CS244573B1 - Kmen mikroorganizmu Acremonium chrysogenum CCM F-752 - Google Patents

Description

3 4 244573

Vyrlález sa týká temena mikrncirganAzmu

Acremonium chrysogenum CCM F-752 (in- terně pracovně označenie BB-IV/82-DJ, pro- dukujúceho cefalosporín C.

Tento kmen bol získaný z kmeňa Acre-monium chrysogenum ATCC 48272 působe-ním mutagénov a opakovanými pasivnýmiselekciami.

Produkčně kmene používané v súčasnos-tf pre výrobu cefalosporínu C produkujú prisubmerznej fermentácii do fermentačnéhomédia okolo 12 000 ug cefalosporínu C prikultivačně] době 120 až 180 hodin. Rozhodu-júcou cestou pri zvyšovaní výroby a zlepšo-vaní jej rentability je zvyšovanie produkciepomocou nových, vyššieprodukčných výrob-ných kmeňov. Pri nových kmeňov získanýchaktívnou a pasivnou selekciou je výhodnésa orientovat na kmene, ktoré dosahujú vyš-šiu produkciu v časovej jednotke, alebo nakmene, ktoré si udržujú produkčnú rýchlosťcefalosporínu C i pri predlženej kultivačnejdobě.

Uvedené přednosti má i nový kmeň mikro-organizmu Acremonium chrysogenum podlávynálezu, uložený v Československej zbier-ke mikroorganizmov Univerzity J. E. Purky-ně v Brně, pod oziniačemím CCM F-752 (pra-covně označenie BB-IV/82-D). Výhodou nového kmeňa je zvýšená pro-duktivita cefalosporínu C, ktorá dosahujeaž výše dvojnásobku produkcie doterajšíchkmeňov. Významnou vlastnostou kmeňa je schop-nost udržaf si vysoká produkčnú rýchlostpri predlženej kultivačnej době. Ďalšou, ekonomicky významnou vlastnos-ťou kmeňa je jeho schopnost produkovatcefalosporín C na produkčných půdách ne-obsahujúcich metionin. Pri doteraz známýchkmeňoch bol metionin rozhodujúcou a urču-júcou zložkou živných pod pre produkciu ce-falosporínu C.

Pri šfachtení produkčných kmeňov sadnes používajú už bežne známe postupy,kombinujúce aktivně mutagénne zásahy spasivnou selekciou, Z najznámejších muta-génnych činidiel sa používajú ultrafialovéžiarenie, nitrózometylmočovina, N-yperit,akriflavín a ďalšie buď samostatné, alebov kombináciach. Dalej sa tieto zásahy kom-binujú tiež pasážovaním kultury na půdáchs prídavkom vhodných, Specifických čini-diel.

Nový kmeň podlá vynálezu bol taktiežzískaný a vyizolovaný použitím týchto, po-stupov. Základným výchozími materiálom prešlechtitelský proces bol kmeň ATCC 48272,na ktorý sme působili striedavo UV svetloma nitrózometylmočovinou. Vybrané izolátybolí dalej podrobené pasážovaniu cez médiáso zníženým, až nulovým obsahom metioni-nu. Po opatovnom použití UV světla a dal-ším pasážovaním boli získané izoláty, ktoréboli podrobené overovaniu ich vlastností zhladistea vhodnosti prlemyseiného, použitia. Zároveň týchto práč bol vybraný kmeň, na ktorý uplatňujeme patentový 'nárok. Při stanovovaní produkcie cefalosporínu Cboli použité Standardně metody biologickéza použitia testovacích kmeňov Bacillus sub-tílis a Alcalígenes faecalis, dalej metodaspektrofotometrická a metóda vysokotlakej,kvapalinovej chromatografie.

Nový kmeň má s původným kmeňom rov-naké niektoré znaky. Pri monospórickomrozseve nia peptónovej sporuilaě.neíj pode vy-tvára okrúhle kolonie priemeru 6 až 8 mm.Po 13 až 15 dňoch sú kolonie vysporulova-né. Majů bielu farbu s nádychom do žita,krémová. Stárnutím, farba postupné pre-chádza do krémovej. Kolonie sú radiálně,nepravidelné zvráskavené, v střede sa zvy-šujú do mierneho špica. Na iných typochsporulačných pod je doba nárastu predlže-ná a kolonie nemajú všetky charakteristickéznaky. Pri submerznej kultivácii sú vláknav Stádiu pomnožovania tenké, dlhé, niekedyvytvárajú zhluky. V produkčnom Stádiu sapostupné skracujú až do gufovitých foriem. Běžné formy dlhodobého uchovávaniakmeňa nie sú velmi účinné. Lyofilizácioukonzervovaná kultura si zachovává klíči-vost spór najviac tri mesiace, po tejto dobětáto forma uchovávania nezaručuje dalšiuživotnost kultúry. Jednoznačné a reprodu-teovatefné výsledky pri uchovávaní kmeňadává metóda permanentnej selekcie mono-spórickým výberom z vysporulovanej kul- túry starej 3 až 4 týždne.

Podobné ako materský kmeň je vegetatív-na forma submerznej kultivácie náročná nadostatočnú teoncentráciu rozpuštěného kys-líka v živnej půdě. Ak nie jě zabezpečenýdostatečný přenos kyslítea do půdy a je,hokonce,ntrácia poklesne k hodnotám blízkýmnule, rast a produkcia kultúry sa zasta-ví.

Velmi významnou vlastnostou kmeňa je,že jeho produkcia cefalosporínu C nie jepodmieineiná přitom,no,stou metioniou. P r í k 1 a d 1 ' ·

Inokulačná půda v baničkách sa naočko-vala spórovou suspenziou a kultivovala sapri 28 °C na rotačnom trepacom stroji 47 ho-din. Takto připraveným vegetatívnym ino-kulom sa naočkovali produkčně baničky soživnou půdou obsahujúcou kukuřičný vý-luh, arašidovú múku, glukózu, škrob, uhli-čitan vápenatý, soli a sójový olej. Kultiváciana rotačnom trepacom stroji prebiehala priteplote 25 °C po dobu 144 hodin a bola do-siahnutá produkcia cefalosporínu C 15,560(Ug/ml. Příklad 2

Fermentácia cefalosporínu C prebiebala v laboratórnych fermentačných tainteoch ob- sahu 20 litrov. Vegetativně inokulum sa pri-

Claims (1)

1. 244573 pravilo taktiež na tomto zariadení na po-de obsahujúcej ako hlavně zložky kukuřič-ný výluh, sacharózu, octan amónny, uhli-čitan vápenatý a sójový olej. Nárast inokulabol ukončený v 69. hodině kultivácie. Ino-kulum v množstve 10 °/o bol naočkovaný pro-dukčný tank so živnou pódou obsahujúcou ako hlavně zložky kukuřičný výluh, sójovýolej, uhličitan vápenatý a zmes solí. V prie-behu kultivácie bol přidávaný sójový olej,síran amónny a čpavková voda. Za 151 ho-din kultivácie sa dosiahla produkcia 26,920,ug/mlcefalospormu C. PREDMET VYNALEZU Kmeň mikroorganizmu Acremonium chrysogenum CCM F-752 produkujúci cefalosporín C.