CS228516B2

CS228516B2 - Method for the production of guanyled aminoglykosides

Info

Publication number: CS228516B2
Application number: CS815736A
Authority: CS
Inventors: Hans Dr Loibner; Wolfgang Dr Streicher
Original assignee: Sandoz Ag
Priority date: 1980-07-28
Filing date: 1981-07-28
Publication date: 1984-05-14
Also published as: IL63429A0; YU184481A; EP0056408A1; JPS57501084A; IT8148952A0; GR74312B; PT73428B; PT73428A; WO1982000464A1; IT1171411B

Description

Vynález popisuje guanylované aminoglykosidy, způsob jejich výroby, farmaceutické prostředky obsahující tyto sloučeniny a použití zmíněných látek jako léčiv.

Výrazem „guanylovaný“, používaným v tomto textu, se míní substituce alespoň jednou amidinoskupinou.

Vynález popisuje zejména sloučeniny obecného vzorce I

ve kterém

Ri znamená atom vodíku nebo zbytek vzorce II, Ha, lib, líc nebo lid

(lid)

228316

S

Rž představuje atom vodíku nebo zbytek vzorce III nebo lila

(III)

OH

ОНг.) přičemž alespoň jeden ze symbolů Ri a Rž představuje atom vodíku,

R3 znamená hydroxyskupinu nebo zbytek vzorce — NHRe,

R4 a Rs buď nezávisle na sobě znamenají vždy atom vodíku, nebo hydroxyskupinu a R a R‘ znamenají atom vodíku, nebo R4 a Rs znamenají atom vodíku a R a R‘ představují další vazbu,

Re znamená hydroxyskupinu, zbytek vzorce —NHRe nebo zbytek vzorce —N(CH3)Re,

R7 představuje atom vodíku- nebo methylovou skupinu,

Re znamená atom vodíku nebo amidinoskupinu,

R9 představuje atom vodíku, amidinoskupinu nebo zbytek vzorce

O —C—X—(CH2)_n—NHR8

Rto znamená atom vodíku nebo zbytek vzorce IV nebo IVa

(IV)

R11 představuje atom vodíku, nebo zbytek vzorce V

X znamená atom kyslíku nebo imincskupinu a n je celé číslo o hodnotě 2 až 5, přičemž v molekule jsou přítomny nejméně jedna a nejvýše dvě amidinoskupiny, a jejich adiční soli s kyselinami.

Vynález rovněž popisuje způsob výroby shora uvedených sloučenin, vyznačující se tím, že se guanyluje aminoglykosid obsahující alespoň jednu volnou aminoskupinu, popřípadě spolu s potenciálními nebo chráněnými amínoskupinami, načež se popřípadě v takto získané sloučenině převedou všechny potenciální aminoskupiny na volné aminoskupiny a z chráněných aminoskupin se odstraní chránicí skupiny.

Konkrétněji řečeno popisuje vynález způsob výroby sloučenin shora uvedeného 0becného vzorce I, vyznačující se tím, že se guanyluje odpovídající sloučenina obecného vzorce VII

ve kterém

R3¹ představuje hydroxyskupinu nebo aminoskupinu,

R6¹ znamená hydroxyskupinu, aminoskupinu nebo methylaminoskupinu,

R’9 - představuje atom vodíku nebo zbytek vzorce

O —C—X— (CH2)n—Z

Z znamená aminoskupinu nebo potenciální aminoskupinu a

R, R‘, Ri, Rž, R4, Rs, R7, X a n mají shora uvedený význam, a kde jedna nebo, několik aminoskupin může být chráněno vhodnou chránicí skupinou, načež se popřípadě . v získaném produktu převedou všechny přítomné potenciální aminoskupiny na volné aminoskupiny a všechny přítomné chráněné aminoskupiny se zbaví chránících skupin.

Je dobře známo, že reaktivita aminoskupin přítomných v aminoglykosidech, jako například ve sloučeninách obecného vzorce VII, se mění v širokých mezích v závislosti na jejich poloze [viz například T. Naito a spol., J. Antibiot. 26, 297 (1973); J. J. Wright a spol., J. - Antibiot. 29, 714 (1976)].

K získání žádaného produktu guanylovaného na jedné nebo dvou konkrétních aminoskupinách je pouze nutno chránit aminoskupiny mající vyšší reaktivitu než aminoskupiny, které se mají guanylovat. Z mole-

kul výchozích , látek , obsahujících dvě aminoskupiny s přibližně stejnou reaktivitou lze v souhlase s tím, co bylo řečeno výše, získat disubstituované produkty. Je pochopitelné, že má-li se guanylovat nejreaktivnější aminoskupina, není nutno ostatní aminoskupirny chránit, chránění těchto skupin však za určitých okolností snižuje na minimum riziko získání nežádoucích vedlejších produktů a tím může vést k zvýšení výtěžků.

Způsob podle vynálezu je možno uskutečnit běžným způsobem známým pro zavádění amidinoskupiny, jak je například popsáno v práci Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, sv. XV/1, str. 531 a další. Jako příklady vhodných guanylačních činidel je možno uvést S-alkylisothiomočoviny, 1-pyrazolkbrboxaimdino-hydrochlorid a 1-amidmo-3,5-dimethylpyrazol. Reakci je možno provádět v rozpouštědle inertním za reakčních podmínek, jako v pyridinu, dimethylformamidu, chloroformu nebo v jejich směsích.

Reakční teploty se pohybují například · mezi teplotou místnosti a zvýšenou teplotou, jako je například teplota 65 až 80 °C.

Vhodnými chránícími · skupinami, použitelnými při práci způsobem podle vynálezu, jsou skupiny, o nichž je v daném oboru · známo, že je lze k tomuto účelu používat, jako benzylo.xykarbonylová skupina, terc.butyldxykarbodylová skupina nebo trirhlorethrxykarbonylová skupina. Tyto skupiny je možno zavádět a odštěpovat obvyklým způsobem, například analogicky, jak je popsáno v příkladech provedení.

Jako, příklady potenciálních aminoskupin, jako potenciálních aminoskupin představovaných symbolem Z v obecném vzorci VII, lze uvést azidoskupinu, benzyloxykarbonylaminoskupinu, terc.butyloxykarbonylaminoskupinu, ftalimidrskupinu a sukcidimidoskupinu, kteréžto skupiny je možno převést na volnou aminoskupinu běžným způsobem, jako způsobem popsaným v příkladech provedení.

Výchozí látky · shora uvedeného obecného vzorce VII, ve kterém R9¹ znamená zbytek vzorce

O

II —C-^X—CCHžjn—z jsou zčásti nové a lze je připravit například reakcí odpovídající sloučeniny obecného vzorce VII, ve kterém R9¹ představuje atom vodíku a aminoskupiny jsou chráněny příslušnou chránící skupinou, se sloučeninou obecného vzorce

O

Y—C—X—CCHžJn—z o = c = N-ÍCHsK-Z ' v nichž :·

X, Z a n mají shora uvedený význam a

Y představuje odštěpující se skupinu, jako halogen, zejména chlor nebo brom, N-sukcinimidoxysku1idu, N-ftalimiddxyskupinu, p-mtrofedoxysku1inu, 1-benzdtriazolyloxysku1mu nebo imidazdlylovou skupinu.

Tuto· reakci je možno uskutečnit běžným způsobem, například v inertním rozpouštědle, jako v chloroformu, dimethylformamidu či tetlahydlrfuradu, při teplotě místnosti nebo při zvýšené teplotě, s výhodou při teplotě místnosti.

Zbývající výchozí materiály jsou buď známé, nebo je lze připravit · známými metodami.

Výsledné sloučeniny lze izolovat a vyčistit běžným způsobem.

Sloučeniny obecného vzorce · I je možno obvyklým způsobem převádět na adiční soli s kyselinami a naopak.

Sloučeniny obecného vzorce I vykazují chemoterapeut^kou · účinnost. Zmíněné látky zejména mají antimikrobiální účinnost, o čemž svědčí testy in vitro za použití zředovací řady a testy in vivo na myších, prováděné s různými bakteriálními kmeny, jako jsou například StapOylocrccus aureus, Sta1hylorrrcus epidermis, Streptocdccus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Escheri-7 chia coli, Próteus vulgaris, Próteus · mirabilis, Próteus morganii, Shigella dysenteriae, Shigella · sonnei, Shigella flexneri, Enterobacter verogenes, Edterobartel cloacal, Alcaligenes faecalis, Klebsiella aerogenes, Klebsiella pneumonias, Serratia marcescens, Salmonella , typhimurium a Salmonella Oeidelberg. Výše zmíněná účinnost byla pozorována in vitro· v koncentracích zhruba mezi 0,1 a 50 ^g/ml a in vivo v koncentracích zhruba mezi 0,4 · a 100 mg/kg tělesné · hmotnosti pokusného zvířete.

Sloučeniny podle vynálezu · lze tedy používat jako léčiva, zejména jako antibakteriálně účinná antibiotika.

Doporučená celková denní dávka se pohybuje od 0,1 do 2 g a účelně se podává v dílčích dávkách od 25 do 1500 mg dvakrát až čtyřikrát denně nebo v 1lrtraOdvané formě.

Vynález tedy popisuje rovněž způsob léčení chorob nebo infekcí způsobených bakteriemi, za použití sloučenin obecného vzorce I, jakož i použití sloučenin obecného vzorce I jako chemoterapeut^kých činidel, například jako ^^bakteriálně účinných antibiotik, a jejich použití k terapeutickému ošetřování těla člověka nebo zvířete.

Sloučeniny podle vynálezu je možno používat ve formě volných bází nebo ve formě cOematera1eutirky upotřebitelných adičních solí · s kyselinami, například О-Гю^^нГ^.

Tyto soli vykazují stejně silnou účinnost jako volné báze.

nebo

228316

Sloučeniny podle vynálezu je možno mísit s běžnými chemoterapeuticky upotřebitelnými ředidly a nosiči, a popřípadě s dalšími pomocnými látkami, a v této formě je aplikovat jako tablety, kapsle nebo Injekční preparáty.

Zmíněné prostředky rovněž spadají do rozsahu vynálezu.

Jako příklady konkrétních skupin sloučenin podle vynálezu se uvádějí následující látky:

a) pokud R = R‘ = vodík

Ri = skupina vzorce II nebo Ha,

R3 = guanidinoskupina

R6 = aminoskupina nebo methylaminoskupina

Rž = Re = R9 = vodík

Rá, Rs = vodík nebo hydroxylové skupina nebo pokud R spolu s R‘ tvoří další vazbu Ri = skupina vzorce Ha

R3 = guanidinoskupina

Re = aminoskupina nebo methylaminoskupina

Rí = R=5 = Re = Rg = vodík;

nebo

b) pokud R = R* = vodík

R3 = hydroxyskupina nebo aminoskupina Rí, Rs = vodík, hydroxyskupina

Re = aminoskupina, methylaminoskupina Re = vodík

Re = zbytek vzorce

O NH

II —С—X—(CH2]_nNH—C—NH2 nebo pokud R spolu s R‘ tvoří další vazbu R2 = vodík

R4 = Rs = vodík;

nebo

c) pokud R = R‘ = vodík

R3 = hydroxyskupina, aminoskupina Ré, Rs = vodík, hydroxyskupina

Re - guanidinoskupina

R7 = Re = R9 = vodík nebo pokud R spolu s R‘ tvoří další vazbu R2 = vodík

R4 = Rs = vodík; a jejich adiční soli s kyselinami.

Jako příklady výhodných skupin sloučenin pro shora uvedené použití lze uvést látky odvozené od gentamycinu nebo kanamycinu, zejména od gentamycinu Ci, Ci_a а C2 a kanamycinu A, přičemž zvlášť výhodné jsou ty sloučeniny, v. nichž jedna amidinoskupina se nachází v poloze 1-, 2‘- nebo 6‘

-N-molekuly nebo v ω-poloze postranního řetězce je-li přítomen jako zbytek Ra, a jejich chemoterapeuticky upotřebitelné adiční soli s kyselinami.

Výhodnými individuálními sloučeninami jsou 2‘-N-amidinogentamycin Ci a 2‘-N-amidinogentamycin C_la, a jejich chemoterapeuticky upotřebitelné adiční soli s kyselinami, zejména například hydrochloridy.

Vynález ilustrují následující příklady provedení, jimiž se však rozsah vynálezu v žádném směru neomezuje. V těchto případech jsou všechny teploty udávány ve stupních Celsia.

К chromatografiím se používají následující eluční činidla:

I =	chloroform — methanol — koncentrovaný amoniak 15 : 4 : 1
II	=	chloroform —	methanol	— kon-
		centrovaný amoniak 1:1	: 1
III	=	chloroform —	methanol	— 25%
		amoniak 1:2:	2
IV	=	chloroform —	methanol	— 25%
		amoniak 2:2:	1
v	=	chloroform —	methanol	— 25%
		amoniak 1:1:	1
VI	=	chloroform —	methanol	- 33%
		amoniak 1:2:	2
VII	=	chloroform —	methanol	— 25%
		amoniak 15 : 4	: 1
VIII	=	chloroform —	methanol	— 25%
		amoniak 70 : 21 : 9
IX	=	chloroform —	methanol	— 33%
		amoniak 15 : 4	: 1
X	=	chloroform —	methanol	— 25%
		amoniak 2:1:	1
XI	=	chloroform —	methanol	— kon-

centrovaný amoniak 9 :1: 0,2

XII = chloroform — methanol — koncentrovaný amoniak 17 : 3 : 0,4

XIII = chloroform — methanol — 25% amoniak 9 :1: 0,2

XIV = chloroform — methanol — 25% amoniak 17 : 3 : 0,4

XV = chloroform — methanol 8 : 2

XVI = chloroform — methanol — 33% amoniak 17 : 3 : 0,4.

Přikladl

2‘-N-amidinogentamycin Ci — hydrochlorid

2,2 g l,3,6‘,3“-tetra-N-terc.butoxykarbonylgentamycinu Ci a 0,73 g 1-pyrazolkarboxamidinohydrochloridu se rozpustí v 50 ml pyridinu, roztok se 15 hodin zahřívá na 75°, pak se zahustí к suchu na rotační odparce a zbytek se chromatografuje na sloupci sllikagelu (eluční činidlo IJ. Získá se produkt, který je podle chromatografie na tenké vrstvě (eluční činidlo I) čistý a má R₍ = 0,37. Tento produkt se rozpustí v 5 ml trifluoroctové kyseliny а к roztoku se po 5 minu228516 tách přidá 200 ml etheru. Vysrážený trifluoracetát se na bazickém iontoměniči (Amberlite IRA 400, CP-cyklus) převede na hydrochlorid. Získá se žádaný produkt, který je podle chromatografie na tenké vrstvě čistý (eluční činidlo II — spodní fáze) (sloučenina č. 1).

C-13-NMR:

NH

Z

157,3 (C ) , \

NH2

101.7 (1“), 97,1 (1‘), 84,5 (6), 77,8 (4),

75,5 (5), 70,7 (4“), 70,0 (5‘), 68,7 (5“), 67,0 (2“), 64,3 (3“), 58,8 (6‘), 50,8 50,4, 49,9 (1,3, 2‘), 35,4 (7“), 32,1 (8‘), 28,5 (2), 23,8 (4‘), 22,9 (3), 21,9 (6“), 11,0 (7‘).

P ř í k 1 a d 2

6‘-N-amidinogentamycin C_la — hydrochlorid

1.7 gramu 1,3,2‘,3“-“etra-N-terc.bbtooyyarbonylgentamycinu Ci- se rozpustí . ve 20 ml absolutního pyridinu, přidá se k 590 mg l-pyrazalkarboxumidinohy0roc01ortdu a výsledný roztok se zahřeje na 75 °C. Po- 2 hodinách se pyridin odpaří ve vakuu a zbytek se chromatografuje na silikarelu (eluční činidlo VII).

Takto získaný produkt se nechá reagovat s 5 ml trifluoroctové kyseliny, reakční směs se po- 7 minutách zředí 20 ml etheru, vyloučená sraženina se rozpustí v methanolu a na iontoměniči (Amberlite 401S, C-cyklus) se převede na hydrochlorid. Produkt má Rf = 0,37 (eluční činidlo III) (sloučenina č. 2). '

Příklad 3

6,-N-umidiokmanumycin A — hydrochlorid

0,7 g l,3,3“-tri-N-terc.butoyykarbonylkanamycinu A a 0,26 g 1-pyrazolkmrboymmldlnohydrochloridu se rozpustí ve 30 ml pyridinu a roztok se 18 hodin zahřívá na 70 ^cC. Rozpouštědlo se odpaří na rotační odparce a zbytek se chromatografuje na silikagelu (eluční činidlo VII). Získá se amorfní produkt, který je podle chromatografie na tenké vrstvě čistý a má R_f = 0,48 (eluční činidlo IV).

Tento produkt se rozpustí v 10 ml trifluoroctové kyseliny a k roztoku se po 7 minutách přidá 100 ml etheru. Vyloučená sraženina se rozpustí v methanolu a na iontoměniči (Amberlite 401S, CP-cyklus) se převede na hydrochlorid. Produkt má R_f = = 0,13 (eluční činidlo III) (sloučenina č. 3).

Přikládá

1-Nmmidinogemtumycin C_u — hydrochlorid

1,88 g 3,2‘,6‘-tri-N-terc.butoyykarbonylgentamycinu Ci_a a 730 mg 1-pyrazolkarboyamidinohydrochloridu se rozpustí ve 30 ml pyridinu a roztok se 3 hodiny zahřívá na 75 °C.

Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se chromatografuje na sillaagelu (eluční činidlo VIII). Získá se podle chromatografie na tenké vrstvě čistý produkt o Rf = 0,28 (eluční činidlo- V — spodní fáze).

950 mg tohoto produktu se rozpustí ve 3 ml trifluoroctové kyseliny, po 7 minutách se přidá 50 ml etheru, vyloučená sraženina se odfiltruje, rozpustí se v methanolu a roztok se zfiltruje přes sloupec bazického iontoměniče (Amberlite IRA, 401S, CP-cyklus). Po odpaření rozpouštědla se získá žádaný hydrochlorid ve formě bílého amorfního prášku o Rf = 0,33 (eluční činidlo III) (sloučenina č. 4).

C-13-NMR: “.

157.8 (N—C=N), 99,4 (1“), 95,7 (Γ), 82,4 (6),78,2 (4),751,1 (5),70,7 (4“), 68,2 (5“),

66.8 (2“), 66,7 (5‘), 65,0 (3“), 51,6 (2‘), 49,7 (1,3), 43,5 (6‘), 36,0 (7“), 31,3 (2), 26,1 (4‘), 22,0 (6“), 21,4 (3‘).

P ř í k 1 a d 5

N^-mmidmogemtumycln C2 — hydrochlorid

Analogickým postupem jako v příkladu 4 se nechá vzájemně reagovat 1,9 g 3,2‘,6‘-tri-N-terc.butoyykarbonylgentamycinu Cz a 730 mg 1-pyrmzolkarboyamidinohydrochloridu. Získá se produkt o Rf = 0,48 (eluční činidlo V — spodní fáze).

Výsledný produkt se analogickým způsobem jako v příkladu 4 zbaví chránících skupin a převede se na hydrochlorid. Výsledná sloučenina je podle chromatografie na tenké vrstvě čistá a má Rf = 0,47 (eluční činidlo III) (sloučenina č. 5).

C-13-NMR:

157.8 (N—C=N), 99,4 (1“), 96,3 (1‘), 82,4 (6), 78,7 (4), 75,1 - (5), 70,6 (4“), 70,0 (5‘), 68,2 (5“), - 67,0' (2“), 66,6 (3“), 51,6, 50,5, 49,7 (6‘. 1, 3, 2‘), 35,8 (7“), 31,3 (2), 23,0 (4‘), 21,9 (6“), 21,4 (3‘), 13,5 (7‘).

Příklad 6

NN-umidiolr)gentumycin Ci — hydrochlorid

1,95 g 3,2‘,6‘-tri-N-terc.butoyykarbonylgentamycinu Cl a 730 mg 1-pyrazolkmrboyamidinohydrochloridu se nechá reagovat analogickým způsobem jako v příkladu 4.

228S16

Po chromatografii se získá produkt, který je podle chromatografie na tenké vrstvě čistý a má R_f = 0,28 (eluční činidlo V — spodní fáze).

Takto vzniklý produkt se pak nechá dále reagovat jako v příkladu 4, čímž se získá podle chromatografie na tenké vrstvě čistý hydrochlorid o R₍ = 0,43 (eluční činidlo III).

C-13-NMR:

157,8 (N—C-N), 99,3 (1“), 96,2 (1‘), 82,4 (6), 78,4 (4), 75,1 (5), 70,6 (4“), 70,1 (5‘), 68,2 (5“), 66,6 (2“), 64,9 (3“), 58,6 (6‘), 51,6 (2‘), 49,7 (1,3), 35,9 (7“), 32,1 (8‘), 31,3 (2), 23,2, 21,4 (4‘, 3‘, 6“), 10,9 (7‘).

Příklad 7

1-N- (2-guanidinoethoxykarbonyl) gentamycin C_Ia (báze a hydrochlorid)

1,9 g 1-N-(2-aminoethoxykarbonyl )-3,2‘,6‘,3“-tetra-N-terc.butoxykarbonylgentamymycinu Си se rozpustí v 60 ml absolutního pyridinu a roztok se nechá reagovat s 0,6 g

1-pyrazolkarboxamidinohydrochloridu. Po patnáctiminutovém zahřívání na 75 °C se pyridin oddestiluje a zbytek se vyčistí sloupcovou chromatografii. Získá se amorfní produkt, který je podle chromatografie na tenké vrstvě čistý a má Rf = 0,39 (eluční činidlo IX).

1,3 g takto získaného 1-N-(2-guanidinoethoxykarbonyl ) -3,2‘,6‘,3“-tetra-N-terc.butoxykarbonylgentamycinu C_la se rozpustí v 5 ml trifluoroctové kyseliny a roztok se po 7 minutách vylije do 50 ml etheru. Vyloučená sraženina se odsaje, rozpustí se v methanolu a na bazickém icmtoměniči (Amberlite IRA 401S, Cl“-cyklus) se převede na hydrochlorid. Výsledný produkt je podle chromatografie na tenké vrstvě čistý, má Rf = 0,47 (eluční činidlo VI) a optickou rotaci [a]d²⁰ = 93,6° (c = 1,3 ve vodě) (sloučenina č. 7).

C-13-NMR (volná báze):

158,25 (CO, C=NH), 99,03 (Г), 98,73 (1“), 84,65 (4), 81,89 (6), 75,54 (5), 72,12 (4“), 68,53, 68,29, 67,69 (2“, 5‘, 5“), 64,57 (3“), 64,27 (CHzO), 51,80 (2‘), 50,19, 49,89 (1, 3), 44,37 (6‘), 41,38 (CH2N), 36,95 (7“), 35,62 (2), 27,41 (4‘), 24,47 (3‘), 22,38 (6“).

C-13-NMR (hydrochlorid):

158,07 (CO, C—NH), 98,79 (1“), 95,56 (1‘), 81,11 (6), 78,18 (4), 75,18 (5), 70,74 (4“), 67,81, 66,79 (5“, 2“, 5‘), 64,93 (3“), 64,27 (СШ0), 50,97 (2‘), 49,83, 49,59 (1, 3),

43,47 (6‘), 41,31 (CH2N), 35,86 (7“), 31,67 (2), 26,15 (4‘), 21,90 21,30 (6“, 3‘).

Příklad 8

1-N- (2-guanidinoethoxykarbonyl) gentamycin Cý — hydrochlorid

Sloučeninu uvedenou v názvu je možno získat analogickým postupem jako v příkladu 7. Produkt rezultuje jako látka čistá podle chromatografie na tenké vrstvě, o R₍rovná se 0,53 (eluční činidlo VI) a optické rotaci [α]ο²⁰ = 96,4° (c = 1,2 ve vodě) (sloučenina č. 8).

Příklad 9

1-N- (2-aminoethoxykarbonyl) -2‘-N-amidinogentamycin Ci — hydrochlorid g l-N-[2-(benzyloxykarbonylamino)ethoxykarbonyl]-3,6‘,3“-tri-N-terc.butoxykarbonylgentamycinu Ci a 0,6 g 1-pyrazolkarboxamidlnohydrochloridu se rozpustí v 5 ml pyridinu a roztok se 50 hodin zahřívá na 70 °C. Rozpouštědlo se odpaří na rotační odparce a zbytek se chromatografuje na silikagelu (eluční činidlo VII). Získá se podle chromatografie na tenké vrstvě čistý produkt o R_f = 0,20 (eluční činidlo VII).

0,65 g tohoto produktu se rozpustí v 5 ml methanolu, roztok se smísí s 20 ml 20% roztoku mravenčenu amonného ve směsi methanolu a vody (8 :2) a 100 mg paládia na uhlí, a směs se 5 minut vaří. Methanolický roztok se zahustí na rotační odparce, odparek se rozpustí v 7 ml trifluoroctové kyseliny a po 7 minutách se к němu přidá 200 mililitrů etheru. Vyloučená sraženina se rozpustí v methanolu a roztok se zfiltruje přes sloupec iontoměniče (Amberlite IRA 301S, Cl--cyklus). Filtrát se zahustí na objem cca 10 ml a přidá se к němu 200 ml etheru. Získá se žádaný produkt ve formě amorfního prášku, který je podle chromatografie na tenké vrstvě čistý a má R_f = 0,34 (eluční činidlo IV) (sloučenina č. 9).

Příklad 10

1-N- (2-guanidinoethoxykarbonyl) -2‘-N-amidinogentamycin Ci — hydrochlorid

1,38 g 1-N-(2-aminoethoxykarbonyl)-3,6*,3“-tri-N-terc.butoxykarbonylgentamycinu Ci a 1,38 g pyrazolkarboxamidinohydrochloridu se rozpustí v 50 ml pyridinu a roztok se 40 hodin zahřívá na 70 °C. Po odpaření rozpouštědla na rotační odparce se zbytek chromatografuje na silikagelu (eluční činidlo VIII). Produkt má R_É = 0,40 (eluční činidlo VIII).

0,83 g tohoto produktu se rozpustí v 10 ml trifluoroctové kyseliny a roztok se zpracuje analogickým způsobem jako v příkladu 9, čímž se získá žádaný produkt, který je podle chromatografie na tenké vrstvě čistý a má R_f = 0,12 (eluční činidlo III) (sloučenina č. 10).

Příklad 11

2‘-N-amidinogentamycin C_Ja — hydrochlorid

2.3 g

Cia a 1,16 g l-pyrazolkarboxamidinohydrochloridu se rozpustí v 50 ml pyridinu. Po padesátihodinovém zahřívání . na 70 °C ' se rozpouštědlo oddestiluje a zbytek se chromatografuje na silikagelu (eluční činidlo VIII). Získá se podle chromatografie na tenké vrstvě čistý amorfní produkt o Rf = = 0,47 (eluční činidlo IV).

0,52 g 6‘-N-benzyloxykarbonyl-2‘-amidinogentamycinu C)a se rozpustí ve 30 ml methanolu a 10 ml 10% vodné kyseliny octové, a směs se v přítomnosti paládiové černi hydrogenuje při teplotě 20 °C za tlaku 0,3 MPa. Po odfiltrování katalyzátoru se rozpouštědlo oddestiluje, zbytek se rozpustí v methanolickém chlorovodíku (pH = 3) a roztok se zfiltruje přes sloupce iontoměniče (Amberlite IRA 401S, Cl“-cyklus).

Filtrát se zahustí na objem 5 ml a přidáním etheru se vysráží žádaný produkt, který je podle chromatografie na tenké vrstvě čistý a má R_f == 0,11 (eluční činidlo IV) (sloučenina č. 11).

C-13-NMR:

NH

Z

157,4 (C ) , \

NH2

101.9 (1“), 96,6 (Γ), 84,6 (6), 77,4 (4),

75.5 (5), 70,8 (4“), 68,8 (5“), 67,1 (2“),

66.6 (5‘), 64,2 (3“), 50,6 (1,2‘), 49,8 (3),

43.7 (6‘), 35,6 (7“), 28,6 (2), 26,9 (4‘),

22.9 (3‘), 21,9 (6“).

Příklad 12

6‘-N-amidinogentamycin Cl_a

5.4 g gentamycinu C-, a 3,6 g 1-pyrazolkarboxamidinohydrochloridu se rozpustí ve 120 ml chloroformu a 30 ml pyridinu a roztok se 20 hodin zahřívá na 70 °C. Po ochlazení se vyloučená sraženina odfiltruje, rozpustí se v methanolu a znovu se vysráží přidáním etheru. Tato sraženina se chromatografuje na silikagelu za použití 5% vodné kyseliny octové jako elučního činidla. Získá se podle chromatografie na tenké vrstvě čistý produkt identický s produktem vyrobeným v příkladu 2, který je možno postupem popsaným v příkladu 2 převést na hydrochlorid.

Příklad 13

2‘-N-amidinogeintamycin Ci

0,48 g gentamycinu Cl a 0,3 g l-pyrazolkarboxamidinohydrochloridu se. rozpustí v 5 ml chloroformu a 5 ml pyridinu, a roztok se 40 . hodin zahřívá k varu pod zpětným chladičem. Po ochlazení se vyloučená sra ženina odfiltruje a chřomatografuje se na silikagelu za použití 5% vodné kyseliny octové jako elučního činidla. Získá se podle chromatografie . na tenké vrstvě čistý produkt identický s produktem připraveným v příkladu 1, který je ' možno ' postupem popsaným v příkladu 1 převést na hydrochlorid.

Potřebné výchozí látky je . možno připravit například následovně:

A. l,3,6‘,3“-tetra-N-terc.butoxykarbonylgentamycin Ci (pro příklad 1)

8,5 g gentamycinu Ci se rozpustí ve 100 ml methanolu a roztok se za chlazení na 40'C nechá pomalu reagovat s roztokem 2,9 g sloučeniny vzorce

O

CF3CSC2H5 ve 20 ml methanolu. Po 3 hodinách se přikape roztok 17,3 g di-terc.butyldikarbonátu ve 20 ml methanolu, po 35 hodinách, během kterých se udržuje . teplota na 20 °C, se přidá stejný objem 3,3% amoniaku a po 15 hodinách se reakční roztok odpaří k suchu na rotační odparce. Po chromatografií na sloupci silikagelu (eluční činidlo XI) se získá podle ’ chromatografie na tenké vrstvě čistý žádaný produkt o R_f = 0,26 (eluční činidlo XII).

B. l,3,2‘,3“-tetra-N-terc.butoxykarbonylgentamycin Cla (pro příklad 2)

a) 6‘-N-benzyloxykarbonylgentamycin

4,5 g gentamycinu C_u se rozpustí ve 100 ml methanolu, roztok se ochladí na —10 °C a pomalu se k němu přikape roztok 3,1 g N-benzylkarbonyl-5-norbornen-2,3-dikarboximidu v 50 ml methanolu a 10 ml chloroformu. . Po 0,5 hodiny se rozpouštědlo odpaří ve vakuu a zbytek se chromatografuje na silikagelu. Produkt má R_f = 0,37 (eluční činidlo VII).

b) l,3,2‘,3“-tetra-N-terc.butoxykarbonylgentamycin Cia

2,3 g 6‘-N-benzyloxykarbonylgentamyc-nu Cia se rozpustí v 50 ml methanolu a k roztoku se přidá 3,6 g di-terc.butyldikarbonátu ve 30 ml methanolu. Po čtyřhodinové reakci je podle chromatografie na tenké vrstvě reakce ukončena. Produkt má R_f = = 0,58 (eluční činidlo XIII).

K roztoku se přidá 50 ml 20% roztoku mravenčanu amonného a 500 mg 10% paládia na uhlí, reakční směs se 3 minuty vaří, pak se zfiltruje, rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí ve vodě. Roztok se třikrát extrahuje ethylacetátem, ' spojené extrakty se vysuší síranem sodným a rozpouštědlo. se odpaří ve vakuu. Získá se podle chromatografie na tenké vrstvě čistý produkt o Rf = 0,25 (eluční činidlo XIII).

C. l,3,3“-tri-N-terc.butoxykarbonylkanamycin A (pro příklad 3)

a) 6‘-N-benzyloxykarbonyl-l,3,3“-tri-N-terc.butoxykarbonylkanamycin A g 6‘-N-bei^;^i^lkarbonylkanamycinu A se rozpustí v 50 ml směsi stejných dílů methanolu a vody, a podrobí se reakci s 1,27 g di-terc.butyldikarbonátu a 1 ml triethylaminu. Reakční směs se 20 hodin míchá při teplotě místnosti, během kteréžto doby se vyloučí gelovitá sraženina. Po zředění vodou se sraženina odfiltruje. Produkt je podle chromatografie na tenké vrstvě čistý a má Rf = 0,42 (eluční číndlo XV).

b) l,3,3“-tri-N-terc.butoxykarbonylkanamycin A g produktu připraveného. v odstavci a) se rozpustí ve směsi methanolu a 10% vodné kyseliny octové (5:1) a v přítomnosti paládia na uhlí se hydrogenuje při teplotě 20 °C za tlaku 0,3 MPa. Po odfiltrování katalyzátoru a odpaření filtrátu se získá podle chromatografie na tenké vrstvě čistý produkt o Rf = 0,77 (eluční činidlo III).

D. l-N-(2-aminoethoxykarbonyl)-3,2‘,6‘,3“-tetra-N-terc.butoxykarbonylgentamycin Cu (pro příklad 7)

a) N-(2-azidoethoxykarbonyloxy)ftalimid

K roztoku 1,74 g 2-azidoethanolu ve 100 ml chloroformu prostého ethanolu a 10 ml pyridinu se přidá 5,41 g N-(chlorkarbonyl)ftalimidu. Výsledný roztok se přes noc míchá, pak se. extrahuje roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se síranem sodným a rozpouštědlo se oddestiluje. Získaný krystalický zbytek je možno přímo použít v následujícím stupni.

b) 3,2‘,6‘-tri-N-terc.butoxykarbonylgentamycin Cu

Sloučenina uvedená v názvu se získá analogickým postupem jako v postupu E odst.

a). Produkt taje při 215 až 217°C a má Rf rovná se 0,31 (eluční činidlo XIV).

c) 1-N- (2-azidoethoxykarbonyl) -3,2‘,6‘-tri-N-terc.butoxykarbonylgentamycin Cla

K roztoku 11,23 g 3,2‘,6‘-tri-N-terc.butoxykarbonylgentamycinu Cla ve 200 ml chloro formu prostého ethanolu se při teplotě místnosti .' přikape roztok 4,56 g N-(2-azidoethoformu. Po 7 hodinách se výsledný roztok extrahuje roztokem hydrogenuhličitanu sodného, odpaří se na rotační odparce a amorfní zbytek se vyčistí sloupcovou chromatografií. . .Získá se podle chromatografie ' na tenké vrstvě čistý produkt o R_f = 0,35 (eluční činidlo XV).

d) l^^N-(2^-^aminoethoxy^ai'b^i^;^^)-3,2‘,6‘,3“-tetra-N-terc.butoxykarbonylgentamycin Cu

K 7,3 g l-N-(2-azidoethoxykarbonyl)-3,2‘6‘-tri-N-terc.butoxykarbonylgentamycinu Cu se při teplotě místnosti přikape 1,85 g di-terc.butyldikarbonátu rozpuštěného ve 20 mililitrech methanolu. Po ukončení reakce [Rf = 0,45 ve směsi chloroformu a methanolu (10:1)] se přidá 200 mg 10% poládia na aktivním uhlí a suspenze se redukuje vodíkem při teplotě místnosti.

Po ukončení redukce se katalyzátor odfiltruje a filtrát se odpaří na rotační odparce. Zbytek se vyčistí sloupcovou chromatografií na silikagelu. Získá se podle chromatografie na tenké vrstvě čistý produkt o Rf rovná se 0,2 (eluční činidlo XV).

E. l-I\H2-aminoethoxykarbony))-3,2,,6‘,3“-tetra-N-terc.butoxykarbonylgentamycin Cž (pro příklad 8)

a) 3,2‘,6‘ltri-N-terc.butoxykarboιnyll gentamycin C2

232 g gentamycinu C2 a 439 g hydrátu octanu zinečnatého se rozpustí v 8 litrech isopropanolu. Ρ 1 hodině se přidá roztok 392 g dilterc.butylkarbonátu v isopropanolu a reakční směs se 20 hodin zahřívá na 50 °C. Výsledný roztok se odpaří na rotační odparce, zbytek se vyjme 10 litry 2 N amoniaku a vodná fáze se extrahuje šestkrát vždy 1,5 litru ethylacetátu. Spojené organické fáze se promyjí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 10% roztokem hydrogensíranu sodného a vodou, a vysuší se síranem sodným. Rozpouštědlo se odpaří a odparek se trituruje s acetonňtrilem, čímž se získá krystalický produkt o teplotě tání 254 až 256 °C. Podle chromatografie na tenké vrstvě je produkt čistý a má Rf = 0,34 (eluční činidlo XIV). Další podíl produktu je možno získat z matečných louhů chromatografií na silikagelu (eluční činidlo XIII).

b) l-N-(2-azidoethoxykarbonyl)l3,2‘,6‘-tri-N-terc.butoxykarbonyll gentamycin C2

38,2 g 3,2‘,6‘-tri-Nlterc.butoxykarbonyl) gentamycinu C2 se rozpustí ve 300 ml chloroformu a k roztoku se po přidání 5,6 g triethylaminu pomalu přikape při teplotě

O °C roztok 7,5 g 2-azidoethoxykarbonylchloridu ' ve 100 ml - chloroformu. Po patnáctihodínové reakcí při teplotě 20 °C se reakční roztok odpaří ve vakuu. Získá se bezbarvý pěnovitý produkt (Rf = 0,27; eluční činidlo XV), který je možno přímo používat v následujícím reakčním stupni.

c) l-N-(2-azidoethoxykarbonyl)-3,2‘,6‘,3“-tetra-N-terc.butoxykarbonylgentamycin Cž

Produkt získaný postupem popsaným v odstavci b) se rozpustí ve 100 ml chloroformu, roztok se zředí methanolem na objem 1 litru, přidá se k němu nejprve silně bazický iontoměnič (Měrek III, OH~-cyklus) a pak 13 g di-terc.butyldikarbonátu. Výsledná suspenze se 15 hodin míchá, pak se zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří. Získá se bezbarvý pěnovitý produkt o R_f = 0,9 (eluční činidlo XV), který je možno - přímo použít v následujícím reakčním stupni.

d) l-(2-aininoethoxykarbonyl)-3,2‘,6‘,3“-tetra-N-terc.butoxykarbonylgentamycin C2 g produktu připraveného postupem popsaným v odstavci c) se rozpustí ve 100 ml roztoku 200 g mravenčenu amonného ve 200 ml vody a 800 ml methanolu, roztok se smísí se 300 mg 10% paládla na uhlí a směs se 1,5 hodiny vaří pod zpětným chladičem. Po filtraci se rozpouštědlo odpaří a zbytek se chromatografuje na silikagelu (eluční Činidlo XVI). Získá se pěnovitý produkt, který je podle chromatografie na tenké vrstvě Čistý a má R_f = 0,2 (eluční činidlo XV).

F. 1-N- [ 2- (benzyloxykarbonylamino)ethoxykarbonyll-3,6‘,3“-tri-N-terc.butoxykarbonylgentamycin Ci (z příkladu 9)

a) 3,2‘,6‘-tri-N-terc.butoxykarboyylgentamycin Ci

Analogickým postupem jako v části E, odst. a), se získá amorfní produkt, který je podle chromatografie na tenké vrstvě čistý a má Rf = 0,3 (eluční činidlo XIV).

b) 3,2‘,6‘-tri-N-terc.butoxykarbonyI-1-N- [ 2- (ben zy loxykar-bon у 1amino·· ) ethoxykarbonyl ] gentamycin Ci

31,1 g 3,2‘,6^<-tri-N-terc.butxxykar0ynyl- gentamycinu Ci a 5 g triethylaminu se rozpustí ve 200 ml chloroformu a pozvolna se smísí s roztokem 15,4 g N-[2-(benzyloxykarbonylaminog ) ethoxykarbonyloxy ] f talimidu ve 100 ml chloroformu. Po- dvacetihodinové reakci při teplotě 20 °C se reakční směs několikrát promyje· roztokem hydrogenuhličitanu sodného a odpaří se na rotační odpar18 ce. Produkt · je možno- ' vyčistit chromatografií na silikagelu - [směs chloroformu a methanolu (10:1) jako . eluční - činidlo]. Získaný produkt má Rf = 0,42 (eluční činidlo XV).

c) 1-N- [ 2- (benzyloxykarbonylamiono) ethoxykaгbonyl]gentamyciy Ci

31,1 g 3,2‘,6‘ttri-N-teгc.butxxyaar0ynyl-

-1-N- [ 2- (benzyloxykarbonylamino) ethoxykarbonyl ]gentamyelnu Ci se rozpustí v 60 ml trifluoroctové kyseliny a - po 10 minutách se roztok smísí s 1 litrem etheru. Vyloučená sraženina se odsaje, rozpustí se ve vodě a chromatografuje se na sloupci iontoměniče [Amberlite CG-50 (NHí⁺)] za použití vody a 0,3 N amoniaku. Frakce reagující pozitivně na ninhydrin se spojí a lyofilizují se. Získá se amorfní pěnovitý produkt, který je podle chromatografie na tenké - vrstvě čistý a má Rf = 0,73 (eluční činidlo V).

d) 1-N- [ 2- (beyzyloxykarbonylamlno) ethoxykarbonyl] -2‘-N-trfluoracetylgentamycin Ci

22,6 g 1-N-[2-(benzyloxykaгbonylamlУo )ethoxykarbonyl ]gentamycinu Ci se rozpustí v 1,2 litru methanolu a roztok se při teplotě —10 ^CC pozvolna smísí s roztokem 4,1 mililitrech ethylesteru tr:^:lh^c^itUik^c^(^'^c^v^é kyseliny v 15 ml methanolu. Reakční roztok se nechá 20 hodin stát při teplotě 20 °C, přičemž průběh reakce se sleduje chromatografii na tenké vrstvě. Reakční produkt má Rf = 0,57 (eluční činidlo VII). Výsledný roztok se může přímo použít v následujícím reakčním stupni.

e) 1-N- [ 2- (benzyloxykarbonylamino) ethoxykarbonyl ] -3,6‘,3“-tri-N-terc.butoxykarbonylgentamycin Ci

Roztok připravený postupem popsaným v odstavci d) se při 20 °C smísí s 23 g di-terc.butyldikarbonátu a 4 hodiny se míchá. -Reakční roztok se pak zředí 1 litrem 25% amoniaku a 20 hodin se míchá při teplotě 20 °C. Reakční směs se dále zředí vodou, methanol se odpaří ve vakuu a vodná fáze se několikrát extrahuje ethylacetátem. Po promytí nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a 0,5 N kyselinou chlorovodíkovou se ethylacetátový roztok odpaří na rotační odparce a zbytek se chromatografuje na silikagelu (eluční činidlo XIII). Produkt je podle chromatografie na tenké vrstvě čistý a má Rf = 0,40 (eluční činidlo XIV).

G. l-N-(2-aminoethoxykarbony--3,6‘,3“-tri-N-terc.butoxykarboyylgeУtamycln Ci (pro příklad 10)

1,5 g 1-N-[ 2-(be^:^’^lo^^^l^i^i'b(^i^i^]^^i^ii^o)ethoxykarbonyl ] -3,6‘,3“-tri-n-terc.butoxy228516 karbonylgentamycinu Ci se rozpustí v 10 ml methanolu, roztok se smísí s 20 ml 20% roztoku mravenčenu amonného ve směsi methanolu a vody (8:2) a 200 mg paládia na uhlí, a směs se 5 minut vaří.

Po filtraci se reakční roztok odpaří na rotační odparce, zbytek se vyjme vodou a roztok se neutralizuje amoniakem na pH 9. Po extrakci ethylacetátem se získá produkt, který je podle chromatografie na tenké vrstvě čistý a má Ř_f = 0,23 (eluční činidlo XIV).

Claims

PŘEDMĚT

1. Způsob výroby guanylových aminoglykosldů obecného vzorce I

VYNALEZU (III) ve kterém

Ri znamená atom vodíku nebo zbytek vzorce II, Ila, lib, líc nebo lid, přičemž alespoň jeden ze symbolů Ri a Rz představuje atom vodíku,

R3 znamená hydroxyskupinu nebo zbytek vzorce —NHRe,

Rd a Re bud nezávisle na sobě znamenají vždy atom vodíku nebo hydroxyskupinu a R a R' znamenají atomy vodíku, nebo Rd a Rs znamenají atomy vodíku a R a R* představují další vazbu,

Re znamená hydroxyskupinu, zbytek vzorce —NHR8 nebo zbytek vzorce —N(CH3)Re,

R7 představuje atom vodíku nebo methylovou skupinu,

Re znamená atom vodíku nebo amidinoskupinu,

R9 představuje atom vodíku, amidinoskupinu nebo zbytek vzorce

^НО\Л~° WC) ( OH OH (lib) (llc)

o —C—X(CH2)_n—NHRe ,

Rio znamená atom vodíku nebo zbytek vzorce IV nebo IVa (lid)

NH. (IV) (iVaJ

Rn představuje atom vodíku nebo zbytek Rz představuje atom vodíku nebo zbytek vzorce V vzorce III nebo lila

X znamená atom kyslíku nebo aminoskupínu a n je celé číslo o hodnotě 2 až 5, přičemž v molekule jsou přítomny nejméně < jedna a nejvýše dvě amidinoskuplny, a jejich adičních solí s kyselinami, vyznačující se tím, že se guanyluje odpovídající slouče* nina obecného vzorce VII ve kterém

R3¹ představuje hydroxyskupinu nebo aminoskupinu,

R6¹ znamená hydroxyskupinu, aminoskupinu nebo methylaminoskupinu,

Rg' představuje atom vodíku nebo zbytek vzorce

O

II .

—C-X-(CH2)n-Z ,

Z znamená aminoskupinu nebo potenciální aminoskupinu a

R, R‘, Ri, Rz, R<i, Rs, Rz, X a n mají shora uvedený význam, a kde jedna nebo několik amínoskupin může být chráněno vhodnou chránicí skupinou, načež se popřípadě v získaném produktu převedou všechny přítomné potenciální aminoskupiny na volné aminoskupiny a všechny přítomné chráněné aminoskupiny se zbaví chránících skupin, a výsledný produkt obecného vzorce I se popřípadě převede reakcí s kyselinou na svoji adiční sůl s kyselinou.
2. Způsob podle bodu 1, k výrobě sloučenin shora uvedeného obecného vzorce I, ve kterém, pokud R a R‘ znamenají vždy atom vodíku,

Ri představuje zbytek shora uvedeného vzorce II nebo Ha,

Rs znamená guanidinoskupinu,

R6 představuje aminoskupinu nebo methylaminoskupinu,

Rž, Rs a Rg znamenají atomy vodíku,

R4 a Rs nezávisle na sobě znamenají vždy atom vodíku nebo hydroxylovou skupinu a

R7 má význam jako v bodu 1, nebo pokud R a R‘ znamenají další vazbu, Ri představuje zbytek shora uvedeného vzorce Ha,

R3 znamená guanidinoskupinu,

Re představuje aminoskupinu nebo - methylaminoskupinu,

R4, Rs, Re a R9 znamenají vždy atom vodíku a

R2, R7, R10 a R11 mají význam jako v bodu 1, a jejich adičních solí s kyselinami, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použijí sloučeniny shora uvedeného vzorce VII, ve kterém

R3¹ znamená aminoskupinu,

Re¹ představuje chráněnou aminoskupinu nebo- methylaminoskupinu,

R9I znamená atom vodíku a zbývající 0becné symboly mají v tomto bodu uvedený význam.
3. Způsob podle bodu 1, k výrobě sloučenin shora uvedeného obecného vzorce I, ve kterém pokud R a R‘ znamenají vždy atom vodíku,

R3 představuje hydroxyskupinu nebo- aminoskupinu,

R4 a Rs znamenají vždy atom vodíku nebo hydroxyskupinu,

Re představuje aminoskupinu nebo methylamin oskupinu,

Rs znamená atom vodíku,

R9 představuje - zbytek vzorce

O NH

II II .

- C-X- (CH2)nNH-C-NHž a

Ri, Rz, R7, R10, R11, X a n mají význam jako v bodu 1, nebo pokud R a R‘ znamenají další vazbu, pak mimoto

R2, R3 a Rs znamenají atomy vodíku, a jejich adičních - solí s kyselinami, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použijí sloučeniny shora uvedeného obecného- vzorce VII, ve kterém

R3¹ znamená - hydroxyskupinu nebo chráněnou aminoskupinu,

Re* představuje chráněnou aminoskupinu nebo methylamiNoskupiNu,

R91 znamená zbytek vzorce

O

-C—X—(CH2]_n—HH2 a zbývající obecné symboly mají v tomto bodu uvedený význam.
4. Způsob podlé bodu 1, k výrobě sloučenin shora uvedeného obecného vzorce I,ve kterém ρ'.

pokud R a R‘ znamenají vždy atom vodíku,

R3 představuje hydroxyskupinu nebo aminoskupinu,

Rí a Rs znamenají vždy atom vodíku nebo hydroxyskupinu,

Re představuje guanidinoskupínu,

R7, Re a R9 znamenají atomy vodíku a

Rl, Rz, R7, Rio a Rn mají význam jako v bodu 1, nebo pokud R a R* znamenají další vazbu, pak mimoto

R2, Ri a Rs představují atomy vodíku, a jejich adičních solí s kyselinami, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použijí sloučeniny shora uvedeného obecného vzorce VII, ve kterém

R3¹ znamená hydroxylovou skupinu nebo chráněnou aminoskupínu,

R6¹ představuje aminoskupínu,

R9¹ znamená atom vodíku a zbývající obecné symboly mají v tomto bodu uvedený význam.

Severografia, n. p., závod 7, Most