CS242621B1 - Způsob stanovení lidského choriového gonadotropinu v preparátech imunoglobulinů připravených z náhradních surovin - Google Patents
Způsob stanovení lidského choriového gonadotropinu v preparátech imunoglobulinů připravených z náhradních surovin Download PDFInfo
- Publication number
- CS242621B1 CS242621B1 CS834923A CS492383A CS242621B1 CS 242621 B1 CS242621 B1 CS 242621B1 CS 834923 A CS834923 A CS 834923A CS 492383 A CS492383 A CS 492383A CS 242621 B1 CS242621 B1 CS 242621B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- buffer
- raw materials
- diluted
- immunoglobulin
- human
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 239000002994 raw material Substances 0.000 title claims description 9
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 claims abstract description 28
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 11
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims abstract description 5
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 3
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 claims 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 abstract 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 abstract 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 abstract 1
- 230000036046 immunoreaction Effects 0.000 abstract 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 1
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 231100000508 hormonal effect Toxicity 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 238000012092 latex agglutination test Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Stanovení spočívá v tom, že preparát
imunoglobulinu se ředí pufrem o pH 6,5 až
8,0 s přídavkem sérového albuminu, například
hovězího albuminu v množdtví 0,005 až
1 %, načež se imunoenzymatickou metodou
stanoví"obsah lidského choriového gonadotropinu.
Preparát imunoglobulinu lze ředit
pufrem o pH 6,5 až 8,0 s přídavkem sérového
albuminu a clioridu sodného maximálně
do koncentrace 0,3 M. Výhodné je
používat fosfátový pufr. Dále je výhodné
použít imunoenzymatické metody, při níž
se provádí adsorbce jedné z imunoreagencií
na pevný nosič.
Description
Způsob stanovení lidského choriového gonadotropinu v preparátech imunoglobulinů připravených z náhradních surovin
Stanovení spočívá v tom, že preparát imunoglobulinu se ředí pufrem o pH 6,5 až 8,0 s přídavkem sérového albuminu, například hovězího albuminu v množdtví 0,005 až 1 %, načež se imunoenzymatickou metodou stanovíobsah lidského choriového gonadotropinu. Preparát imunoglobulinu lze ředit pufrem o pH 6,5 až 8,0 s přídavkem sérového albuminu a clioridu sodného maximálně do koncentrace 0,3 M. Výhodné je používat fosfátový pufr. Dále je výhodné použít imunoenzymatické metody, při níž se provádí adsorbce jedné z imunoreagencií na pevný nosič.
242 621
- 1 242 621
Vynález se týká stanovení lidského chořiového gonadotropinu v purifikovaných i nepurifikováných preparátech imunoglobulinů připravených z náhradních surovin - např. erymasy, poporodních a potratových sér užitím metody enzymimunoanalýzy. Uvedené výchozí suroviny obsahují lidský choriový gonadotropin /hCG/, který při výrobě přechází ze suroviny do konečného preparátu. Přítomnost hGG v konečném preparátu je nežádoucí, nebot jde o biologicky účinnou látku - hormon- za fyziologických okolností produkovanou lidskou placentou. Tento hormon v konečném preparátu zanášen do organismu příjemce-pacienta-což je velmi nežádoucí, přestože se jedná o poměrné malé dávky. Pacientem může být i dítě a jakékoli vnější hormonální vlivy jsou nežádoucí. Aby bylo možno vyvinout účinný způsob odstraňování hCG z preparátů imunoglobulinů při jejich výrobě, je nutno mít k dispozici spolehlivou metodu, kterou lze hormon v preparátech kvantitativně stanovit.
V současné době jsou k dispozici pouze testy na principu hemaglutinace /Wide,· L.: Lancet,ii, 1969,s«863/ či latexové aglutinace /01son,Adduci,j Amer.J.clin.Pathol., 39, 1963, s.589/·
Tyto testy jsou málo citlivé, pro stanovení hCG v proteinovém mediu, jako jsou např. preparáty imunoglobulinů. Jsou značně ovlivňovány složením stanovovaného preparátu a výsledky jsou neobjektivní.
Jako vyhovující se ukazuje stanovení hCG v preparátech imunoglobulinů radioimunologickou metodou /RIA//Talow, Berson,: Nature/Lond./, 184, 1959, s.1648/. Soupravy pro toto stanovení jsou však dostupné pouze z dovozu z devizové oblasti. Metoda mé i řadu nevýhod, nutnihst budování speciálních izotopových laboratoří, pro vyhodnocování výsledků je třeba nákladných počítačů impulsů,
- 2 242 621 komerční soupravy mají krátkou dobu použitelnosti-řádově týdnů, práci je nutno provádět dle přísných bezpečnostních předpisů a použité radioaktivní reagencie skladovat do inaktivace na místech k tomu určených. Navíc práce s radioizotopy představuje zdravotní riziko. Náklady na jedno vyšetření jsou poměrně vysoké.
Uvedené nedostatky odstraňuje postup dle vynálezu, který spočívá v tom, že preparát ímunoglobulinu se ředí pufrem o pH 6,5 až 8,0 s přídavkem sérového albuminu,například hovězího albuminu v množství 0,005 až 1 %, načež se imunoenzymatickou metodou stanoví obsah lidského choříového gonadotropinu.
Preparát ímunoglobulinu lze ředit pufrem o pH 6,5 až 8,0 s přídavkem sérového albuminu a chloridu sodného maximálně do koncentrace 0,3M. Výhodné je používat fosfátový pufr.
Dále je výhodné použít imunoenzymatické metody, při níž se provádí adsorbce jedné z imunoreagencií na pevný nosič.
Příklad stanovení: Imunoenzymatickou metodou byl stanovován lidský choriový gonadotropin v preparátech imunoglobulinů výrobce ÚSOL o.p. Praha - šarže č. 2/83, 4/83, 5/83, 8/83, 12/83 ve formě 16% roztoku. Dále byl stanovován obsah hCG v lyofilizovaných preparátech imunoglobulinů výrobce Imuna Šarišské Michelany, šarže 70/72, 26/77, ze kterých byly připraveny též 16% roztoky. Stanovení bylo provedeno na mikrotitračňích destičkách typu P výrobce KOH-I-NOOR Dalečín.
Postup stanovení:
1/ Lyofilizovaná protilátka proti hCG byla rozpuštěna v pufru a do každé jamky destičky bylo aplikováno 0,2 ml roztoku protilátky. Za 20 hodin při teplotě +4 °G /inkubace do druhého dne v lednici/ je navázání protilátky na stěnu jamek ukončeno. Roztok ze všech jamek byl odstříknut do výlevky a každá jamka destičky byla pufrem 3x promyta.
2/ Do celkem 2xdevíti jamek /vždy ve dvojicích/ byly do jamek vždy v objemu 0,1 ml aplikovány standardy hCG, do zbývajících jamek naředěné preparáty imunoglobulinů /ředění je prováděno geo- 1 242 621 metrickou řadou 2n 0,01 M fosfátovým pufrem 0,14 M NaCl 0,01% merthiolét 0,1 % hovězí sérový albumin pH 7,5 /lze použít i jiných vhodných pufrů/ vždy v objemu 0,1 ml do každé jamky. Ředění vzorků je prováděno proto, aby bylo možno výsledné hodnoty absorbancí přepočítávat proti kalibrační křivce /z více bodů/. Destička se standardy a vzorky se poté inkubovala 2,5 hod v termostatu při 37 °C.
3/ Obsah jamek destičky byl odstříknut do výlevky a jednotlivé jamky 2x po sobě promyty pufrem. Do každé jamky bylo aplikováno 0,1 ml enzymem značené druhé protilátky proti hCG /jako enzym je použita křenová peroxidáza/. Destička byla inkubována
1,5 hod v termostatu při 37 °C.
4/ Obsah jamek destičky byl odstříknut do výlevky a destička 4x po sobě promyta pufrem. Do každé jamky bylo aplikováno 0,1 ml roztoku substrátu s chromogenem. Destička byla inkubována 40 minut v termostatu při 37 °C. Nastává rozklad substrátu enzymem, který se projevuje změnou barvy chromogenu.
5/ Reakce ve všech jamkách byla zastavena přidáním 0,05 ml 4 N h2sd4.
Výsledné zbarvení obsahu jamek se odečte na fotometru. Čím vyšší byla koncentrace hCG ve vyšetřovaném vzorku, tím intenzivněji proběhla reakce a tím intenzivnější je zabarvení chromogenureakce je tedy kvantitativní. Zabarvení lze odečítat fotometricky - jako absorbanci. Pokud vyšetřovaný vzorek neobsahoval hCG nedochází k žádné vazbě na prvou vrstvu, následující vrstva se nemá též možnost vázat, ve zkumavce po propláchnutí tedy není pří tomen enzym, nedochází k rozkladu substrátu a změně barvy chromogenu.
Pokud se k neznámým vyšetřovaným vzorkům přiřadí i několik vzorků o známé koncentraci hCG /tzv. standardních/, lze podle kalibrační závislosti-vynesením známých koncentrací standardu a jim příslušejících absorbancí na dvě na sebe kolmé osy sestrojit kalibrační křivku. Ze zjištěné absorbance vzorků, při nichž byly aplikovány standardy hCG se sestrojí kalibrační křivka, z níž se na základě zjištěné absorbance vzorků ředěných imunoglobulinu odečte koncentrace hCG. K vynesení křivky a výpočtu koncentrace
- 4 242 β?1 hCG lze též použít počítače. Ke stanovení lze použít namísto mikrotitračních destiček, kde každá jamka destičky je jakoby malou zkumavkou, zkumavky.
Výsledky /dle přepočtu mikropočítače Tesla PMD-85/:
I. preparáty imunoglobulinů ÚSOL o.p. Praha
| šarže č. | jednotkový obsah hCG /IU/ml/ v 16% roztoku | chyba stanovení v % /variační koef./ |
| 2/83 | 20,557 | 18,59 |
| 4/83 | 27,711 | 25,49 |
| 5/83 | 24,982 | 9,37 |
| 8/83 | 40,899 | 20,43 |
| 12/83 | 36,853 | 9,857 |
| II. preparáty imunoglobulinů Imuna | Šarišské Michalany |
Ve stanovených šaržích č. 70/72 a 26/77 se nepodařilo prokázat lidský choriový gonadotropin. Dotazem u výrobce bylo poté zjištěno, že tyto šarže nebyly připraveny z náhradních surovin, ale z krve zdravých netěhotných dárců /tedy hCG neobsahujících surovin/.
Opakovanými pokusy bylo prokázáno, že imunoenzymatickou metodou lze provádět stanovení lidského choriového gonadotropinu v preparátech imunoglobulinů připravených z druhotných surovin. Způsob stanovení podle vynálezu je 200x citlivější než hemaglutinační či latex-aglutinanční testy ani netrpí nevýhodami radioimunologických testů.
Test lze v provedení na zkumavkách užít v každé laboratoři vybavené běžným spektrofotometrem, k provedení je třeba jen pipet vhodných objemů, běžného termostatu a domácí suroviny. Není omezen bezpečnostními předpisy a náklady na jedno stanovení jsou nízké. Využiti imunoenzymatické metody pro stanovení hCG přináší možnost citlivé a přesné kvantifikace hCG v preparátech imunoglobulinů a může významně přispět k péči o zdraví obyvatelstva.
Claims (4)
- PŘEDMĚT VYNÁLEŽF242 6211. Způsob stanovení lidského choriového gonadotropinu v preparátech imunoglobulinů připravených z náhradních surovin, vyznačující se tím, že se preparát imunoglobulinu ředí pufrem o pH6,5 až 8,0 s přídavkem sérového albuminu, například hovězího albuminu v množství 0,005 až 1,00 % hmot., načež se imunoenzymatickou metodou stanoví obsah lidského choriového gonadotropinu.
- 2. Způsob podle bodu 1 vyznačující se tím, že preparát imunoglobulinu se ředí pufrem o pH 6,5 až 8,0 s přídavkem sérového albuminu a chloridu sodného' maximálně do koncentrace 0,3 M.
- 3. Způsob podle bodu 1 a 2, vyznačující se tím, že se preparát imunoglobulinu ředí fosfátovým pufrem.
- 4. Způsob podle bodu 1 až 3, vyznačující se tím, že se lidský choriový gonadotropin stanoví imunoenzymatickou metodou, při níž se provádí adsorbce jedné z imunoreagencií na pevný nosič.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS834923A CS242621B1 (cs) | 1983-06-30 | 1983-06-30 | Způsob stanovení lidského choriového gonadotropinu v preparátech imunoglobulinů připravených z náhradních surovin |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS834923A CS242621B1 (cs) | 1983-06-30 | 1983-06-30 | Způsob stanovení lidského choriového gonadotropinu v preparátech imunoglobulinů připravených z náhradních surovin |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS492383A1 CS492383A1 (en) | 1985-08-15 |
| CS242621B1 true CS242621B1 (cs) | 1986-05-15 |
Family
ID=5393044
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS834923A CS242621B1 (cs) | 1983-06-30 | 1983-06-30 | Způsob stanovení lidského choriového gonadotropinu v preparátech imunoglobulinů připravených z náhradních surovin |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS242621B1 (cs) |
-
1983
- 1983-06-30 CS CS834923A patent/CS242621B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS492383A1 (en) | 1985-08-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4294817A (en) | Method of fluoro immunoassay | |
| EP0325449A2 (en) | Immunoassays | |
| CS257757B2 (en) | Method of reaction determination between antigen and antibody and reaction agent for realization of this process | |
| US20030017619A1 (en) | Test method for IgA nephropathy | |
| Karsh et al. | Quantitative determination of rheumatoid factor by an enzyme-labeled immunoassay | |
| EP2309265B1 (en) | Method of assaying complex and kit to be used therefor | |
| JPH0772152A (ja) | 特異的バインディングアッセイ方法及び分析要素 | |
| Scott | Enzyme immunoassay of lactoferrin in newborn term infants: reference values and influence of diet | |
| CS242621B1 (cs) | Způsob stanovení lidského choriového gonadotropinu v preparátech imunoglobulinů připravených z náhradních surovin | |
| Helenius et al. | A sensitive and practical immunoradiometric assay of thyrotropin. | |
| Liu et al. | A semi-automated microassay for complement activity | |
| USRE32696E (en) | Enzymatic immunological method for determination of antigens and antibodies | |
| US6514716B1 (en) | Detection of the end-position sialic acid groups of the human transferrin molecule | |
| Arends et al. | Immunofluorometry of thyrotropin, from whole-blood spots on filter paper, to screen for congenital hypothyroidism. | |
| Macdonald et al. | The quantitation of pregnancy specific β1-glycoprotein by enzyme linked immunoassay | |
| EP0908726B1 (en) | Method for measuring urinary trypsin inhibitor | |
| Hobbs | Comparison of the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) with the complement fixation test (CFT) for the serodiagnosis of bovine brucellosis | |
| Oğuz et al. | Alkaline phosphatase interference in immuno-enzymatic assays | |
| JPH08509064A (ja) | 化学的に架橋したタンパクの固相支持体上の固定化 | |
| JP4013270B2 (ja) | 尿中生理活性ペプチドの測定法及び測定用試薬 | |
| Sayyad et al. | REVIEW ON ELISA (ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY) FOR DIAGNOSIS AND DISEASE | |
| Schwartz et al. | Development and performance of a fully automated method for assay of C-reactive protein in the aca discrete clinical analyzer. | |
| Ohkubo et al. | Multilayer-film analysis for urea nitrogen in blood, serum, or plasma. | |
| JP2534067B2 (ja) | Ｃ反応性タンパクの定量法 | |
| SU1425549A1 (ru) | Способ радиоиммунологического определени антигенов |