CS219875B2 - Method of fixing the triglycerine - Google Patents
Method of fixing the triglycerine Download PDFInfo
- Publication number
- CS219875B2 CS219875B2 CS766611A CS661181A CS219875B2 CS 219875 B2 CS219875 B2 CS 219875B2 CS 766611 A CS766611 A CS 766611A CS 661181 A CS661181 A CS 661181A CS 219875 B2 CS219875 B2 CS 219875B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- lipase
- determination
- triglycerides
- alkyl
- buffer
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims abstract description 14
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 claims abstract description 13
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- 240000005384 Rhizopus oryzae Species 0.000 claims abstract description 8
- 235000013752 Rhizopus oryzae Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims abstract description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 5
- -1 carboxyl ester Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 3
- 108010051152 Carboxylesterase Proteins 0.000 abstract description 7
- 102000013392 Carboxylesterase Human genes 0.000 abstract description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 4
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 abstract description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 abstract description 3
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 abstract description 3
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 abstract description 3
- 102000057621 Glycerol kinases Human genes 0.000 abstract description 2
- 101710163410 Probable glycerol kinase Proteins 0.000 abstract description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 abstract description 2
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 abstract description 2
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 abstract 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 abstract 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 abstract 1
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 abstract 1
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 abstract 1
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 abstract 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 abstract 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 abstract 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 abstract 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 abstract 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 abstract 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 abstract 1
- 229930029653 phosphoenolpyruvate Natural products 0.000 abstract 1
- DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-N phosphoenolpyruvic acid Chemical compound OC(=O)C(=C)OP(O)(O)=O DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 4
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 3
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 3
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 2
- VHFCNZDHPABZJO-UHFFFAOYSA-N cyclohexylazanium;2-phosphonooxyprop-2-enoate Chemical compound NC1CCCCC1.OC(=O)C(=C)OP(O)(O)=O VHFCNZDHPABZJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- RMJPDRUNCDRUQC-MCDZGGTQSA-M sodium;[[[(2r,3s,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl] hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O RMJPDRUNCDRUQC-MCDZGGTQSA-M 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- OULAJFUGPPVRBK-UHFFFAOYSA-N tetratriacontan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCO OULAJFUGPPVRBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000001000 lipidemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/61—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving triglycerides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/939—Rhizopus
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu stanovení triglyceridů na bázi enzymatického zmýdelnění lipázou.
Podle vynálezu se zmýdelnění provádí v přítomnosti sloučeniny obecného vzorce RO (CH2CH2O )nH, kde R znamená alkylovou nebo alkylenovou skupinu se 14 až 20 atomy uhlíku a n číslo 7 až 20, a glycerin, uvolněný při zmýdelnění, se stanoví -například fotometricky.
Stanovení se používá pro analytiku potravin a pro lékařskou diagnózu, zejména hyperlipemií.
219075
Vynález se týká způsobu stanovení triglyceridů.
Způsob stanovení triglyceridů enzymatickým zmýdelněním pomocí lipázy z Rhizopus arrhizus a měřením uvolněného glyrinu při kterém se zmýdelnění provádí v přítomnosti karbocylesterázy a alkylsíranu alkalického kovu nebo kovu alkalické zeminy, kde alkylový zbytek má 10 až 15 atomů uhlíku, je znám například z DAS 2 229 849.
Nedostatek tohoto známého způsobu spočívá v tom, že v mnoha případech, zejména u silně lipemických sér, vznikají zákaly, jejichž vznik lze odvozovat od uvolněných vyššíoh karboxylových kyselin a které značně ruší optické stanovení. Zásadně je sice možné udržet vyšší karboxylové kyseliny v roztoku přísadou detergentů, avšak při množství detergentů, která jsou pro tento účel nutná, brzdí opět tyto detergenty enzymy. Ze zkoušení obrovského počtu látek s povrchově účinnými vlastnostmi vyplynulo, že žádná z těchto látek není schopna uspokojivě splnit oba požadavky, tj. zabránitl vzniku zákalů a při tom nijak nerušlti aktivitu enzymů.
Z DOS 2 327 894 je již znám způsob zabraňování vzniku zákalů ve vzorcích krve nebo séra, které jsou vyvolávány triglyceridy a tedy ne jejich produkty zmýdelnění. Podle tohoto způsobu se ke vzorku krve nebo séra přidává polyethoxylovaná sloučenina kyseliny laurové s 9 až 20 moly ethylenoxidu. Z pokusů vyplynulo, že pomocí tohoto způsobu není možné zabrániti zákalům, vznikajícím enzymatickým štěpením triglyceridů a kromě toho dochází к brzdění llpolýzy. Uvedená sloučenina je proto pro řešení základního problému nevhodná.
Úlohou vynálezu proto bylo vytvoření způsobu pro stanovení triglyceridů, který by umožnil dokonalé zmýdelnění a stanovení, zabránil zákalům, které vznikají v důsledku se uvolňujících vyšších karboxylových kyselin a který by neovlivňoval nepříznivě aktivitu enzymů.
Tato úloha je vyřešena způsobem stanovení triglyceridů enzymatickým zimýdelněním lipázou, zejména z Rhizopus arrhizus, v přítomnosti karboxylesterázy a alkylsíranu alkalického kovu nebo kovu alkalické zeminy s 10 až 15 atomy uhlíku v alkylovém zbytku podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že se zmýdelnění provádí v přítomnosti sloučeniny obecného vzorce
RO(CH2CH2Oj„H, kde znamenají
R alikylovou nebo alkylenovou skupinu se 14 až 20 atomy uhlíku a n číslo 7 až 20 a glycerin, uvolněný při zmýdelnění se stanoví například fotometricky.
Pro způsob podle vynálezu se s výhodou používá lipáza z Rhizopus arrhizus. Mohou se ale také používat i jiné lipázy, aniž by bylo nutné prodloužit dobu reakce a zvýšit reakční teplotu. Upotřebltelnost lipázy v rámci vynálezu je zčásti také současně určena karboxylesterázou. Jako karboxylesteráza se s výhodou používá známá esteráza z mikroorganismů. Podle patentu NSR číslo 2 229 849 vznikající aktivace lipázy působením alkylsíranu nezůstává při tom pouze zachována, nýbrž se dokonce podaří ještě dále snížit dobu trvání reakce a reakční teplotu oproti způsobu podle citovaného NSR patentu No. 2 229 849.
Způsob podle vynálezu zvyšuje přesnost stanovení. Kromě toho je možné snížit dobu trvání stanovení až na 10 minut a při tom pracoviati při teplotě místnosti.
Stanovení se může provádět pomocí hodnoty slepého vzorku nebo bez ní.
Vynález je dále blíže vysvětlen pomocí následujících příkladů.
Příklad 1
Stanovení za pomoci hodnoty slepého vzorku se provádí následovně:
5,0 ml reakční směsi, sestávající z pufračního roztoku, připraveného z 0,05 M pufru fosforečnanu sodného pH 7,0, obsahujícího 4 mM síranu hořečnatého, z 0,01 % dodecylsíranu sodného a 0,015 % cetylstearylalkoholpolyglykoléteru se 12 M ethylenoxldu, dále sestávající ze směsi koenzymů a to 10 mM NADH, 22 mM sodné soli ATP a 18 mM soli PEP-CHA a ze směsi enzymů, sestávající ze 400 U/ml lipázy (Rhizopus arrhizus), 50 U/ml karboxylesterázy (mikroorganismy), 50 U/ml PK (králičí svaly), 300 U/ml LDH (vepřové srdce) jako suspenze v roztoku síranu amonného, se smísí s 0,1 ml séra. Z této směsi se odeberou 2,0 až 2,5 ml a smísí se s 0,01 ml suspense 150 U/ml glycerokinázy, suspendované v roztoku síranu amonného (vzorkem); zbytek slouží jako slepý vzorek. Oba roztoky se nechají stát asi 10 minut při 20 až 25 °C a měří se extinkce vzorlku proti hodnotě slepého vzorku. Nalezená hodnota se použije pro výpočet.
Stanovení bez použití hodnoty slepého vzorku:
2,5 ml reakční směsi stejného složení jako v předchozím případě se smísí s 0,05 ml séra, nechá se stát asi 10 minut při 20 až 25 °C a potom se odečte extinkce tohoto roztoku. Potom se přimíchá 0,01 ml suspense 150 U/ml glycerinkinázy, suspendované v roztoku síranu amonného a po 10 minutách se odečte extinkce. Rozdíl obou měření se použije pro výpočet. Měření se provádí ve fotometru při 365 nm, 340 nm nebo 334 nm.
Výpočet se provádí vždy podle naměřené vlnové délky násobením rozdílu extinkce 15,5 (365 nm), popřípadě 8,23 (340 nm) nebo 8,53 (334 nm), přičemž výsledek se získá v mmolech triglyceridů na litr vizorku.
Opakování stanovení s rozdílným množstvím triglyceridu v séru se získá přímka. Úměrnost r (korelační koeficient) = 0,997.
Příklad 2
Pro srovnání způsobu podle vynálezu se způsobem podle NSR patentu No. 2 229 849 byly provedeny následující pokusy: Pokusy 1 a 2
Smísilo se
4,9 ml složky 1 z příkladu 1 patentu No. 2 229 849 (0,1 M triethanolového pufru pH 7,6, obsahujícího 3 mM síranu hořečnatého, 1,5 mg albuminu hovězího séra/ /ml a 0,1 mg natriumdodecylsulfátu/ml),
0,2 ml složky 2 podle příkladu 1 NSR pat. No. 2 229 849 (6 mM NADH, 33 mM ATP a 11 nM PEP v destilované vodě)
0,1 ml složky 3 a 4 podle příkladu 1 z pat. No. 2 229 849 (krystalické suspenze 2 mg LDH/rnl a 1 mg PK/ml = složka 3 a roztoku 0,2 mg lipázy z Rhizopus arrhizus/ /ml a 4,0 mg karboxylesterázy/ml = složka 4)
0,1 ml séra (asi 500 mg % triglyceridu).
Z tohoto roztoku bylo dáno do kyvety 1
2,5 ml, zbytek byl dán do kyvety 2.
Pokusy 3 a 4 ml složky z příkladu 1 sestávající z pufračního roiztoku, připraveného z 0,05 M pufru fosforečnanu sodného pH 7,0, obsahujícího 4 mM síranu horečnatého, z 0,01 % dodecylsíranu sodného a 0,015 % cetylstearylalkoholpolyglykoléteru se 12 M ethylenoxidu,
0,1 ml směsi koenzymů 10 mM NADH, 22 mM sodné soli ATP a 18 mM soli PEP-CHA
0,1 ml směsi enzymů 400 U/ml lipázy (Rhizopus arrhizus), 50 U/ml karboxylesterá zy (mikroorganismy), 50 U/ml PK (králičí svaly), 300 U/ml LDH (vepřové srdce) ve formě suspenze v roztoku síranu amonného)
0,1 ml séra (jako u pokusu 1 a 2).
Ze získaného roztoku bylo dáno 2,5 ml do kyvety 3 a zbytek byl dán do kyvety 4.
Asi po 20 minutách se do kyvety 1 a 3 napípetovalo 0,01 ml suspenze glycerinkinázy. Kyvety 2 a 4 se ponechaly jako hodnoty slepého vzorku.
Výsledky:
1. opětné zjištění po vyhodnocení slepých vzorků:
kyveta 1/2 517 mg triglyceridu (100 ml séra) ipo 10 minutách kyveta 3/4 508 mg triglyceridu (100 ml séra) opětné zjištění po vyhodnocení bez slepého vzorku:
kyveta 1 477 mg triglyceridu (100 ml séra) po 10 minutách kyveta 3 513 mg triglyceridu (100 ml séra)
Pomocí činidla podle vynálezu byly naměřeny prakticky stejné hodnoty bez přihlédnutí a s přihlédnutím na hodnotu slepého vzorku.
Pomocí činidla podle NSR patentu No. 2 229 849 byly získány odchylné výsledky (způsobeno vznikajícími zákaly); rozdíl činí v předloženém případě asi 8 °/o.
2. Zákal
Bezprostředně po přídavku vzorku byly všechny pokusné vsázky téměř čiré. V kývete 1 a 2 vznikl po 5 minutách zřetelný zákal. V kyvetě 3 a 4 došlo po 1/2 minutě к vyjasnění. Po 55 minutách byl roztok v kyvetě 4 stále ještě čirý, v kyvetě 2 velmi zakalený.
Claims (1)
- Způsob stanovení triglyceridů enzymatickým zmýdelněním lipázou, zejména lipázou z Rhizopus arrhizus, v přítomnosti karboxylestrázy a alkylsíranu alkalického kovu nebo kovu alkalické zeminy s 10 až 15 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, vyznačující se tím, že se zmýdelnění provádí v přítomnosti sloučeniny obecného vzorce vynalezuRO(CH2CH2O)nH, kde znamenajíR alkylovou nebo alkylenovou skupinu se 14 až 20 atomy uhlíku a n číslo 7 až 20 a glycerin, uvolněný při zmýdelnění, se stanoví například fotometricky.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19752535953 DE2535953C2 (de) | 1975-08-12 | Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Triglyceriden |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS219875B2 true CS219875B2 (en) | 1983-03-25 |
Family
ID=5953826
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS766611A CS219875B2 (en) | 1975-08-12 | 1976-07-06 | Method of fixing the triglycerine |
| CS764473A CS219874B2 (en) | 1975-08-12 | 1976-07-06 | Agent for fixing the triglycerine |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS764473A CS219874B2 (en) | 1975-08-12 | 1976-07-06 | Agent for fixing the triglycerine |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4066508A (cs) |
| JP (1) | JPS5223110A (cs) |
| AT (1) | AT354406B (cs) |
| BE (1) | BE845042R (cs) |
| CA (1) | CA1057179A (cs) |
| CH (1) | CH607028A5 (cs) |
| CS (2) | CS219875B2 (cs) |
| DD (1) | DD126398A6 (cs) |
| DK (1) | DK144856C (cs) |
| FR (1) | FR2321126A2 (cs) |
| GB (1) | GB1502204A (cs) |
| HU (1) | HU175208B (cs) |
| IT (1) | IT1065064B (cs) |
| NL (1) | NL7608735A (cs) |
| SE (1) | SE420216B (cs) |
| SU (1) | SU641884A3 (cs) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4195126A (en) * | 1977-10-04 | 1980-03-25 | The Board Of Trustees Of The University Of Alabama | Albumin-dye complex for fatty acid determination |
| US4223090A (en) * | 1978-07-13 | 1980-09-16 | American Hospital Supply Corporation | Reagents for the enzymatic determination of triglycerides |
| US4254222A (en) * | 1978-07-19 | 1981-03-03 | Owen Oliver E | Semi-quantitative assay of lactic acid and β-hydroxy butyrate |
| DE2839433A1 (de) * | 1978-09-11 | 1980-03-20 | Merck Patent Gmbh | Waessrige lipid-standardloesung und verfahren zu ihrer herstellung |
| US4394445A (en) * | 1979-02-22 | 1983-07-19 | Nix Paul T | Enzymatic glyceride hydrolysis |
| US4259440A (en) * | 1979-05-21 | 1981-03-31 | Miles Laboratories, Inc. | Hydrolysis and assay of triglycerides |
| DE3007764A1 (de) * | 1980-02-29 | 1981-10-15 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagens zur bestimmung der beta -lipoproteine |
| US4309502A (en) * | 1980-06-30 | 1982-01-05 | Beckman Instruments, Inc. | Enzymatic assay for glycerol and triglycerides and a reagent for use therein |
| US4338395A (en) * | 1980-07-21 | 1982-07-06 | Technicon Instruments Corporation | Method for the analysis of triglycerides |
| JPS5754599A (en) * | 1980-07-22 | 1982-04-01 | Baker Instr Corp | Improved glycerol detecting reagent |
| US4503146A (en) * | 1980-10-01 | 1985-03-05 | Technicon Instruments Corporation | Method for eliminating turbidity in a biological fluid and reagent therefor |
| JPS59173080A (ja) * | 1983-03-19 | 1984-09-29 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | リパ−ゼの安定化方法 |
| US5310679A (en) * | 1985-05-13 | 1994-05-10 | Artiss Joseph D | Composition for reducing turbidity in samples of biological fluids |
| US4626511A (en) * | 1985-05-13 | 1986-12-02 | Wayne State University | Composition for reducing turbidity in samples of biological fluids |
| GB8514708D0 (en) * | 1985-06-11 | 1985-07-10 | Unilever Plc | Enzymatic detergent composition |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3853465A (en) * | 1972-06-09 | 1974-12-10 | Technicon Instr | Turbidity reduction in serum and plasma samples using polyoxyethylated lauric acid compounds |
| AT324282B (de) * | 1972-06-19 | 1975-08-25 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagens zur bestimmung von triglyceriden |
| US4011045A (en) * | 1975-02-14 | 1977-03-08 | Bonderman Dean P | Turbidity reduction in triglyceride standards |
| US4012287A (en) * | 1975-11-18 | 1977-03-15 | Dr. Bruno Lange Gmbh | Method and reagent for the quantitative analysis of triglycerides |
-
1976
- 1976-06-08 AT AT416376A patent/AT354406B/de not_active IP Right Cessation
- 1976-06-10 GB GB24061/76A patent/GB1502204A/en not_active Expired
- 1976-07-06 CS CS766611A patent/CS219875B2/cs unknown
- 1976-07-06 CS CS764473A patent/CS219874B2/cs unknown
- 1976-07-07 CA CA256,485A patent/CA1057179A/en not_active Expired
- 1976-07-21 US US05/707,455 patent/US4066508A/en not_active Expired - Lifetime
- 1976-07-22 DK DK331776A patent/DK144856C/da not_active IP Right Cessation
- 1976-07-26 IT IT25712/76A patent/IT1065064B/it active
- 1976-07-30 SU SU762386217A patent/SU641884A3/ru active
- 1976-08-06 FR FR7624214A patent/FR2321126A2/fr active Granted
- 1976-08-06 NL NL7608735A patent/NL7608735A/xx not_active Application Discontinuation
- 1976-08-09 CH CH1014376A patent/CH607028A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-08-10 DD DD194266A patent/DD126398A6/xx unknown
- 1976-08-10 SE SE7608919A patent/SE420216B/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-08-10 BE BE169690A patent/BE845042R/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-08-11 HU HU76BO1627A patent/HU175208B/hu unknown
- 1976-08-12 JP JP51096608A patent/JPS5223110A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4066508A (en) | 1978-01-03 |
| JPS5223110A (en) | 1977-02-21 |
| AT354406B (de) | 1979-01-10 |
| IT1065064B (it) | 1985-02-25 |
| GB1502204A (en) | 1978-02-22 |
| CA1057179A (en) | 1979-06-26 |
| CS219874B2 (en) | 1983-03-25 |
| FR2321126A2 (fr) | 1977-03-11 |
| DD126398A6 (cs) | 1977-07-13 |
| DK331776A (da) | 1977-02-13 |
| BE845042R (fr) | 1977-02-10 |
| FR2321126B2 (cs) | 1980-10-10 |
| SU641884A3 (ru) | 1979-01-05 |
| SE420216B (sv) | 1981-09-21 |
| CH607028A5 (cs) | 1978-11-30 |
| ATA416376A (de) | 1979-06-15 |
| HU175208B (hu) | 1980-06-28 |
| DK144856C (da) | 1982-11-08 |
| DK144856B (da) | 1982-06-21 |
| NL7608735A (nl) | 1977-02-15 |
| SE7608919L (sv) | 1977-02-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0019253B1 (en) | Test device, composition and method for the determination of triglycerides | |
| CS219875B2 (en) | Method of fixing the triglycerine | |
| CA1125151A (en) | Triglycerides assay and reagents therefor | |
| US3862009A (en) | Determination of triglycerides | |
| CA1148456A (en) | Process and reagent for determining triglycerides | |
| EP0713093B1 (en) | Improved methodology for colorimetrically determining the concentration of white blood cells in a biological fluid | |
| Webb | The action of alkyl fluorophosphonates on esterases and other enzymes | |
| US4056442A (en) | Lipase composition for glycerol ester determination | |
| IL38235A (en) | Triglyceride hydrolysis and assay | |
| US4394445A (en) | Enzymatic glyceride hydrolysis | |
| US4223090A (en) | Reagents for the enzymatic determination of triglycerides | |
| US4503146A (en) | Method for eliminating turbidity in a biological fluid and reagent therefor | |
| US4022667A (en) | Substrate solution for carboxylic ester hydrolase determination | |
| US4212939A (en) | Substrate solution for carboxylic ester hydrolase determination | |
| US4816411A (en) | Method for eliminating turbidity in a biological fluid and reagent therefor | |
| US4279994A (en) | Lipase determination method and reagent | |
| US4206280A (en) | Determination of acid phosphatase | |
| JPH0151782B2 (cs) | ||
| JPH0367600A (ja) | リパーゼ定量用単一試薬系およびその製造方法 | |
| EP0045032B1 (en) | A triglyceride analysis composition and a method for triglyceride determination | |
| CA1201047A (en) | Method for quantitative measurement of phosphatidyl glycerol | |
| EP0019875B1 (en) | Method for assaying fatty acids | |
| JPH0549279B2 (cs) | ||
| SU505382A3 (ru) | Способ определени триглицеридов в веществах | |
| GB2050601A (en) | An Improved Triglycerides Assay and Reagents Therefor |