SU1425549A1

SU1425549A1 - Способ радиоиммунологического определени антигенов

Info

Publication number: SU1425549A1
Application number: SU864158475A
Authority: SU
Inventors: Виктор Михайлович Гузов; Сергей Александрович Усанов; Вадим Леонидович Чащин
Original assignee: Институт биоорганической химии АН БССР
Priority date: 1986-12-10
Filing date: 1986-12-10
Publication date: 1988-09-23

Abstract

Изобретение отноеитс к биохимии , точнее к иммунологическим микроопределени м антигенов, предназначено дл диагностики различных патологических и физиологических состо ний человека и при определении микроколичеств биологически активных веществ. Цель изобретени - повышение чувствительности иммунологического определени антигенов. Дл того инкубирую т антиген со специфическим антителом, один из компонентов радио- активномеченый, инкубацию провод т в присутствии декстрана с мол.мае. 20000-50000 и его конечной концентрацией 3-8%. Затем отдел ют радиоактивный комплекс и провод т радиометрию . Все определени дл повышени чистоты дублируютс . 1 табл. i

Description

(/;

с

Изобретение относитс к медицинской биохимии, а именно к способу иммунологического микроопределени антигенов , и может быть использовано дл диагностики различных патологических и физиологических состо ний организма человека, а. также в научных исследовани х при определении микроколичеств биологически активных веществ.

Цель изобретени - повышение чувствительности иммунологического определени антигенов.

Пример 1. Построение калибровочной кривой дл радиоиммунологического определени раковоэмбрионального антигена (РЭА) по стандартной методике с использованием раздел ющей системы на основе иммобилизованных вто- ричных антител в присутствии декстра- на (мол.мас. 70000).

Все определени дублируютс .

В пробирки добавл ют растворы реагентов:

твин-20-буфер (50 мМ фосфатный буфер, содержащий 0,4% твина-20, 0,6,М NaCl, 0,1 мМ ЭДТА, 0,02% ЫаНз, рН 7,4), содержащий 10% декстрана,

в количестве 0, 1 мл;

растворы стандартов РЭА, приготовленные на нормальной сыворотке человека и содержащие 0,2,5,10,25,80,150 и 350 нг РЭА/мл, в количестве 0,1 мл Х-РЗА, содержащий 10% декстрана , в количестве 0,1 мл;

антисыворотка кролика против РЭА в разведении, необходимом дл св зы

вани 20-25% вносимого 1-РЭА, содержаща 10% декстрана, в количестве О,1 мл.

В пробирки дл определени неспецифического св зывани вместо антисыворотки добавл ют альбуминовый буфер (50 мМ фосфатный буфер, содер- жащий 0,1% бычьего сывороточного альбумина, 0,15 М NaCl, 0,1 мМ ЭДТА, 0,02% NaNi, рН 7,4).

и пробирки помещают в гамма-счетчик дл измерени радиоактивности.

Рассчитывают среднее арифметическое значение (х) количества импульсов в минуту дл каждой пары пробирок, а также определ ют величину В/Во 100% дл каждого стандарта, где В - св занна радиоактивность в пробирках, не содержащих стандарты, имп/мин; БО - св занна радиоактивность в пробирках, содержащих О нг РЭА/мл, имп/мин.

Результаты приведены в таблице.

В линейных координатах стро т стандартные кривые, откладыва по оси ординат значение В/Во А 100%, а по оси абсцисс - концентрацию стандартов РЭА в нг/мл. Графическим способом определ ют чувствительность анализа (т.е. концентрацию стандарта РЭА, при которой B,). Как следует из таблицы, чувствительность анализа в присутствии декстрана - 2 нг/мл.

Использование предложенного спо

Содержимое всех пробирок тщательнодд соба позвол ет повысить чувствительперемешивают и пробирки инкубируют 20 ч при комнатной температуре. После инкубации во все пробирки добавл ют по 0,1 мл суспензии иммобилизованных вторичных антител. Пробирки встр хи- с вают в течение 1,5 ч при комнатной температуре, после чего центрифугируют 10 мин при 1500 g, осадки промывают 1 раз по 1 мл твин-20-буфера.

ность иммунологического определени антигенов в 2-4 раза по сравнению с известным.

Claims

Формула изобретени

Способ радиоиммунологического определени антигенов, включающий инкубацию антигена со специфическими анность иммунологического определени антигенов в 2-4 раза по сравнению с известным.

Формула изобретени

Способ радиоиммунологического определени антигенов, включающий инкубацию антигена со специфическими ан3U255A9

тителами, при этом один из компонен- тельности анализа, кнку6а1шю антигена тов несет радиоактивную метку, отде- со специфическими антителами прово- ление радиоактивного комплекса и его д т в присутствии декстрана с мол. радиометрию, отличающийс , мае. 20000-50000 при его конечной тем, что, с целью повьшени чувстви- концентрации 3-8%.