CS206872B1 - Způsob přípravy preparátů pro elektronovou i světelnou mikroskopii buněk . z kultur in vitro, tělesných tekutin a ze všechbuněčných typů nevytvářejících pevnou tkán - Google Patents
Způsob přípravy preparátů pro elektronovou i světelnou mikroskopii buněk . z kultur in vitro, tělesných tekutin a ze všechbuněčných typů nevytvářejících pevnou tkán Download PDFInfo
- Publication number
- CS206872B1 CS206872B1 CS394679A CS394679A CS206872B1 CS 206872 B1 CS206872 B1 CS 206872B1 CS 394679 A CS394679 A CS 394679A CS 394679 A CS394679 A CS 394679A CS 206872 B1 CS206872 B1 CS 206872B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- cells
- preparation
- cell
- preparations
- light microscopy
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 title claims description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 title claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title description 2
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 claims description 4
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 claims description 4
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 claims description 4
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims description 3
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims description 3
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 claims description 2
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 claims description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 claims 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 claims 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000005453 pelletization Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 208000006168 Ewing Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 150000001252 acrylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000001226 reprecipitation Methods 0.000 description 1
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 239000000057 synthetic resin Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
(54) Způsob přípravy preparátů pro elektronovou i světelnou mikroskopii buněk . z kultur in vitro, tělesných tekutin a ze všech buněčných typů nevytvářejících pevnou tkán _ __
Q Vynález se týká způsobu přípravy preparátůpro i elektronovou i světelnou mikroskopii buněk z kultur in vitro, tělesných tekutin a ze všech buněčných typů nevytvářejících pevnou tkáň.
Obtížnost zhotovení kvalitního preparátu pro ultrastrukturální studie buněk z kultur in vitro nebo z buněčných typů nevytvářejících pevnou i tkáň, např. krve, lymfy apod., spočívá v tom, že i sledované buňky je nutno inkorporovat do inertníi ho media, umožňujícího krájení ultratenkých řezů na mikrotomu. Pro účely elektronové mikroskopie i buněk rostoucích v monolayeru na plastikových ; miskách byly vypracovány metody umožňující zalití buněk in sítu do akrylátů a’ syntetických pryskyřic (např. Epon). Tuto metodu nelze použít pro přípravu řezů z buněk rostoucích ve skleněných nádobách nevo v suspenzi. Preparáty pro elektronovou mikroskopii z těchto kultur jsou nejčastěji I připravovány metodou peletizace buněk anebo měně častou zalitím do agaru. Společnou nevýhodou těchto postupů je, že jsou technicky náročné, vyžadují značnou zkušenost a hlavně velké množství buněk, které nemusí být vždy k dispozici (např. i při rychlé diagnostice). Případně zatěžují buňky i vysokými tepelnými změnami. Dále není při nich i možné současné zpracování řezů pro světelnou í mikroskopii.
• Tyto nedostatky odstraňuje způsob přípravy i
preparátů buněk pro elektronovou i světelnou piikroskopii podle vynálezu, jehož podstatou je, že juňky určené pro mikroskopii jsou inkorporovány ; lo fibrinového koagula, které vzniklo reakcí 0,1 až 100 ml fibrinogenu o koncentraci 1,0 až 100,0 ,pg/ml a 0,01 až 10,0 ml trombinu ó koncentraci 0,5 [až 500 U. I. při pH 6 až 8 v pufru, při teplotě 25° až ! 40 °C po dobu 20 až 60 minut.
Tato metoda umožňuje standardizaci postupu přípravy řezů z různých typů buněk. Další výhodou způsobu podle vynálezu je, že se nemusí pracovat s velkým množstvím buněk, jako např. při peletizaci (108 buněk), ale stačí pouhých 7,5 x 105 buněk. Při menších počtech buněk vzrůstá pracnost při výběru vhodných řezů k dalšímu zpracování. Způsob podle vynálezu je možno jednoduchým postupem využít k současné přípravě preparátů řezů z buněk tkáňových, buněčných, suspenzních kultur nebo jednotlivých izolovaných buněk. Tím se ušetří na kultivace buněk včetně pomocných látek a přístrojů nutných pro kultivaci velkého množství buněk. Při diagnostice stačí odběr malého množství zkoumané tkáně. Další výhodou způsobu podle vynálezu je, že se následná doba potřebná pro přípravu preparátu zkrátí na 1/3 proti klasickým způsobům a tím dojde ke značným úsporám elektrické energie.
Zařízení k. provádění přípravy preparátů podle vynálezu je k dispozici v každé běžné biologické laboratoři.
Dále je uveden příklad způsobu přípravy preparátu podle vynálezu.
Příklad.
Lidská buněčná linie ES-1, derivovaná z histólogicky diagnostikovaného Ewingova sarkomu, byla užita k přípravě praparétů mezi 13 až 15 pasáží. Kultivace buněk probíhala ve skleněných 5Ó ml lahvičkách (Můllerovy lahvičky) do satur-ační denzity 1 x 104 buněk na 1 cm2 za 7 až 10 dní. Po spočítání buněk byly tyto pásážovány v poměru 1 1 : 2. Kultivace se prováděla v Eaglově minimálním esenciálním mediu s haňksovým solným roztokem doplněným neeseneiálními aminokyselinami a 10-ti hmot. % hovězího fetálního séra a antibiotiky (100 U. I. penicilinu a 100 μg streptomyéinu na 1 ml).
Hovězí fibrinogen byl rozpuštěn v pufru_(TRIS) ·
o pH 7,2 do konečnékoncentrace 10 pg/l ml a do použití se uchovával zmražený pri —25 °Č, 1
Ťrofflbin byl rozpuštěn ve fosfátovém balancovaném roztoku (PBS) do finální koncentrace 50 U. I./l ml a do použití skladován v zatavených ampulích v kapalném dusíku.
Buňky narostlé v& skleněné lahvičce byly opakovaně opláehnuty vytempeřovaným pufrem (TRIS) o pH 7,2, opatrně seškrábány a cehtrifugovány v konické kývetě při 800 Otáčkách za minutu, po ; dobu 10 minut. Výtěžek 7,5 x 105bylresuspendován v 0,25 ml roztoku fibrógenu. Konverze ve fibrin byla provedena pomocí 0,02 ml čeřstvého roztoku frombinu a směs byla koagulována 45 miň. při 37 °C. Přesrážení bylo 2 X opakováno.
Fibrinový bloček s obsahem buněk byl přenesen • do zkumavky a dále Zpracován jednak pro potřeby světelné a jednak pro potřeby elektronové mikroskopie.
Claims (1)
- PŘEDMĚTZpůsob přípravy preparátů pro elektrodovou i světelnou mikroskopii buněk z kultur in1 vitró, tělesných tekutin a všech buněčných typů nevytvářejících ; pevnou tkáň, vyznačený tím, že buňky určené pro mikroskopii jsou inkorporovány doVYNÁLEZU fibrinovéhó koaguía, které vzniklo reakcí 0,1 ážJ 100,0 ml fibrinogenu o koncentraci 1,0 až 100,0 pg/ml a 0,01 ml až 10,0 ml trombinu o koncentraci 0,5 až 500,0 U. I. pri pH 6 až 8 vpuiru, při' teplotě 25 až 40 °C po dobu 20 až 60 minuti
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS394679A CS206872B1 (cs) | 1979-06-08 | 1979-06-08 | Způsob přípravy preparátů pro elektronovou i světelnou mikroskopii buněk . z kultur in vitro, tělesných tekutin a ze všechbuněčných typů nevytvářejících pevnou tkán |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS394679A CS206872B1 (cs) | 1979-06-08 | 1979-06-08 | Způsob přípravy preparátů pro elektronovou i světelnou mikroskopii buněk . z kultur in vitro, tělesných tekutin a ze všechbuněčných typů nevytvářejících pevnou tkán |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS206872B1 true CS206872B1 (cs) | 1981-07-31 |
Family
ID=5381016
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS394679A CS206872B1 (cs) | 1979-06-08 | 1979-06-08 | Způsob přípravy preparátů pro elektronovou i světelnou mikroskopii buněk . z kultur in vitro, tělesných tekutin a ze všechbuněčných typů nevytvářejících pevnou tkán |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS206872B1 (cs) |
-
1979
- 1979-06-08 CS CS394679A patent/CS206872B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fischer | Tissue culture; studies in experimental morphology and general physiology of tissue cells in vitro | |
| Rothfels et al. | An air-drying technique for flattening chromosomes in mammalian cells grown in vitro | |
| Taylor et al. | The contractile basis of ameboid movement. II. Structure and contractility of motile extracts and plasmalemma-ectoplasm ghosts. | |
| DE68918331T2 (de) | Menschlicher kristallinischer Granulocyt-Koloniestimulierungsfaktor und dessen Herstellung. | |
| McLean et al. | The relationship of gamone to the mating reaction in Chlamydomonas moewusii | |
| Alper et al. | Reconstitution of flagellar sliding | |
| CN115261302B (zh) | 一种基质胶及其制备方法和应用 | |
| DE2749023C2 (de) | Verfahren zur schnellen Vermehrung von SV3T3 Zellen in vitro | |
| CN103764028B (zh) | 凝固控制剂和包含凝固控制剂的装置 | |
| Baker et al. | ARTIFICIAL MAINTENANCE MEDIA FOR CELL AND ORGAN CULTIVATION: I. THE CULTIVATION OF FIBROBLASTS IN ARTIFICIAL AND SERUMLESS MEDIA | |
| Paranchych | Assay of infectious RNA from bacteriopahge R 17 | |
| CN103484428B (zh) | Cape在体外培养造血干/祖细胞中的用途 | |
| Kinsey | Purification and properties of the egg plasma membrane | |
| CS206872B1 (cs) | Způsob přípravy preparátů pro elektronovou i světelnou mikroskopii buněk . z kultur in vitro, tělesných tekutin a ze všechbuněčných typů nevytvářejících pevnou tkán | |
| US3072538A (en) | Isolation of bacteria | |
| Munn | Fine structure of basal bodies (kinetosomes) and associated components of Tetrahymena | |
| Peters | Preparation of large quantities of pure bovine lymphocytes and a monolayer technique for lymphocyte cultivation | |
| Beattie | [2] Yeast versus mammalian mitochondrial protein synthesis | |
| Taylor et al. | Purification and character of the swine-influenza virus | |
| Moore et al. | A method for the morphological identification of contractile filaments in single cells | |
| RU2193061C1 (ru) | Питательная среда для культивирования микобактерий туберкулеза (мбт-бульон) | |
| Shore et al. | Tissue culture of human renal cell carcinoma: effect of serum on monolayer growth | |
| SU686732A1 (ru) | Способ получени комплемента | |
| FISHMAN et al. | Enzymorphology: A study of free cells | |
| JPH10248557A (ja) | 細胞培養法 |