CS245290B1 - Method of isocitratedehydrogenaze production - Google Patents

Description

-ΛΘΟΤΒ Π Ka ο ο ο ο o o ore ore ore ore ore ore ore ore ore ore ore ore ore ore ore ore ore ore ore ore ore 3 3 3 3 3 ΗΜΘΗΘΗΗΘ ΗΜΘΗΘΗΗΘ ΧΚΜΗΗΘΟΚΟ 3 3

XapaKTapHCTHKa Ζ3ΒΘΟτηηχ τθχηηήθοκκχ ρθπιθηηη:

Cnocotí nOJiyneHÍLH ΗΒΟΏΖΤρδΤβθΓΗ, πρΟΓΘΗΘβΗ yw Η3ΒΘΟΤΘΗ. HaH-dojiea paonpocTpaHBHHHM ββληθτοη nojiyvemie <£ epMeHiaH3 ep Cepjiqa (S. Ochoa in Methods in EnzymologyHrsg. SP Colowick and ND Kaplan, Vol., S. 699-704, Academic Press New York 1955; WW Cleland, VW Thompsonund RE Barden in Methode in Enzyraology, Hrsg JM Lowenstein, Vol XIII, S. 30-55, Academic Press New York (1969).

Upn ποιήθηκε E3OHHTpawnwporeHa3U b ochobhom nocTynamTT9K, hto ηοχοληηζ Ma Tepna eats cbhhhoo cepjme cHanaJia μθχβηεήθο-KE ΡΘ3ΜΘΛ £ Η8ΘΤΟΗ. OTCEffla HOJiyHaiOT όθΟΚΗΟΤΟΗΗΐώ OJOJIKOBHfi SKCT-ρβκτ, HairpHMQp, o homouiljo ηθητρη ^ γεροβθιιηη. Ilpa yoKopoHEH b40 000 aKTEBKOCTB πο ^ ηθηηογο cθρμθητθ cocTaBjmeT λο 0,4 ΗΕ / μγ, DpE 0ΟΛΘΘ ΚΕ3ΚΕΧ OÓOpOTaX ΟΗΘ ΗΒΧΘ. CTΛΗCTCTCTCTKT HKT 333333333333333333333333333333333333333333333333333333333333333opopopopopopopopopopopopopopopopopopopopopopopopop ΙΙοορθλοτβομ μηογοκρθτηογο nepeocasflemmOyjILČjáaTOM ΘΜΜΟΗΗΗ ΕΛΗ 3TaH0JI0M φβρΜΘΗΤ ysaSTCH OdoraTHTL £ 0οπθπηφΕΗθοκοΑ θκτεβηοοτε β 2-4 ΗΕ / μγ and nocjie nocjiejiyíomaS χρο-HH MaTorpa $ · Hanpmep Ha ΟβφβΛθκοβ Γ 25 and KM-nejunM03a - λο3Η3ηθηε2 b ΗΕ 10-20 / μγ. IIpojiasHna npenapaTH εμθϊοτ oóhhho ax-TEBHOCTB B 2-4 ΗΕ / μγ (W ΜΘΗΒΙΠΘ 3%). # 0 CEX πορ Ηθ Η3ΒΘ0ΤΘΗ CHOCOÓ ΠΟΛ ^ ΗΘΗΗΗθφρΜΘΗΤΗ Ε30ΕξΕΤρθΤ-ΛΘΓΕίξρ0ΓΘΗ33Η ΜΗΒρΟόΕΟΛΟΓΕΠΘΟΚΕΜ ΠγΤΘΜ. ΗθΛΒ Η300ρθΤΘΗΕΗ Η300ρθΤΘΗΕΘ ΕΜΘΘΤ ΗΘΛΒΚ) Πρθ &amp; ΚΟΧΗΤΒ TSKOŽ CHOCOÓ HOJiyHOHMφβρΜΘΗΤΘ, πρχ OCymeCTBJíeHHH ΚΟΤΟρΟΓΟ 3KTEBH0CTB Η3ΟΕ0ΪΤρ3ΤΛΘΠϋζ-poreHa3H Yae b rpyóoM óojikobom θκοτρθκτθ εμθθτ βηθηθηεθ β 1-3ΗΕ / μγ, Tax ητο πο ^ ηθηεθ rpeóyeT 3Η3Ήετθλβηο μθηβιπεχ 3aTpar, ΗΘΜ ΠΟ Ε3ΒΘ0ΤΗΗΜ ΠΟ CEX ΠΟρ ΜΘΤΟΠΗΜ. Η3ιϋΟ2ΚΘΗΗΘ CyiUHOCTH Ε300ρθΤΘΗΕΗ 3anane2 ε300ρθτθηεη ηβληθτοη nojiyneKae ποορθποτβομ πρεμθηθηεηΜΕΚροόΕΟΠΟΓΕΗΘΟΚΟΓΟ ECTOHHHKa φθρΜΘΗΤΘ ΠρΕ ΟΟΒΜΘΟΤΗΟΜ ΠρΕΜΘΗΘ-HHE hoboíí TexHOJiormj BejiaeMoro Φθρμθητθ c bucqkoíí cneííHčgizreec aKTEBHOCTBK-KOH).

CoWiaCHO Ε300ρθΤΘΗΕΙ £> 38 ^ 3 ^ ρΘΙΚΘΤΟΗ T3KEM 0Ópa30M, HTO-ffiOp μθητ E30iJ5iTpa wrxflporeHa3a (groves-3aBECHMul) πρεγοτοβλήθτοηE3 UITaMMa Pseudomonas putida ATGC 17,633th KyJIBTHBHpo- βθηεθ nraaMMa ocymecTBJíneTCfl πρθημυπθοτβθηηο Ha 2% Arap npx 245,290 -4- πρπ 4C Β HOTOHHHKa yr-ΛθρΟίΒ NH (NH4) 2SO4 Κ9Κ HOTOHHHKa a30Ta.

KyJIBTHBiPoHHe Pseudomonas putida OCyiHeCTBJMeTCH ΠΟΟΛΘ3apaaeHita hojihoS KyjiBTypu npH leMiiepaiype ot 20 to 40 ° C (npeHMywecTBeHHO npa: 30 ° C) b oydMepcHOHHo KyjiBType Ha & ew-KOft ΜΗΗΗΜΘΛΒΗΟΖ Ορθβθ.

BapantuBaHna npoBOflHTca b ycjioBnax θ θ ο ne ne ne ne ne ne 3 3 3 3 3 3 3 J J J J J J J J HAJ®. TaK K3K 3TO, HO BHflHMOMy, xapaicrepHo, κθκ b cjiynae ηθηθλβηογο ροοτβ, τβκ hxrpu flOCTHKSHHH CTaUHOHapHOS φθ3Η, aKTHBHOCTB φθρΜΘΗΤΘ Π0Κ33Η-Β3ΘΤ OCTpuS MaKCHMyM, κοτορίώ ΛΟΟΤΗΓΘΘΤΟΗ B KOHUe JIOrapn MH @ 3 H-ηθοκοζ $ POCl. Taxoe pa3BHTHe mgcto b βρηηιχηπθ πρπΠρΗΜΘΗΘΗΗΗ CT HCTOHHHKOB yraepOflB, ΚΟΤΟρΗΘ ΙΠΤΘΜΜ Β COCTOHHHHΗ0Π0ΛΒ30Β8ΤΒ. AÓCOJIETHHe 3Η3ΗΘΗΗΗ, yρΗΘ MOTyT HTHTB HOCTET-HyTH & ΜΘ ΜΘ & SI ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΒΗΧ ΟΟΟόθΗΗΟ ΠρΗΘΜΛΘΜΗΜΗ ΟΚΘΘΗΒΘΙΟΤΟΗ ΤΘΚΗΘ ΒΘΙΠΘΟΤΒΘ y-ΚΟΤΟ ΡΗΧ Β ΒρΟΧξθΟΟΘ ΟΚΗΟΛΘΗΗΗ ΒΟ3ΗΗΚΘΘΤ όΟΛΒΠΙΟΘ ΗΗΟΛΟ ΤΘΚΗΧ ΙφΟΜΘ-syTOHHHX npojiyKTOB (HanpuMep, θηθτοθχιθτθτ) κοτορπβ πρπ Orpa-ΗΗΉΘΗΗΟΜ 0ΗΘ0ΚΘΗΗΗ KHCJIOpOflOM B HX Λ9ΛΙ> ΗθίίΙΜΧ peaKUJlHX HOipeÓ-jlíhot HAJ® η. τθμ caMHM pereHepHpymT HAJJ +. ΠρΗΜθρ τθκηχ βκλοβΠρθΛΟΤΘΒΛΘΗ B TadJUEDP I. Β ΚΘΗΘΟΤΒΘ HCTOHHHKOB A30t ΠρΗΜΘΗΘΗΗΘ HaXOJOUH NH ^ Cl, (NH ^ SO ^ Η Τ.Π. Ho ΗΟΤΘΗΘΗΠΗ ΒρθΜΘΗΗ number 5 OT 40 £ 0 H3C0B 38ΒΗ0ΗΜ0 B-cth οτ Φηθηολογηηθοκογο cocTOSHHH h κοκηηθοτβθ sapaaaeMoro Ma-TepnaJia - daKTepnn cotínpaiOTCH, Hanpmiep, ΐίθΗτρΗφγρκροΒθΗΗθΜ, npOMHBaiOTCH φΟΟφθΤΗΗΜ dypepOM H npOBpamaKTCH B βθΚΠΚΗΘΗΗΘ B0θοκλθτοηηη2 SKCTpaKT, HTO, Hanpmiep, μοκθτ ocymecTBJíHTBCHodpadoTKoií yjiBTpa 3syK0M npn TewnepaTypax βΟληθη τοίο eaMep 3θηηη-C ^ nocjxeAywiM ηθητρη γηροβθηκθμ.

Coflepscamafíca β 0θκλθτοηηομ rpyóoM θκοτρβκτβ φβρΜθΐιτ ποβ23η-BaeT b 3aBHCHM00Tn ot HCTOHHííKa yrjiepoxa npescTaB ^ eHHiíe b Tatí-ΛΗΙίθ I ΟΠΘΙξΗφίΓΪΘΟΚΗΘ aKTHBHOCTH. ΡθΗΒ Η ^ ΘΤ 3Π0Μ From 9Μθρ- 245290 -5- chohhom KyjiLTHBHpoBaHHH Ha 2 $ arape. linden cyÓMepcHOHHiix YC-JIOBHHX KyjIBTHBffpOBaHHH ΤΘΚΗΘ 3Η3ΗΘΗΚΗ aKTHBHOCTH .HOCTHraiOTCHnooae cooTBGTCTByícmaro οιιτημηροβηηκη raeoBoro cocTaBa h CKO-pOCTH ΠΘΡΘΜΘΠΕΒΘΗΗΗ B 38BHCHM0CTíI KOHCTpyKOJIOHHUX ΠΒβΏΜΘΤ OT-POB φβρΜΘΗΤθΐίΗΟΗΗΟΓΟ cocyra. ΟΟΟύθΗΗΟ βηγοληηθ po3yjn> TATE ΛΟ-CTnrajmc £ b cjiynae, ecrã ι ^ λβτηββροβθηηθ npoBo; njuioc £ GIP IRPA-μθηθηηη yrjiQBOítopojioB b KanecTBe hgtohhhkob yrjiepo.ua, κοτορυθnOJÍBOflHJUIGB φθρΜΘΗΤΘΙζΗΟΗΗΟΙ K ^ B COCyjiy ra300Ópa3H0M COGTOHHHK.H3 óecKJieToqHoro rpydoro deraoBoro 3KCTpaKTa wwpawwpo-reHa3a μοκθτ óhtb otíorameHa c homoiw ^ paKUHOHspoBaHHoro ocasc-ΛθΗΗΗ COJIHMH UJDI 3KCTpaKHEie2, ρΠρίΙΜθρ, C CyJIL $ aTOM aMMOHHa, b 5-10 pa3. JUa θτογο κ rpydOMy dejiKOBOMy SKCTpaKTy jjoóaBJíaeT-ca TBepsuS cyji £ $ aTMMOHHa λο κοηθηηζ KOHneHipamm b 70% Ha-cumeHjaa, irpaaeM Bca βκτηβηοοτβ nepexojmT b ocasoK. JDjia sajiB-HeSmero odorameima H3onjiTpaTsewporeHa3H octstok nepeMenmBa-erca Kasame 5 MHHyT c pacTBopoM cyji> $ aTa θμμοηηη, cosepaamero0,05 moji / ji NaH2P04 πρκ 0 ° C H cHHKawtxca KOHqeHTpaiiHaxcyjit $ aTa θμμοηηη. Φθρμθητ pacTBopaeTca npa 3tom b B03pacTaranežοτθπθηη. HθρHjm h h h h h h h h h h h $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $ $eaeaeaeaeaeaeaeaeaeaea

UpnroTOBjíeHHHa coraacHO π300ρθτθηηχ) φβρΜβΗΤ χοροιπο coxpaHHM.lípu cnenjiqsneGKOH θκτηβηοοτη 5-10 mmojib / MHH / μγ óejiKa-ycTaHOB which CZK ηθ óoaee cjiejtywix ayaeposHHX θκτηβηοοτθ2: ajucorojiB-, MaaaT- aaKTaT H-R ernj3poreHa3H, I waa MeHee%. H3on ^ TpaTAeninporeHa3a ρ η $ Han Han Han Han Han Han Han Han Han Han Han Han Han 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 b 50 HE / mt. HaθοΟρθτθηηθ noacHaeTca Ha cjieryiomeM npmepe ocymecTBJíemia.HpiiMep ocyiuecTBJíeHna η300ρθτθηηη

KyjIBTHBHpOBaHHe Pseudomonas putida ATCC 17633ItIsHJIOCBb cpejje, coflepKameH Ha and cjieryiomíe οοοτθβηηθ nacTii:

KpHPO4, 7.46g; KaII 2 PO, 0.54 g; MgSO 4. 7 µl, 20 mg;

CaCl2. 2,320, 20 mg; FeOTH ^ CSO ^. 6 H 2 O, ΊΟ mg; 245290 -6- B κθ ^ θοτβθ εοτοηηηκθ a3OTa cnywi; (nh4) 2 504 (<g / i).

JUH 3ΜΘΡΟΗΟΗΗΟΓΟ KyJIBTHBHpOBaHHH ΠΜΜ3ΜΜ3 B C Οΰΐ C K OC OC OC OC%%% och och och och och och Ha ochobg βηπιθ-oniaoaHHoS cpesa. Ha npzMeHiUiIioBi 6 mji pacraopa arapa.3aTBepjieBaHE © arapa nonsho ocymecTBjniTBCH b MaKcmajiBHo bos-MOKHOM ropH3OHTaJIBHOM HOJIOWHO UpOÓHpOK. JÍRA HOnnepjKaHKHunaMMa npotíHpKH nocjie nepeceBa Ha ποβθρχηοοτβ, HanpHMep, cΠΟΜΟΟΒΙΟ ΠΘΤΤΠΙ, CTaBHTGH ΒθρΤΗΚΘ JIBHO. B ββΚΛΚΗΘΗΙΙΘ SOÓaBJUHOT0,1 mji naicaHa, npaneM ποβθρχηοοτβ rejin tojibko b οοηοβθηιπι co-cyna πρηχοηπτ b οοπρηκοοηοβθηηθ c hctohhhkom yrjiepona.

OcjieΗΗ 60 ° °an 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60HHHHHHHHHHHHHHHHHHHH5555ji55jijiji5ji5555555555555555555555555555555555555555555555jijijijijijiji -hhh cydMepGHOHHO KyjiBTypu. Hjiothogtb noceBHoro Ma Tepna JiaEgooM /> 0.05. Hpn Kyjr &amp; THBHpoBaHEH Ha yrjieBOflopoflax, HanpHMep, on γθκοθηθ, hotohhhk yrjiepona nonaeTcne nepeara 30 »eny 30 eny eny eny eny eny eny.

Thus, B 10 C JIHTpOBOM φθρΜΘΗΤΘTHBHOM COCyne ΗΘΠΟΛΗΘΗΗβΜ £ 0 7 JInocTynjieHHe ra30B02 cmgch (2-10 Ji / NAC) ocymecTBJíaeTCH nepe3conepjsamyro γθκοθη npoMHBHyio CKJiHHKy NPH 30 ° C Cpennee nocTyn-jieinie rencaHa b Φθρμθητββιιοηηημ oocyn npn θτηχ ycjioBHnx coc-5- TaBjíaeT okojio 10 MJi / nao. KyjiBTypaJiBHan ηητθηοηβηο ne-ΡΘμθιοηβθθτοη (800 oó / mhh). Hocjie KyjiBTHBHpoBaHHH b τθηθηηθ20-30 NAC πρπ 30 ° C - MyraocTB cPen οοοτθβληθτ nocjie stotoEg0QM / ~ <2-4 - óaKTepmi oodHpaioTcn nocpencTBoii iíeHTpiírayriipoBa-HHH, npoMHBaiOToa poemathhm óypepow (0.05 Mojib / her, pH 7.5) b hpa3pyinaioTCH 3aKJiOTeHne c πομοιιιβιο yjiBTpa3ByKa irpu 4 ° C. Eec-KjieTonHLĚ rpyÓHÍi θκοτρβκτ nojiynaeTcn neHTpiigynrpoEaHiieM. One- * HH & raecxaH θκτηβηοοτβ H3Oin-iTpaTnerHnporeHa3u npn sthx ycjioBH-nx nocraraeT 3HaneKittens 1-2 /Ε / μγ. In the present invention, there is disclosed a pH range of 0.05 m / m @ 2 / cm @ 2 / cm @ 2 / cm @ 2 / pH 8 (pH 8) r / v / w / w / w / w / v / v of 5-20 mt / ml. ο γ γ ac ° up 4 ny ° ° ° ° ° ο ο ο ο ο ο ο ο ο H H%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%..... 245290 -7- Qowasi θκτηβηοοτβ n3oxjjiTpaTflemflporeHa3H ηθχο ^ ητοη řepu θτομb ocajute. Kοολθ yeHTpH ^ yinpoBaHiiH aj ο K K K ir pu C pu pu pu pu pu pu 40 40 b b b b b b b b b b b b b b b ax b b b b b b b Π ο%%,,,,,,,, 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 ax ax ax ax ax ax ax ax ax ax ax ax ax ax ax ax ax ax The CHOBA ocaswaeTCH nyieM λο08βηηη cyjBqáaTa θμμοηηηflo kohohoho KOHiíeHTpaumí b 70% HacumeHHa. Ecjm nojtyHeHHHíi no-cpeflCTBOM SKCTpaKmra cymgáaTa θμμοηηη cynepHaTaHT (second cynepHaTaHT 40%) b 15 xojnraecTBe np ^ c as epnaHneM tíajuca 130 b mtHaHocHTCH Ha KOJioHKy, Koiopan coaepsaiT 80 IO KapdoKcnjienHJi Wi-ce $ apo3H sjírapyeTCH NPH h 22 ° C 100-200 µl pacTBOp cym> $ aaMMOHHH (HacmueHiie b 40%), this is H3OHHTpaTe; 245290 -8-

Taóona I ΟΠΘϋΗφΗπθΟΚΘΗ aKTHBHOCTL · ΙΙΗΤ30ΙΙΗΤρ3ΤΒΘΓΗ £ Ρ0ΓΘΗ33Η B rpyÓOM3Κ0ΤΡ3ΚΤΘ H3 Paeudomonas putida ATCC 17633 H0CJI3 poCTaHa pa3jmHHh [x ucTOHHHKax yrxepo, on

Kyjn> THBnpoBaHiíe hpoboíjijiogb Ha KÖCO Arap, npiaraeM ηοτοή-hhkh yřjaepofla noóaBJDumci b KOHneHTpaw but 0.5% Kajajmž.ΙΙοολθ HHKy.óanrazí b NACA 24 NPN 30 C óaKiepra ομηβθληοβ ^ Akthbhoctb onpesejiKHacB nocjie 3aMopaHHBaHHH-οττηηββηιιη kjxo-flow b npHcyTCTBini 0 , 1% 100ρητοκθ X 100.

Hctohhhkk yrjieposa OOTHHecKan oothoctb E600 ACHBHOCTí φορΜΘΗ-Ta (mmojil / mhh / μγ) LHTpaT 1,2 0,8 H30Hř [TpaT 1,0 0,7 a-KBTorjwTapaT 3,0 1,5 $ yMapaT 2,5 1,2 cywtHaT 3.8 0.7 njipyBaT 3.4 1.4 D, L-MaJiaT 1.9 2.0 jiewtH 1.5 1.4 wiyTapaT 2.9 3.0 reiccaH 1.4 2.0 ΛΘΚΘΗ 1.5 1 , 1 245290 -9-

Taójmna 2 OÓOraiIlQHHO Η30Ι £ 1τρ9ΤΛΘΓΗβρ0ΓΘΗ331Ι H3 Pseudomonas putidanocpeflCTBOM SKCTpaKrpui cyjn> $ a? 0M θμμοηηη OóihhS dejcoK Otímaa θκτηβ- ΟπθιφιΦη- Bekojc (μγ) HOCTL · (mmojil / MHH) Neckam QK-THBHOCTB (mmojxi> / MHH / mt) Ppytíuž sKCTpaKTmna ocaflOK 70% 5800 6080 1.04 I. cynepHaiaHT 40% 1050 1650 1.5 27 2. oynepHaTaHT 40% 550 4040 7.3 67 245290 -10- SQWJIA HSOEPEIEHHa

1. Cnocod nojiyneinui H3OOTTpawrworeHa3H oTjmnawíftcH ΤΘΜ, ΏΟ H3OHHTpawrHJiporSHa3a ΒΗΒΘΛΗΘΤΟΗ H3 ΙϋΤ3ΜΜ3 Pseudomonasputida ATCC 17633, Kyju »THBnpyeMoro b cyÓMepcHOHHO

KyjiBTyp © Ha khjíkoh μηηημθλβηοζ cpese.

2. CnocOs HO HyHCTs I, OTJIHnaOWCH ΤΘΜ, HTQPseudomonasputida ATCC 17633 KyjLETHBHpyeTGH npEt TewmepaTypax 20-40 ° C B CytMepCHOHeGy KyJIBType Ha WJCOfi MEHHMaJIBO θρθβθ, H HO Η0-TeneHm BpeMeHH pocia οο 5 λο 40 nao. óaKTepm codnpaioTCfl, NPO-MHBaiOTCH φΟΟφθΤΗΗΜ dy $ QpOM Η ΠθρθΒΟΛΗΤΟΗ Β deOKJIQTO ^ HHZ 3KCT-ρβκτ, Η3 κοτοροΓΟ φθρωθΗτ odoramaeTca nocpescTBOM φρβκηκοΗΗρο-Β3ΗΗ0Γ0 ΟΟΛΘΒΟΓΟ OCaWHHH, ΠρΗΊΘΜ 70 ^ -ΗΟΘ ΗβΟΗΠξθΗΗΘ <NH4) 2S04βθλθτ κ nojiHOMy ocaaweHHio φβρΜβΗΤΘ, τογλθ Κ3Κ 40- 50 ^ -ηοθθ Haca-ΏθΗΗθ ποητη paciBopaeT. 3. Cnocod no nyHCTy 2, OT-mtawEScn τθμ, hto b KaneciBeuctohhhkob yxoiepona πρημθηθηηθ HaxojcaT iniTpaT, H3ontnpaT, a-KGTorjiyTapaT, $ yMapaT, cyKnmiaT, wapyBaT, d, l -μβλθτ, JiefirpíH.iviyTapaT, reiccaH, . β οτλθλβηοοιή ηλη β προηβΒΟΛΒ-ηηχ KOMdHHanaax. '4. Cnocod no nyHKTaM οτ I ro 3, OTjmnawtžcn τθμ, hto no ^ ofLUTcn 0,3-1,5 λ B03syxa / rJi κκτθτθλβηοΕ: cpenn. 5, OTjnrcaiQiiiHScH τθμ, hto bKanecτβθ hctohhhkob yimepojia πρημθηηβτοη yrjieBOjiopojm, ΛΘΚΘΗ H Π.Π., ΠΟβΒΟΛΗΜϋθ B ra300dpa3H0M COCTOHHHH. 6. Cnocod no nyHKTaM οτ I ro 6, OTmnawScf τ τμμ, hton3ODjiTpaTíterHjiporeHa3a odoramaeica c homoiulio rnjpo ^ odHpo xpo-MaTorpa ^ m Ha IQ-KapdOKCHKenjMC © $ apo3e with 50 mmojib / mhh / μγ. 245290 -11-

AHHOTAW Ιί30 <3ρθΤθΗΗθ KacaeTCH cnocoda noay ^ ieHHa H3onaTpaw: rawporeHa-3H. Oho meeT not © npejtioKHTt cnocotí nponywm stopo φορΜΘΗ-Ta, b nponecce κοτοροτο θκτηβηοοτβ H3onHTpaTneirmporeHa3U bI no 3 HE / μγ nocTuraeTCH y &amp; e b rpypyM βκοτρβκτθ. An CT ΗΟΗ b τ η ο 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 ΗΤ 3 3 3 3 3 3 3 ΗΗΗ 3 3 CT CT 3 3 CT 3 CT CT Ú CT

Sanana pemaettnnyTeM nojiynenan H3 niTaMMa Pseudomonas putidaATCC 17633, φθρΜθΗτβ. 24ό29ΰ

Claims (5)

245290, 2 δ δ) i) of the invention A process for the production of isocitrate dehydrogenase, characterized in that the isocitrate dehydrogenase is obtained from a strain of Pseudomonas putida ATGC 17oJ3 grown submerged on a liquid minimal medium. 2. A method according to claim 1, wherein the Pseudomonas putida ATCC 17633 is grown on liquid minimal soil at 20 to 40 DEG C. and the bacteria are separated, rinsed with a phosphate buffer and transferred to a non-toxic form after a growth period of from 5 to 40 hours. the cell extract from which the ferment is enriched by fractional salting out, with 70% saturation / NH 4 / SO 4 resulting in complete salting out of the ferment at 40-50% saturation, the ferment almost dissolving. 3. A process as claimed in claim 2, wherein the carbon source is citrate, iso-titre, ketoglutrate, fumarate, succinate, pyruvate, D, L-small, leucine, glutarate, hexane or decane alone or in any combination. 4. The process of claims 1 to 3 wherein 0.3 to 1.5 L of air / culture medium is fed. 5. A process as claimed in claim 1, wherein hydrocarbons, such as hexane and decaffinate, are used as carbon sources. 6. The process of claim 1, wherein the isocitrate dehydrogenation is performed by hydrophobic chromatography on 10-carboxydecylsepharose to 50 mmol / min / mg. Recognized by the invention on the basis of the results of the expert review by the Patent Inventory Office, Berlin, DD. Severografia, n. P., MOST Price 2,40 Kcs