CS218198B1 - Spósob přípravy kyselin D-galaktopyranurónovej, digalakturónovej a trigalakturónovej - Google Patents

Description

Vynález sa týká spósobu přípravy kyselin D-galaktopyranurónovej, digalakturónovej a trigalakturónovej.

Podstata vynálezu spočívá v tom, že sa pektan sodný degraduje za katalytického účinku endopoíygalakturonázy ireverzibilné imobilizovanej na polymérnu látku typu polykondenzátu na báze diolov a dikarboxylových kyselin. Látky připravené podlá vynálezu majú použitie pri izolácii a charakterizácii pektolytických enzýmov. 218198 2

Vynález sa týká spósobu selektívnej produkcie kyselin D-galaktopyranurónovej, digalakťurónovej a trigalakturónovej enzýmovou hydrolýzou pektanu sodného. Uvedené látky sa používajú pri izolácii a charakterizaci! pektolytických enzýmov; kyselina D-galaktopyranurónová ako štandarda pri stanovovaní aktivity polygalakturonáz, kyselina digalakturónová ako substrát exopolygalakturonázy a kyselina trigalakturónová po kovalentnom naviazaní na nerozpustný nosič ako špecifická afinanta pre selektívnu izoláciu endopolygalakturonázy.

Doteraz známe spósoby získavania týchto látok sa zakladajú na parciálnej hydrolýze kyseliny pektovej uskutočňovanej v kyslom prostředí pri vysokej teplote, alebo za miernejších podmienok v roztokoch obsahujúcich pektolytické enzýmy endopolygalakturonázu a exopolygalakturonázu. Obecnou nevýhodou týchto postupov je, že pri obidvoch spósoboch degradácie vzniká zmes oligogalakturónových kyselin so širokým rozpátím stupňa polymerizácie, v dósledku čoho sú výtažky uvedených troch sacharidov nízké a ich oddelenie z reakčnej zmési obtiažné. Produkciu oligogalakturónových kyselin so stupňom polymerizácie vyšším ako 3 je možné potlačiť ak sa enzýmová degradácia uskuteční endopolygalakturonázou kovalentne imobilizovanou na Sepharózu, celulózu, alebo sklo. Nevýhodou použitia takto imobílizovaných enzýmov je nízká operačná stabilita, súvisiaca s postupným uvolňováním enzymu z nerozpustného nosiča do roztoku, ako aj operačná a materiálová náročnost přípravy týchto imobilizovaných enzýmových preparátov.

Uvedené nedostatky dosial’ známého spósobu získavania uvedených látok parciálnou hydrolýzou kyseliny pektovej sa odstraňujú postupom podl’a vynálezu. Jeho podstatou je, že sa pektan sodný degraduje za katalytického účinku endopolygalakturonázy ireverzibilne imobilizovanej na polymérnu látku typu polykondenzátu na báze diolov a dikarboxylových kyselin, s výhodou na polyetyléntereftalát. Základný účinok spósobu přípravy uvedených látok podía vynálezu spočívá v selektívnej produkcii přibližné ekvimolárnej zmesi kyselin D-galaktopyranurónovej, digalakturónovej a trigalakturónovej, podmieňujúcej vysoké výtažky a možnost jednoduchej separácie týchto látok chromatografiou na vymieňačoch iónov, alebo molekulových sitách. Dalšou výhodou spósobu podía vynálezu je možnosť mnohonásobné opakovaného použitia mobilizovaného enzýmu, kontinuálně ale- bo diskontinuálne, daného neobyčajne vysokou operačnou stabilitou zakotvenia. Spósob podía vynálezu ďalej umožňuje uskutočnenie imobilizácie enzýmu, ako aj degradácie substrátu v jednom operačnom stupni, za rovnakých reakoných podmienok, bez kontaminácie reakčnej zmesi chemikáliami na imobilizácu.

Spósob přípravy galakturónových kyselin podía vynálezu je vysvětlený na nasledujúcich príkladoch jeho prevedenia. Příklad 1 1 g preparátu imobilizovanej endopolygalakturonázy připraveného adsorpciou enzýmu na polyetyléntereftalát sa suspenduje v 0,1 M octanovom tlmivom roztoku o pH odpovedajúcom pH optimu použitého enzýmu, najčastejšie 3,8 až 4,6. Suapenzia sa zmieša s roztokom pektanu sodného v rovnakom tlmivom roztoku a zmes sa inkubuje za miešania pri teplote nepřesahujúcej 45 °C dovtedy, kým sa štiepia glykozidieké vazby substrátu. Po skončení reakcie sa gél mobilizovaného enzýmu oddělí filtráciou alebo centrifugáciou a móže sa použiť k degradácii ďalšej dávky substrátu. V roztoku přítomné produkty degradácie — kyseliny D-galáktopyranurónová, digalakturónová a trigalakturónová sa po zahuštění separujú obvyklým spósobom, napr. chromatografiou na vymieňačoch iónov, alebo na molekulovom site. Příklad 2 1 g polyetyléntereftalátu sa suspenduje v 0,1 M octajnovom tlmivom roztoku o pH odpovedajúcom pH optimu použitej endopolygalakturonázy, 'najčastejšie pH 3,8 až 4,6 a naplní sa do chromatografiekej kolonky. Cez štipec gelu sa najskór přefiltruje roztok obsahujúci endopolygalakturonázu a potom sa, ňou nechá pretekať roztok pektanu sodného v tom istom tlmivom roztoku. Efluent z kolonky sa zahustí a produkty enzýmovej degradácie, ktorými sú kyseliny D-galaktopyranurónová, digalakturónová a trigalakturónová sa separuje ako je uvedené v příklade 1. Výťažky selektívne produkovaných kyselin D-galaktopyranurónovej, digalakturónovej a trigalakturónovej sú závislé na stupni degradácie substrátu, którý je daný ako pri kontinuálnom, tak pri diskontinuálnom spósobe degradácie dlžkou doby styku pektanu sodného s mobilizovaným enzýmom.

Claims (1)

1. PREDMET VYNALEZU Spósob přípravy kyselin D-galaktopyranurónovej, digalakturónovej a trigalakturónovej parciálnou hydrolýzou kyseliny pektovej vyznačujúci sa tým, že sa pektan sodný degraduje za katalytického účinku endopolygalak- turonázy ireverzibilne imobilizovanej na polymérnu látku typu polykondenzátu na báze diolov a dikarboxylových kyselin, s výhodou na polyetyléntereftalát.