CS239472B1 - Způsob odstranění choriogonádotropního hormonu z roztoků lidských krevních derivátů izolovaných z retroplacentárního nebo abortnfho sóra - Google Patents
Způsob odstranění choriogonádotropního hormonu z roztoků lidských krevních derivátů izolovaných z retroplacentárního nebo abortnfho sóra Download PDFInfo
- Publication number
- CS239472B1 CS239472B1 CS842736A CS273684A CS239472B1 CS 239472 B1 CS239472 B1 CS 239472B1 CS 842736 A CS842736 A CS 842736A CS 273684 A CS273684 A CS 273684A CS 239472 B1 CS239472 B1 CS 239472B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hormone
- solutions
- serum
- abortive
- blood derivatives
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Prakcionace a purifikace krevních
derivátů pro terapeutické a profylaktické
úěely, které jsou připravovány z placentárního
nebo abortního séra.
Jedná se o způsob odstranění lidského
choriogonádotropního hormonu z roztoků
lidských krevních derivátů, zejména z roztoků
imunoglobulinu a sérového albuminu. Tento
hormon je nežádoucí biologicky aktivní příměsí
uvedených preparátů.
Podstatou vynálezu je oddělení choriogonádotropního
hormonu, případně dalěích nežádoucích
biologicky aktivních látek, z
roztoku bílkovin úpravou pH na hodnotu, při
které dochází k uvolnění komplexu bílkovina
- hormon a následnou sorbcí na předem vhodně
upravený sorbent
Description
(54) Způsob odstranění choriogonádotropního hormonu z roztoků lidských krevních derivátů izolovaných z retroplacentárního nebo abortnfho sóra
Prakcionace a purifikace krevních derivátů pro terapeutické a profylaktické úěely, které jsou připravovány z placentárního nebo abortního séra.
Jedná se o způsob odstranění lidského choriogonádotropního hormonu z roztoků lidských krevních derivátů, zejména z roztoků imunoglobulinu a sérového albuminu. Tento hormon je nežádoucí biologicky aktivní příměsí uvedených preparátů.
Podstatou vynálezu je oddělení choriogonádotropního hormonu, případně dalěích nežádoucích biologicky aktivních látek, z roztoku bílkovin úpravou pH na hodnotu, při které dochází k uvolnění komplexu bílkovina - hormon a následnou sorbcí na předem vhodně upravený sorbent.
Vynález řeší způsob odstranšní lidského choriogonádotropního hormonu /HCG/ z roztoků lidských krevních derivátů, zejména z roztoků imunoglobulinu a sérového albuminu, které byly izolovány z retroplacentárního a abortního séra.
Dosud vyráběné injekění roztoky lidských imunoglobulinů Norga a infúzní roztoky lidského sérového albuminu, které byly izolovány z retroplacentárního nebo abortního séra, obsahují podstatné množství HCO jako nežádoucí biologicky aktivní přimést. Na tuto skutečnost již upozornila Ninakova (ŽltEI 3,66 /1979), která porovnávala obsah HCO v preparátech imunoglobulinů izolovaných z dárcovské plazmy a z výše uvedených druhů surovin. V této práci také upozornila na důvody, proě je přítomnost hormonu v preparátech imunoglobulinů nežádoucí. Zejména se to týká případů opakovaná aplikace těchto roztoků dětem. Roztok 16* hmotnostních imunoglobulinu Norga získaný z retroplacentárního séra obsahuje 104 až 6.104 J/1 HCO. Naopak roztok připravený z dárcovská plazmy obsahuje pouze 10 až 20 J/1 tohoto hormonu. Zvýšený obsah je způsoben tím, že hladina hormonu v krvi žen během těhotenství se výrazně zvyšuje a HCO se během frakcionace koncentruje v bílkovinných frakcích. Například Infúzní 20* hmotnostních roztok albuminu, který byl Izolován z retroplacentárního nebo z abortního séra metodou podle AO 194957, obsahuje 1 000 až 5 000 J/1, naopak albumin získaný z dárcovské plazmy obsahuje HCO o dva řády méně. Lidský choriogonádotropní hormon je glykoprcteinový hormon, produkovaný placentou a obsažený v krevní plazmě. Z těla těhotných žen je vylučován močí, z níž jej lze izolovat v čistá formě. Jeho molekulární hmotnost je 40 000 daltonů. Obsahuje okolo 30 * cukerná složky. Hormon má nápadně nízký izoelektrický bod 2,95 pH. /0. Hanč. Z. Pédr: Hormony, Academia Praha 1982 str. 163 až 175/. HCO lze nesnadno, jak už bylo naznačeno, oddělit z roztoků plazmatických bílkovin, protože se váže na jejich molekulu. To platí například pro metodu frakcionace krevních bílkovin etanolem za chladu, frakcionaci síranem amonným, polyetylénglykolem, chromatografii na iontoměničích a gelové filtrace.
Také využití sorbce na některé nespecifické sorbenty, jako je například hydroxid hlinitý, fosforečnan vápenatý, nepřináší žádoucí účinek. Některé postupy, vhodné pro izolaci HCO z moči, jsou neupotřebitelné pro oddělení hormonu z roztoků krevních derivátů, bu3 že negativně ovlivňují kvalitu konečného preparátu, nebo jsou z hlediska technologie nevhodná. Týká se to například afinitní chromatografie na Con A Sepharose, sorbce na materiály, které by mohly třeba jen stopově uvolňovat toxické látky, či postupů, u nichž by v důsledku užití extrémních podmínek docházelo k denaturaci plazmatických bílkovin.
Výěe uvedená problémy spojené s odstraněním HCO z krevních derivátů, zejména imunoglobulinu, případně lidského sérového albuminu, které byly izolovány ze surovin obsahujících zvýšené množství hormonu, se řeší podle vynálezu tím, že se v některá fázi jejich izolace upraví pH roztoku bílkovin na hodnotu 3,0 až 5,3, s výhodou na 4,7, přidá se aktivní uhlí nebo jiný sorběnl materiál, nejlépe předem upravený například varem s roztokem kyseliny chlorovodíkové, octové nebo vodou. Vzniklá suspenze se ponechá v kontaktu za občasného míchání při teplotě 0 °C až 30 °C, s výhodou po dobu 15 až 180 minut a po následná filtraci, kterou se oddělí sorbění materiál, se roztok bílkovin, zbavený podstatného množství HCO a dalších nežádoucích biologicky aktivních látek, po úpravě pH na výhodnou hodnotu, například 5,5 až 6,5, dále zpracuje některým ze známých postupů.
Hlavní výhodou navrženého způsobu je podtatné snížení přítomnosti HCO v konečných roztocích lidských imunoglobulinů, albuminu, případná dalších roztoků krevních derivátů, získaných z retroplacentárních nebo abortních výchozích materiálů, jednoduchým technologicky nenáročným způsobem. Ztráty vzniklé při navrhovaném způsobu jsou nízké a jejich úroveň je závislá na promytí sorbčníto· materiálu, případně na vhodném zařazení postupů do procesu frakcionace. Postup neovlivňuje negativně z žádného známého hlediska kvalitu konečného produktu. Zařazením způsobu oddělení HCO je současně dosaženo oddělení dalších nežádoucích biologicky aktivních látek, například části ^krevního barviva, mastných kyselin apod. Antikomplementérní aktivita imunoglobulinů se při použití postupu s aktivním uhlím snižuje průměrně o 50 až 40 *. Způsob podstatně neovlivňuje u roztoků imunoglobulinů titr protilátek.
Postup lze v případě potřeby opakovat nebo výhodně kombinovat s jinými purifikaěními postupy. Způsob oddělení HCG z roztoků plazmatických bílkovin lze zařadit do různých fází frakcionaěního postupu a v různém frakcionačním kroku.
Pokud jsou dodrženy věechny ostatní předepsané podmínky pro přípravu injekčních roztoků v celém procesu výroby, preparáty zbavené HCG navrhovaným způsobem vyhovují požadavkům ČSL3.
Příklady provedení:
1. Ke 100 ml 8% /hmotnostních/ roztoku imunoglobulinu obsahujícímu 15 000 J HCG/1, který vznikl po oddělení sraženiny po etanólové frakcionaci za chladu a chloroformové purifikaci, bylo přidáno 8 g předem upraveného aktivního uhlí. Tato úprava spočívala v tom, že aktivní uhlí se vařilo 30 minut s IN kyselinou chlorovodíkovou nebo IN kyselinou octovou. Uhlí bylo proqyto dekantací vodou. V suspenzi roztoku imunoglobulinu s aktivním uhlím bylo upraveno pH na 4,7 a suspenze byla ponechána v kontaktu za občasného promíchání
180 minut při 4 °C. Aktivní uhlí bylo odděleno filtrací přes dekalizační vrstvu a ve filtrátu bílkoviny bylo bezprostředně upraveno pH do neutrální oblasti 6,5. Roztok imunoglobulinu byl dále zpracován známým postupem.
2. Injekční 16% /hmotnostních/ roztok imunoglobulinu, který obsahoval vysoké množství HCG, byl naředěn destilovanou vodou na 5% /hmotnostních/ roztok bílkoviny. K roztoku bylo přidáno předem upravené aktivní uhlí podle příkladu 1, v množství odpovídajícím 5 g suchého uhlí na 1 g bílkoviny. V suspenzi bylo upraveno pH na hodnotu 5,3 a za míchání bylo ponecháno ,5 minut při laboratorní teplotě. Aktivní uhli bylo odděleno filtraci přes dekalizační vrstvu a ve filtrátu bylo upraveno pH na požadovanou hodnotu 6,0. Roztok imunoglobulinu byl dále zpracován známým způsobem.
3. Sloupcem o celkovém objemu 10 ml předem upraveného aktivního uhli podle příkladu 1 zvolna protékal roztok 10 ml imunoglobulinu o koncentrací 1% /hmotnostních/ bílkovin mající pH 4,7. U proteklého roztoku bylo bezprostředně upraveno pH na požadovanou hodnotu podle příkladu 1 a dále byl roztok bílkoviny známým způsobem zpracován.
4. K 10% /hmotnostních/ roztoku sérového albuminu, který obsahoval vysoké množství HCO, bylo přidáno aktivní uhlí v poměru 5 g suchého aktivního uhlí na 1 g bílkoviny a ponecháno v kontaktu za míchání 480 minut při pH roztoku 3,0. Aktivní uhlí bylo odděleno filtrací podle příkladu 1 a u roztoku bílkoviny upraveno pH na hodnotu 5,5. Roztok byl dále zpracován známým postupem.
5. 5% /hmotnostních/ roztok imunoglobulinu nebo sérového albuminu, který obsahoval vysoká množství HCG, byl rozmíchán s kaolinem předem upraveným varem ve vodném prostředí a dekantací nadbytečné vody. Hodnota pH suspenze byla upravena na 4,0. Po 180 minutách se kaolin oddělil filtrací a v roztoku bílkoviny bylo upraveno pH na hodnotu 6,0. Roztok bílkoviny byl dále zpracován známým způsobem.
6. Z roztoku imunoglobulinu nebo sérového albuminu, který obsahoval vysoké množství HCG, byl oddělen hormon zčásti tím, Že k roztoku bílkoviny byl za podmínek uváděných v příkladech 1 až 5 přidán oxid křemičitý vhodný pro chromatografii v tenké vrstvě, který byl předem upraven varem ve vodném prostředí. Po oddělení oxidu křemičitého způsobem uvedeným v příkladech 1 až 5 a úpravě pH na 7,0 byl roztok bílkoviny dále zpracován známým způsobem.
V uvedených příkladech bylo dosaženo oddělení choriogonádotropního hormonu pod stanovitelná množství pomocí metody R1A nebo ELISA, nebo jeho množství v roztoku bílkoviny bylo podstatně sníženo na 1 až 10 % z výchozího množství.
Obecný princip navrženého způsobu oddělení choriogonádotropního hormonu z roztoků bílkovin je založen na úpravě pH na hodnotu, při které dochází k uvolnění komplexu bílkovina-hormon 3 následnou sorbcí na vhodná upravený sorbent.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUZpůsob odstranění lidského choriogonádotropního hormonu z roztoků lidských krevních derivátů izolovaných z retroplacentárního nebo abortního séra, která obsahují vysoká množství tohoto hormonu, jeho sorbcí, vyznačený tím, že se v nškterá fázi izolace uvedených krevních derivátů upraví pH roztoku bílkovin na hodnotu 3,0 až 5,3, s výhodou 4,7, přidá se sorbční látka, s výhodou aktivní uhlí předem upravené například-varem s kyselinou chlorovodíkovou nebo octovou, vzniklá suspenze se ponechá v kontaktu za případného míchání při teplotě 0 °C až 30 °C a sorbční materiál se odfiltruje.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CS842736A CS239472B1 (cs) | 1984-04-10 | 1984-04-10 | Způsob odstranění choriogonádotropního hormonu z roztoků lidských krevních derivátů izolovaných z retroplacentárního nebo abortnfho sóra |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CS842736A CS239472B1 (cs) | 1984-04-10 | 1984-04-10 | Způsob odstranění choriogonádotropního hormonu z roztoků lidských krevních derivátů izolovaných z retroplacentárního nebo abortnfho sóra |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CS273684A1 CS273684A1 (en) | 1985-05-15 |
CS239472B1 true CS239472B1 (cs) | 1986-01-16 |
Family
ID=5365295
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CS842736A CS239472B1 (cs) | 1984-04-10 | 1984-04-10 | Způsob odstranění choriogonádotropního hormonu z roztoků lidských krevních derivátů izolovaných z retroplacentárního nebo abortnfho sóra |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CS (1) | CS239472B1 (cs) |
-
1984
- 1984-04-10 CS CS842736A patent/CS239472B1/cs unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CS273684A1 (en) | 1985-05-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2521707B2 (ja) | 卵胞液から単離したインヒビン | |
US4217339A (en) | Glycoprotein and process for isolating it | |
Brew et al. | The characterization of the whey proteins of guinea-pig milk: The isolation and properties of α-lactalbumin | |
EP0123307B1 (de) | Gewebeprotein PP4, Verfahren zu seiner Gewinnung sowie seine Verwendung | |
US4301064A (en) | Ubiquitary tissue protein PP8 | |
US4191533A (en) | Pregnancy-specific β1 -glycoprotein and process for isolating it | |
US4269825A (en) | New glycoprotein and process for isolating it | |
US4402872A (en) | Protein and process for isolating it | |
US4302385A (en) | Placenta-specific tissue protein PP10 | |
EP0100522B1 (de) | Neues Protein (PP17), Verfahren zu seiner Anreicherung und Gewinnung sowie seine Verwendung | |
EP0101603B1 (de) | Neues Protein (PP13), Verfahren zu seiner Anreicherung und Gewinnung sowie seine Verwendung | |
PIAZOLO et al. | Isolation and purification of a calcium-binding protein from human tissues | |
AU2002318066B2 (en) | Process for obtaining growth factor (TGF-BETA and IGF-1), lactoperoxidase and immunoglobulins preparations from milk products having low mutual cross-contamination | |
US4368148A (en) | Protein PP9, process for its enrichment and its isolation and its use | |
Vaerman et al. | Identification and some properties of rat secretory component | |
US4746731A (en) | Isolated tissue protein PP18 | |
DE69925870T2 (de) | Verfahren zur bereitstellung von wachstumsfaktozubereitungen (tgf-beta und igf-1) mit niedriger gegenseitiger verunreinigung aus milchprodukten | |
US4065445A (en) | Pregnancy-specific β1 -glycoprotein and process for isolating it | |
EP0141326B1 (de) | Neues Protein PP20, Verfahren zu seiner Gewinnung sowie seine Verwendung | |
IE44824B1 (en) | Process for the isolation of a placenta-specific glycoprotein | |
EP0029191B1 (de) | Neues Protein PP11, ein Verfahren zu seiner Gewinnung und seine Verwendung | |
CS239472B1 (cs) | Způsob odstranění choriogonádotropního hormonu z roztoků lidských krevních derivátů izolovaných z retroplacentárního nebo abortnfho sóra | |
EP0151463B1 (de) | Gewebeprotein PP19, Verfahren zu seiner Gewinnung sowie seine Verwendung | |
EP0137345B1 (de) | Membranassoziierte Proteine (MP2), Verfahren zu ihrer Gewinnung sowie ihre Verwendung | |
GRAHAM et al. | Separation and partial characterization of erythropoietin from human urine |