CS225842B2 - The production of the 23-de/mycinosyloxy/-tylosene derivates - Google Patents
The production of the 23-de/mycinosyloxy/-tylosene derivates Download PDFInfo
- Publication number
- CS225842B2 CS225842B2 CS814339A CS433981A CS225842B2 CS 225842 B2 CS225842 B2 CS 225842B2 CS 814339 A CS814339 A CS 814339A CS 433981 A CS433981 A CS 433981A CS 225842 B2 CS225842 B2 CS 225842B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- dmot
- nrrl
- medium
- new
- acid
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/08—Oxygen as only ring hetero atoms containing a hetero ring of at least seven ring members, e.g. zearalenone, macrolide aglycons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
- C07H17/08—Hetero rings containing eight or more ring members, e.g. erythromycins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
- C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
- C12R2001/54—Streptomyces fradiae
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Processing Of Solid Wastes (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Description
Předmětem vynálezu je způsob výroby.23-de(myclno3yloxy)tylosinového derivátu zejména sloučenin podobných známému léčivu tylosinu, který byl popsán například v ’Tetrahedron Litera, 2339 (1970).
Přestože tylosin je velmi dobrým entibiotikem, je zapotřebí nalézt antibiotika nová také proto, že mohou vzniknout odolné kmeny. Mmoto při změnách struktury antibiotika může být získáno a^‘tibi^otium s jiiým spektrem účinnooti. Bylo však zjištěno, že chemické modifikace antibiotik tylosinového typu jsou velmi nesnadné. Nappíklad v publikaci J. Lrg. Chem. 44 (12), 2050 až 2052 (1979) se uvádí některé potíže, spojené s odštěpením mmccnosylglykosidové vazby tylosinu chemiclým způsobem. Je tedy zapotřebí nalézt nové struktury jiným . způsobem, nejprvaděpodobněji pomocí nových mikroorganismů, které se vyškytají bu3 přirozeně nebo byly získány uměle. Kuutivací těchto mikroorganismů by bylo možno získat nová antibiotika.
Nyní bylo neočekávaně zjištěno, že je možno získat sloučeniny podobné tylosinu, avšak bez mmcCno9yloxyskupiny tylosinu tak, že se pěstuje v submmezní kultuře ze aerobních podmínek Streptomyces fradiae.
Předmětem vynálezu je způsob výroby 23-de(mmcCnocyCoxy)tylcsinovéhc derivátu obecného vzorce I
kde
Q znamená skupinu -C^OHinebo -CHO, jakož i z farmaceutického hlediska přijatelných solí nebo ecylesterů těchto sloučenin, vyznačující se tím, že se pěstuje Streptom/ces fradiae NRRL 12171 v submmezní kultuře za aerobních podmínek při teplotě 10 až 37 °C ' do nehromědění antibiotika, antibioiikn se z kultivačního prostředí izoluje a popřípadě se takto . získané antibiotiUn převádí na sůl přijatelnou z farmaceutického hledidke nebo na acylester.
Přestože v Obecném vzorci I není uvedena stereochemická konfigurace, je zřejmé, že je totožné s . konfigurací tylosinu. Neuurální cukr je mk^óze a aninocukr- rnykernmnóze
V případě, že Q znamená skupinu -CHO, je sloučenina obecného vzorce 1 novým makkilidním a^tibi^c^tk^(^m, který bude dále nazýván de(mycnooyyooy)tylosin nebo DMOT a který je možno vyjádřit vzorcek:
Dithytoodeeivát DMOT, to jest 20-dihydro-23-de (InУinooyУpoy)tyУo8io bude dále nazýván
CH3
DMOT a dihydro-DMOT.inhltaiUÍ růst organismů, patogenních pro zvířata. Tyto antibakteriální látky jsou zvláště účinné proti grempooltivmím mikroorgpnistůta a čeledi Mrkopla&na·
Hydro^lové ’skupiny DMOT a dilyydro-OMOT mohou být esterifkkoróny V poloze 2', 4, 3 a na 3-hydroxylové skupiny, čímž vznikají cenné acylestery. Mmoto je možno ésterifikovet dihydro-OMOT na hydroaxylové skupině v poloze 20. Esterifikace hydroxylové skupiny v poloze 2' je n^;jsn^(^i^nj2^ší. Typickými estery jsou- estery monokerbbxylových kyselin nebo hemiistery dikarboxylových kyselin - o 2 až 18 atomech uhlíku.
DMOT, dihydro-OMOT a acylestery jsou zásadité sloučeniny, které při aplikaci s kyselinou poslktují ediční soli. Tyto ediční soli rovněž spaddjí do oboru vynálezu. Pro jednoduchost bude používán pojem sloučenina tyou DMOT, tento pojem zahrnuje DMOT, d^ÍS^c-MMaT a -acylestery těchto sloučenin nebo z farmaceutického hlediska přijatelné adiční soli s kyselinami v případě DMOT, dihydro-MMOT i acylesterů.
Nové ahtnbionikuí je možno získat pěstováním nového kmene Streptomyces fradiae NRRL 12171, DMOT nebo dihydro-MMOT je možno získat pěstováním tohoto kmene v submeezní kultuře za aerobních podmínek do nahromadění dostatečného mmnoství antibiotika. Obě látky je možno extrahovat z jlkalioovanélo filtrátu živného prostředí použitím polárních organických rozpouštědel a je možno je dále čistit edsorpcí nebo extrekčními postupy.
Vy^niez se rovněž týká nového způsobu výroby 2,3-desoxy-5-0-íykвminnoyllylonolidu, který bude dále zkracován jako - DOMT a 20-dnlydro-23-deiOxy-5-O-mУejinhoyllylonolidu (dihydí^o^^M^) hydrolýzou DMOT nebo -dnlцydro-OMOT v mírně kyselém prostředí. DOMT má vzorec
Dihydro-OMOT je možno získat - chemickou redukcí nebo fermennací. V případě, že se tato látka připravuje chemickou redukcí, je možno pouuít známých postupů, například působením . přibližně stecH ©metrického tnnnoství chemického redukčního činidla, jako bomhydridu sodíku v alkoholu. Dilydro-OMOT je možno také získat pěstováním S. fradiae NRHL 12171 za řízených podmínek.
DMOT a je možno esterifikovat v poloze 2', 4, 3 a 3- za vzniku ecylesterů působením acylačních činidel známým způsobem. M-moto je možno dihyydrcDMíOT esterifikovat v poloze 20. Esterifikace hydroxylové skupiny v poloze 2' je hejshj(dnj8í. Typickými acylačními činidly jsou anlhydridy, helogenidy, obvykle společně se - zásadou nebo - jinou látkou, která pohlcuje kyselinu a aktivní - estery organických kyselin, - Acylece je teké možno dosáhnout použitím síísí organické kyseliny a dehydratečního činidle, jako například N,N'-dncyklolexylkjrbodiiíidu. Acylaci je také možno provádět enzyinaaicky, jek bylo - popsáno v US patentu č. 4 092 473, Oke^to a daaší. Acylované deriváty je možno děěit a čistit známým způsobem.
2*-O(nlooetery je možno záskat selektivní esterifikaci, která je běžně známa, například tak, že se na antibioikum působí stechionetiricýn шпс^8^1п nebo - malým přebytkem acylečního činidla, například anhydridu při teplotě místnooti po dobu - 1 až 24 hodin, v průběhu té to doby je esterifikace obvykle zcela ukončena. 2'-Monoester- je možno z reakční směsi izolovat standardním způsobem, například extrakcí, ctatomaaoortOií a krystaaizací.
Použitelné scyEstery jsou estery organických kyselin, a to alifatických, cykkoolífatických, hetorocyklL.ckých karboxylových kyselin, sulfonových kyselin, kyselin, odvozených od arylových a eralkylových zbytků a olkoxyketbnčyloeých kyselin, s výhodou o 2 ai 18 atomech uhlíku, zejména o 2 ai 12 atomech uhlíku.
Vhodnými estery jsou tedy estery, odvozené například od kyseliny octové, chloroctové, prOpionové, mésslné, i^ve^tové, alkoxykotbnoneých kyselin, kyseliny stearové, cyklopropankerboxylové, cyklohoxonkarbo:ιςyinvé, bete-cyklohexyl propanové, 1-adaman0enkkrbonylnvé, benzoové, fenyloctové, fonoxynctnvé, mandlové a 2-thieoylnctnvé, jakož i od kyselin elkylsulf(nových, arylsulfonových a aralkylsulfonových, přičemž tyto substituované kyseliny mohou popřípadě nést další substituenty jako atom halogenu, nitro skupinu, nižší liknxyskupinu a podobně oo aromatickém kruhu. Vhodnými estery jsou také hemilstery, odvozené od dikarboxylových kyselin, například od kyseliny jantarové, mee-cinové, numerové, m^e-onové a ftělové.
Ferieceužicky přijatelné estery jsou výhodnou skupinou svrchu uvedených sloučenin. Ostatní estery je možno použít - jako rreiptndukty.
DMOT, dihydoo-MMOT a acylderivéty tvoří ediční soli s kyselinami. Tyto ediční soli DMOT, dikydúro-DMOT a acylderivéty s kyselinami jsou rovněž zahrnuty do předmětu vynálezu.
Tyto soli jsou ceooé například při izolaci a čištění DM<OT, ditýdoo-DMOT a ecylovaoých derivátů. —moto ííIÍ tyto soli obvykle dokknoaijěí rozpustnost ve vodě.
Vhodnými solemi - jsou například soli, vzíO-k^jcí běžnými reakcemi s organickými nebo anorganickými kyselinami, jde tedy například o edičoí - soli s kyselinou sírovou, chlorovodíkovou, fosforečnou, octovou, jantarovou, citrónovou, mléčnou, me-einovou, fum arovou, palmitovou, chnlinovnu, pemoovou, muuioovou, --gluternvnu, d-kafrovou, glutarovou, glyknlnvnž, ftalovou, vinnou, tnrrvěnčí, laurovou, steerovou, talicylovnž, metaneulftrnovou, benzenouufonovou, sobovou, pLkrovou, benzoovou, skořicovou a podobně.
Farrrveežicky přijatelné edičoí soli s kyselinami jsou zvláště výhodnou skupinou solí, které je možno získat způsobem podle vynálezu. Pod pojmem fvtriveuticky přijatečné se rozumí takové soli, které jsou dostatečně oetoxické, aby je bylo možno pouužt k léčbě te pokrevných živočichů.
Vynčlez se rovněž týká nového způsobu výroby 23-delnxy-5-0-rykkvinčnyУlylonolL.du (3) (DMOT) a dihydro-OOMT hydrolýzou DMOT a dihy/dro-DMOT v mírně kyselém prostředí. Podmínky hydrolýzy v míroě kyselém prostředí jsou známé. K provedení hyidrolýzy je možno užít roztoků o pH 4 oebo nižším. Při provádění hyfrolýzy je možno užít teploty 20 ai 100 °C. Reakční doba se mění v zá^alos^ oa pH reakční *гГ81 v oe pouužté teplotě. Při vyšším pH je reakčoí rychlost OLžší v při vyšší teplotě ee reakční rychlost zvětšuje. Reakce se provádí - tak, že se působí oe DMOT nebo dihydncDDMOT míroě kyselým roztokem po dobu, dnatoteδčnu k odstranění mykaly lově skupiny ze vzniku DMOT nebo di^yf(too-DOT.
Je také možno postupovat tek, že se získá DMOT nebo dihyrdTO-MMOT přímým působením oe DMOT nebo dihyfdro-DMOT ve fe^en^ů^m prostředí, v němž byly tyto látky získány při použžtí míroě kyselého roztoku tak, jek bylo svrchu popsáno po dobu, doB^te^ou pro přeměnu DMOT nebo dihy/dro-MMOT oa DOMT nebo di^yг(tro-O)DT. Někdy je tento způsob v^l^c^c^d^čěÍ^ií. DOMT nebo di^y/dгo-OODT je pak možno izolovat z forrentvčoíhn prostředí známými způsoby.
DOMT je totožný s depnxycirraryoiner A, (de-epoxycirraryein R). Příprava a účinnost d·poxycitraiyciou A, je popsána v publikaci H. Tsuld-ura a další, v J. Ančtbiotics 22 (3), až 99 a 100 až 105 (1969). Autoři připravili depoaqpcirramycin A, působením jodidu draselného v kyselině octové na cirramýcin A ·
D1ší způsob výroby DOMT je navrhován v publikaci T. ' Suzuki a další, Chemiitry Letters 1973, 793 až · 798. Tento způsob spočívá v tom, že se působí ne antibioiitui B-58941 jodidem draseltyi v kyselině octové, produkt podle sdělení autorů může být totožný s depoaxcirramyčinem A·
DOMT je také příbuzný se sloučeninou M-4365 G2 (reprcmicin) a ^sedcln, tě jest 4'-hydroxy-M-4365 G2 ’nebo de-eρcχt-4*-htdroxyrcstiicin, jek bylo popsáno v publikaci A. n.nummki a další, J. AaUMoUís 30 (6), 450 až 454 <1977). Výroba DOMT z M-4365 O2 nebo z rosamicinu by však byla výroba velmi obtížná.
DMOT a ditydro-DMOT je možno získat pěstováním kmene Streptomyces fradiee, který produkuje tyto látky v submeezní.·kultuře _ za aerobních podmínek ve vhodném živném prostředí. Tímto způsobem je možno získat · dostatečné mnossví antibiotika. Nejprve se vytváří v 'průběhu fermentece DMOT, dihydoo-MMOT se vytváří až po delší době, která dovoluje enzymt^^u redukci pří^mného DMOT.
K pěstování Streptomyces fradiee NRRL 12171 je možno užít celou řadu živných prostředí. Z hlediska hcspoClááncrSi, optimálního výtěžku a izolace jsou však výhodná některá živná prostředí. Výhodnými zdroji uhlíku pro fermenteci ve větším měřítku jsou uhlohydráty, například dextrin, glukóza, škrob a kukuřičná mouka a deje, například sojový dej. Výhodným zdrojem dusíku je kukuřičná minka, sojová mouka, rybí mouka, tiinoCktsliny a podobně. Z anorganických solí se včleňuj do živného prostředí běžné rozpustné sdi obsahující železo, draslík, sodík, hořčík, vápník, amonný ion, chloridový icl,uhličltlnoiý ion, síranový ion, dusičnanový ion a podobně.
Živné prostředí má obsahovat také stopové prvky, které jsou nutné-pro růst a vývoj mikroorganismu. Tyto stopové prvky se běžně vys^tuj jako nečistoty v ostatních složkách živného prostředí v ííiossví, které je dostatečné pro růstové požadavky mikroorganismů. Někdy však může být zapotřebí přidat mmlé minožtví protipěnového činidla (0,2 ml/litr), například propylelgltkdu o idekulcvá hmo0nncti přibližně 2 000, protože zejména ve větším měěítku je nutno pěnění zabrán, t.
Při výrobě větších mnnoství DMOT nebo ditydoo-MMOT je výhodné aerobní fermentece · v sulmerzní kultuře. · Mlé mídasv! DMOT nebo dihydoo-MMOT je možno také získat v třepacích lahvích. Vzhledem k období flek při výrobě · antibiotik, které je obvykle spojeno s očkováním spor přímo do velkých tanků, je výhodné užít vegetativní očkovací materrál. Tento vegetativní očkovací iθttriál se získává tak, že se mmlý objem živného prostředí naočkuje sporami nebo fragmenty media organismu, čímž · se získá čerstvá, aktivně rostoucí kultura organismu. Tento vegetativní očkovací iattriál se pak přenese'do většího tanku. K získání vegetativního očkovacího ieaeriélu je možno užít·téhož prostředí jako pro fermenteci ve větším měřítku, je však možno užít i jiných živných prostředí.
S. fradtee NRRL 12171 je možno pěstovat při teplotách 10 až 37 °C. K optimální produkci antibiotika dochází při pěstování mikroorganismu při teplotě 28 °C.
Tak, jek je·obvyklé při fermentacích v suliiezní kultuře ze aerobních podmínek, probublávé se kulturou steιrl/lí vzduch. Pro efektivní produkci tntiliceiit mé být prostředí v tanku nasyceno·vzduchem alespoň na 30 · % nebo více, při trp/ctř 28 °C, to znamená tlak 100 kPa.
K produkci ιπ^Ι^Ι^ dochází v průběhu fe^en^ce a vzrůst mnoožtví antibiotika je sledovat odebíráním vzorků živného pro středí a ersOovéllíi těchto vzorků na mikroorganismech, cLt^ivý^ch na tato antibiotika. Vhodným pokusným crgaldLimem je Sttphylcioccus aureus ATCC 9144. · Bidogické zkouška se · - obvykle provádí automaticky měřením zákalu.
225642
M.aoto je možnost sledovat produkci antibiotika kapalinovou chromatografií při současném sledování v ultraftalovém světle.
Po nahromadění dostatečného mnoství antibiotik v submarrzní taULtuře je možno izolovat DMOT nebo dilvdro-DMOT z iermentačního prostředí obvyklými způsoby. Obvykle se při izolaci DMOT nebo dihyydrcDDMOT nejprve iermenteční prostředí ziiltruje. Zfiltrované prostředí je možno déle čistit za získání požadovaných antibiotik. Toto čištění je možno provádět různým způsobem. Výhodné je postupovat tak, že se fiUfrát upraví na pH 9 a pak se extrahuje vhodným rozpouštědlem, například etylacetátem, amlecetátem nebo eeCyli8obutylke0ueee, organická fáze se pak extrahuje kyselým vodným roztokem e antibiotium se oysráží alkalizací tohoto prostředí. Daěi čištění spočívá v extrakci, adsorpci, . a/nebo srážení.
Mikroorganismus
Mikroorganismus používaný př provádění způsobu podle vynálezu byl získán chemickou muuecí kmene Streptomyces irač^e, který produkuje tylosin. Mikroorganismus, získaný touto muuecí produkuje pouze velmi malé mmnoství tylosinu, avSak jako hlavní složku produkuje DMOT.
Při stanovení vlastností byl'nový mikroorganismus srovnáván s kmenem Streptomyces fradiaě M448-E 2724.1, který produkuje tylosin a je odvozen od kmene. S. ' fatditc NRRL 2702. Tento kmen byl popsán v US patentu č. 3 178 341 (Hammu a ' deaší), uveřejněn 13. dubna 1965. Dále bude kmen S. fatdite M48-E 2724.1, který produkuje tylosin, nazýván pouze E2774.1.
Nový kmen, produuuuící DMOT e dihydroe-DMOT, kmen NRRL 12171 je také lltsiflkooán jako Streptomyces fatdLtc. Při popisu vlastností tohoto organismu byl uchováván postup, doporučovaný Internatimel Streptomyces Project pro stanovení vlastností čeledi Streptcmyces /E. B. Slhrliug a D. Oott-ieb, Meehods For CCicatCecizati(m of Streptomyces Speciis,” Interna 1. Jou^iu^l of Systemaeic BeieriOLlry, 16 (3), 313 až 340 (1966)/. Mimoto byly provedeny ještě některé další testy. V úvahu byly vzaty také popisy S. v lieeretuře:
1. ‘R. E. Buchanan a N. E. Gibbcrns, ^Berge^s №nuul of Determinnaive
8. vydání, The Vdlliems and Mlkins Co., Baltimore, Md, 1974, str. 815 a
2. E. ' B. Shirling a D. Go^lieh, Ccl>leraaivc Deccriptilu o^ Streptomyces. II. Species Deecriptiou frrom First Study, Iuternel. Journal of SysternaUc Beeierilllry, 18 (2), 118, (1968).
Dále bude srovnán kmen, který produkuje DMOT s kmenem, který produkuje tylosin, S. fradLae E2724r1.
Vastnosti mikroorganismu spor u nového kmene i u E2724.1 spadá do oblasti Retinacuuum-Apertum (RA).
Háčky, kličky a ueprearidelué spirály jsou velmi krátké a obvykle nejsou Široké. To je nejlépe vidět ne živném prostředí ' ISP 2, to jest na agaru s extraktem z kvasnic a ze sladu v případě kmene E2724.1 a ue CzapkovS agaru ' v případě nového kiamne. Spory maj hladký povrch a kulovitý tvar při průměrném rozmSru 0,65 ^uM. Roziameí tohoto průměru je 0,61 ' až 0,71 JM.
Neevětší rozdi^l mezi oběma kmeny je možno pozorovat ue vlastnostech jejich kultur. Kmen E2724.1 ' produkuje pom^i^ně dobře vzdušné myelium na většině živných prostředí a toto myyelium má světlou barvu. Nový kmen obvykle produkuje - velmi mmlé vzdušné meyeliue nebo žádné a v případě,. Že je přítomno, bývá šedavé. Zacdií strana těchto íoLhUí neprodukuje žádný pigment a je světlá tiótíruě uažlortlá. Produkce me^l^i^i^idního pigmentu je negativní.' . .
Produkce eelanoidníhl pigmentu byla zkoumána při poouití živných prostředí ISP . 1, to jest bujónu s trypt trnem a extraktem z koasiUc, ISP 6, to jest agaru s pcptluce, extraktem ^^i^oULc a železa, ISP 7> to jest agaru s tynstnem a téhož prostředí bez tynsi^u.
Shnití důležitých obdobných i rozdílných vlastností mezi kmenem E2724.1 a novým kmenem je podáno v následující tabulce 1.
Tabulka 1
Srovnání Streptomyces frediae E2724.1 a NRRL 12171
Podobné vlastnosti Roodíly
| MoofologLe řetězců spor Vastnosti kultury | ||
| Vzhled povrchových spor . | Tolernnce NtoCl | |
| - . | Rozměr spor Bezbarvost | Oblast H Oblast tepooty |
Chybění rozpustného pigmentu
Růst na stejrých vegetativních prostředcích
Hycdrolýza škrobu ·
Neesaivní fermentace odstředěného mléka
Podobné - vlastnosti Rozdíly
Redukce dusičnanu
Pozitivní katelézová reakce reakce
Pooztivní fosfatázová reakce ·
Negativní ureázová reakce
Spektrum citlivosti na antibiotika
Vyyžití zdrojů uhlíku
Zkapalnění želatiny
Moofologie a růstové vlastnosti kmenů S. fradiae E2724.1 a NRRL 12171 jsou srovnávány v tabulce 2. V tabulce 3 je srovnávána citlivost mikroorganismu na produkovaná antibiotika, v tabulce 4 jé srovnáváno využití zdrojů uhlíku a v tabulce 5 různé fyziologické vlastnosti obou kmenů.
Tabulka 2
Růst a moofologie
| E2724.1 | . NRRL 12171 | ||
| Sporofory | RA | RA | |
| Řetězec spor | >10 | >10 | |
| povrch spor' | hladký | hladký | |
| Tvar spor | kulov.tý | kulovitý | |
| ISP 2 | G2 | dobrý | střední |
| R | 87· m. ^utý3 | 87. m. žlutý | |
| Am | 263. bílý dobrý | žádný | |
| Sp | žádný | žádný | |
| ISP 3 | G | špatný | žádný růst |
| R | 263. bílý | - | |
| Am | 263. bílý špatný | - | |
| Sp | žádný | - | |
| ISP 4 | G . | bohatý | dobrý |
| R | 87. m. žlutý | 87. m. žlutý | |
| Am | 263. bílý bohatý | 92. y. bílý dobrý | |
| Sp | žádný | žádný |
225642 pokračování tabulky 2
| E2724.1 | NRRL 12171 | ||
| ISP 5 | G | dobrý | dobrý |
| R | 86.1. žlutý | 86.1. žlutý | |
| Am | 92. y. bílý dobrý | stopy 93. y. Šedý | |
| Sp | žádný | žádný | |
| ISP 7 | G | bohatý | dobrý |
| R | 87. m. žlutý | 87. m. žlutý | |
| Am | 263. bílý ' bohatý | 264.1 šedý dobrý | |
| Sp | žádný | světlehnědý | |
| Bennnttův agar | G | Špatný | žádny |
| R | 90. py. žlutý | - | |
| Am | žádný | - | |
| Sp | žádný | - | |
| Ca-aalét | G | dobrý | Špatný |
| R | 263. bílý | 92. y. bílý | |
| Am | 263. bílý dobrý | žádný | |
| Sp | žádný | žádný | |
| Czapkův agar | G | dobrý | dobrý |
| R | 87. m. žlutý | 97. o. žlutý | |
| Am | 263. bílý bohatý | 92. y. bílý dobrý | |
| Sp | žádný | žádný | |
| Glukózou e]p^e£Ln | G | žádný | žádný |
| R | - . | - | |
| Am | - . | - | |
| Sp | . - | - | |
| Agar s extraktem z rajčat | |||
| a . s ovesnou' mmikou | G | bohatý | dobrý |
| R | 92. y. bílý | 97. o. žlutý | |
| Am | 263. bílý bohatý | žádný | |
| Sp | žádný | žádný |
Vysvětlivky:
Vzhled. povrchu spor byl stanoven elektronová mikroskopem
O = . růst, R zadní nebo spodní strana kolonie, Am = ' vzdušné my cc li um, Sp - rozpustný pigment 3 ítózvy barev Jsou v souladu s IÍCC-IBS ta lulkami (K. L. Kelly a D. Б. Judd, The ISCC-NBS
СсвОго^ Color Charta Standard Semple Č. 2106,“ U. S. Lept. of Comerre, National Bureau of Standarde, Washington, D. C. 20234)
Tabulka . . 3
Citlivost ne antibiotik» e’ b
| Antibiotikm | Koncentrace | Sloučenina | E2724. 1 | NRRL 12171 |
| Chloramfenikol | 30 pg | nitrofenylderivát | + . | . + |
| Erythromycin | 15 pg | maakolid | tr | + |
| Ceffloridin | 30 pg | beta-lakaam | + | |
| Linkomycin | 2 pg | linkosaminid | - | - |
| Polymyydn B | 300 jednotek | peptid | tr | tr |
| Streptoqjycin | 10 pg | + | + | |
| Tetracyklin | 30 pg | tetracyklin | + | +. |
| Vankornyyin | 20 pg | glykopeptid | + | 4· |
Stanoveno pomocí kotoučů uložených na naočkovaný agar
- = odolnost (bez zóny inhibice) + = citlivost (zóna inhibice) tr = stopy citlivosti
Tabulka 4 ν^ϋί z<dr°)e uhlíku e' b
| Zdroj uhlíku | E2724.1 | NRRL 12171 |
| Koonrola: bez uhlíku | - | - |
| Koonrola·: glukóza | + | + |
| L-arabinoza | - ' | - |
| D-fruktóza | + ' | + . |
| D-galaktóza | + | + |
| t-icositol | + | .. + |
| D-mennntol | - | ' . - |
| rafinóza | ' - | - ' |
| saJLicin | , - | · |
| sacheróza | + ' | + |
| D-xylóze | + | . + · |
| D-rb^e^mnóza | - | - |
- = bez využití + = využití
Stanoveno podle Internationel Streptomyces Project (ISP) 9 na základním prostředí, do něhož byly přidávány po sterilizaci filtrací zdroje uhlíku do koncentrace 1,0·%. · Inkubace při 30 °C, odečtení· za 7·a 12 dní.
Tabulka 5
Různé fyziologické vlastnosti
| E2724.1 | NRRL 12171 | |
| ISP 1 (chromooeeCcita) | - | - |
| ISP 6 (chromo^íCíHs) | - | - |
| ISP 7 (chrom o^enecta) . | - | - |
| Zka splnění želatiny | - | - |
| Fermentsce odstředěného mléka | - | - |
| R18tové oblast, 2 | 6,1 ti 8,8 | 6,1 ti 7,8 |
| R8tová teplota ' ' 3 Toleranc.e NeCC'' * | 10 ai 37 °C | 10 ti 30 °C |
| 8 % | 4 « | |
| HtooVze škroto^ | + | 4 |
| Redukce dusičnanu | + | |
| Két.láM6 | + | |
| Fosfat^s^ | 4- | |
| Ureéí^ | - | - |
VyyvVtlivky:
Na ISP 2 (agar a extraktem z kvasnic a viadu), inkubace 7 dnů
Stanoveno při použití následujících pufrů v koncentraci 0,05 Mí kyselina citrónová, pH 3, 4, 5, kyselina 2-(N-oorrolin)etanvulfonové, pH 6, kyselina 3-(N-morrolin)propenvulfonové, pH 7, kyselina N-2-lh<dOlyyeylpi]prazZn-N*-2-etanvulOonová, pH 8. 2-Ámino-2-(hydroxymetyy)-1,3-propanddol, pH 9, kyselina 3-cykllhexyltoino-1,1-propan8Ulflnlvá, pH 10, 11. Po inkubaci 7 dnů bylo bráno pH ageru jako vprévné'hodnota, pOtoie některé pufry neudržely stanovené pH. Toodcits pufru byla zkoumána po úpravě všech pufrů ne pH 7,0 stanovením růstu. Nebyle prokázéne , iádná toxicita.
3 Pokusy byly prováděny při 5·, 10, 20, 25, 210, 37 40, 45, 50 a 55 °C.
* Měřeno poddáním NaCl к agaru do 0, 46^ í3,4^0 а I2 hmotnostních % $ Hycdolýze škrobu byle stenovene testy ne přítomnost škrobu působením jodu ne prostředí ISP 4 (agar s anorganickými solemi a škrobem) * PM enzymt^j.ckých zkouškách tyla užita met^s D. J. Blažence s G. M. Ederers uvetaró v pu^Iíscí IPinccples of Biolhhe0cal Tests in Diagnostic Mcrobbology, John Wley and Sons, New Tork, N. X, 1975.
Na základě svrchu uvedených vlastností mikroorganismu, který produkuje DMOT s dihydro-DMOT, to jest kmene NRRL 12171 tyl tento kmen klasifikován jako nový kmen Streptomyces frediee. Nová kultura byle uloiene ve veřejné ·sbírce Northern Regione1 Reseerch Cenner, 'Apricultural Research, North Ccnnrel Re^on, 1815 North Uinveerity Street, Pe.orit, DHmis, 61604, odkud je možno ji získat pod číslem NRRL 12171.
Stejně jako je tomu v případě jiných mikroorganismů, vlastnosti StreptOTyces frtdiae NRRL 12171 se mohou оОпСХ Je například možno získat rekombbnanty, mutenty nebo umělé varianty kmene NRRL 12171 působením různých fyzikálních s chemických mutagenů, například ultrať! savého světle, paprsků X, paprsků gsms nebo N-motyУ-N*-]nLtrlsogtenidint. Všechny přírodní L umělé varianty, s rekomfabnanty kmene Streptomyces fradite NRRL 12171, které si uchovávej schopnost produkce DMOT je možno užít při provádění způsobu podle vynálezu.
η
Účinnost sloučenin typu DMOT
Sloučeniny typu DMOT inttLbují růst patogenních bakteeií, zejména gremppoitivních bakterií a čeledi Mcoclasma. V tabulce 6 je například shrnuta minimální inhibiční koncentrace (MIC), měřená standardním ředěním ne agaru, z tabulky - je zřejmě, že DMOT ve volné formě inhibuje růst některých bakkeeií.
Tabulka 6
ÚCinncst DMOT ve volné formě in vitro ·
| Mi kr o orgeini smus | MIC (jg/mD |
| Strep.tococcus pyogenes C203 | 0,25 |
| Streptococcus pnnumonian Park - I | 0,13 |
| Streptococcus sp. (skupina -D) 282 | 0,5 |
| Staphylococcus mimus 3055 | 1,0 |
| Pastewrella mmutocide | 6,25 |
| Pastewrella heimo! tica | 25,00 |
| Meoplasma gallisepiicm | 0,097 |
| Meoplasma hycpnnumoninn | 0,39 |
| Meoplasma hyorhiiHs | 0,78 _ _ .л |
Sloučeniny typu DMOT mají účinnost in vivo při pokusných bakteriálních infekcích. V případě, že myším s experimentální infekcí byly podlny 2 dlvky zkoumané látky, byle účinnost měřena jako hodnota ED^q, což je účinná dlvka v m^kg, schopné ctarldt 50 % pokusných zvířat. Základní údaje o této látce byly podlny v publikaci Weeren Mek a další, J. Bateriol. 81. 233 až 235 (1961). Hodnoty ED^q, zjiStěné pro DMOT jsou uvedeny v tabulce 7.
Taablls7 ,
Hodnoty ED^q pro DMOT®
| Zkoumaná látka | Streptococcus pyogenes C203 |
| DMOT ve volné formě | 6,3 |
| bakterie x LD^q | 268 |
Podkožní podéní, m^kg x - 2
Při prevenci nebo léčbě infekcí, které byly způsobeny čeledí Myopleame - u drůbeže se podává DMOT p^jrorálně nebo parenterálně. S výhodou se DMOT podává spolu s nosičem, např. s vodou.
Vynález bude osvětlen následujícími příklady.
A. Fermentace DMOT v třeрасí lahvi
Lyofilizovená peleta Streptomyces fradiae NRRL 12171 se disperguje v 1 ež 2 ml sterilizované vody. 0,5 ml tohoto roztoku se užije к naočkování 150 ml vegetativního živného prostředí následujícího složení:
Složka Množství v %
| kukuřičný výluh | 1,0 |
| extrakt z kvasnic | 0.5 |
| drt ze sojových bobů | 0.5 |
| uhličitan vápenatý | 0,3 |
| surový sojový olej | 0,45 |
| deionizováná voda | 97,25 |
Je také možno postupovat tak, že se vegetativní kultura S. fradiae NRRL 12171, zmrazené po objemu 1 ml v kapalném dusíku rychle nechá roztát a roztok se užije к naočkování vegetativního Živného prostředí. Toto prostředí se inkubuje v Erlenmeyerově baňce o objemu 500 ml při teplotě 29 °C po dobu 48 hodin v uzavřené třepačce při 300 otáčkách za minutu.
0,5 ml tohoto inkubovaného vegetativního prostředí se užije к naočkování 7 ml produkčního prostředí následujícího složení.
| Složka | Množství |
| řepná melasa | 2.0 |
| kukuřičná mouka | ’ ,5 |
| rybí mouka | 0,9 |
| kukuřičný gluten | 0,9 |
| NaCl | 0,1 |
| (Na4)2HP04 | 0,04 |
| CaCO3 | 0,2 |
| surový sojový olej | 3,0 |
| deionizovené voda | 91,36 |
Naočkované fermentační prostředí se inkubuje v lahvi o objemu 50 ml při teplotě 29 °C po dobu 6 dnů к uzavřené třepačce při 300 otáčkách ze minutu.
B. Fermentace DMOT v tanku
Aby bylo možno získat větěí objem očkovacího materiálu bylo 60 ml inkubovaného vegetativního prostředí, získaného podle odstavce A užito к naočkování 38 litrů vegetativního růstového prostředí následujícího složení:
| Složka | Množství v % |
| kukuřičný výluh | 1,0 |
| sojové mouka | 0,5 |
| extrakt z kvasnic | 0,5 |
| CaCO3 | 0,3 |
| Složke | Mnoství v % |
| surový sojový olej surový lecithin voda | 0,5 0,015 97,185 |
Vegetntivní prostředí se upraví ne pH 8,5 přidáním 50% roztoku hydroxidu sodného.
Toto vegeeetivní prostředí z druhého stupně se inkubuje v tanku o objemu 68 litrů po dobu 47 hodin při teplotě 29 °C.
litry takto získaného ppootředí se užijí к neoěkovréní 40 litrů.sterilního produkčního prostředí následujícího složení:
| Složka | Množtví v % |
| rybí mouka č | 0,9188 |
| kukuřičná mouka | 1,575 |
| kukuřičný gluten | 0,9188 |
| CeCO-j | 0,210 |
| Na Cl | 0,105 |
| (NH4)2HP04 | 0,042 |
| řepná melasa | 2,10 |
| surový sojový olej | 3,15 |
| lecithin | 0,0945 |
| voda | 90,8859 |
Živné prostředí se upraví na pH'7,2 přidáním 50% roztoku hydroxidu · sodného. .
Naočkované produkční prostředí se inkubuje 5 dnů v tenku o objemu 68 litrů při teplotě 28 °C. Fermentační prostředí se ‘ provzdužnuje sterilním vzduchem k udržení hladiny kyslíku v rozmezí 30 až 50 % a míchá se·běžným míchedlem rychlostí 300 otáček za minutu.
Příklad 2
Izolace DMOT
Fermeeteční prostředí, získané způsobem podle příkladu 1 o pH 7,2 se zfiltnje za použití pomocného prostředku pro filtraci.
450 ml filtrátu se s^í^i se 400 ml etylacetátu. Pak se upraví pH roztoku na 9,1 pMdáním hydroxidu sodného. Roztok se míchá · 10 miint, etylecetátová vrstva se oddělí a zfiltruje za pouuití filtaččního prostředku, aby byle odstraněna tvořící se emulze. Filtrát se znovu extrahuje 200 ml etylacetátu. Etylacetétové extrakty se slijí, přidá se 200 ml vody a pH roztoku se upreví na 4,1 kyselinou fosforečnou. Po extrakci se · vodná fáze oddělí a organické fáze se odloží. Vodná fáze se upraví na pH 9,1 hydroxidem sodným a pak zehuutí ne objem 100 ml ve vakuu. Vznikne amoofní sraženina. Po stání přes noc se tato sraženina odděl-í filtrací, rozpustí se ve 20 ml acetonu a · přidá se 75 ml vody. Roztok se zehustí ve vakuu k odstranění acetonu.. Vvznklá sraženina se oddělí filtrací a promyj se vodou, čímž se získá přibližně 500 · · mg DMOT. Delších 260 mg · se získá obdobným způsobem z filtrátu.
Příklad 3
Příprava DMOT g DMOT, připraveného. podle příkladu 2 se rozpustí ve zředěné kyselině chlorovodíkové, přičemž se tato kyselina přidévá do vody do pH 1,8. Výsledný roztok se neché stát 24 hodin při teplotě místnosti a pak se uplaví na pH 9,0 přidáním hydroxidu sodného. Tento roztok se extrahuje chlorofrrmem. Chloroformový extrakt se vysuší ve vakuu, čímž se získá
9,65 g DOMT. Na přiloženém výděsu je znázorněno spektrum volného DMOT v infračerveném světle v chloroformu. DMOT je bílá amorfní pevná látka, které měkne při teplotě 158 °C a taje při 165 až 167 °C. Elementární analýza ukazuje, že složení této látky v procentech je přibližně: uhlík 62 %, vodík 8 %, dusík 2 %, kyslík 27 Enmirický vzorec je C3QH6jN0ia> molekulové hmmonost 726 (725 podle stanovení hmotovou spektrometrií).
Jak je zřejmé z absorpčního spektra volného DMOT v infračerveném světle v chloroformu, je možno pozrnovat absorpční maxima při následnících fT^kvencích: cm’: 3 653 3 588 hrb, 3 470 Široké, 3 026 hrb, 2 998 hrb, 2 969 intenzívní, 2 932 intenzívní, 2 837 hrb, 1 709 intenzívní, 1 669 střední, 1 616 (velmi mal^^j, 1 583 intenzívní, 1 447 střední, 1 400 střední, 1 364 střední, 1 309 střední, 1 278 maaé, 1 175 střední, 1 151 střední, 1 106 maé, 1 066 hrb, 1 036 intenzívií, 1 001 střední, 982 stře&ií, 972 hrb, 946 mmaš, 913 velmi maaé, 891 velmi malé, 853 velmi mlé, 826 mmaé.
š t
Absorpční spektrum DMOT v ultiafierovm světle v neutrálním etenolu má absorpční mmximum při 283 nm ( ε 21,500).
DMOT jako volná báze má následnici specifickou otáčivost:
[a] 25 - 62,75° (c = 1, CHjOH).
Elektrometrleká titrace DMOT v 66% vodném dimetylfrmmamidu prokazuje přítomnost titrovatelné skupiny s hodnotou pKfi přibližně 7,3.
DMOT ve , volné firmě je poměrně málo rozpustné ve vodě, je však rozpustné ve většině polárních organických rozpouštědel jako acetonu, etenolu, dimetylfrrmamidu, chloroformu a dimeylsulfoxidu. DMOT ve formě edičních solí s kyselinami je rozpustně Čí ve vodě než DMOT ve volné formě.
DMOT je možno oddlšit od tylosin a od DOMT chrrmrtyrгiflí ne papíře a na tenké vrstvě. Přibližné hodnoty Rf a Rx těchto antibiotik jsou shrnuty v následujících tabulkách 8 a 9. V tabulce 8 je hodnota Rx poměr pohybů relativně k plosinu, jehož hodnota byla stanovena jako 1,0. K detekci bylo užito bioautoogefie s použitím Baillus subttiis.
Tabulka 8
Ο^οη^^^^ DMOT na tenké vrstvě®
Hodnoty Rf
| Sloučenina | Ab | B | C |
| tylosin | 0,53 | 0,53 | 0',67 |
| DMOT | 0,70 | 0,56 | 0,67 |
| DOMT | 0,48 | 0,17 | 0,24 |
Vysvětlivky k tabulce 8:
Prostředí: Merck, DarmsVedt - Silice Gel 60
Rozpouutědlo: A = etylacetát a dietylesin (v poměru 96:4) B = aceton a etanol (v pumSru 2:1) C = chloroform a sti^no^L (v poměru 3:1)
Tabulka 9
C^i^í^t^stc^ogr^e^ie DMOT na papíře8
Rx
| Sloučenina | —— | E |
| IsI^íi | 1 ,00 | 1 ,00 |
| DMOT | 1,50 | 1 ,09 |
| DOMT | 0,50 | 0,97 |
Poppr: Watman ě. 1 po zpracování 0,75 M hyd^oganfosí^^i^^č^i^i^r^^m draseným jako pufren o pH 4,0' v následným uvuěením
RooppoUtědlo: D = etylacetát nasycený vodou
E = n-buleno! nasycený vodou
P rík ka d4
Způsob výroby dihydoo-MMOT mg DMOT, připraveného způsobem podle příkladu 2, ve rozpistí ve 25 ml 40% roztoku ivuoruoslelkuhclu ve vodě. 20 mg borulhsdridu sodíku se rozpustí v 10 ml 30% vodného roztoku ivoorcoyltlkchulu. K roztoku s obsahem_DMOT se přidá 1 ml roztoku borohydridu sodíku. Výsledná reakční směs se míchá 5 'načež se upraví na pH 7,5 přidáním kyseliny fosforečné a pak se zatnutí ve vakuu k odstraněni ivoprooylαlkuhulu. Přidá se 50 ml chloroformu a pak se upraví pH vodné fáze na hodnotu 7,5. Po extrakci se chloroform odstraní a reakční směs se odpaří dosucha ve vakuu, čímž se získá dihydoo-MMOT.
Příklad 5
Příprava dihydoo-OMMT
Dihydro-DMOT, připravený způsobem podle příkladu 4, se zpracovává způsobem, popsaným v příkladu 3, čímž se získá dihydoo-OOMT.
Příklad 6
Dkší možný způsob výroby DOMT
DOMT je možno získat z DMOT tak, že se na DMOT ve fermentačnim- prostředí, v němž byl získán, působí slabou kyselinou tak, jak bylo popsáno v příkladu 3. Izolace DOMT se pak provádí způsobem, který je obdobný izolaci DMOT podle příkladu 2.
Příklad 7
2'-0-acetyl-DM0T
5,0 g (6,9 mmolu) DMOT se rozpustí ve 150 ml acetonu e po kapkách se přidá 0,84 ral (8,2 mmolu) enhydridu kyseliny octové za stálého míchání při teplotě místnosti. Směs se míchá 17 hodin, pak se rozpouštědlo odpaří za sníženého tlaku, odparek se rozpustí v malém množství etylecetátu a chrometografuje se na sloupci silikagelu (Waters Prep 500). Sloupec se vymývá 4 litry etylecetátu. Frakce, které obsahují požadovaný výsledný produkt, se slijí a odpaří dosucha ze sníženého tlaku, čímž se ve výtěžku 80 % získá 4,2 g 2'-0-ecetyl-DMOT.
Příklad 8 '-0-acetyl-4 * *-O-fenylacetyl-DMOT
2,7 g (3,5 mmolu) 2'-0-acetyl-DM0T se rozpustí v 70 ml metylenchloridu a 0,8 ml pyridinu а к roztoku se přidá roztok 0,56 ml, 3,5 mmolu fenylecetylchloridu ve 30 ml metylenchloridu po kapkách za stálého míchání při teplotě místnosti. Po 6 hodinách se rozpouštědlo odpaří, odparek se rozpustí v metylenchloridu a extrahuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhliěitanu sodného. Organická vrstva se oddělí, vysuší síranem sodným, zfiltruje a odpaří. Odparek se rozpustí v etylecetátu a chromatografuje se na sloupci silikagelu. (Waters Prep 500). Sloupec se vymývá 4 litry etylecetátu. Frakce, které obsahují požadovaný výsledný produkt, se slijí a odpaří dosucha, čímž se ve výtěžku 38 % získá 1,2 g 2'-О-асе ty 1-4-0-f enylacetyl-DMOT.
Příklad 9
2'-O-ecetyl-4*'-O-isovaleryl-DMOT
Obdobným způsobem se na 1,2 g (1,6 mmolu) 2*-O-acetyl-DMOT ve 29 ml pyridinu působí 0,7 ml (3,8 mmoly) isovelerylchloridu za stálého míchání při teplotě 0 °C. Po zpracování se surový produkt rozpustí v toluenu a chromatografuje se ne sloupci silikagelu. Sloupec se vymývá směsí toluenu a etylacetátu v poměru 9:1 až 1:2, ěímž se získá 0,12 g produktu. Po vymytí sloupce metylenchloridem se pak ve výtěžku 55 % získá 0,84 g 2*-O-acetyl-4**-O-fenylacetyl-DMOT.
Příklad 10 * *-O-i sovaleryl-DMOT
0,4 g (0,47 molu) 2'-O-scetyl-4*'-O-isovaleryl-DMOT se rozpustí ve 30 ml 80% vodného metanolu a směs se zahřívá na teplotu varu pod zpětným chladičem 4,5 hodinv Pak se roztok zchladí na teplotu místnosti a odpaří se dpsucha za sníženého tlaku, čímž se ve výtěžku 34% získá 0,13 g 4-O-isovaleryl-DMOT.
Příklad 11
0-f eny leče tyl -DMOT
0,2 g (0,23 molu) 2*-O-acetyl-4**-0-fenylacetyl-DMOT se rozpustí v 18 ml 80% vodného metanolu a směs se zahřívá na teplotu varu pod zpětným chladičem 5 hodin. Roztok se zchladí na teplotu místnosti e odpaří dosucha za sníženého tlaku, čímž se ve výtěžku 86 % získá 0,16 g 4 * *-O-fenyláce tyl-DMOT.
Příklad 12 '-O-ecetyl-4' '-O-propionyl-DMČT .
1,0 g (1,3 rnmolu) 2z-O-ecenyl-MOOT se rozpustí ve 30 ml pyridinu a přidá se po kapkách 0,6 ml (4,6 ornoiu) eohydridu kyseliny propi^ové za stálého rníchání při teplotě Oí^1^i^(^iSl.. Po 20 hodinách se přidá ještě 3,0 ml (23 rnmolu) pohytoidu kyseliny orooiooové a rekačoí směs se oíehá ještě 26 hodin při teplotě rníítnopsi. Pak se soěs zředí 30 rnl toluenu a rozpouštědlo se odppří za sníženého tlaku. Výsledná olejovité kapalina se rozpustí v 50 rnl diehlorrnetenu a extrahuje oasyceiso hy<hrogenuUličiPonem sodoSrn. OgaiOLcká vrstva se oOděěí, vysuší síjrenern sodnýo, zfiltruje a odppaí. Odparek se nanese na sloupec silikpgelu (Waters Prep 500) a vyosvá lineární gradientern při pouužtí 4 litrů toluenu a 4 litrů etylpeetátu. Nejprve se získá 305 rng 2 O-ecetyl-3,4 -dP-O-poppiorl-l-DMOT p pak 286 g 2 -O-pcetyl-4 -O-pPoplonyl-DMOT.
Každé z těehto sloučenin se vaří pod zpěto^o ehladičern v 80% vodnéo meesnolu, číož se získá 4*'-.0-роорОопу1-ВМОТ a 3,4z-dd-0-)-poopionyl-M0T.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VXNÁLEZUZpůsob výroby 23-de(mycenooiylopxntnlosinového derivátu obecného vzoree IOCH3 kdeQ zoaoeoá skupinu -CHgOH nebo -CHO, jakož i z farmaceutického hlediska přijpteOiSeh solí nebo aeylesterů těchto sloučenin, vyznmPuuíeí se tío, že se pastuje Streptornnces fradipe NRRL 12171 v.subrneezní kultuře za aerobních podolek při teplotě .10 až 37 °C, pntibioPkUum se z .. kultivačního prostředí izoluje a popřípadě se takto získané antibioikuo převádí op sůů,‘přijatelnou z farmaceutPckého hlediska nebo oe ecylester.1 výkres
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/156,855 US4321362A (en) | 1980-06-12 | 1980-06-12 | De(mycinosyloxy)tylosin and process for its production |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS225842B2 true CS225842B2 (en) | 1984-02-13 |
Family
ID=22561375
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS814339A CS225842B2 (en) | 1980-06-12 | 1981-06-10 | The production of the 23-de/mycinosyloxy/-tylosene derivates |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0042694B1 (cs) |
| JP (1) | JPS5731698A (cs) |
| KR (1) | KR840001957B1 (cs) |
| AT (1) | ATE6468T1 (cs) |
| AU (1) | AU544358B2 (cs) |
| CA (1) | CA1172190A (cs) |
| CS (1) | CS225842B2 (cs) |
| DD (1) | DD159645A5 (cs) |
| DE (1) | DE3162501D1 (cs) |
| DK (1) | DK255581A (cs) |
| ES (1) | ES8203963A1 (cs) |
| FI (1) | FI811827A7 (cs) |
| GB (1) | GB2077730B (cs) |
| GR (1) | GR75276B (cs) |
| HU (1) | HU189979B (cs) |
| IE (1) | IE51613B1 (cs) |
| IL (1) | IL63076A (cs) |
| NZ (1) | NZ197360A (cs) |
| PH (1) | PH15924A (cs) |
| PT (1) | PT73164B (cs) |
| RO (1) | RO81017A (cs) |
| SU (1) | SU1134120A3 (cs) |
| YU (1) | YU144281A (cs) |
| ZA (1) | ZA813578B (cs) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4423148A (en) * | 1982-07-02 | 1983-12-27 | Eli Lilly And Company | Process for producing 20-dihydro-20-deoxy-23-de(mycinosyloxy)tylosin |
| US4435388A (en) | 1982-06-10 | 1984-03-06 | Schering Corporation | Tylosin 20-imino-20-deoxo-4"-acyl derivatives, pharmaceutical compositions and method of use |
| JPS58219197A (ja) * | 1982-06-15 | 1983-12-20 | Sanraku Inc | マクロライド系抗生物質の誘導体 |
| US4436729A (en) * | 1982-06-30 | 1984-03-13 | Schering Corporation | 23-Demycinosyltylosin compounds, pharmaceutical compositions and method of use |
| US4452784A (en) * | 1982-07-19 | 1984-06-05 | Eli Lilly And Company | C-23-Modified derivatives of DMT |
| IL71032A0 (en) * | 1983-02-28 | 1984-05-31 | Lilly Co Eli | C-20 and c-23-modified macrolide derivatives |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1428452A (fr) * | 1958-10-29 | 1966-02-18 | Lilly Co Eli | Méthodes de production de nouveaux composés organiques azotés, tels que la tylosine et la desmycosine |
| US4161523A (en) * | 1972-11-15 | 1979-07-17 | Schering Corporation | Rosamicin esters, acid addition salts and methods for production thereof |
-
1981
- 1981-05-27 ZA ZA00813578A patent/ZA813578B/xx unknown
- 1981-06-09 PH PH25730A patent/PH15924A/en unknown
- 1981-06-09 NZ NZ197360A patent/NZ197360A/en unknown
- 1981-06-09 CA CA000379332A patent/CA1172190A/en not_active Expired
- 1981-06-09 YU YU01442/81A patent/YU144281A/xx unknown
- 1981-06-09 PT PT73164A patent/PT73164B/pt unknown
- 1981-06-09 AU AU71447/81A patent/AU544358B2/en not_active Ceased
- 1981-06-09 RO RO81104536A patent/RO81017A/ro unknown
- 1981-06-09 SU SU813345999A patent/SU1134120A3/ru active
- 1981-06-10 DE DE8181302572A patent/DE3162501D1/de not_active Expired
- 1981-06-10 CS CS814339A patent/CS225842B2/cs unknown
- 1981-06-10 EP EP81302572A patent/EP0042694B1/en not_active Expired
- 1981-06-10 GB GB8117838A patent/GB2077730B/en not_active Expired
- 1981-06-10 AT AT81302572T patent/ATE6468T1/de not_active IP Right Cessation
- 1981-06-11 GR GR65216A patent/GR75276B/el unknown
- 1981-06-11 IL IL63076A patent/IL63076A/xx unknown
- 1981-06-11 HU HU811738A patent/HU189979B/hu unknown
- 1981-06-11 IE IE1296/81A patent/IE51613B1/en active Protection Beyond IP Right Term
- 1981-06-11 DK DK255581A patent/DK255581A/da not_active Application Discontinuation
- 1981-06-11 JP JP9072481A patent/JPS5731698A/ja active Pending
- 1981-06-11 ES ES502981A patent/ES8203963A1/es not_active Expired
- 1981-06-11 FI FI811827A patent/FI811827A7/fi not_active Application Discontinuation
- 1981-06-12 DD DD81230762A patent/DD159645A5/de unknown
- 1981-06-12 KR KR1019810002108A patent/KR840001957B1/ko not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IE51613B1 (en) | 1987-01-21 |
| EP0042694A1 (en) | 1981-12-30 |
| SU1134120A3 (ru) | 1985-01-07 |
| ES502981A0 (es) | 1982-04-16 |
| ATE6468T1 (de) | 1984-03-15 |
| ZA813578B (en) | 1983-01-26 |
| PT73164A (en) | 1981-07-01 |
| CA1172190A (en) | 1984-08-07 |
| RO81017A (ro) | 1983-02-01 |
| HU189979B (en) | 1986-08-28 |
| GB2077730A (en) | 1981-12-23 |
| AU7144781A (en) | 1981-12-17 |
| DE3162501D1 (en) | 1984-04-12 |
| JPS5731698A (en) | 1982-02-20 |
| DK255581A (da) | 1981-12-13 |
| KR840001957B1 (ko) | 1984-10-26 |
| AU544358B2 (en) | 1985-05-23 |
| IL63076A0 (en) | 1981-09-13 |
| EP0042694B1 (en) | 1984-03-07 |
| ES8203963A1 (es) | 1982-04-16 |
| KR830006430A (ko) | 1983-09-24 |
| IE811296L (en) | 1981-12-12 |
| FI811827L (fi) | 1981-12-13 |
| GB2077730B (en) | 1984-06-20 |
| PH15924A (en) | 1983-04-26 |
| IL63076A (en) | 1984-07-31 |
| GR75276B (cs) | 1984-07-13 |
| NZ197360A (en) | 1984-03-30 |
| DD159645A5 (de) | 1983-03-23 |
| PT73164B (en) | 1982-07-16 |
| YU144281A (en) | 1983-09-30 |
| FI811827A7 (fi) | 1981-12-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4321361A (en) | Demycinosyltylosin and process for its production | |
| US4161523A (en) | Rosamicin esters, acid addition salts and methods for production thereof | |
| KR850001666B1 (ko) | 마크로라이드 항생물질의 제조방법 | |
| CS225842B2 (en) | The production of the 23-de/mycinosyloxy/-tylosene derivates | |
| CS228517B2 (en) | Method for the production of macrolide | |
| US4385116A (en) | Demethylmacrocin and process for its production | |
| US4234690A (en) | Method for producing rosaramicin (rosamicin) | |
| CA1158579A (en) | Antibiotic ar-5 complex, derivatives thereof and methods for production thereof | |
| CA1211731A (en) | De(mycinosyloxy)tylosin derivatives | |
| US4358584A (en) | Antibiotics A6888C and A6888X | |
| JPS62263196A (ja) | １４−ハイドロキシエリスロマイシン誘導体およびその製造方法 | |
| EP0056290B1 (en) | Novel macrolidic antibiotics having antibiotic activity, process and microorganism for their preparation, and related pharmaceutical compositions | |
| US4419447A (en) | Fermentation process for producing demycinosyltylosin | |
| US4486584A (en) | Demethylmacrocin compounds and derivatives thereof | |
| KR840001193B1 (ko) | 마크로라이드 항생물질의 제조방법 | |
| JPS6235755B2 (cs) | ||
| US4334019A (en) | Process for producing de(mycinosyloxy)tylosin | |
| US4537957A (en) | Process for the production of mycaminosyltylonolide | |
| JP3192723B2 (ja) | 新規マクロライド抗生物質ｓｆ２７４８ｂ物質、ｓｆ２７４８ｃ１物質、ｓｆ２７４８ｄ物質およびｓｆ２７４８ｅ物質ならびにその製造法 | |
| JP3063804B2 (ja) | 新規マクロライド抗生物質ｓｆ２７４８物質およびその製造法 | |
| US4956283A (en) | Process for preparing macrolide antibiotics by culturing streptomyces hirsutus ATCC 53513 | |
| CA1175422A (en) | Method of preparing 5-0-mycaminosyl-tylonolide | |
| SU352469A1 (ru) | Способ получения антибиотического комплекса |