CS224726B1 - Způsob izolace ergosterolu - Google Patents

Description

Vynález se týká způsobu izolace ergosterolu ze směsi sterolů získaných po odstranění /

nukleových kyselin a alkalické hydrolýze pomocí extrakce nepolárním rozpouštědlem.

Izolace ergosterolu ze směsi sterolů a vedlejších látek, produkovaných kvasinkami, as dosud obyčejně provádí extrakcí benzenem, hexanem nebo jiným organickým rozpouštědlem a vykrystalováním produktu buS přímo, nebo po přídavku nižších alkoholů (methanol, ethanol). Nevýhodou těchto postupů je získání buJ poměrně málo čistého produktu, vyžadujícího rekrystalizaci, nebo nízký výtěžek ergoeterůlu. Nejčastěji používaným rozpouštědlem je benzen, který sice poskytuje produkt ještě vyhovujíví kvality bez rekrystalizaoe, dává však nízký výtěžek krystalizace asi 75 %· Další nevýhodou je dlouhá doba krystalizace, v matečných louzích zbývá značné množství ergosterolu, které společně s rozpouštědlem odchází do odpadních vod.

Nová janponaká metoda využívá k extrakci n-butenolu, izolaci autoři provádějí vlitím zahuštěného extraktu do vody (Japan Kokai č. 75 142 787). Tato metoda však vyžaduje jednak rekrystalizací produktu,, jednak často působí značné potíže rozvrstvení doufázového systému v důsledku negativního působení solí vyšších mastných kyselin vzniklých alkalickou hydrolýzou.

Uvedené nevýhody odstraňuje způsob izolace ergosterolu ze směsi sterolů získané z hydrolyzovaného droždí extrakcí organickým rozpouštědlem a buJ přímým oddestilováním tohoto rozpouštědla, nebo krystalizaci po částečném zahuštění extraktu, nebo oddestilováním rozpouštědla z matečných louhů po této krystalizaci, podle tohoto vynálezu. Podstata vynálezu spočívá v tom, že ae ke směsi sterolů přidá 2 až 20násobné množství alkoholu až G$, a výhodou C^, nebo acetonu a voda, jejíž množství se pohybuje od 1 do 20 % hmotnostních, načež se směs zahřeje na 50 až 90 °C a ze vzniklého roztoku se ergoaterol izoluje po ochlazení na +5 až -5 °C. Hodnota pH roztoku se může v kterékoliv fázi izolace upravit na 5 až 9. K případné úpravě pH roztoku ergoaterolu je možno použít slabých kyselin, např. octové nebo kyselých solí, např. chloridu amonného, hydrogen a dihydrogenfosforečnanu sodného, hydrogenaíranu sodného.

V případě zpracování extraktu způsobem dle vynálezu, tj. po oddestilování rozpoštědla použitého k extrakci kvasnic se získá ergosterol o čistoě kolem 90 % a obsahem krystalové vody 5 až 6 %, který je vhodný pro další zpracování ozařováním na vitamín Dg. Jestliže P° necháme nejprve část produktu vykrystalovat a zpracováváme jen matečné louhy, získáme produkt čistoty kolem 75 %, který rekrystalizací dá čistou látku. Matečné' louhy po izolaci ergoaterolu ze směsí alkohol - voda obsahující ještě další množství ergoaterolu, který může být získán po částečném zahuštění a doplnění vody ve formě méně čistých podílů, které lze však dočistit.

K rekrystalizací lze užít buá opakování postupu kryatalizace z vodného alkoholu dle způsobu podle vynálezu nebo samotnou krystalizaci z běžně užívaných rozpouštědel, jako je benzen, směs benzen-etanol, etanol, izopropylalkohol aj. Lze též využít kryatalizace surového produktu přidáním k původnímu extraktu obsahujícímu směa sterolů v org.rozpouštědle a vykrystalováním, případně krystalizaci za matečných louhů po izolaci prvních podílů produktu v případě používání dvoustupňové kryatalizace. Matečné louhy po rekrystalizací ergosterolu je možno zpracovat společně 9 matečnými louhy po vykrystálování prvních podílů ergoaterolu. Pro extrakci směsi. sterolů z droždí po hydrolýze jsou nejvýhodnější aromáty, jako benzen, toluen případně naaycené uhlovodíky, jako hexan a cyklohexán. Ke snížení oxidace produktu v alkalickém roztoku je možno přidat malé množství antioxidantů, např. butylhydroxytoluenu.

Výhoda postupu dle vynálezu spočívá ve zvýšení výtšžku ergoaterolu o 5 až 15 % při zachování kvality» minimálních vlastních nákladech, ve snížení doby kryatalizace a snížení množství odpadních látek.

Pro bližší objasnění podstaty vynálezu jsou dále uvedeny příklady provedení.

Příklad 1

Z matečných louhů /benzenových) po izolaci ergoaterolu byl oddestilován benzen až do teploty v baňce 130 °C a zbytky benzenu byly oddestilovány za sníženého tlaku, aby destir lační zbytAk obsahoval méně než 2 % hmot. benzenu.

10,0 destilaěního zbytku obsahujícího 23,1 % hmot. sterolu bylo rozpuštěno ve 100 ml Izoamylalkoholu zahřátím na 80 až 90 °C, načež bylo přidáno 10 ml vody. Emulze byla míchána a chlazena na + 5 °C, vypadlé krystaly byly odsáty a promyty 3x 10 ml etanolu. Po vysušení při 50 °C bylo získáno 3,1 g produktu a obsahem 37,3 % ergoaterolu, tj. 50,2 % teorie.

Příklad 2

100,0 g deatilačního zbytku, obsahujícího 22,3 % ergosterolu získaného podle příkladu 1, bylo rozpuštěno v 1 000 ml izobutylalkoholu a 200 ml vody zahřátím na 70 až 80 °C, přidány 2,0 g aktivního uhlí, za horka zfiltrováno a filtrát postupně ochlazen za míchání na 0 °C. Krystalický podíl byl ostře odsát a promyt 3x100 ml etanolu ochlazeného na 0 °C.

Po vysušení při 50 °C bylo získáno 20,5 & produktu s obsahem 69,4 % hmotnostních ergosterolu, tj. 63,8 % výtěžku.

Příklad 3

300,0 g deatilačního zbytku, obsahujícího 30,3 % ergosterolu získaného podle postupu 1, bylo rozpuštěno v 2 700 ml n-butanolu a 450 ml vody zahřátím na 80 až 90 °C. Vzniklý roztok po přidání 2 g křemeliny byl za horka zfiltrovén, pH roztoku upraveno přídavkem chloridu amonného na hodnotu 5 až 8 a filtrát postupně ochlazen za míchání na 0 °C. Krystalický podíl byl ostře odsát a promyt 3x 150 ml methanolu ochlazeného na 0 °C. Po vysušení koláče bylo získáno 87,2 g produktu obsahujícího 70,0 % hmot. ergosterolu, tj. a výtěžkem 67,1 % teorie.

Příklad 4

Z benzenového extraktu sterolů po hydrolýze droždí, tj. bez částečné izolace ergosterolu, byl oddeatilován benzen až do teploty v baňce 130 °C a zbytky benzenu byly oddestilovány za sníženého tlaku, aby destilační zbytek obsahoval méně než 2 % hmot. benezenu.

218,0 g deatilačního zbytku obsahujícího 50,8 % hmot. ergosterolu bylo rozpuštěno v 1 000 ml n-butanolu a 163 ml vody zahřátím na 80 až 85 °C, načež byl roztok postupně ochlezen na - 2 °G. Vypadlý produkt byl ostře odsát a promyt 3x 200 ml methanolu. Po vysušení bylo získáno 110,8 g produktu a obsahem 90,9 % hmot. ergosterolu, tj. s výtěžkem 90,9 % teorie.

Příklad 5

100 g surového ergosterolu s obsahem 78,3 % hmot. bylo rozpuštěno ve 2 000 ml butanolu zahřátím na 80 °C, přidány 2 g karborafinu a za horka zfiltrováno. K filtrátu přidáno 400 ml horké vody a za míchání ochlazeno na 0 °C. Vyloučený krystal byl ostře odeát a po vysušení bylo získáno 55 g ergosterolu s obsahem 90,2 % účinné látky, což odpovídá výtěžku 63,4 % teorie.

Příklad 6

218 g deatilačního zbytku, obsahujícího 50,8 % hmot. ergosterolu bylo rozpuštěno v 2 000 ml acetonu, přidáno 100 ml vody, směa zahřáta na 5'0 °0 a roztok postupně chlazen za míchání na 0 °C. Produkt byl ostře odsát, promyt 3x 200 ml ethanolu. Bylo získáno 115,1 g produktu a obsahem 91,2 % hmot. ergosterolu, tj. a výtěžkem 94,2 % teorie.

Claims (2)

1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU

   1. Způsob izolace ergosterolu ze směsi sterolů získané získané z hydrolyžovaného droždí extrakcí organickým rozpouštědlem a bu3 přímým oddestilováním tohoto rozpouštědle, nebo krystalizscí po částečném zahuštění z extraktu, nebo oddestilováním rozpouštědle z matečných louhů po této krystelizaci, vyznačující se tím, že se ke směsi sterolů přidá 2 až 20násobné množství alkoholu až C^, s výhodou C^, nebo acetonu a voda, jejíž množství se pohybuje od 1 do 20 % hmotnostních, načež se směs zahřeje na 50 až 90 °G a ze vzniklého roztoku se ergosterol izoluje po ochlazení na +5 až -5 °C.
2. 2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že pH roztoku se v kterékoliv fázi izolace upraví na hodnotu 5 až 9.