CS233440B1 - Agarovo-vaječná pAda pra kultiváciu mykobaktárif - Google Patents

Description

233440 2

Vynález sa týká agarovo-vaječnej pfidy pře kultiváciu mykobaktérií.

Kultivačně postupy v mykobakterlológii, vrátane výběru a přípravy kultivačných pfidsú v porovnaní s inými metodikami používanými“ v bakteriologii velmi náročné. Z viacerýohdnes známých živných pfid pre mykobaktérie sú najvhodnejšie pevné vaječné a tekuté pfidys obsahem natťvnej bielkoviny (Sula, 1970). Z nich sa ňajviac uplatňuje Lowensteln-Jense-nova pOda. Výběr kultivačných médii závisí od metodik používaných v tom-ktorom laboratórlu.Laboratorně vyčetrovacie metodiky vo veterinárnej medicíně (1974) určujú pre kultiváciumykobaktérií pfidu Petragnaniho, Stonebrinkovu a šulovu. Standardně metody RVHP pre labora-tórnu diagnostiku tuberkulózy (1980) návrhu jd pre kultiváciu mykobaktérií Lowenstein-Jen-senovu pfidu. Laboratorně metodiky vó veterinárnej mykobakterlológii používané v USA (1975)určujú pre kultiváciu čtyři druhy pfid: LówenstedLn-Jensenova, Heroldova, Ulddlebrookova7 H 10, Stonebrinkova.

Snahy o.zjednouušenie a skvalitnenie kultivačných médií pokračujú. V našich podmien-kach ide predovšetkýmo hledánie možností náhrady drahých chemikálií z dovozu. Napříkladvýznamem jSaparagínu"a jeho náhradou v Lowenatein-Jensenovej pfidé sa zaoberal Slosareka kol. (1981). V mykobakteriologickej praxi najma pri izolácii mykobaktérií z kontaminovaného materiá-lu sa velmi často vyskytujú případy, že primokultivácia je neúspěšné kvfili nešpecifickejmikroflóre, ktorá kontaminuje použité kultivačně média. V takýchto případech sa používajúsilnejšie dekontaminpčné prostřiedky pře devitalizáciu nešpecifickej mikroflóry, čím savšak usmrtí 70 až 80 % mykobaktérií a teda.diagnostická spolehlivost je nízká. Na druhejstraně je možné použit pfidy menej citlivé k nešpecifickej mikroflóre, ale umožňujúce dobrýrast mykobaktériám. Uvedené vlastnosti majú Speciálně agarove pfidy, ktoré sú však náročnéna přípravu a obsahujú množstvo chemikálií z dovozu.

Uvedené nedostatky možno v podstatnej miere odstránlť agarovo-vaječnou pfidou podlávynálezu, ktorej podstata spočívá v tom, že pozostáva z 0,25 % hm. masového výtažku, 0,43 % hm. peptonu, 1,28 % hm. agaru, 0,33 % hm. chloridu sodného, 2,57 % hm. glycerolu,81,73 % hm. destilovanej vody, 13,08 % hm. vaječného žítka, 0,33 % hm. 2%-nej malachitovejzelene.

Agarovo-vaječná pfida podlá vynálezu je nepriehladná, sýto zelenej farby s dokonalehladkým a lesklým povrchom, čo umožňuje výrobnú kontrolu jak pri inkubáciť, tak pri odčí-taní rastu mykobaktérií. Pfidu třeba uskladňovat v chlade a tme pri +4 °C, Pri sprévnompostupe přípravy a skladovaní vydrží najmenej 6 týždňov bez zjavného ovplyvnenia jej kva-lity.

Agarovo-vaječná pfida podlá vynálezu je rovnocenná s inými vaječnými pfidami používanýmipre kultiváciu mykobaktérií. Jej výhodou však je, že pri primokultivácii je menej citliváku nespecificky mikroflóre, najma pri izolácii mykobaktérií zo vzoriek vonkajšieho prostre-dia, čím sa zvyšuje diagnostická spolehlivost. Přikladl Příprava agarovo-vaječnej pfidy 24 g živného agaru č. 1 (SEVAC - t. j. 3,13 g masového výtažku, 5,22 g peptonua 15,65 g agaru) sa po polhodinovom nabobtnaní v destilovanej vodě do celkového objemu £ 1 000 ml dokonale rozvarí so 4 g chloridu sodného a 28 ml glycerolu. Po ochladení na 60 °Cna Up raví pH na 7,5 a autoklavuje sa 25 minút pri 121 °C. Po ochladení na 52 °C sa přidá 8 kusov vaječných žítkov a 4 ml 2%-nej malachitovej zelene. Po dfikladnom zhomogenlzovanísa pfida rozlieva do bakteriologických skúmaviek v šikmej polohe. POda stuhne po 10 minútach. 3 233440

Predmet vynálezu bol overený a Statisticky zhodnotený v pokusných podmienkach. I. Porovnánie navrhované;) agarovo-vaječnej p6dy s najviac používanými pevnými pOdamipre mykobaktárie a Statistické hodnotenie výsledkov. Pře testovanie p8dy boli použité referenčně mykobakteriálne kmene zo zbierky IHEv Prahe. 1. M. scrofulaceum 2. M. avium serotyp 2 3. M. intracellulare serotyp 4 4. M. intracellulare serotyp 8 5'. M. fortuitum 6. M. phlei

Porovnávané kultivačně média; 1. Navrhovaná agarovo-vaječná pčda 2. Stonebrinkova p6da 3. Lowenstein-Jensenova p6da 4. Ogawova p8da 5. Heroldova pčda Při kultivácii bol sledovaný deň, kedy bolo možné prvý raz zaznamenat rast kmeňa aa množstvo narastenej masy kmeňa na 30. deň. Výsledky boli Statisticky spraoované Studen-tovým T-testom, na hladině významnosti = 0,05 (tabulka č. 1). T a b u 1’ k a 1

Porovnávané p6dy t hodnota = 0,05 MH+ : Lowenstein-Jensenova 0,175 MH+ ; Stonebrinkova 0,049 1,960 MH+ : Ogawova 0,321 MH+ ; Heroldova 0,22 MH+ = navrhovaná agarovo-vaječná pĎda Z porovnania hodnfit je zřejmé, že medzi testovanými médiami nie je Statisticky význam-ný rozdiel a teda agarovo-vaječná p8da podlá vynálezu je pre kultiváciu vybraných mykobak-rteriálnychkmeňov rovnako vhodná ako porovnávané p6dy. II. Předběžné výsledky praktického použitia agarovo-vaječnej p8dy podl’a vynálezu.

Agarovo-vaječná p8da (MH) bola použitá pre primokultiváciu mykobaktéril zo vzoriekvonkajSieho prostredia pri paralelnom hodnotení s Heroldovou (H) a Lowenstein-Jensenovou(LJ) p6dou.

Celkom bolo izolovaných 35 mykobakteriálnych izolátov II., III. a IV. skupiny Bunyonorvej klasifikácie z 11 vyšetřených vzoriek vody a p6dy z močaristej lokality ako aj tekutého,hnoja ošípaných, makkýšov a podobné. Hodnotenie p8d bolo založené na sledovaní absolátnehopočtu izolátov, počtu pozitlvnych kultivácii, počtu kontaminovaných p8d nespecifickou mikro-flórou, počtu p8d bez nárastu mykobaktéril (tabulka č. 2). Vztah počtu kontaminácil a počtup8d bez nárastu mykobaktéril bol hodnotený "Chi-kvadrat" testom (tabulka č. 3).

Claims (1)

1. 4 233440 Tabulka 2 POda počet založe- počet . počet pozitiv- počet pdd počet . ných kultivácii kontamlnáclí nych kultivácii bez nárostu izolátor mykobaktérií LJ 33 12 36,4 « 3 9,09 » 21 63,6 % 3 MH 33 2 6,06 % 16 48,5 « 16 48,5 % 20 H 33 3 0,09 % 12 36,4 « 19 57,6 « 12 Tabulka 3 2 Porovnávané pfidy X LJ : MH 15,9 H : MH 0,512 Kritická hodnota X2 pre 0,05 =3,8 Z hodnotenia vyplývá, že agarovo-vaječné pOdy Heroldova a MH sú vhodnéjčie pre lzolá-ciu atypických mykobaktérií z vonkajéieho prostredia, ako Lówenstein-Jensenova pdda, ktoráje viac citlivá ku kontamlnáclí. fialSou výhodou j^ že zloženie agarovo-vaječnéj pddy nevyžaduje chemikálie z dovozu,pričom ingredience - agar, peptom a masový výtažek - sú u nás už komerčně vyrábané v polo-produkte, t. zv. živný agar č. 1 n. p. Imuna Šarišské UichaTany. Výhodou je- tiež jej nená-ročnost při príprave, ktorá nevyžaduje Speciálně zrážacie aparatúry, ako napr. Arnoldůvzréžací přistroj* PREDMET VYNÁLEZU Agarovo-vyječná pOda pre kultiváciu mykobaktérií vyznačujúca sa tým, že pozostávaz 0,25 $ hmotnostných masového výtažku, 0,43 % hmotnostných peptonu, 1,28 % hmotnostnýchagaru, 0,33 % hmotnostných chloridu sodného, 2,57 % hmotnostných glycerolu, 81,73 % hmot-nostných destilovanéj vody, 13,08 % hmotnostných vaječného žítka a 0,33 % hmotnostných2 3S-nej malachitovej zelene. Severografia, n. p., MOST Cena 2,40 Kčs