CS211239B1 - Způsob přípravy koncentrovaných puntíkovaných roztoků sérových imunoglobulinů skupiny G, A, M - Google Patents

Způsob přípravy koncentrovaných puntíkovaných roztoků sérových imunoglobulinů skupiny G, A, M Download PDF

Info

Publication number
CS211239B1
CS211239B1 CS469980A CS469980A CS211239B1 CS 211239 B1 CS211239 B1 CS 211239B1 CS 469980 A CS469980 A CS 469980A CS 469980 A CS469980 A CS 469980A CS 211239 B1 CS211239 B1 CS 211239B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
group
solution
immunoglobulin
immunoglobulins
concentration
Prior art date
Application number
CS469980A
Other languages
English (en)
Inventor
Ivan Stepanek
Original Assignee
Ivan Stepanek
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ivan Stepanek filed Critical Ivan Stepanek
Priority to CS469980A priority Critical patent/CS211239B1/cs
Publication of CS211239B1 publication Critical patent/CS211239B1/cs

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Přípravě koncentrovaných petrifikovaných roztoků sérových imunoglobulinů skupiny G, A, M se týká diagnostické a terapeutické imunologie a je založena na tom, že při stacionárním zmrazení při -5 až -50 ¾ po dobu 2 až 24 hodin a stacionárním rozmražení při +5 ΐ až + 20 T po dobu 2 až 48 hodin vzniká v roztoku imunoglobulinů skupiny G, A, M koncentrační gradient v důsledku čeho ve spodní části nádoby se bude nacházet zakoncentrovaný roztok, který se vypouětí a dále zpracovává sterilní filtrací. Proces zmrazení a rozmražení lze podle potřeby opakovat. Purifikované imunoglobuliny skupiny G, A, M se rozpouští v apyrogenní vodě na koncentraci bílkovin 8 ± 2 % při hodnotě pH 4,0 až 8,0. Po odstranění nízkomolekúlámích sloučenin z imunoglobulinového roztoku skupiny G, A, M pomocí průtokové dialysy anebo gelové filtrace proti 0,1 až 1,0 procentnímu roztoku chloridu sodného y destilované apyrogenní vodě o teplotě 0 % až +6 X se provádí jeho sterilizace filtrací a naplnění kolony je možné do 75 % objemu.

Description

Vynález se týká způsobu přípravy koncentrovaných purifikovaných roztoků sérových imunoglobulinů skupiny G, A, M.
Imunoglobulinové preparáty skupiny G, A, U začínají být v současnosti Široce používány zejména v klinické terapeutické praxi. Současná technologická praxe přípravy imunoglobulinových preparátů skupiny G, A, M buá laboratorních anebo určených pro terapeutické účely se v převážné míře zakončentrovává lyofilizací.
Metoda lyofilizace klade velké néroky a náročné požadavky na výrobní zařízení, je značně drahá a vyžaduje nepřetržitou servisní pozornost. Navíc je potřeba konstatovat, že v přirozených podmínkách ekosféry naSí planety se za fyziologických ba ani za patologických podmínek nevyskytují tak nízké hodnoty vakua ve spojení s teplotami, které se běžně užívají při lyofilizaci.
Technologický postup může taktéž část některých nízkomolekulárních sloučenin s biochemicko-fyziologickou aktivitou v roztoku imunoglobulinů skupiny G, A, li koncentračně obohacovat vzhledem k jejich koncentraci ve výchozí surovině, z které byly imunoglobuliny izolovány a jednak se zpravidla do imunoglobulinového roztoku zanáší nízkomolekulární anorganické nebo organické sloučeniny použité jako precipitans.
Odstraňování vody v průběhu lyofilizace má za následek zvySování koncentrace imunoglobulinů skupiny G, A, M a všech v roztoku přítomných nízkomolekulárních látek a poměrně zvýSená teplota na konci mrazové sublimace je zdrojem aktivační energie dostačující na vytvoření nežádoucích interakcí těchto látek s molekulami imunoglobulinů skupiny G, A, M.
Koncentrace bílkovinných roztoků pomocí lyofilizace se sice oelosvětově hojně používá, ale hledají se i jiné metody zakoncentrování bílkovinných roztoků založené jendak na vakuovém oddestilovávéní vody a prchavých součástí (Smith K. J., Watt J. C., Watson C. N., Mastenbroek G. G. A.: Vox Sang. 22, 120, 1972) a jednak na oddělování vody a nízkomolekulárních látek pomocí membránových systémů (Friendli Η., Fournier Ε., Volk T., Kistler P.:
Vox Sang. 33, 93, 1977).
Podstata způsobu výroby koncentrovaných purifikovaných roztoků sérových imunoglobulinů skupiny G, A, M spočívá v tom, že bílkovinný materiál obsahující purifikované imunoglobuliny skupiny G, A, M se rozpouští v takovém množství destilované apyrogenní vody o teplotě 0 °C až +6 ?C, aby se hodnota koncentrace bílkovin nacházela v rozmezí 2 % až 5 % a hodnota pH mezi 4,0 až 8,0, odstranění nízkomolekulárních sloučenin se z imunoglobulinového roztoku skupiny G, A, M provede zejména pomocí průtokové dialyzy anebo gelové filtrace proti 0,1 až 1,0 procentnímu roztoku chloridu sodného v destilované apyrogenní vodě o teplotě 0 °C až +6 °C, imunoglobulinový roztok skupiny G, A, M se sterilizuje zejména filtrací vyznačující se tím, že sterilizovaný roztok imunoglobulinů skupiny G, A, M se vnese do vysterilizované mrazově koncentrační zpravidla kovové kolony, kterou zaplní až do 75 % objemu ve které se imunoglobulinový roztok skupiny G, A, íi stacionárně zmrazí například na -5 °C až -50 °C po dobu 2 až 24 hodin a opět stacionárně rozmrazí například při +5 °C až +20 °C po dobu 2 až 48 hodin a potom sé z kolony odebere zahuštěný roztok imunoglobulinů skupiny G, A, M o stanovené koncentraci, anebo se proces zmrazovéní a rozmrazování opakuje, potom se imunoglobulinový roztok skupiny G, A, M dále zpracovává například sterilní filtrací.
Vynález je dále objasněn na příkladech provedení jimiž jeho rozsah není ani omezen ani vyčerpán.
Příklady provedení
Příklad 8. 1
Výchozí surovinou je bílkovinná pasta precipitátu imunoglobulinů skupiny G, A, M získaná způsobem podle Pejaudiera a spol. (Pejaudier L., Audran R., Steinbuch M.:
Vox Sang. 23, 165, 1972).
Bílkovinný materiál se rozpouští v takovém množství apyrogennl destilované vody 0 teplotě 0 °C až +6 °C, aby hodnota koncentrace bílkovin se nacházela v rozmezí 2 až 5 %. Rozpouštění se urychluje mícháním. Po rozpuětění se imunoglobulinový roztok skupiny G, A, li vyčeří například filtrací.
V technologických poměrech jsou výše uvedené podmínky zpravidla zachovány tehdy když rozpouštíme 1 kg imunoglobulinové pasty ve 2 000 ml destilované apyrogenní vodě o teplotě 0 °C až + 6 °C. Hodnota pH takto vzniklého imunoglobulinového roztoku skupiny G, A, M bývá zpravidla mezi pH 4,0 až S,0 a koncentrace bílkvin bývá mezi 2 až 5 %. Takto připravený roztok purifikovanýoh imunoglobulinů skupiny G, A, li se vyěeří například filtrací a nízkomolekulární sloučeniny se z imunoglobulinového roztoku skupiny G, A, li odstraní například gelovou filtrací anebo dialýzou proti 0,1 až 1,0 procentnímu roztoku chloridu sodného v destilované apyrogenní vodě o teplotě 0 °C až +6 °C.
Imunoglobulinový roztok skupiny G, A, li se po odstranění nízkomolekulárních látek podrobí sterilizaci například filtrací a umístní se do vysterilizované koncentrační aparatúry.
Za optimální rozměry technologických mrazově koncentračních kolon se považují takové, kde průměr kruhové anebo úhlopříčka čtvercové nebo obdélníkové základní plochy kolony ku výšce kolony se pohybují v poměru 1 : 2 až 1 : 10.
Množství imunoglobulinového roztoku skupiny G, A, M vsazeného do kolony nemá překročit 75 % objemu mrazově koncentrační kolony. Přístup chladu má být orientován hlavně vertikálním směrem ze spodu k vrchu a až potom směrem horizontálním od vnějšku ku vnitřku. Vrchní část kolony má zamrzat poslední a umožnit kapalině vytlačované v důsledku zvětšováni objemu, aby mohla vystoupit nezamrzlým středem.
Zmrazování se provádí například při -50 °C až -5 °C po dobu 2 až 24 hodin a rozmrazování při +5 °C až +20 °C po dobu 2 až 48 hodin. Mamrazování a rozmrazování má být pomalé a plynulé přičemž kapalina zejména po rozmražení se nesmí pohybovat nebo mechanicky míchat. Dobu potřebnou na zmrazení a rozmražení je nutno pro každý konkrétní typ aparatúry stanovit empiricky.
Pokud se nejedná o velmi objemné kolony lze zmrazení realizovat vložením kolony do mrazícího pultu a rozmrazování realizovat vyjmutím z mrazícího pultu a umístěním kolony do pokojové teploty. Velkoobjemov.é mrazově koncentrační kolony musí mít chladicí jakož i ohřívací potrubí stočeno hadovitě okolo kolony odspodu směrem k vrchu kolony.
Roztok imunoglobulinů skupiny G, A, M se po stacionárním rozmražení vypouští z kolony po malých objemech například po 100 ml až 500 ml a vyhodnocuje se obsah bílkovin, například spektrofotometricky nebo refraktometricky a oddělí se ty konkrétní frakce kde koncentrace poklesla pod hranici našeho zájmu například pod 10 g imunoglobulinů skupiny G, A, M na litr.
Zakoncentrovaný roztok imunoglobulinů skupiny G, A, M se podrobí dalšímu zpracování jako například sterilní filtraci. V případě potřeby lze proces zakoncentrování opakovat.
Příklad δ. 2
Výchozí surovinou může být bílkovinná pasta imunoglobulinů skupiny G, A, Ií izolovaná pomocí jiných precipitačnich sloučenin. Na preeipitaci balastních bílkovin ze směsi imunoglobulinů skupiny G, A, M může být použit síran amonný a rivanol (Schwick H. G., Fischer J., Geiger H.: Progr. Immunobiol. Standard 4, 86, 1970; Schwick H. G.: Vox 3ang 23, 82, 1972), kyselina boritá (Pejaudier L., Audran R., Steinbuch M.: Vox Sang. 23, 165, 1972) a kyselina kaprylová (Blatrix C., Israel J., Reinert Ph., Griscelli C., Steinbuch M.:
La nouvelle Presse Medicale 5, 1 193, 1976).
Bílkovinný materiál se rozpouští v takovém množství apyrogenní vody zpravidla destilované o těplotě 0 °C až +6 °C, aby hodnota koncentrace bílkovin se nacházela v rozmezí až 5 %. Rozpouštění se urychluje mícháním. Po rozpuštění se imunoglobulinový roztok skupiny G, A, M vyčeří například filtrací, Roztok imunoglobulinů skupiny G, A, Ií se zpracovává v dalším postupu jako v příkladě č. 1.
V případě, že by spodní výtokový otvor na vypouštění zakoncentrovaného roztoku imunoglobulinů skupiny G, A, H nemohl být otevřen lze zakoncentrovaný roztok imunoglobulinů skupiny G, A, M odsávat vrchem kolony. Odsávání se provádí pomocí tenké skleněné trubice, která se opatně ponoří až na dno nádoby, na kterou je napojená například gumová hadice s možností připojení na vakuum.
Účinnést zakoncentrování lze demonstrovat na tomto případě. Při zákoneentrování 3 litrů roztoku imunoglobulinů skupiny G, A, M o výchozí koncentraci 10 g na litr byl po prvním zmrazení a rozmražení získaný roztok, který po vypuštění po jednotlivých frakcích a 50 ml vykazoval tento koncentrační gradient.
Ve frakci δ. 1 bylo stanoveno 36 e imunoglobulinů G, A, M na litr
Ve frakci č. 5 bylo stanoveno 27 g imunoglobulinů G, A, M na litr
Ve frakci č. 10 bylo stanoveno 20 g imunoglobulinů G, A, M na litr
Ve frakci č. 15 bylo stanoveno 15 g imunoglobulinů G, A, ω na litr
Ve frakci č. 20 bylo stanoveno 11 e imunoglobulinů G, A, M na litr
Koncentrace ve frakcích 21 až 60 byla pod 10 g imunoglobulinů skupiny G, A, M na litr t.j. pod hranici našeho zájmu.
Při zakoncentrování 3 litrů roztoku imunoglobulinů skupiny G, A, li o výchozí koncentraci 10 g na litr byl po dvojnásobném zmrazení a rozmražení získán roztok, který po vypuštění po jednotlivých frakcích a 50 ml vykazoval tento koncentrační gradient.
Ve frakci č. 1
Ve frakci č. 5
Ve frakci č. 10
Ve frakci č. 15
Ve frakci č. 20
bylo stanoveno 58 bylo stanoveno 35 bylo stanoveno 20 bylo stanoveno 13 bylo stanoveno 8 g imunoglobulinů g imunoglobulinů g imunoglobulinů g imunoglobulinů g imunoglobulinů
G, A, M na litr
G, A, M na litr
G, A, M na litr
G, A, M na litr
G, A, M na litr
Koncentrace ve frakcích 21 až 60 byla pod 8 g imunoglobulinů skupiny G, A, M na litr t.j. mnohem níže než je hranice našeho zájmu.

Claims (1)

  1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU
    Způsob přípravy koncentrovaných roztoků sérových imunoglobulinů skupiny G, A, M spočívající v tom, že bílkovinný materiál obsahujíoí purifikované imunoglobulíny skupiny G, A, M se rozpouští v takovém množství destilované apyrogenní vody o teplotě 0 °C až +6 °C, aby se hodnota koncentrace bílkovin nacházela v rozmezí 2 až 5 f> a hodnota pH mezi 4,0 až 8,0, odstranění nízkomolekulárních sloučenin se z imunoglobulinového roztoku skupiny G, A, M provede zejména pomocí průtokové dialyzy anebo gelové filtrace proti 0,1 až 1,0 procentnímu roztoku chloridu sodného v destilované apyrogenní vodě o teplotě 0 °C až +6 °C, imunoglobulinový roztok skupiny G, A, M se sterilizuje zejména filtrací vyznačující se tím, že sterilizovaný roztok imunoglobulinů skupiny G, A, M se vnese do vysterilizované mrazově koncentrační zpravidla kovové kolony, kterou zaplní až do 75 % objemu ve které se imunoglobulinový roztok skupiny G, A, M stacionárně zmrazí například při -5 °C až -50 °C po dobu 2 až 24 hodin a opět stacionárně rozmrazí například při +5 °C až +20 °C po dobu 2 až 48 hodin a potom se z kolony odebere zahuštěný roztok imunoglobulinů skupiny G, A, M o stanovené koncentraci, anebo se proces zmrazování a rozmrazování opakuje, potom se imunoglobulinový roztok skupiny G, A, M dále zpracovává například sterilní filtrací
CS469980A 1980-07-02 1980-07-02 Způsob přípravy koncentrovaných puntíkovaných roztoků sérových imunoglobulinů skupiny G, A, M CS211239B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS469980A CS211239B1 (cs) 1980-07-02 1980-07-02 Způsob přípravy koncentrovaných puntíkovaných roztoků sérových imunoglobulinů skupiny G, A, M

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS469980A CS211239B1 (cs) 1980-07-02 1980-07-02 Způsob přípravy koncentrovaných puntíkovaných roztoků sérových imunoglobulinů skupiny G, A, M

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS211239B1 true CS211239B1 (cs) 1982-02-26

Family

ID=5390344

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS469980A CS211239B1 (cs) 1980-07-02 1980-07-02 Způsob přípravy koncentrovaných puntíkovaných roztoků sérových imunoglobulinů skupiny G, A, M

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS211239B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU632893B2 (en) A method of preparing a fibrinogen concentrate from blood plasma, a device for carrying out said method, and a method of preparing fibrinogen from said concentrate
US4141887A (en) Process and apparatus for the production of sterile filtered blood clotting factors
US4789545A (en) Removal of lipid soluble process chemicals from biological materials by extraction with naturally occurring oils or synthetic substitutes thereof
US4104266A (en) Method for preparation of antihemophilic factor
US3560611A (en) Process for the manufacture of preparations rich in interferon
EP0440633B1 (en) Pharmaceutical for treating tumors in humans and method for making it
CN108976297A (zh) 一种冷沉淀的制备方法及其在人凝血因子ⅷ生产中的应用
CS211239B1 (cs) Způsob přípravy koncentrovaných puntíkovaných roztoků sérových imunoglobulinů skupiny G, A, M
JP2000514783A (ja) 物質の貯蔵
DE3330770A1 (de) Verfahren zur pasteurisierung von humanplasma
RU2005478C1 (ru) Способ получения концентрата сапропеля
US4128637A (en) Process for producing thymosin
CS211241B1 (cs) Způsob přípravy koncentrovaných roztoků sérových gama globulinů
US4278592A (en) Process and apparatus for the production of sterile filtered blood clotting factors
CS211240B1 (cs) Způsob přípravy koncentrovaných purifikovaných roztoků sérových albuminů
Strumia et al. The development of plasma preparations for transfusions
DE19729778A1 (de) Verfahren zur Herstellung von virusinaktivierten biologischen Flüssigkeiten
CN116179638A (zh) 一种鱼精蛋白多肽的制备方法及产品
CN113201522B (zh) 一种蛋白酶的精制和干燥方法
SU934589A1 (ru) Способ получени полипептидов
DE3851696T2 (de) Faktor VIII- Gelfiltration.
WO2008054247A1 (fr) Procédé de production d'un immunomodulateur apyrogénique
SU1730109A1 (ru) Способ получени концентрата каротиноидов из моркови
CN1020734C (zh) 提取超氧化物歧化酶复合物的方法
CN109485750A (zh) 一种肝素钠低温真空干燥技术