CS221839B2 - Method of making the tylactone - Google Patents

Method of making the tylactone Download PDF

Info

Publication number
CS221839B2
CS221839B2 CS815078A CS507881A CS221839B2 CS 221839 B2 CS221839 B2 CS 221839B2 CS 815078 A CS815078 A CS 815078A CS 507881 A CS507881 A CS 507881A CS 221839 B2 CS221839 B2 CS 221839B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
tylactone
medium
tylosin
culture
fermentation
Prior art date
Application number
CS815078A
Other languages
English (en)
Inventor
Richard H Baltz
Eugene T Seno
Original Assignee
Lilly Co Eli
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lilly Co Eli filed Critical Lilly Co Eli
Publication of CS221839B2 publication Critical patent/CS221839B2/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D313/00—Heterocyclic compounds containing rings of more than six members having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/08—Oxygen as only ring hetero atoms containing a hetero ring of at least seven ring members, e.g. zearalenone, macrolide aglycons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • C12R2001/54—Streptomyces fradiae
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886—Streptomyces
    • Y10S435/896—Streptomyces fradiae

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Vynález se týká způsobu výroby tylaktonu.
Tylakton je makrolidové aitibiotiUm, je možno vyjádřit vzorcem I
O
O
Tato látka je vhodným meeiproiuktem pro výrobu acylieeivátů obecného vzorce II
O
O (II) kde
R a Rj znamená acylové zbytky.
Sloučeniny vzorců I a II j3ou cannými ' meeiprodukty, z nichž je možno získat miakc^lidová antibiotika se 16člennou strukturou. Přestože ve vzorcích nejsou uvedeny žádné stereochemické údaje, je stereochemie těchto látek totožná se stereochemi! tylosinu.
Tylakton je možno esterifikovat na hyeroyllovýcLχ_ skupinách v poloze 3 a 5 za vzniku acylesterů, reakce se provádí působením acylačních činidel známým způsobem. Acylestery tylaktonu jsou cennými meelprodukty při výrobě nových maakolidových kltibiotii.
Typickými acуlačními činidly jsou knwteidy, halogenidy, a to obvykle v kornbbnaci se zásadou nebo jnnou látkou, poohccu^c^ kyselinu, jakož i aktivní estery organických kyselin. Acylaci je rovněž možno provádět při poožžií směsi organické kyseliny a dehydratačního Činidla, například Ν,Ν<’-eicyklsheytliarbsdiibieu. Acylaci je rovněž možno provést enzymaticky při poožiií postupů, které byly popsány například Okamotem a dalSími v US patentu č. 4 092 473. Takto získané acylované deriváty je možno izolovat a čistit známými způsoby.
Deeiváty je možno připraví některým ze známých způsobů esterifkace, například tak, že se na sloučeninu působí stechisbetrCclým mwostvím nebo malým přebytkem rsterlfikacího acylačního činidla, například aOhtlridu kyseliny v organickém rozpouutědle, okpříklae pyridinu při teplotě 0 °C až teplotě místnossi po dobu 1 až 24 hodin do ukončení esterifkkace. Estery je možno izolovat ' z reakční směěi běžnými, postupy, například extrakcí, chromatogra-» fií a krystali-zací.
PouUiteltýbi estery jsou estery organických kysslin, a to kyselin aLi^^^atiký^ch, cykloarylkarbsyylsvýih, ' araHy! karbonových, hoto^cy^-iclých karboxylových kyselin, kyselin sulfidových a alkoyykarbootlsvýih o 1 až 18 atomech uhlíku a v případě aior ganických 'kyselin může jít zejména o kyselinu sírovou a kyselinu fosforečnou. Příkladem vhodných esterů jsou estery, odvozené například od kyseliny mavenčí, octové, chLoroctové, propionové, mselné, isovaLerové, glukoronové, alkoxykarbonylové, stearové, cyklopropankarboutylové, cyklohrtankarboxylové, beta-cyklohexylpropionové, 1 -aaamaitukea^ojxlové, benzoové, fenyloctové, frnotyoctové, mandlové a 2~thienyloctové, a kyseliny alkylsulfonové, arylsulfonové, aralkylsulfonové, přičemž kyseliny, substituované arylovými nebo aralkylovými zbytky popřípadě nesou subssituenty ze skupiny atom - halogenu, nitroskupina, nižší.alkoxyskupina a podobně na aromatickém kruhu. Vhodnými estery jsou také poloestery, odvozené od dikarboxylových kyssein, například od kyseliny jantarové, malinové, f umarové, malonové a fialové.
Tylakton je možno získat pěstováním kmene Streptomyces fradiae, který produkuje tuto sloučeninu v subi^ersz^jí ^mt^uře za aerobních podmínek ve vhodném živném prostředí. Fermentace sr provádí až do nahromadění žádaného možžsví výsledné sloučeniny.
K pěstování kmene Strepoomycrs fradiae je možno užít celou- řadu živných prostředí. Pro hospodárnost produkce, optimální výtěžek a snadnou izolaci výsledného produktu je však výhodné užít určitých živných prostředí. Je například možno . jako - . výhodného . zdroje . uhlíku pro fermentaci vr velkém měřítku užít uhlohyddáty, například dextrin, glukózu, . škrob a kukuřičnou mourku, jakož i oleje, například sójový olej. Výhodným zdrojem dusíku je kukuřičná mouka, sójová mouka, rybí mouka, aminolιkseriny a podobně. Pokud jde o anorganické soU, je možno včlent do živného prostředí běžné rozpustné soU, které doddávaí železo, d^^^г^t»:ík, sodík, hořčík, vápník, amonné ionty, chloridové ionty, ionty uh.ičiainiové, síranové, dusičnanové a podobně.
Do živného- prostředí p^t^třzí rovněž. základní stopové prvky, nutné pro růst a vývoj produkčního organismu. Tyto stopové prvky sr však běžně vystytují jako nečistoty jirých složek živného prostředí v množstv, které je dostatečné pro růstové požadavky organismu. Někdy však může být zapotřebí přidat do živného prostředí při fermentaci vr většm m^ěítku malé mn»ožsví protipěnivého činidla, například 0,2 m/1, tímto činidlem je například polypropy-_ lrnglykol s molekulovou UeoOnooeí přibližně 2 000.
Pro výrobu větších mιoOževí tylaktonu v submrzní kultuře za aerobních podnínek je výhodná frrmrntace v tancích. Menší шlo0sSví této sloučeniny je možno získat i vr třrpací kultuře.· Protože při přmém naočkování velkých tanků sporami organismů je nutno nejprve vyčkat po celé období lag, je výhodnnjší užít vrgeeaaivní očkovací maeeii^].. Tento vegetativní očkovací m^at^rr^^ sr připravuje tak, že sr malé mlo0sSví živného prostředí naočkuje sporami nrbo zlomky m^sTia uvedeného organismu, čímž sr získá čerstvá, aktivně rostoucí kultura organismu. Vegerativní očkovací maatriál sr pak užije k. naočkování prostředí vr velkém tanku.
živné prostředí užité k získání vegetativního očkovacího míat^r^r.á^u může být totéž prostředí, jakého sr užívá při frrmentaci vr větších nádobách, je však možno užít i jiného prostředí.
Způsob podlr vynálezu spočívá v tom, žr sr pěstuje nový mikroorganismus, který byl získán chemickou mutagenézou. Jdr o kmen Strepoomycrs fr^adiar, který produkuje tylo^n. Nový mikroorganismus však produkuje pouzr velmi malé mnossví tylo^nu, avšak jako hlavní složku produkuje tylakton.
Předmětem vynálezu je tedy způsob výroby tylaktonu vzorce I nrbo jeho esteru,- vyznačující sr . tím, žr sr pěstuje kmen Strepoomycrs fradiar NRRL 12188 proddukuící tylakton v živném přostordí, obsáiuuícím a^^m^^ovatrl^ný zdroj uhlíku, dusíku a anorganické soU v euSmerzní kultuře při teplotě 10 až 40 °C . za aerobních podmínek při provzdušnění alespoň 30 % a takto získaný tylakton sr^opřípadě rsterifikujr.
Nový mikroorganismus, který produkuje tyl akt on · je možno klasifikovat · jako kmen Streptomyces fradiae. Kultura tohoto mikroorganismu byla na trvalo uložena do veřejné sbírky mikroorganismů Northern Reegonal Reseturch Ceener, Ariccutaral Research, Nooth Ceenral Region, 1815 North UnivvrsSty Street, Peeoia, Ilin^ol^s, 61604, odkud je možno ji kdykcoi získat pod číslem NRRL 12188.
Jako je tomu i v případě jných mikroorganismů, vlastnossi Strep^n^es fradiae
NRRL 12188 se poněkud měnn. Je například možno získat rekrшbbnaniy, mutanty nebo varianty kmene NRR 12188 působením různých známých· fyzikálních a chemických mutagenních činitelů, jako ^tr^a^ového světla, paprsků X, paprsků gama nebo N-meryl-^Γ-nitrr-N-nitrosoruanidinu. Všechny přírodní i vyvolané varianty, muttanty a rekombinanty kmene Strepoomyces fradiae NRRL 12168, které se uchováávaí svou základií vlastnost produkce tylaktonu spadsaí do oboru vynálezu.
S. fradiae NRR 12188 je možno .pěstovat v teplotním rozmezí 10 až 40 °C. K optimální produkci tylaktonu dochází při teplotě přibližně 28 °C.
Jak je to obvyklé v subrnmezní kultuře za aerobních podmínek, nechá se Živným prostředím procházet steT^Hní vzduch. Pro účinnou produkci aΊiibirtika má být nasycený vzduchem při fermentaci v tanku 30 % nebo větší při teplotě 28 °C · a a^a^er^kého tlaku.
Produkce tylaktonu je možno v průběhu fermentace sledovat tak, že se ze živného prostředí odeberou vzorky a ty se pak · vysokotlakou kapalinovou chrrmaaorradií při pootití tltrεf'dlroééhr svěěla jako detekčního systému, jak bylo popsáno například v puubikaci Kennedy v J. C^πtrmadographic Science, Ц6, 492 až 495 (1978).
Po ukončení submeezní fermentace za aerobních podmínek je možno izolovat tylakton z fermentačního prostředí některým ze známých způsobů. Protože je tylakton jen omezeně rozpustný ve vodě, · nemusí se rozpol tát v prostředí, · v němž došlo k jeho výrobě. Z tohoto dů! vodu je možno tylakton izolovat bu3
1. extrakcí z fermentačního prostředí nebo
2. filtrací fermentačního prostředí s následnou extrakcí lfilOrodnnéhr prostředí i myceliáliLÍhr koláče.
Extrakci je možno provádět různým způsobem. S výhodou se zfetované živné prostředí extrahuje obvykle bez předchozí úpravy pH vhodným rozpouštědlem, nappíklad amlacetátem nebo petropeem, organická fáze se tapeTÍ ve vakuu, čímž se získaaí krystaly nebo olejovitá kapa^na. V případě, že se získá olejovitá kapa^na, je možno ji dále čistit adsorpční ctatrmmdoorrrdlí.
Sloučeniny vzorců I a II jsou cennými meelproduuky, z nichž je možno získat mmdroridrvá a^nibioti^k^a o 16 členech ve struktuře. Například tylakton vzorce I je možno biologicky převést na tylosin tak, že se tato látka přidá k rostoucí kultuře mikroorganismu, který je schopen biologickou přeměnu provést. Tímto mikroorgtnismmem může být kmen Strepoomyces f řadiče, který produkuje tylosin nebo je schopen produkovat tylosin s tou výjimkou, že se blokuje tvorba tylaktonu.
Kmmn, který je schopen produkovat · tylosin a je blokován pokud jde o produkci tylakoonu je možno získat tak, že se působí na kmen, který produkuje tylosin mutagenem a přeJ^ž^i^e^ající kmeny se sleduj na neschopnost produkce tylo^nu. Ty kmeny, které neprodu^ j tylosin se dále sleduj ke stanovení kmenů, které jsou také neschopné produkovat tylakton. Tyto kmen se pak uloží do mmlých třepacích lahví a přidává se tylakton, aby bylo možno stanoolt, zda jej měrní ne tylosin.
Streptomyces fradiae kmeny NRRL 2702 a NRRL 2703 mohou být příkladem kmenů Streptomces, které jsou schopné produkovat tylosin· Typickými mutageny, kterých je možno užít k selekci kmenů jsou například deriváty N-metyl-N*-nntronitoosoguanLdinu.
Sloučenina vzorce I je zvláště cenná pro výrobu značených sloučenin pro meeabblické pokusy. Znalit se může bučí tylakoonová část nebo cuk, čímž je možno sledovat meeabboické pochody tylosinu.
Vynález bude osvětlen následujícími příklady.
Příklad 1
A. Fermentace tylaktonu v třepící. ku.tuře
Lyofiizoované pelety Strep-Oc^ces Γγι^Ιο NRRL 12188 se disper^^í v 1 až 2 m sterilioovamé vody. 0,5 ml tohoto roztoku se užije k naočkování 150 ml vegetativního živného prostředí násled^ícího složení.
Složka Množtví v %
kukuřičný výluh 1,0
extrakt z kvasnic 0,5
drť ze sojových bobů 0,5
CaCO3 0,3
surový sojový Hej 0,45
deionizovaná voda 97,25
Je také možno postupovat tak, že se otgetalioní kultura S. NRRL 12188 uložená po objemech 1 ml v kapalném dusíku rychle rozrazí a užije k naočkování vegetationího prostředí. Naočkované otgetalioní prostředí se inkubuje v Erlermeyerových baňkách o obsahu 500 ml při teplot 29 °C po dobu 48 hodin v uzavřené třepačce při 300 otéétóch za minutu.
Takto . naočkované živné prostředí se v mnoství 0,5 m užije k naočkování 7 m produkčního živného prostředí násled^ícího složení.
Složka Množství v %
řepná melasa 2,0
kukuřičná mouka 1,5
rybí mouka 0,9
kukuřičný gluten 0,9
NaCl 0,1
(NH4)2HPO4 0,04
CaCOj 0,2
surový sojový Hej 3,0
deionizovaná voda 91 ,36
Naočkované feteentační prostředí se inkubuje v baňce o objemu 50 m při teplotě 29 °C po dobu 6 dnů v uzavřené třepačce p^di 300 otáčkách za minutu.
B. Fermentace tylaktonu v tanku
Aby bylo možno získat větší objem očkovacího materiálu, užije se 60 ml inkuibovaného vegetativního prostředí, připaaveného tak, jtk bylo popsáno v odstavci A. k naočkování 38 litrů vegetativního růstového prostředí druhého stupně s následujícím složením:
Složka MnnOství v %
kutatfičný výluh 1,0
sojová ' mouka 0,5
extrakt z kvasnic 0,5
CaCOj 0,3
surový sojový olej 0.,5
surový lecitin 0,015
voda 97,185
Živné prostředí se upraví na pH 8,5 přidáním 50% roztoku hydroxidu sodného.
Toto vtgetativní živné prostředí z druhého stupně se inkubuje v tanku o objemu 68 litrů po dobu 47 hodin při teplotě 29 °C.
litry takto získaného inkubovaného živného prootředí ze druhého stupně se užije k naočkování 40 litrů sterilního produkčního prostředí následujícího složení.
Složka Množsví v %
rybí mouka 0,92
kukuřičná mouka ',57
kukuřičný gluten 0,92
CaCC^ 0,21
NaCl 0,10
(NH4)2HPO4 0,04
řepná melasa 2,10
surový sojový olej 3,15
lecitin 0,09
voda 90,90
Živné prostředí se upraví na pH 7,2 přidáním 50% roztoku hydroxidu sodného.
Naočkované produkční prostředí se fermentuje v tanku o objemu 68 l^itri^ů po dobu 5 dnů při teplotě 28 °C. Fermmetační prostředí se provzdušnuje sterilním vzduchem tak, aby bylo nasyceno rozpuštěrým kyslíkem na 30 ai 60 % a míchá se běžnými míchadly při 300 otáčkách za minutu.
Příklad 2
Izolace tylaktonu
600 litrů fermentačního prostředí, získaného způsobem podle příkladu 1 se zfiltruje při použití pomocného prostředku pro filtraci (3 % Hrflo Supeecce, infusoriová hlinka, Johns ManVlle Coop·). Filtrát se upraví na pH 9,'přidáním 2% hydroxidu sodného. Filtrát se extrahuje 400 litry amynaceátu. Amyacetátový extrakt, který má vysokou optickou hustotu při 282 nm, avšak žádnou aitinitarobiální účinnost se zaiussí ve vakuu na olejovitou kapalinu. Tato kapaaina se rozpuusí v 5 ltreech benzenu. Benzenový roztok se chromaaoorafuje na sloupci sLliafrei^u (Grace, grade 62, Davison Chemical Co.) v ' benzenu, sloupec má rozměry 5,25 x 36. Sloupec se vymývá směsí benzenu a etylacetátu v poměru 3:2, aluce se sleduje cltatolmrooraafí na tenké vrstvě silkarelu, detekce se provádí kyselinou sírovou. Benzenem se odstraní zbytky tukovitých látek a pak se směsí benzenu a etylacetátu v poměru 9:1 odděěí a izoluje tylakton. Frakce s obsahem tylaktonu se slijí a odpaaí ve vakuu. Tylakton se nechá krystalizovat ze směsi benzenu a hexanu nebo horkého hexanu, čími se získají 2 r této sloučeniny o teplotě tánzí 162 ai 163 °C.
Spektrum tylaktonu v inftaačervenéi světle v chloroformu je znázorněno na přiliženém výkresu.
Tylakton je bílá pevná látka, která krystaluje z hexanu nebo ze směsi etylacetátu a hexanu a taje při teplotě 162 ai 163 °C. Skládá se přibližně ze 70 % uhlíku, 9,7 % vodíku .a 20,3 % kyslíku. Má žmiiriciý vzorec ^23^38θ5 a molekulovou hmoonost přibližně 394.
Absorpční spektrum tylaktonu v infaažθvžnnéi světle ' v chloroformu je znázorněno na při^enném výkresu. Pozorovatelná absorpční maxima se vys^y^í při následnících frekvencích: (cm-1):
534 (střední, 2 924 (silné), 2 398 (slabé), 2 35(3 (slabé), 1 709 (velmi s ilné), 1 67© (velmi silné), 1 626 (malé^ 1 592 (velmi silné), 1 458 (silné), 1 441 (hrb), 1 404 (silné), 1 379 (ííL·)), 1 316 (silné), 1 284 (střednn), 1 181 (velmi silné), 1 143 (silné), 1 103 (střednn), 1 078 (střední), 1 049.(velmi mTé), 1 025 (střednn), 984 (velmi silné), 958 (silné), 923 (střednn), 911 (hrb), 859 (mb)), 868 (střednn), 840 (střednn), 820 (velmi malé) a 661 (medé).
Spektrum tyl ií to nu v sltraiaalovéi světle v neutrálním etan^u má absorpční maximum při 282 nm (E*m = 560).
TylT^m má následduící lpežifickou otáAivost: [a] p9 -55,23° (c = 1, CH-jOH).
Tylakton nemá podle elektronetrické tid^ce v 66% vodném diietyllcimliidu iádné Шпvatelné skupiny.
Tylakton je téměř nerozpustný ve vodě, avšak rozpon tí se v organických rozpouštědlech, jako acetonu, meetaiolu, etudu, diietylOoriliidu, chloroformu, dietyléteru, petrdéteru, benzenu a dimeetlsulf oxidu. .
Tylakton je možno odlišit od tylosinu cta?o!mlolralfí na tenké vrstvě siMarelu. K detekci je moino užít kyselinu sírovou, a to koncentrovanou nebo zředěnou na 50 %. Pi tomto způsobu detekce vytvá^ tylakton nejprve skvrnu. V případě, ie siMaagelové plotny s fSuožeccenčeíi pozadím se užíval pro tento typ chrlmaaolrcaiž, je možno provést detekci sltrafralovýi světlem. Hodnoty Rf pro tyl^im jsou uvedeny v eásleddLSící tabulce I.
221839 8
Tabulka I
Chromatografie tylaktonu na tenké vrstvě silikagelu
Sloučenina
Hodnoty Rf
Aa) В tylakton
0,50
0,62 tylosin
0,0
0,0 a) rozpouštědlo: A = směs benzenu a etylacetátu v poměru 4:1 В = směs benzenu a etylacetátu v poměru 3:2
Příklad 3
3,5-di-O-Acetyl-tylakton
200 mg tylaktonu, připraveného způsobem podle příkladu 2 se rozpustí ve 4 ml pyridinu. Přidají se 4 ml anhydridu kyseliny octové. Výsledná směs se nechá stát 16 hodin při teplotě místnosti a pak se odpaří ve vakuu dosucha. К odparku se přidá 5 ml metanolu a roztok se zahřívá 1/2 hodiny na teplotu 60 °C a pak se odpaří ve vakuu, čímž se získá 3,5-di-O-acetyltylakton. Tato sloučenina má Rf 0,59 při chromatografií na tenké vrstvě silikagelu při použití směsi benzenu a etylacetátu v poměru 4:1 jako rozpouštědla. Hodnota Rf pro tylakton v tomto systému je 0,3.
Příklad 4
3.5- di-O-propionyltylakton je možno získat způsobem podle příkladu 3 při použití anhydridu kyseliny propionové.
Příklad 5
3.5- di-O-isovaleryltylakton je možno získat způsobem podle příkladu 3 při použití anhydridu kyseliny isovalerové.
Příklad 6
3.5- di-O-benzoyltylakton je možno získat způsobem podle příkladu 3 při použití anhydridu kyseliny benzoové.
Příklad 7
3.5- di-O-(n-butyryl)tylakton je možno získat způsobem podle příkladu 3 při použití anhydridu kyseliny n-máselné.
Příklad 8
Výroba tylosinu z tylaktonu
Kmen Streptomyces fradiae, který původně produkoval tylosin, ale byl blokován pokud jde o uzavření makrolidového kruhu se pěstuje způsobem podle příkladu 1, odstavec A. s tím rozdílem, že teplota při testování je 28 °C. Tylakton se přidá k fementačníu prostředí 48 hodin po naočkován. Fermentace se provádí tak dlouho, až se nahromadí větší možsSví tylosinu, to jest obvylkLe 3 dny. přítomnost tylosinu je možno prokázat odebrání vzorků živného prostředí a testováním proti mikroorginiismí citiivým na tylosin. K tomuto účelu je možno užít například Staphylococcus aureus ATCC 9144. Biologická zkouška se obvykle provádí automaticky turbidimetrickou metodou Chro^mUto^ír^^Lií na tenké vrstvě nebo vysokotlakou kapalinovou ctaOmmaografií, detekce se provádí tltraftativί světlem.

Claims (1)

  1. Způsob výroby tylaktonu vzorce I (I) nebo jeho farmaceuticky pr^stenného esteru, vyznaačjící se tí, že se pěstuje kmen Streptomyces ^adíe NRRL 12188 produ^^cí tylakton v živném prostředí, obsa^ícím asimilovateilnv zdroj drinky dusí^ a anorganické soH v suhneezní kdltuře při teplota 10 až 40 °C za aerobních podmínek při nasycení živného prostředí vzduchu alespoň 30 % a takto získaný tylakton se popřípadě převede na farmaceuticky přijatelný ester.
CS815078A 1980-07-02 1981-07-01 Method of making the tylactone CS221839B2 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/162,977 US4366247A (en) 1980-07-02 1980-07-02 Process for preparing tylactone

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS221839B2 true CS221839B2 (en) 1983-04-29

Family

ID=22587920

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS815078A CS221839B2 (en) 1980-07-02 1981-07-01 Method of making the tylactone

Country Status (24)

Country Link
US (1) US4366247A (cs)
EP (1) EP0043280B1 (cs)
JP (1) JPS5743692A (cs)
KR (1) KR840001954B1 (cs)
AU (1) AU7238581A (cs)
BG (1) BG35749A3 (cs)
CA (1) CA1171009A (cs)
CS (1) CS221839B2 (cs)
DD (1) DD202047A5 (cs)
DE (1) DE3162648D1 (cs)
DK (1) DK292681A (cs)
ES (1) ES503565A0 (cs)
FI (1) FI812065A7 (cs)
GB (1) GB2079279B (cs)
GR (1) GR74938B (cs)
HU (1) HU189515B (cs)
IE (1) IE51361B1 (cs)
IL (1) IL63221A (cs)
NZ (1) NZ197585A (cs)
PL (1) PL231943A1 (cs)
PT (1) PT73288B (cs)
SU (1) SU1069631A3 (cs)
YU (1) YU162181A (cs)
ZA (1) ZA814463B (cs)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4423148A (en) * 1982-07-02 1983-12-27 Eli Lilly And Company Process for producing 20-dihydro-20-deoxy-23-de(mycinosyloxy)tylosin
JPS59181294A (ja) * 1983-03-30 1984-10-15 Satoshi Omura 抗生物質ｐｔｌ−４４８とその誘導体およびそれらの製造方法
US5284757A (en) * 1989-01-12 1994-02-08 Ajinomoto Company, Inc. Process for producing l-arginine by fermentation with brevibacterium or corynebacterium
US5698420A (en) * 1995-12-05 1997-12-16 Pfizer Inc. Preparation of 4-deoxy-O-mycaminosyltylonolide
CA2197524A1 (en) * 1996-02-22 1997-08-22 Bradley Stuart Dehoff Polyketide synthase genes
KR100914251B1 (ko) 2007-06-27 2009-08-26 이화여자대학교 산학협력단 신규한 올리보실 틸락톤 및 그 제조 방법
MD1180Z (ro) * 2017-03-02 2018-03-31 Институт Физиологии И Санокреатологии Академии Наук Молдовы Procedeu de stimulare a formării reflexelor condiţionate în perioada diminuării funcţiilor

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3178341A (en) * 1960-06-27 1965-04-13 Lilly Co Eli Antibiotics tylosin and desmycosin and derivatives thereof
US3326759A (en) * 1962-07-19 1967-06-20 Lilly Co Eli Antibiotics macrocin and lactenocin
US3344024A (en) * 1963-04-17 1967-09-26 American Cyanamid Co Antibiotic am-684 and method of production
BE667952A (cs) * 1964-08-05
US4161523A (en) * 1972-11-15 1979-07-17 Schering Corporation Rosamicin esters, acid addition salts and methods for production thereof
GB1587685A (en) * 1977-03-09 1981-04-08 Microbial Chem Res Found Macrolactone derivatives and their production

Also Published As

Publication number Publication date
US4366247A (en) 1982-12-28
EP0043280A1 (en) 1982-01-06
HU189515B (en) 1986-07-28
IE811462L (en) 1982-01-02
GB2079279B (en) 1984-08-22
IL63221A0 (en) 1981-10-30
PT73288A (en) 1981-07-01
DD202047A5 (de) 1983-08-24
ES8205018A1 (es) 1982-05-16
PT73288B (en) 1982-07-22
FI812065L (fi) 1982-01-03
GB2079279A (en) 1982-01-20
SU1069631A3 (ru) 1984-01-23
PL231943A1 (cs) 1982-10-11
DE3162648D1 (en) 1984-04-19
ES503565A0 (es) 1982-05-16
DK292681A (da) 1982-01-03
NZ197585A (en) 1983-11-30
AU7238581A (en) 1982-01-07
EP0043280B1 (en) 1984-03-14
KR840001954B1 (ko) 1984-10-26
IE51361B1 (en) 1986-12-10
KR830006425A (ko) 1983-09-24
BG35749A3 (bg) 1984-06-15
YU162181A (en) 1983-09-30
JPS5743692A (en) 1982-03-11
CA1171009A (en) 1984-07-17
GR74938B (cs) 1984-07-12
FI812065A7 (fi) 1982-01-03
IL63221A (en) 1985-03-31
ZA814463B (en) 1983-02-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0573628B1 (en) New a83543 compounds and process for production thereof
PETERSEN et al. Production of cladospirone bisepoxide, a new fungal metabolite
US4299953A (en) Mycarosyltylactone
KR850001666B1 (ko) 마크로라이드 항생물질의 제조방법
CS221839B2 (en) Method of making the tylactone
AU631693B2 (en) A83543 recovery process
US4277478A (en) Antibiotic and use thereof
US4440857A (en) Process for preparing mycarosyltylactone
US4362881A (en) Tylactone
EP1483395A1 (en) Process to prepare and isolate geldanamycin
DK143570B (da) Fremgangsmaade til fremstilling af maytansinol maytanacin og eller maytansinolpropionat
CA1211731A (en) De(mycinosyloxy)tylosin derivatives
EP0002589B1 (en) A-40104 antibiotics, their preparation, and formulations containing them
EP0034009B1 (en) Process for preparing polyether antibiotic
US4239690A (en) Antibiotics produced by Cytospora sp. W.F.P.L. 13A
EP0045205B1 (en) Macrolides
US4220718A (en) Antibiotics produced by Cytospora sp. W.F.P.L. 13A
EP0064409B1 (en) Process for preparing narasin
CA1171869A (en) Tylactone
US4293649A (en) Process for production of antibiotic A-33853
RU1808007C (ru) Способ получени антибиотика
US2965547A (en) Process for the production of l-6-diazo-5-oxonorleucine
NZ197869A (en) 5-0-mycarosyl-20-dihydro-20,23-dideoxytylonolide derivatives
JPS5932120B2 (ja) ９−β−Ｄアラビノフラノシル・アデニンの製造法