CS207666B2 - Method of making the 2-bromergosin and the additive salts thereof with the acid - Google Patents

Description

207666 (II) (B2) ČESKOSLOVENSKASOCIALISTICKÁREPUBLIKA( 1» )

POPIS VYNÁLEZUK PATENTU

(22) Přihlášeno 05 09 78 (21) (PV 5746-78) (32) (31)(33) Právo přednosti od 09 09 77(P-2161/77) Jugoslávie (40) Zveřejněno 15 09 80

ÚŘAD PRO VYNÁLEZY (45) Vydáno 15 06 84 (51) Int Cl.3 0 07 D 519/02A 61 K 31/59

A OBJEVY

(72) Autor vynálezu RUČMAN RUDOLF dipl. ing. a DJORDJEVIČ NEBOJŠA dr., LJUBLJANA (JUGOSLÁVIE) (73) Majitel patentu LEK, TOVARNA FARMACEVTSKIH in KEMIČNIH IZDELKOV, N. SOL. O. LJUBLJANA (JUGOSLÁVIE) (54) Způsob výroby 2-bromergosinu a jeho adičních solí s kyselinou 1

Vynález se týká způsobu výroby nového 2-bromergosinu a jeho z fyziologického hlediskapřijatelných adičních solí s kyselinou. Tyto sloučeniny je možno užít jako léčiva k léčbězvýšeného krevního tlaku a srdečních arytmií.

Předmětem vynálezu je způsob výroby 2-bromergosinu obecného vzorce I

jakož i jeho adičních solí s netoxickými kyselinami, vyznačující se tím, že se selektivněbrómuje přírodní alkaloid ergosin v poloze 2 mírnými bromačními činidly, například N-brom-sukcinimidem nebo pyrrolidonhydrotribromidem, v inertní atmosféře při teplotě 10 až 50 °Cv rozpouštědle, inertním za reakčníeh podmínek, a získaný produkt se převede na svou adičnísůl s kyselinou.

Selektivní bromace se provádí například pyrrolidonhydrotribromidem, N-bromovými slou- čeninami, dioxandibromidem nebo 3-brom-4,5-dialkyl-2-oxazolidony. Přeměna se provádí při teplotě místnosti nebo při slabě zvýšené teplotě v rozpouštědle, které je inertní za re- akčních podmínek a popřípadě za přítomnosti iniciátoru radikálových reakcí. (Bianchi G., 207666 207666 2

Grunanger P., Tetrahedron 21. 817 /1965/), například 2,2'-azo-bis-(2-metylpropionitril)v Inertní atmosféře. Při použiti N-bromovaných sloučenin a dioxandibromidu se dosáhne středně vysokýchvýtěžků. Protože reakce trvá. při teplotě místnosti více než 10 hodin, zahřívá se reakčnísměs obvykle na teplotu 40 až 50 °C nebo je možno přidat katalytické množství iniciátoruradikálových reakcí. Vysoké teploty působí nepříznivě, protože dochází ke tvorbě vedlej-ších produktů.

NejpříznivějSí bromaci při teplotě místnosti je možno provést pyrrolidonhydrotribro-midem. Tato sloučenina se používá v množství 1 až 1,5 molu na 1 mol ergosinu. Jako roz-pouštědlo je možno užit cyklické étery, například dioxan nebo tetrahydrofuran nebo chloro-vané uhlovodíky jako chloroform nebo metylenchlorid.

Reakce se obvykle provádí tak, že se roztok ergosinu smísí při teplotě místnostiv inertní atmosféře za stálého míchání s pyrrolidonhydrotribromidem, který je rozpuštěnv tomtéž rozpouštědle. Reakce je ukončena, jakmile dojde k dobrému promísení reakčníchsložek. Výchozí ergosin je známá přírodní látka, kterou je možno získat z námelových alkaloidůextrakcí. Pyrrolidonhydrotribromid je obchodně dodávaná látka, která je snadno dostupná.

Protože se 2-bromergosin rozpouští ve vodě jen slabě a jako takový není vhodný proléčebné použití, převádí se na adiční soli s netoxickými organickými nebo anorganickýmikyselinami. K tomuto účelu je možno užít například kyselinu chlorovodíkovou, sírovou,fosforečnou, bromovodíkovou, mravenči, octovou, dietyloctovou, propionovou, jablečnou,mléčnou, fumarovou, maleinovou, metansulfonovou, etansulfonovou, vinnou, citrónovou apod. 2-bromergosin, vyrobený způsobem podle vynálezu,a jeho z fyziologického hlediska při-jatelné adiční soli s kyselinou mají následující vlastnosti. 1. Akutní toxicita

Střední smrtná dávka DLjq byla stanovena na myších obojího pohlaví s hmotností 18 až25 g. Myším byl podán kovovou žaludeční sondou 2-bromergosinmetansulfonát v množství0,01 ml/g tělesné hmotnosti perorálně. Střední smrtná dávka byla stanovena způsobem, po-psaným v publikaci Litchfield J. T. a Wilcoxon F., J. Pharmacol. exp. Ther. 96. 99 (1946)a při 95% pravděpodobnosti je 489,7 mg/kg, meze spolehlivosti 427,2 až 561,4 mg/kg. 2. Působení na arteriálni krevní tlak a) Působení na krevní tlak normotenzivních narkotizovaných krys

Krysy kmene Wistar byly narkotizovány a do Arteria Carotis communis byla zavedenakanyla, načež byl měřen krevní tlak dynografem (Beckman) pomocí transduceru a byl průběžněregistrován. Srdeční frekvence byla měřena na tomtéž dynografu pomocí kardiografu. 2-bromergosinmetansulfonát byl podáván v pomalé infúzi v dávce 10, 20, 50, 150, 450, 1 500 a 4 500 mg/kg nitrožilně do Véna jugularis. Výsledky těchto pokusů jsou uvedeny v tabulce 1 a ukazují, Že při zvýšení dávky dochá-zí k silnějšímu poklesu systolického a diastolického tlaku, přičemž pulsový tlak se zvyšu-je. 3 207666

Tabulka 1

Nitrožilní dávkamikrogramy/kg hmotnosti systolického Procentuální .laku diastolického změna tlaku pulsového tlaku 10 7,41 14,16 13,34 ±1,56 ±2,68 ±2,23 20 8,57 17,09 12,77 ±1,54 ±2,23 ±6,41 50 11,61 21,52 15,34 ±2,06 ±2,83 ±1,70 150 14,13 25,33 23,81 ±1 ,88 ±6,23 ±10,86 450 19,46 39,22 33,33 ±2,54 ±2,48 ±9,11 1 500 22,32 46,98 41,49 ±1,50 ±1,30 ±8,70 4 500 19,38 45,49 37,96 ±0,71 . ±1,93 ±6,91 {· = pokles systolického nebo diastolického tlaku f = vzestup pulsového tlaku Všechny dávky vyvolávaly inhibici hypertenzivního reflexu v Sinus oarotious nebo došlok poklesu tlakového zvýšení, které bylo vyvoláno jednostranným uzávěrem Arterie Carotiscommunis. b) Vliv na pokles krevního tlaku u spinálních krys

Krysy kmene Wistar v uretanové narkóze byly spinalizovány (mícha byla oddělena v ob-lasti druhého krčního obratle) a byly umístěny do přístroje pro umělé dýchání (napříkladMelsungen). Tímto způsobem byla u krys vyřazena centrální regulace krevního tlaku. V dů-sledku toho doSlo u zvířat k poklesu krevního tlaku přibližně o 6,5 kPa. Tento pokus sloužíke stanovení, zda má sledovaná sloučenina bezprostřední vliv na hladké svaly cév.

Ze získaných výsledků je zřejmé, že 2-bromergosinmetansulfonát má vliv na pokles krev-ního tlaku pouze při nitrožilní dávce 450 mikrogramů/kg, takže dochází ke vzestupu krevníhotlaku na původní normální hodnotu. Sloučenina má vasokonstrikční účinek, podobný účinkudihydroergotoxinu a dihydroergotaminu, způsobuje tedy smrštění hladkých svalů cév. (RothlinE., Cerletti A., Verh. dtsch. Ges. Kreislaufforsch. JLS., '58 /1949/). c) Účinek na zvýšený krevní tlak vyvolaný adrenalinem u narkotizovanýeh krys U krys kmene Wistar v uretanové narkóze uložených v zařízení pro registraci krevního tlaku se nejprve vyvolá v kontrolním pokusu nitrožilním podáním adrenalinu v dávce 10 mi- krogramů/kg dvakrát trvající zvýšení krevního tlaku. Pak se podává infúzí 2-bromergosin- metansulfonát v dávkách 10, 20, 50, 150, 450, 1 500 a 4 500 mikrogramů/kg a po 3 minutách znovu adrenalin ve stejné dávce jako při kontrolním pokusu. 207666 4

Minimální inhibiční dávka pro 2-bromergosinmetansulfonát byla pouze 10 mikrogramů/kg.Při vyšší dávce došlo k inverzi adrenalinového účinku. Pokusy prokázaly, že 2-ergosinmetan-sulfonát inhibuje působení adrenalinu na krevní tlak přibližné stejným způsobem jako di-hydroergotoxin a dihydroergotamin. Toto působení je s největší pravděpodobností výsledkemkompetitivního antagonismu 2-bromergosinmetansulfonátu a adrenalinu na alfa-adrenergníchreceptorech (Bricher R., Cerletti A., Helv. med. Acta 16, Suppl. 22 /1949/). d) Působeni na zvýšený krevní tlak vyvolaný serotoninem u spinálních krys K pokusu bylo užito spinalizovaných krys kmene Wistar, u nichž byla porušena míchav oblasti druhého krčního obratle v uretanové narkóze.

Bylo možno prokázat, že nitrožilně podaný 2-bromergosinmetansulfonát v dávce 150 mi-krogramů/kg zřetelně snižuje účinek serotoninu ve srovnání s účinkem této látky v kontrol-ním pokusu. V uvedené dávce působí 2-bromergosinmetansulfonát podobně jako dihydroergoto-xin a dihydroergotamin. e) Působení na krysy s normálním krevním tlakem

Pokusnými zvířaty bylo 10 krys kmene Wistar s normálním krevním tlakem, obojího pohla-ví s hmotností 200 až 250 g. 2-bromergosinmetansulfonát byl podáván v dávce 5 mikrogramů/kga den intraperitoneálně, přičemž byl měřen systolický krevní tlak. Krevní tlak, jehož hod-nota byla na začátku pokusu 16 337 až 16 878 Pa, tj. 123 až 127 mm Hg, postupně klesal a po8 až 10 dnech od začátku pokusu dosáhl hodnoty 12 664 až 13 996 Pa, tj. 95 až 105 mm Hg.Tato hodnota se již neměnila do konce pokusu, který trval 30 dní. f) Vliv na krevní tlak krys se spontánně zvýšeným krevním tlakem V tomto pokusu bylo užito 10 krys Okamoto Aoki F^q se spontánní hypertenzí, obojíhopohlaví o hmotnosti 200 až 250 g. 2-bromergosinmetansulfonát byl podáván intraperitoneálněv dávkách 5 mikrogramů/kg a den, současně byl měřen krevní tlak. Systolický tlak, jehožhodnota byla na začátku pokusu 174 až 177 mm Hg, tj. 23 142 až 23 541 Pa poklesl v průběhu6 až 10 dnů na hodnotu 135 až 140 mm Hg, tj. 17 955 až 18'620 Pa. Přestože byla účinnálátka dále podávána, zůstal krevní tlak na uvedené hodnotě až do konce pokusu, tj. do30. dne. g) Účinek na DOCA-hypertenzivní krysy U mladých krys kmene Wistar obojího pohlaví o hmotnosti 40 g byl vyvolán zvýšený krev-ní tlak tak, že zvířatům byla odebrána jedna ledvina. Zvířata byla dále krmena běžným krmi-vém a jako nápoj dostávala 1% roztok chloridu sodného. 7 dní po vynětí jedné ledviny byl podáván dvakrát týdně nitrosvalově desoxykortiko-steroidacetát (DOGA) v dávce 38 mg/kg jako 1% mikrosuspenze v 0,5% roztoku přípravkuTween 80 s přísadou 0,5% karboxymetylcelulózy. Po 6 týdnech podávání této látky dosáhlsystolický krevní tlak maximální hodnoty. Pak byl podáván intraperitoneálně 2-bromergosin-metansulfonát v dávce 5 mikrogramů/kg. U zvířat kontrolní skupiny trvalo zvýšení krevního tlaku jen 2 až 3 týdny, pak pokleslkrevní tlak na 135 mm Hg, tj. 17 955 Pa. U krys, kterým byl podáván 2-bromergosinmetansul-fonát, došlo k poklesu krevního tlaku již na začátku podávání této látky. Po 10 až 12 dnechpoklesl krevní tlak z počáteční hodnoty 189 až 187 mm Hg, tj. 25 137 až 24 871 Pa v poměru 5 207666 ke kontrolní skupině na nejnižší hodnotu 135 až 140 mm Hg, tj. 17 955 až 18 620 Pa.

Rozdíl mezi oběma skupinami byl ve srovnání se samovolným poklesem krevního tlakuu kontrolních krys nižěl. 3. Vliv 2-bromergosinu na srdeční činnost Při pokusech na normotenzivních narkotizovaných intaktních a spinálních krys vyvolává2-bromergosinmetansulfonát v účinné dávce zpomalení srdeční činnosti. Tento účinek je mož-no pozorovat u všech známých námelových alkaloidů a jejich derivátů. (Rothlin E., Vien,Kliň. Nachr. 62, 893 /1950/). Účinek 2-bromergosinmetansulfonátu na srdce in vitro byl sledován na izolovaném mor-čeclm srdci modifikovanou Langendorfovou metodu (Zalar S., Baňo M., Djordjevič N., KozjakF., Bolí. Chim. Farmac. 114. 146 /1975/). 2-bromergosinmetansulfonát byl podáván zařízenímpro pomalou infúzi (Melsungen). Výsledky jsou uvedeny v tabulce 2.

Tabulka 2

Sloučenina Dávka v mikrogramechna g srdeční tkáně Maximální pozitivníinotropní účinek Maximální negativníchronotropní účinek 2-bromergosin- metansulfonát 0,70 80 % 29 % dihy droergotoxin 0,85 7 % 5 % dihydroergotamin 0,72 60 % 10 % ergotamin 0,65 75 % 30 % Z uvedených výsledků je zřejmé, že 2-bromergosin má na izolovaném srdci účinek, kterýje kvalitativně i kvantitativně podobný účinku ergotaminu. Z popsaných farmakologických vlastností je zřejmé, že 2-bromergosin má hypotenzivníúčinek, jak bylo prokázáno pokusy na krysách 8 normálním krevním tlakem, na krysách sespontánně zvýšeným krevním tlakem a na krysách se zvýšeným krevním tlakem, vyvolaným BOČA,mimoto má 2-bromergosin pozitivní inotropní účinek na stahy srdeční komory a negativníchronotropní účinek na srdeční frekvenci, mimoto působí 2-bromergosin inhibici zvýšenéhokrevního tlaku, vyvolaného adrenalinem a serotoninem.

Na základě těchto vlastnosti je možno užít 2-bromergosin jako léčivo k léčbě arteriál·ní hypertenze a srdeční arytmie. 2-bromergosin je možno užít ve formě jeho adičních solí s netoxickými kyselinami jakoléčivo k enteriálnímu i parenterálnímu podání. K výrobě farmaceutických přípravků je možnoužít anorganických i organických pomocných látek. Při výrobě tablet nebo dražé je možnoužít například laktózu, škroby, mastek, stearáty apod., při výrobě roztoků a suspenzí,například vodu, alkoholy, glycerol, rostlinné oleje apod. při výrobě čípků jde o přírodnínebo ztužené oleje nebo vosky. Mimoto je možno užít konzervační prostředky, stabilizátory,smáčedla, pomocná rozpouštědla, sladidla a barviva.

Pro 2-bromergosin ve formě adiční soli s netoxickou kyselinou je rozmezí dávek pronitrožilnl podání 0,005 až 0,02 mg/kg a pro peronální podání 0,05 až 0,3 mg/kg denně, pře-počteno na čistý 2-bromergosin. 207666 6

Vynález bude osvětlen následujícími příklady. Přikladl 9,54 g (17,4 mmol) ergosinu se rozpustí ve 180 ml dioxanu a roztok se smísí za stálé-ho míchání v inertní atmosféře s 3,52 g (19,8 mmol) N-bromsukcinimidu v roztoku v 60 mldioxanu. Směs se nechá stát 10 minut při teplotě 40 °C. Pak se reakční směs odpaří ve va-kuu. Odparek se dělí v dělicí nálevce mezi 200 ml 2N vodného roztoku uhličitanu sodnéhoa 300 ml metylenchloridu. Uetylenchloridový extrakt se slije a odpaří ve vakuu. Odparekse rozpustí ve 40 ml metylenchloridu a chřomatografuje na sloupci neutrálního kysličníkuhlinitého (aktivita II až III podle Brockmanna). Sloupec se vymývá metylenchloridem s 0,2 %etanolu. Frakce, které obsahují 2-bromergosln, se odpaří ve vakuu a odparek se nechá krys-talizovat z etylacetátu. Tímto způsobem se vě výtěžku 34,8 % získá 4,33 g čistého krysta-lického 2-bromergosinu o teplotě tání 183 až 185 °C (za rozkladu).

Složení O^QHjgNjOjBr . CHjCOOCgHj

Specifická otáčivost = -91,6° (c = 1, chloroform)

Elementární analýza: Pro C30H36N5°5Br vypočteno: 57,63 % C, 6,06 % H, 10,84 % K, 12,40 % Br; nalezeno: 57,51 % C, 6,79 % H, 11,18 % N, 12,73 % Br. Příklad 2 5,47 g (10 mmolů) ergosinu se rozpustí ve 200 ml dioxanu a roztok se smísí za stáléhomíchání při teplotě místnosti v inertní atmosféře s roztokem 6,94 g (14 mmolů) pyrrolidon-hydrotribromidu v 1 500 ml dioxanu. Reakce je skončena, jakmile dojde k promísení oboureakčních složek. Reakční směs se odpaří ve vakuu. Odparek se dělí mezi vodnou a organic-kou fázi a pak se čistí chromatografil na sloupci stejně jako v příkladu 1. Tímto způsobemse získá ve výtěžku 81,3 % teoretického množství 5,81 g 2-bromergosinu ve formě krystalůs etylacetátem. Sloučenina má tytéž vlastnosti jako výsledný produkt z přikladu 1. Příklad 3 5,47 g (10 mmolů) ergosinu se rozpustí ve 100 ml metylenchloridu a roztok se smísíza stálého míchání při teplotě místnosti v inertní atmosféře s roztokem 6,94 g (14 mmolů)pyrrolidonhydrotribromidu ve 300 ml’metylenchloridu. Reakční směs se odpaří na polovinupůvodního objemu a extrahuje se třikrát 200 ml 2N uhličitanu sodného. Metylenchloridovýroztok se přímo chromatografuje na sloupci silikagelU’a tento sloupec se vymývá metylen-chloridem, který obsahuje rostoucí množství dioxanu od 0 do 20 %. Frakce s obsahem 2-bromergosinu se odpaří a nechají se překrystalovat z etylacetátu. Ve výtěžku 70,7 % se tímtozpůsobem získá 5,06 g 2-bromergosinu ve formě krystalů s etylacetátem. Sloučenina má tytéžvlastnosti jako výsledný produkt z příkladu 1. Příklad 4 2,42 g (3,86 mmol) amorfního 2-bromergosinu (sraženina z petroléteru) se rozpustí ve 20 ml etanolu, který obsahuje 0,22 ml (4,24 mmolů) kyseliny metansulfonové a za stálého míchání se vlije do 400 ml dietyléteru. Po filtraci a usušení sraženiny se tímto způsobem ve výtěžku 89,4 % získá 2,49 g ve vodě dobře rozpustného 2-bromergosinmetansulfonátu o tep- .lotš tání 191 až 192 °C. 7 207666

Specifická otáčivost [cG §° “ +104° (c - 1, chloroform). Příklad 5Tablety a lisuje na tablety. Příklad 6Kapsle Příklad 7Injekční roztok

Složení mg/tableta 2-bromergosinmetansulfonát 20 laktóza 228 škrob 27 mastek 13 tragant ,0 stearát hořečnatý _2 celkem 300 mg > standardním způsobem smísí s ostatními složkami, na Složení mg/kapsle 2-bromergosinmetansulfonát 20 laktóza 200 celkem 300 mg i standardním způsobem smísí s laktózou a směs se pln Složení hmotnostv mg 2-bromergoslnmetansulfonát 1,00 sodná sůl karboxymetylcelulózy 1,50 polyvinylpyrrolidon 5,50 lecithin 3,20 benzylalkohol 0,01 pufr q. s. bidestilovaná voda 1 ml celkem 1 ml

Roztok se připraví standardním způsobem, sterilizuje se a plní se do ampulí.

Claims (2)

1. 207666 8 PŘEDMĚT VYNÁLEZU

   1. Způsob výroby 2-bromergosinu obecného vzorce I

   N-CHj *H .CO-NH-- O

   H CH, I z CH / \ ch3 ch3 (I) jakož i jeho adiěních soli s netoxickými kyselinami, vyznaěující se tím, že se selektivnébrómuje přírodní alkaloid ergosin v poloze 2 mírnými bromaěními Sinidly, například N-bromsukcinimidem nebo pyrrolidonbydrotribromidem, ▼ inertní atmosféře při teplotě 10 až 50 °Cv rozpouštědle, inertním za reakěních podmínek, a získaný produkt se převede na svou adiění sůl s kyselinou.
2. 2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se jako inertního rozpouštědla užijecyklického éteru jako dioxanu nebo chlorovaného uhlovodíku jako metylenchloridu. Severografia, n. p., závod 7, Most