CS228836B1 - Činidlo pro fotometrické kinetické stanovení kreatininu pro potlačení interference bilirubinu - Google Patents

Abstract

Činidlo podle vynálezu obsahuje na 1 mol kyseliny pikrové dané množství molů měánaté soli, s výhodou síranu nebo chloridu mědnatóho, dané množství molů vinanu sodnodraseIného a molů dibutylnaftalensulfonanu sodného. Činidlo dále obsahuje určité množství molů hydroxidu sodného. Stanovení obsahu kreatininu v séru a moči je vhodné pro laboratorní diagnostickou metodu při sledování n onemocněni ledvin.

Description

(⁵⁴) Činidlo pro fotometrické kinetické stanovení kreatininu pro potlačení interference bilirubinu

Činidlo podle vynálezu obsahuje na 1 mol kyseliny pikrové dané množství molů měánaté soli, s výhodou síranu nebo chloridu mědnatóho, dané množství molů vinanu sodnodraseIného a molů dibutylnaftalensulfonanu sodného. Činidlo dále obsahuje určité množství molů hydroxidu sodného.

Stanovení obsahu kreatininu v séru a moči je vhodné pro laboratorní diagnostickou metodu při sledování n onemocněni ledvin.

228 836 , 228 838

Předmětem vynálezu je činidlo pro fotometrické kinetické Z stanovení kreatininu pro potlačení interference bilirubinu.

Stanovení obsahu kreatininu v séru a moči je závažná laboratorní diagnostická metoda při sledování onemocnění ledvin, která patří mezi běžné analysy prováděné ve všehh základních typech zdravotnických zařízení.

Fotometrické metody stanovení obsahu kreatininu v biologickém materiálu jsou větěinou založeny na Jaffého reakci kreatininu s alkalickým roztokem kyseliny pikrové za vzniku oranžově zbarveného reakčního produktu. Tato reakce je málo specifická a kromě kreatininu reaguje i řada dalších složek séra, například glukosa, některé ketoáloučeniny a redukující látky, kte- ré jsou souhrnně zahrnovány pod tak zvané pseudochromogeny.

Složitější pracovní postupy při fotometrickém stanovení kreatininu v biologickém materiálu často navazují na předchozí separaci interferujících látek, nebo separaci kreatininu ze vzorku. Jsou pracné a časově náročné a v praxi se proto téměř neužívají. Jednoduché starší rutinní metody fotometrického stanovení sérového kreatininu jsou většinou založeny na fotometrickém stanovení po předchozí deproteinaci séra, čímž se eliminuje zejména nepříznivý vliv bílkovin a bilirubinu. _{228 83e}

Kinetické metody stanovení sérového kreatininu jsou podstatně rychlejší a jednodušší, není nutná deproteinace. Vynechání deproteinace sérových bílkovin je v kinetických postupech nahrazeno přídavkem povrchově aktivních látek, obvykle laurylsulfátu sodného, který vliv bílkovin částečně eliminuje. Interference dalších pseudochromogenů je při kinetickém způsobu stanovení potlačena Vlivem jejich rozdílných reakčních rychlostí * ve srovnání s reakční rychlostí kreatininu s kyselinou pikrovou. Tak například stanovení v tomto případě neruší acetoctan, kyselina močová a kyselina askorbová. Není ale potlačena interference bilirubinu, jehož přítomnost způsobuje zápornou chybu úměrnou jeho koncentraci v analysovaném vzorku. I při běžné koncentraci bilirubinu v séru 20 /umol/1 může při kinetickém stanovení s dosud známými činidly dosáhnout systematická záporná chyba až 25 /uraol kreatininu/1. Falešně nižší hodnota sérového kreatininu vlivem interference bilirubinu může mít za následek mylnou diagnosu a poškození nemocného, zejména u počátečních stavů ledvinového poškození. Je tedy žádoucí připravit #ró fotoipetrické kinetické stanovení kreatininu v biologických tekutinách tahové činidlo, které by vliv sérového bilirubinu eliminovalo.

K eliminaci vlivu bilirubinu při fotometrickém kinetickém stanovení kreatininu směřuje činidlo podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že na 1 mol kyseliny pikrové obsahuje 0,01 až 0,06 molů měánaté soli, s výhodou síranu nebo chloridu měánatého, 0,01 až 0,2 molů vinanu sodnodraseIného a 0,5 až 0,9 molů dibutylnaftalensulfonanu sodného. Činidlo podle vynálezu může dále obsahovat 12 až 16 molů hydroxidu sodného, vztaženo na 1 mol kyseliny pikrové. _{228 83g}

Činidlo podle vynálezu je vhodné připravit odděleně ve formě dvou roztoků. Prvý roztok může s výhodou obsahovat kyselinu pikrovou, měánatou sůl, vinan sodnodraselný a dibutyl naftalensulfonan sodný, druhý roztok může být tvořen samotným hydroxidem sodným. Rozdělení činidla podle vynálezu na dva roztoky je výhodné ze dvou důvodů. Při kinetickém stanovení kreatininu pomocí autoraatických analysátorů se obvykle postupuje tak, že se vzorek smíchá s jedním roztokem činidla a druhý roztok se užívá jako startér kinetické reakce. Oddělení roztoku hydroxidu od roztoku kyseliny pikrové kromě tohoto zvyšuje stabilitu činidla. Pokud se užívá k analyse jediné činidlo, je vhodné je připravit smícháním obou roztoků před vlastní analysou.

Při analyse sér obsahujících 100 /umolů kreatininu/1, ke kterým byl přidáván bilirubin v množství 20 až 200 /umolů/1 byl s činidlem podle vynálezu vždy nalezen správný obsah kreatininu a vliv přidávaného bilirubinu se neprojevil. Na rozdíl od dosud známých činidel lze s činidlem podle vynálezu stanovit správný obsah kreatininu i u vzorků obsahujících běžné nebo i značně zvýšené množství bilirubinu, což má zásadní vliv na včasné rozpoznání poškození ledvin, umožňuje správné stanovení diagnosy, léčebného postupu a jeho kontrolu.

Příklad

Připraví se roztok obsahující 25»6 g kyseliny pikrové, 32,0 g dibutylnaftalensulfonanu sodného, 2,6 g vinanu sodnodraselného a 0,87 g síranu měánatého pentahydrátu v 6600 ml vody. Při<

228 838

- 5 praví se roztok obsahující 66 g hydroxidu sodného ve 220Qml vody.

Před použitím se smíchají 3 objemové díly prvého roztoku s 1 objemovým dílem druhého roztoku.

Příklad 2

Připraví se činidlo obsahující v 1000 ml vodného roztoku 126mmolu kyseliny pikrové, 0,126mmolu dusičnanu měánatého 0,126 mmolu vinanu sodnodraselného, 100 mmolu dibutylnaftaleiísulfonanu sodného a 151 mmolu hydroxidu sodného. Činidlo se užívá přímo.

Příklad 3

Připraví se činidlo obsahující ve 100 ml vodného roztoku 12,6 mmolu kyseliny pikrové, 0,76 mmolu chloridu měánatého, 2,5 mmolu vinanu sodnodraselného, 8 mmolu dibutylnaftalensulfonanu sodného a 201 mmolu hydroxidu sodného. Činidlo se používá přímo·

Příklad 4

K 0,5 ml vzorku séra nebo moči zředěné předtím vodou v poměru 1 ku 49 se přidá 1,6 ml činidla připraveného podle příkladů 1 až 3 a měří se změna absorbance mezi 30. až 120. s po smíchání vzorku s Činidlem při konstatní teplotě v kyvetě 1 cm při vlnové délce 510 nm.

- 228 838

Κ 0,5 ml vzorku séra nebo zředěné moěi se přidají 1,2 ml prvého roztoku podle příkladu 1 a reakce se nastartuje 0,4 ml roztoku hydroxidu sodného. Další postup je stejný jako v předešlém případě.

Claims (2)

1. PŘEDMÉT VYNÁLEZU

   228 836

   1. činidlo pro fotometrické kinetické stanovení kreatininu pro potlačení interference bilirubinu, vyznačené tím, že na

   1 mol kyseliny pikrpvé obsahuje 0,01 až 0,06 molů měánaté soli, s výhodou síranu nebo chloridu měánatého, 0,01 až 0,2 molů vinanu sodnodraseIného a 0,5 až 0,9 molů dibutylnaftalensulfonanu sodného.
2. 2. Činidlo podle bodu 1, vyznačené tím, že obsahuje 12 až 16 molů hydroxidu sodného, vztaženo na 1 mol kyseliny pikrové.