3) Využití dutičnsnů:

Nejtou využívány.

4) Využití dutitsnů:

Nejtou využívány.

5) Využití hydrochloridu ethylsminu: Není využíván.

6) Rozklsd glykotidu (arbutin):

Je rozkládán.

7) Tvorbs snslogů škrobu:

Nevzniksjí.

8) Tvorbs bsrvivs:

Netvoří te.

9) Tvorbs etterů:

Tvoří te.

10) Lakmutová mléčná reskce:

Nesráží te.

11) Požsdsvek vitsmínů:

Nejtou požsdovány.

12) Odolnott k toli:

Kritická koncentrsce od 6 do 8 hmot./obj. proč.

13) Ootimální teplota:

^oc

14) Optimální hodnots pH:

5,0.

15) Rozklsd močoviny:

Nerozkládá te.

16) Růst ns 50 % hmot./hmot. glukózovém sgsru nebo 60 % hmot./hmot. sgsrovém prottředí t kvstničným extrsktem.:

Nerotte.

17) Růtt při teplotě 37 °C: Nerotte.

18) Tvorbs kyteliny z glukózy: Netvoří te.

19) Rezistence k cyklohexylimidu: Rezistentní.

20) Rozklsd olejů s tuků:

Rozkládsjí te.

(4) DoIší mykolooick^№8^0811:

1) Tvorbs pschu:

Tento kmen te vyznačuje tvorbou vonné tložky. Z výsledků plynové chromstogrsfie bylo nslezeno, že vonná tložks te tkládá hlsvně z ethsnolu, ethylscetátu, isopropylslkoholu, isopropzlscetátu, itobutylslkoholu, itobutylscetátu, isosmzlslkoholu s itosmylscetátu. Vůně je tskzvsná jsblečná vůně. Ve trovnání te známými kvstinksmi, které produkují vonné látky, te kmen podle vynálezu vyznsčuje tím, že nejenom tvorbs vyšších slkoholů, sle i jejich etterů je vytoká.

Optimální podmínky pro tvorbu těchto neutrálních vonných tložek jtou následující:

s) Počáteční hodnots pH 4,0 sž 5,0 s udržení nízké hodnoty pH během fermentsce.

b) Celkový obtsh dutíku 400 sž 500 mg/ /litr živné půdy.

Jsko zdroje snorgsnického dutíku te používá t výhodou tírsnu smonného, dutičnsnu smonného s chloridu smonného s jsko zdroje orgsnického dutíku te používá výhodně kvstničného extrsktu, kstsminokyteliny s peptonu. Dále te dotáhne dobrých výtledků, když te přidsjí sminokztelinz, jsko je nspříklsd leucin, isoleucin, vslin s fenylslsnin.

c) Volbs zdroje uhlíku.

Vhodné jtou ' glukózs, gslsktózs, ethylslkohol s glycerol. Výhodná koncentrsce sschsridů je 5 % hmotnostních.

d) Poměr inokulsce buněk činí 1 sž 2 %.

e) Teplota při kultivsci je v rozmezí 25 sž °C. Výhodná je stacionární kulturs.

2) Tvorbs orgsnických kyselin:

Kyselins mrsvenčí, kytelins propionová, kyselins máselná, kyselins jsntsrová s kytelins citrónová vzniksjí z gíukózy.

Pro příprsvu kosmetického prostředku zs použití kmene Trichosporon Kashiwsysms podle vynálezu lze použít obvyklé živné půdy s kvstničným extrsktem. Podle jednoho výhodného provedení te provádí třepání nebo stscionárm kultivsce při teplotě 20 sž 30

stupňů Celsia po dobu asi 24 hodin v pevném nebo tekutém prostředí, které obsahuje 0,3 °/o hmot./obj. glukózy, 0,5 % hmot./ /obj. sbíraného mléka a 0,05 % hmot./obj. kvasničného extraktu a má hodnotu pH 4,0 až 6,0 a stejná živná půda, jak je uvedená výše, se očkuje získaným produktem kultivace jako zárodkem stacionární kultivace nebo kultivace za třepání se provádí při teplotě 30 °C po dobu 3 až 7 dní.

Tekutá kultura se podrobí filtraci a odstranění buněk obvyklými způsoby, například za použití membránového filtru a bezbuněčný supernatan se koncentruje, například za sníženého tlaku, s výhodou při stupni koncentrace 4 až 25. Získaný koncentrát se sterilizuje obvyklými způsoby a skladuje při teplotě místnosti nebo v lednici.

Příklad bezbuněčného supernatantu připraveného podle tohoto vynálezu má vlastnosti uvedené v tabulce 1.

Tabulka 1

Bezbuněčný čištěný filtrát supernatantu produktu kultivace kmene podle vynálezu obsahuje malá množství aminokyselin, sacharidů a lipidů. Když se filtrát hodnotí kvantitativně, lze vidět, že celkový obsah dusíku je 0,005 až 0,15 % a celkový obsah fosforu je 0,004 až 0,014 %.

1) Povaha a stav:

Filtrát představuje bezbarvou, až slabě nažloutlou průhlednou kapalinu s jemnou vůní.

Obsah vody (podle metody sušení za atmosférického tlaku):

Bílkoviny (koeficient 6,25):

Obsah lipidů (Soxhletovou extrakcí):

Obsah vláken:

Obsah popela:

Obsah cukru:

Celkový obsah pevných látek:

Obsah dusíku v aminové formě:

Filtrační kyselost:

Těkavá báze tvořící obsah dusíku:

Obsah arsenu (jako AS2O3):

Obsah těžkých kovů:

(jako Pb):

Celkový obsah rtuti:

Obsah kadmia:

Obsah vápníku:

Obsah fosforu:

Obsah kyseliny fosforečné:

Obsah kyseliny octové:

2) Ověřovací zkoušky:

1) 20 ml filtrátu se odpaří na vodní lázni až se objem sníží asi na 50 ml. Potom se přidá ke koncentrátu 1 ml ninhydrlnového zkušebního roztoku. Když se směs zahřeje po dobu 30 minut, tekutina získá fialovou barvu.

2) 5 ml kyseliny dusičné se přidá ke koncentrátu vzniklému odpařením, stejně jako je popsáno u 1) a směs se zahřívá к varu po dobu 20 minut. Když se směs ochladí, neutralizuje se přidáním 10% roztoku hydroxidu sodného. Potom se přidají ke směsi 2 ml zkušebního roztoku molybdenanu amonného. Když se směs zahřeje, kapalina zežloutne. Jestliže se ke kapalině přidá 10% roztok hydroxidu sodného stává se bezbarvou.

3) К 5 ml filtrátu se přidají 10 mg indolu a 2 ml kyseliny chlorovodíkové a směs se dostatečně protřepe. Když se směs potom zahřeje po dobu 10 minut, kapalina zčervená.

3) Fyzikální vlastnosti:

1) Měrná tíha (dos³⁵): 1,000 až 1,015

2) Index lomu (ne²⁴): 1,330 až 1,340

3) pH (25 °C): 4,5 až 5,5

4) Odparek:

0,5 až 2,0 %.

Analytické hodnoty příkladu koncentrátu (stupeň koncentrace 2) bezbuněčného supernatantu připraveného podle vynálezu jsou uvedeny v tabulce 2.

bulka 2

98,7 % stopa 0,2 % 0 O/o 0,1 % 1,0 % 1,3 % mg %

0,6** mg % nedetekován (mez detekce: 0,1 ppm] nedetekováno (mez detekce: 1 ppm) nedetekováno (mez detekce: 0,01 ppm) nedetekováno (mez detekce: 0,01 ppm) 14,7 mg %

9,8 mg % nedetekováno (mez detekce: 0,1 %) nedetekováno (mez detekce: 0,1 %)

Obsah kyseliny máselné:

Obsah kyseliny mléčné:

Obsah kyseliny citrónové:

Počet živých buněk:

E. coli:

Staphylococcus aureus:

Počet hub:

Počet kvasinek:

Obsah kyseliny propionové:

Obsah kyseliny sorbové:

Kyselina benzoová:

Ester kyseliny p-hydroxybenzoové:

Obsah vitamínu B₁:

Obsah vitamínu B₂:

Obsah vitamínu C:

Obsah vitamínu B₆:

Obsah vitamínu B12:

Obsah kyseliny pentothenové:

Obsah cholinu:

Obsah kyseliny listové:

Obsah niacinu:

Obsah celkového karotenu:

Hodnota pH:

' 470 5 5 JO nedetekováno (mez detekce 0,01 %] 0,06 % 0,02 % méně než 30 buněk v ml . (-) ' (-) (-)/ml ( — )/ml nedetekován (mez detekce 0,02 g/kg) nedetekováno (mez detekce: 0,005 g/kg)

0,42 g/kg nedetekován (mez detekce: 0,005 g/kg) nedetekován (mez detekce: 0,01 mg %) 0,02 mg % nedetekován (mez detekce: 2 mg %) nedetekován (mez detekce: 5 ug %) nedetekován (mez detekce: 0,05 /<g %) 0,09 mg °/o nedetekován (mez detekce: 0,03 %) nedetekován (mez detekce: 1 ₍ug %) nedetekován (mez detekce: 0,03 mg °/o) nedetekován (mez detekce: 0,02 mg %)

4,9

Skladba aminokyselin***

arginin	méně než 0,01
lyzin	méně než 0,01
histidin	méně než 0,01
fenylalanin	méně než 0,01
tyrosin	méně než 0,01
leucin	méně než 0,01
isoleucin	méně než 0,01
methionin	méně než 0,01
valin	méně než 0,01
alanin	méně než 0,01
glycin	méně než 0,01
prolin	méně než 0,01 méně než 0,01
kyselina glutamová
serin	méně než 0,01
threonin	méně než 0,01
kyselina asparagová	méně než 0,01
tryptofan	méně než 0,01
cystin	méně než 0,01
Poznámka	. .i

Pochopitelně bezbuněčného sterilního supernatantu lze použít jako kosmetického prostředku bez koncentrace. Avšak, z hlediska skladování nebo podobně, je výhodné, aby bezbuněčný sterilní supernatant byl koncentrován. Dále, používá se vysokého koncentrátu o stupni koncentrace více než 25 nebo lze použít suchého produktu. Takového koncentrátu, vysokého koncentrátu nebo suchého produktu lze použít jako kosmetického prostředku jako takového.

Dále kosmetický prostředek lze vytvořit smícháním takového koncentrátu, vysokého koncentrátu nebo suchého produktu s krémem, masťovým základem nebo jiným nosičem.

Když je analyzován koncentrát vzniklý koncentrací výše uvedeného bezbuněčného sterilního supernatantu koncentračního stupně 4, lze vidět, že jsou obsaženy různé aminokyseliny s vitamíny. Avšak, protože analýza se provádí z všeobecných hledisek, je snadno pochopitelné, že i když se příslušné složky smíchají podle nalezených analytických hodnot, nelze připravit kosmetický prostředek. Jinými slovy, předpokládá se, že účinnost kosmetického prostředku je založena na neznámých složkách mimo dosah analýzy.

* % vztaženo- na vodu ** počet ml IN alkálie potřebné k titrování při neutralizaci 100 g vzorku *** g aminokyseliny ve 100 g vzorku (cystin: metoda oxidace kyseliny permravenčí, tryptofan: mikrobiol. test).

Výsledky zkoušky toxicity za použití kuřecího embrya prokázaly, že výše uvedený bezbuněčný sterilní koncentrát (koncentrační stupeň 4] není toxický. Dále výsledky zkoušek s náplastěmi na lidském těle a zkoušky kontinuálního dráždění lidské pokožky prokázaly, že koncentrát není vůbec toxický lidskému tělu. Kromě toho výsledky pokusu dráždění králičího oka prokázaly, že koncentrát není vůbec dráždivý. Ještě další výsledky antibiotického zkoušení prokázaly, že koncentrát neobsahuje antibiotikum.

Bylo potvrzeno, že kosmetický prostředek má příznivý účinek na kožní skvrny, poškozenou pokožku, kontaktní dermatitidu a popálenou pokožku. Tyto účinky budou nyní popsány v následujících pokusech.

Zkouška používající náplastí na lidském těle

Padesát žen (trpících některými kosmetickými vadami nebo pod.) ve stáří 23 až 44 let bylo vybráno, ke zkouškám. Na vnitřní stranu levého ramene a paravertebrální krajinu zad byly použity lepivé náplasti velikosti 4 cm x 4 cm, obsahující asi 0,2 g koncentrátu (koncentračního stupně 2) podle vynálezu a po uplynutí doby 48 hodin byly náplasti odstraněny a ošetřené oblasti byly vyšetřeny. U žádné z těchto osob nebyla nepříznivě ovlivněna vnitřní strana levého ramene nebo paravertebrální oblast.

Kontinuální zkouška na kožní dráždivost u člověka

Proužky sterilní gázy velikosti 10 cm³ byly impregnovány asi 5 ml koncentrátu (koncentračního stupně 2) podle vynálezu a byly použity na pravou tvář 45 žen stáří 23 až 45 let (35 žen trpělo některou z kosmetických vad nebo pod. a byly ošetřovány v dermatologické nemocnici a zbývajících deset žen byly zaměstnankyně této nemocnice) po dobu 15 minut. Toto léčení bylo prováděno kontinuálně po dobu 40 dní. U žádné z žen nebyla pozorována žádná reakce a nevznikly potíže, jako například erythem,.

Zkouška dráždění oka u králíka

Jako' pokusných zvířat bylo použito tří bílých králíků. Předem bylo potvrzeno, že oči nemají žádné abnormální znaky. Do pravého oka každého králíka bylo nakapáno 0,1 ml koncentrátu (koncentrační stupeň 2) podle vynálezu a do levého oka bylo nakapáno' 0,1 ml kontrolní tekutiny. Ihned po nakapání a 3, 6, 24, 48 a 72 hodin po nakapání byly obě oči vyšetřeny za použití štěrbinové lampy. Nepřirozené jevy, například jako zdurení duhovky nebo spojivky nebylo vůbec pozorováno.

Zkouška ošetření skvrn pokožky

Bylo vybráno 621 žen majících na tváři kožní skvrny, vyjma osob s jaterními chorobami nebo ženskými chorobami a těhotných žen, které vyhledaly ošetření kožních skvrn v dermatologických nemocnicích. Po umytí tváře byly kožní póry otevřeny ozónem a parou a na místo skvrny byla přiložena gáza impregnovaná koncentrátem (koncentrační stupeň 2) bezbuněčného supernatantu podle vynálezu. Přiložená gáza byla pokryta náplastí typu „Saran—Wrap“ a po dobu 15 až 20 minut bylo provedeno ozáření infračervenými paprsky, aby koncentrát pronikl do pokožky. Toto ošetření bylo prováděno jednou týdně a pokračovalo po dobu tří měsíců. Bylo nalezeno, že u . 363 žen (58,4 %) se vysoce zlepšil stav, u 122 žen (15,6 °/o) došlo k poměrnému zlepšení, u 133 žen (21,4 °/o) nebylo pozorováno žádné zlepšení, u jedné ženy (0,01 %) došlo ke zhoršení a u dvou zbývajících žen (0,03 °/o) byla pozorována kontaktní dermatitida (předpokládá se, že kontaktní dermatitida byla způsobena důvody irelevantními k tomuto ošetřování). Počet osob, u kterých se zlepšil stav podstatně nebo relativně, byl vyšší než 80 %. Dále u 60 % z 365 žen, u nichž se podstatně zlepšil stav, kožní skvrny zcela zmizely.

Zkouška ošetření kožních trhlin a jemných vrásek

Obvykle ženy starší než 25 až 30 let jsou nervózní z kožních trhlin a jemných vrásek a tento sklon je nápadný zejména u žen ve stáří 35 až 40 let, i když ženy starší než 40 let jsou nervózní podobně z kožních trhlin a jemných vrásek. Pro tuto zkoušku bylo vybíráno 962 žen, které hodlaly navštívit dermatologické nemocnice (150 žen ve stáří 25 až 30 let, 218 žen ve stáří 30 až 35 let, 248 žen ve stáří 35 až 40 let, 172 žen ve stáří 40 až 45 let a 174 žen starších více než 45 let).

Po umytí pokožky obličeje byly kožní dutiny otevřeny ozónem a párou a gáza impregnovaná koncentrátem (stupeň koncentrace 2) bezbuněčného supernatantu podle vynálezu byla přiložena těsně na pokožku tváře a gáza byla pokryta páskou typu Saran—Wrap. Po dobu 15 až 20 minut bylo provedeno ozáření infračervenými paprsky, aby koncentrát pronikl do pokožky. Bylo, zjištěno, že po jednom ošetření byla poškozená kůže význačně zlepšena u 698 žen (73, proč.), k poměrnému zlepšení došlo u 156 žen (16 %), stav se nezměnil u 72 žen (7 proč.) a stav se nezhoršil u žádné z ošetřených žen, přičemž zbytek tvořilo 36 žen (4 proč.). Vzhledem k tomu, že kůže s trhlinami přechází v jemné vrásky, předpokládá se, že koncentrát podle vynálezu, který je účinným při ošetřování kůže s trhlinami, předchází vzniku jemných vrásek.

Zkouška účinku při kontaktní dermatitidě

Byla vybírána žena stáří 21 let, která trpěla vyrážkou svěděním na víčkách obou očí od toho dne, kdy vyměnila oční stín od výrobce A za oční stín od výrobce B a byla stanovena diagnóza, že trpí kontaktní dermatitidou. Dermatolog ošetřil napadené oblasti gázou impregnovanou koncentrátem (stupeň koncentrace 2) bezbuněčného supernatantu podle vynálezu. Nebyl vůbec použit žádný steroldní preparát ani prostředek protizánětlivě účinný a antihistaminově účinný. Ošetřované osobě bylo podáno asi 20 ml koncentrátu a koncentrát byl přikládán nebo aplikován po dobu asi 30 minut dvakrát denně, tj. ráno a večer. Po uplynutí doby 48 hodin od začátku léčby svědění bylo odstraněno a po uplynutí doby 96 hodin od začátku léčby vyrážka v podstatě zmizela. Po uplynutí doby 1 týdne nebyla vyrážka vůbec pozorována.

Zkouška ošetření spálenin a opařenin

Žena stáří 47 roků s opařeninou horkou vodou na vnější části levého· předloktí (stupeň spáleniny II] se zčervenáním a otokem a s malými puchýři navštívila dermatologa asi hodinu poté, co se opařila. Postižená krajina byla ihned ochlazena tekoucí vodou a gáza impregnovaná koncentrátem (stupeň koncentrace 2] bezbuněčného sterilního supernatantu podle vynálezu byla použita na postižené místo a pokryta naolejovaným papírem. Potom byla postižená krajina ovázána. Po uplynutí doby 24 hodin bylo zjištěno, že malé puchýřky zcela zmizely, ačkoliv zčervenání a otok ještě trval a pacientka necítila žádnou bolest.

Muž stáří 30 let, který se opařil horkou vodou na zadní části pravé nohy (stupeň spáleniny II] se zčervenáním· a otokem velikosti vejce, byl ošetřen koncentrátem [stupeň koncentrace 2] bezbuněčného sterilního supernatantu podle vynálezu stejně jako je to popsáno vpředu. Po uplynutí doby 24 hodin zmizel otok, ačkoliv zčervenání ještě zůstávalo a pacient netrpěl žádnou bolest.

Takto bylo prokázáno, že koncentrát podle vynálezu má významný účinek na spáleniny a opařeniny.

Kosmetický prostředek bude nyní popsán s odkazem na následující příklady.

Příklad 1

Provzdušňováním míchaný fermentační tank objemu 1 000 litrů byl naplněn 800 lit ry živné půdy stejného složení, jaké je popsáno vpředu a po sterilizaci horkem a přirozeném ochlazení byla tato živná půda naočkována mokulem získaným předběžnou kultivací při teplotě 28 °° po dobu asi 30 hodin v 10 litrech stejného živného prostředí a v malém vzdušněném míchaném fermentačním tanku. Po ukončení fermentace byla kultivační tekutina filtrována, aby byly odstraněny pevné částice a buňky. Získaný filtrát byl koncentrován membránovým způsobem reverzní osmózou, takže objem byl zredukován na 200 litrů. Získaný koncentrát byl sterilizován výměníkem tepla deskového typu, sterilně naplněn do skleněných nádob a uskladněn v lednici (5 °C).

říl

Sterilizovaný koncentrát získaný v příkladu 1 byl lyofilizován a získaný prášek byl smíchán se sterilním krémovým základem za vzniku kosmetického prostředku.

Příklad 3

Kosmetický přípravek byl připraven inkorporací 1 g sterilizovaného koncentrátu získaného v příkladu 1 do kosmetického základu obsahujícího 1 g kyseliny stearové, 7 gramů včelího vosku, 4 g samoemulgovatelného monostearátu glycerolu, 30 g tekutého parafinu, 0,1 g bezvodého lanolinu a 40 g přečištěné vody a hnětením směsi obvyklým způsobem. Přípravek byl nalit a plněn do ampulí a naplněné ampule byly určeny k prodeji.

Příklad 4

Kosmetický prostředek byl připraven inkorporací vhodných množství hydrcchloridu pyridoxinu, χ-oryzanolu, allantoinu, DL-r-tokoferolu a norkového oleje do přípravku připraveného v příkladu 3.

Stručný popis výkresů

Připojené schematické výkresy ilustrují růst mikroorganismu Trichosporon Kashiwayama, kterého se používá podle vynálezu, na agarové živné půdě s braimborovým extraktem, při povrchové kultivaci při · teplotě 25 °° po dobu tří dnů. Obr. 1 je upraven podle mikrofotografie (zvětšení 75-násobné, ukazující stav adheze arthrospor z hýlových buněk za aerobních podmínek. Na obr. 1 je vidět, že arthrospory nepřiléhají ke konidiosporám, nýbrž tvoří boční vybíhající řetězce ze septálních částí hyfových buněk. Obr. 2 je podle zvětšení mikrofotografie (zvětšení 300-násobné) a ukazuje arthrospory. Obr. 3 je podle mikrofotografie (zvětšení 300-násobné) a ukazuje buňky a jejich pučení za anaerobních podmínek.

Claims

PŘEDMĚT VYNALEZU

Způsob přípravy produktu mikrobiální kultivace, vyznačující se tím, že mikroorganismus Trichosporon Kashiwayama, deponovaný ve FRI pod depozitním číslem 4 821, který lze identifikovat jako mikroorganismus náležející do rodu Geotricum nebo Endomycopsis, se kultivuje za aerobních podmínek na nebo v kultivačním prostředí obsahujícím zdroje uhlíku, dusíku a dalších esenciálních živin běžných pro rod Geotri cum nebo Endomycopsis, s výhodou například glukózu, sbírané mléko a kvasničný extrakt, při pH o hodnotě 4,0 až 6,0 a při teplotě 20 až 30 °C, a ze získané kultury se po ukončení kultivace odstraní buňky, například filtrací nebo dekantací, a popřípadě se získaná buněk prostá sterilní kapalina, sterilní filtrát nebo sterilní supernatant zkoncentruje nebo usuší.