CS219874B2 - Agent for fixing the triglycerine - Google Patents

Agent for fixing the triglycerine Download PDF

Info

Publication number
CS219874B2
CS219874B2 CS764473A CS447376A CS219874B2 CS 219874 B2 CS219874 B2 CS 219874B2 CS 764473 A CS764473 A CS 764473A CS 447376 A CS447376 A CS 447376A CS 219874 B2 CS219874 B2 CS 219874B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
lipase
buffer
alkyl
determination
triglycerides
Prior art date
Application number
CS764473A
Other languages
English (en)
Inventor
Elli Rauscher
Erich Bernt
Wolfgang Gruber
Helmut Determann
Original Assignee
Boehringer Mannheim Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE19752535953 external-priority patent/DE2535953C2/de
Application filed by Boehringer Mannheim Gmbh filed Critical Boehringer Mannheim Gmbh
Publication of CS219874B2 publication Critical patent/CS219874B2/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/61—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving triglycerides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/911—Microorganisms using fungi
    • Y10S435/939—Rhizopus

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Fats And Perfumes (AREA)

Description

Vynález se týká činidla pro stanovení tri• glyceridů na bázi enzymatického, zmýdelnění lipázou.
Činidlo podle vynálezu obsahuje , jako ak« tivní ,látku sloučeninu obecného ·. vzorce
RO(CH2CHžO)2H, kde znamenají · R alkylovou ’ nebo alkylenovou skupinu se ' , 14 až ' 20 atomy uhlíku a n číslo 7 až 20, v množství 0,005 až 0,2 % hmot., s výhodou 0,02 až 0,03 % hmot., vztaženo na objem ' pufračního roztoku, s výhodou 0,02 až 0,1 M natriumfosforečnanového pufru s hodnotou pH 6,5 až 8,0.
Vynález se týká činidla ke stanovení triglyceridů. Stanovení triglyceridů enzymatickým zmýdelněním pomocí lipázy z Rhizopus arrhizus a měřením uvolněného glycerinu se až dosud provádělo v přítomnosti karboxylesterázy a alikylsíranu alkalického kovu . nebo kovu alkalických zemin, s 10 až 15 atomy uhlíku v alkylovém zbytku.
Při tomto stanovení dochází v mnoha případech, zejména u silně lipemických sér, k tvorbě zákalů. Jejich vznik lze odvozovat od uvolněných vyšších karboxylových kyselin. Tyto zákaly ruší optické stanovení. Je sice možné udržet karboxylové kyseliny v roztoku přísadou detergentů, ale v případě, že je nutné použít větší množství detergentů, dochází . k brzdění aktivity enzymů. Ze zkoušení obrovského počtu látek s povrchově aktivním účinkem vyplynulo, že žádná z těchto látek není schopna uspokojivě splnit oba požadavky kladené na činidlo pro . stanovení triglyceridů, tj. zabrániti zákalům a při tom nerušiti nijak aktivitu enzymů.
Z DOS 2 327 894 je známé přidávat ke vzorku polyetoxylovanou sloučeninu kyseliny laurové s 9 až 20 moly ethylenoxidu. Z pokusů vyplynulo, že pomocí tohoto prostředku · -není · možné zabránit zákalům, vznikajícím enzymatickým štěpením triglyceridů a kromě toho dochází k . brzdění lipázy. Uvedená sloučenina je proto pro řešení základního problému nevhodná.
Úlohou vynálezu proto je vytvořit činidlo pro stanovení triglyceridů, které by umožňovalo dokonalé zmýdelnění a stanovení, zabránilo zákalům, které vznikají v důsledku se uvolňujících vyšších karbocylových kyselin a neovlivňovalo nepříznivě aktivitu enzymů.
Tato úloha je podle vynálezu vyřešena činidlem pro stanovení triglyceridů na bázi enzymatického zmýdelnění lipázou, obsahující lipázu, zejména z Rhizopus arrhizus, karboxylesterázu, alkylsíran alkalického kovu nebo kovu alkalické zeminy, s 10 až 15 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, pufr a systém k důkazu glycerinu, jehož podstata spočívá v tom, že jako aktivní látku obsahuje sloučeninu obecného vzorce
ROjCH2CHaOjnH ve kterém znamenají
R alkylovou nebo alkylenovou skupinu se 14 až 20 atomy uhlíku a n · číslo 7 až 20 v množství 0,005 až 0,2 % hmot., s výhodou 0,01 až 0,03 · % hmot., vztaženo na objem pufračního· reztoku, s výhodou 0,02 až 0,1 M natriumfosforečnanového pufru s hodnotou pH 6,5 až 8.
Pro činidlo podle vynálezu se s výhodou používá lipáza z Rhizopus arrhizus. Mohou se ale také používat i jiné lipázy, aniž by bylo nutné prodloužit dobu trvání reakce a zvýšit reakční teplotu. Upotřebitelnost lipázy v rámci vynálezu je zčásti také určena současně karboxylesterázou. Jako karboxylesteráza se s výhodou používá známá esteráza z mikroorganismů. Podle něm. patentu No. 2 229 849 vznikající aktivace lipázy působením alkylsíranu nezůstává při tom pouze zachována, nýbrž se dokonce daří ještě dále snížit dobu trvání reakce a reakční teplotu oproti způsobu podle něm. patentu No. 2 229 849.
Podle vynálezu jsou výhodné sloučeniny obecného vzorce ROJCHaCHžO JnH, ve kterém n znamená číslo 9 až 15. Nejvýhodnější jsou pak ty kde n = 12. <
Sloučeniny shora uvedeného obecného vzorce se používají s výhodou v množstvích od 0,005 až 0,2 % hmot., vztaženo na -objem pufračního roztoku. Obzvláště výhodná jsou množství od 0,01 až do 0,03 % hmot.
Jinak ostatní přísady zůstávají podle shora citovaného patentu v podstatě nezměněné. Přísada albuminu séra, zejména albuminu hovězího· -séra je výhodná, když vzorek neobsahuje triglyceridy, asociované z proteinu.
Na rozdíl od cit patentu No. 2 229 849 je u činidla podle vynálezu vhodný fosforečnanový pufr a je dokonce výhodný. Jako obzvláště výhodné se ukázalo být použití 0,02 až 0,1 M fosforečnanového pufru pH 6,5 až 8,0.
Pro důkaz glycerinu lze stejně jako v případě patentu No. 2 229 849 použít každý systém, s výhodou ale analytický systém, který sestává z nikotinamidadenindinukleotidu v - redukované · formě (NADH), · adeno- · sintrifosforečnanu (ATP), fosfoenolpyruvátu (PEP), laktátdehydrogenázy (LDH), fosfoenolkinázy · (PK), glycerinkinázy (GK), » jakož i iontů hořčíku a pufru.
V rámci výhodné kombinace činidel sestává obzvláště vhodné činidlo z:
SOfe#®’4
0,1 až 10,0 mg/mil lipázy z Rhizopus arrhizus,
0,01 až 20,0 mg/ml karboxylesterázy z mikroorganismů,
0,01 až 0,2 mg/ml dodecylsíranu sodného,
0,015 až 0,3 mg/ml cetylstearylpolyglykoléter se 12 moly ethylenoxidu, až 20 mM nikotinamidadenindinukleotidu v redukované formě (NADH), až 100 mM adenosintrifosforečnanu (ATP), až 20 mM fosfoenolpyruvátu (PEP),
0,5 až 5 mg/ml laktátdehydrogenázy (LDH),
0,2 až 5 mg/ml fosfoenolkinázy (PK), 0,05 až 10 mg glycerinkinázy (GK), 0,1 až 2,0 mg/ml albuminu séra, až 30 mM hořčíkových iontů a
0,012 až 0,3 M pufračního roztoku pH 6 až 9.
Následující příklady vysvětlují dále vynález.
Příklad 1
Činidlo podle vynálezu se vyrobí z:
1. pufračního roztoku:
0,05 M pufru fosforečnanu sodného pH 7,0, obsahujícího 4 mM síranu horečnatého,
0,01 % dodecylsíranu sodného
0,015 % cetylstearylalkoholpolyglykoléteru se 12 M etylenoxidu
2. směsi koenzymů:
mM nikotinamidadenindinukleotidu v redukované formě (NADH), mM sodné soli adenosintrifosforečnanu (ATP), mM soli PEP—CHA
3. směsi enzymů:
400 U/ml lipázy (Rhizopus arrhizus)
U/ml karboxylesterázy (mikroorganismy)
U/ml fosfosnolkinázy (PK) králičí svaly
300 U/ml laktátdehydrogenázy (LDH) vepřové srdce) jako suspenzi v roztoku síranu amonného
4. 150 U/ml glycerokinázy, suspendované v roztoku síranu amonného.
Směsi 1 až 4 jsou při + 4 °C trvanlivé nejméně 1 rok. Směs 2 je po rozpuštění při této teplotě trvanlivá asi 2 týdny.
Z činidel 1 až 3 se vyrobí reakční směs, která ochlazena vydrží asi 2 dny. Směs 2 se za tímto účelem rozpustí předem v destilované vodě. Pro hotovou reakční směs se potom roztoky 1 a 2 a susspense 3 smísí v objemovém poměru 50 : 1,0 : 1,0.
Stanovení se může provádět pomocí hodnoty slepého vzorku:
Stanovení se může provádět pomocí hodnoty slepého vzorku nebo bez ní.

Claims (1)

  1. PŘEDMĚT VYNALEZU
    Činidlo pro stanovení triglyceridů na bázi enzymatického zmýdelnění lipáizou, obsahující lipázu, zejména z Rhizopus arrhizus, karboxylesterázu, alkylsíran alkalického kovu nebo kovu alkalické zeminy s 10 až 15 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, pufr a systém к důkazu glycerinu, vyznačující se tím, že jako aktivní látku obsahuje sloučeninu obecného vzorce
    RO(CH2'CH2O)nH kde znamenají
    R alkylovou nebo alkylenovou skupinu se 14 až 20 atomy uhlíku a n číslo 7 až 20 v množství 0,005 až 0,2 % hmot., s výhodou 0,02 až 0,03 % hmot., vztaženo na objem pufračního roztoku, s výhodou 0,02 až 0,1 M natriumfosforečnanového pufru s hodnotou pH 6,5 až 8,0.
CS764473A 1975-08-12 1976-07-06 Agent for fixing the triglycerine CS219874B2 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19752535953 DE2535953C2 (de) 1975-08-12 Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Triglyceriden

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS219874B2 true CS219874B2 (en) 1983-03-25

Family

ID=5953826

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS766611A CS219875B2 (en) 1975-08-12 1976-07-06 Method of fixing the triglycerine
CS764473A CS219874B2 (en) 1975-08-12 1976-07-06 Agent for fixing the triglycerine

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS766611A CS219875B2 (en) 1975-08-12 1976-07-06 Method of fixing the triglycerine

Country Status (16)

Country Link
US (1) US4066508A (cs)
JP (1) JPS5223110A (cs)
AT (1) AT354406B (cs)
BE (1) BE845042R (cs)
CA (1) CA1057179A (cs)
CH (1) CH607028A5 (cs)
CS (2) CS219875B2 (cs)
DD (1) DD126398A6 (cs)
DK (1) DK144856C (cs)
FR (1) FR2321126A2 (cs)
GB (1) GB1502204A (cs)
HU (1) HU175208B (cs)
IT (1) IT1065064B (cs)
NL (1) NL7608735A (cs)
SE (1) SE420216B (cs)
SU (1) SU641884A3 (cs)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4195126A (en) * 1977-10-04 1980-03-25 The Board Of Trustees Of The University Of Alabama Albumin-dye complex for fatty acid determination
US4223090A (en) * 1978-07-13 1980-09-16 American Hospital Supply Corporation Reagents for the enzymatic determination of triglycerides
US4254222A (en) * 1978-07-19 1981-03-03 Owen Oliver E Semi-quantitative assay of lactic acid and β-hydroxy butyrate
DE2839433A1 (de) * 1978-09-11 1980-03-20 Merck Patent Gmbh Waessrige lipid-standardloesung und verfahren zu ihrer herstellung
US4394445A (en) * 1979-02-22 1983-07-19 Nix Paul T Enzymatic glyceride hydrolysis
US4259440A (en) * 1979-05-21 1981-03-31 Miles Laboratories, Inc. Hydrolysis and assay of triglycerides
DE3007764A1 (de) * 1980-02-29 1981-10-15 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren und reagens zur bestimmung der beta -lipoproteine
US4309502A (en) * 1980-06-30 1982-01-05 Beckman Instruments, Inc. Enzymatic assay for glycerol and triglycerides and a reagent for use therein
US4338395A (en) * 1980-07-21 1982-07-06 Technicon Instruments Corporation Method for the analysis of triglycerides
JPS5754599A (en) * 1980-07-22 1982-04-01 Baker Instr Corp Improved glycerol detecting reagent
US4503146A (en) * 1980-10-01 1985-03-05 Technicon Instruments Corporation Method for eliminating turbidity in a biological fluid and reagent therefor
JPS59173080A (ja) * 1983-03-19 1984-09-29 Nippon Oil & Fats Co Ltd リパ−ゼの安定化方法
US5310679A (en) * 1985-05-13 1994-05-10 Artiss Joseph D Composition for reducing turbidity in samples of biological fluids
US4626511A (en) * 1985-05-13 1986-12-02 Wayne State University Composition for reducing turbidity in samples of biological fluids
GB8514708D0 (en) * 1985-06-11 1985-07-10 Unilever Plc Enzymatic detergent composition

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3853465A (en) * 1972-06-09 1974-12-10 Technicon Instr Turbidity reduction in serum and plasma samples using polyoxyethylated lauric acid compounds
AT324282B (de) * 1972-06-19 1975-08-25 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren und reagens zur bestimmung von triglyceriden
US4011045A (en) * 1975-02-14 1977-03-08 Bonderman Dean P Turbidity reduction in triglyceride standards
US4012287A (en) * 1975-11-18 1977-03-15 Dr. Bruno Lange Gmbh Method and reagent for the quantitative analysis of triglycerides

Also Published As

Publication number Publication date
US4066508A (en) 1978-01-03
JPS5223110A (en) 1977-02-21
AT354406B (de) 1979-01-10
IT1065064B (it) 1985-02-25
GB1502204A (en) 1978-02-22
CA1057179A (en) 1979-06-26
CS219875B2 (en) 1983-03-25
FR2321126A2 (fr) 1977-03-11
DD126398A6 (cs) 1977-07-13
DK331776A (da) 1977-02-13
BE845042R (fr) 1977-02-10
FR2321126B2 (cs) 1980-10-10
SU641884A3 (ru) 1979-01-05
SE420216B (sv) 1981-09-21
CH607028A5 (cs) 1978-11-30
ATA416376A (de) 1979-06-15
HU175208B (hu) 1980-06-28
DK144856C (da) 1982-11-08
DK144856B (da) 1982-06-21
NL7608735A (nl) 1977-02-15
SE7608919L (sv) 1977-02-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CS219874B2 (en) Agent for fixing the triglycerine
US4259440A (en) Hydrolysis and assay of triglycerides
US3862009A (en) Determination of triglycerides
Mersmann Lipoprotein and hormone-sensitive lipases in porcine adipose tissue
CA1148456A (en) Process and reagent for determining triglycerides
Webb The action of alkyl fluorophosphonates on esterases and other enzymes
KR870003205A (ko) Hdl 콜레스테롤의 정량 방법 및 제제
Gilder et al. A BIOCHEMICAL AND CYTOCHEMICAL STUDY OF ADENOSINE TRIPHOSPHATASE ACTIVITY IN THE PHLOEM OF NICOTIAN A TABACUM
US3898130A (en) Rapid enzymatic hydrolysis of triglycerides
CA1144051A (en) Method for the analysis of triglycerides
US4223090A (en) Reagents for the enzymatic determination of triglycerides
US4503146A (en) Method for eliminating turbidity in a biological fluid and reagent therefor
Kalf et al. Benzene inhibits RNA synthesis in mitochondria from liver and bone marrow
Jones et al. Oxidative metabolic activity of boar spermatozoa: a system for assessing anti-glycolytic activity of potential inhibitors in vitro
US4816411A (en) Method for eliminating turbidity in a biological fluid and reagent therefor
Patel et al. Peroxisomal localization of glucose-6-phosphate dehydrogenase and pyrophosphate-stimulated dihydroxyacetone-phosphate acyltransferase in mouse kidney
JPH0474000B2 (cs)
CA2017509C (en) Lipase single reagent system
JP4013108B2 (ja) リパーゼの安定化方法
Sandoval et al. ATP-diphosphohydrolase activity in rat renal microvillar membranes and vascular tissue
EP0019875B1 (en) Method for assaying fatty acids
Hutton et al. Inhibition of glycolysis in boar sperm by α-chlorohydrin
EP0045032B1 (en) A triglyceride analysis composition and a method for triglyceride determination
Cockburn et al. Starvation reduces pyruvate dehydrogenase phosphate phosphatase activity in rat kidney
SU505382A3 (ru) Способ определени триглицеридов в веществах