CS209572B1 - Spósob přípravy (U - 14C) D-galaktozy - Google Patents

Description

Vynález sa týká spOsobu.přípravy (U - ¹⁴C) znáčenej D-galakto'zy hydrolytickým netrávením buněčných stien riasý Chlorella účinkom enzýmu β-galaktozidázy (EG 3.2.1.23, β-D-ga laktozid galaktohydroláza po predchádzajúcej kultivácii riasy Chlorella v prostředí značeného kysličníka uhličitého.

Z biochemických metod přípravy (U - ^C) značených mono- a oligosacharidov je popisovaná přípravy (U - ¹⁴C) D-glukozy (čs. AO 189 471), (U - ¹⁴C) melto'zy (čs. AO 187 882), (U - ^^C) D-glukonovej kyseliny (čs. AO č. 188 626) a (U - ^^C) oí-D-glukopyranozylfosfátu Xčs. AO č. 194 587), pričom základnou východzou látkou pre přípravu týchto sacharidov bol intracelulárny </-l,4(6)glukán (U - ^^C) izolovaný z riasy Chlorella, kultivovanéj v prostředí značeného kysličníka uhličitého. Vhodným zdrojom mono- a oligosacharidov sú však aj buněčné steny mikroorganizmov, pričom mono- a olígosacharidy možno z nich uvolnit účinkom vhodných enzýmových systémov bez toho, že by došlo k podstatnému narušeniu zvyšku buňky. .

Podstata vynálezu spočívá v tom, že na celé buňky riasy Chlorella nakultivovanej v prostředí kysličníka uhličitého značeného rádionuklidom sa pfisobí roztokom enzýmu β-galaktozidázy (β-D-galaktozid galaktohydrolása, EC 3.2.1.23), pufrovaným na pH hodnotu 4,5 až 6, pričom (U - ^^C) D-galaktoza sa izoluje chromatografiou na papieri.

i a **

Výhodou navrhovaného spfisobu přípravy (U - C} znnčenej D-galektosy je, že: využiv® doteraz nespracováváný stěnový materiál (odpad); umožňuje spracovanie zvyšného buněčného materiálu (intracelulárny obsah, nukleové kyseliny, a pod.) bez změny zaužíváného technologického postupuj celý postup přípravy je v technickom převedení velmi jednoduchý a všetky enzýmy potřebné k hydrolytickému štepeniu buněčněj steny riasy Chlorella sú komerčně dostupné, a to izolované, ale aj v zmesi.

Příklad 1

K 0,5 ml suspenzie riasy Chlorella o aktivitě 20 kBq sa'pridalo 0,5 ml 50 mM citrátfosfátového roztoku pH = 4,5 s rozpuštěnou β-galaktozidázou (3 mg, 4,2 U) a reakčná zmes sa nechá pretrepávať po dobu 6 hodin při 30 °C. Po přeběhnutí hydrolytickej reskcie sa zmes nanesie na chromaťografický papier Vfhatman 1 a chromatografické delenie sa prevádza v systéme aeeton-n-butanol-voda po dobu 16 hodin. Zóna odpovedajúca pohyblivosťou D-galakto^#ze sa vystřihne a eluuje 50 % vodným roztokom etanolu. Rádiochemický výťažok D-galaktozy bol 0,4 kBq (2 %).

Příklad 2

Postupovalo sa ako v příklade 1, s tým rozdielom, že sa bydrolytické štiepenie buněčné j steny prevádza 0,5 ml riedeného enzýmového systému (1:5) slimáka (Helix pomatle) čerstvo připravený z tráviaceho traktu 50 mM citrát-fosřátovým pufrom o pH 6,0. Po 8 hodinách priebehu reakcie pri 30 °C bolo 3alšie spracovanie reakčnej směsi tak, ako je uvedené v příklade 1. Rádiochemický výťažok D-galaktozy je ako v příklade 1.

Příklad 3 ' ' '

Postupovalo sa ako v příklade 1, s tým rozdielom, že reakcia prebieha v destilovanej vodě. Pre získanie rovnakých výťažkov, ako v příklade 1 musí však reakcia přebiehať 24 hodin.

Vynález má význam pře přípravu (U - značeného cukru D-galakto^zy zaujímavej z hla diska chémie a biochémie sacharidov a pre bakteriologická a klinická prax.

Claims (1)

1. Spósob přípravy (U - D-gapaktózy vyznačujáci sa tým, že na celé buňky riasy Chlo rella kultivovanej v prostředí kysličníka uhličitého značeného rádionuklidom sa pósobí roztokom enzýmu /b-galaktozidázy, pufrovaným na pH hodnotu 4,5 až 6, pričom z buněčných stien sa uvolňuje do rpztoku D-galaktóza (U - ^C), ktorá sa získá z roztoku papierovou chromatografiou.