CS203818B1 - Spdsob přípravy merkaptodeoxycelulózy - Google Patents

Spdsob přípravy merkaptodeoxycelulózy Download PDF

Info

Publication number
CS203818B1
CS203818B1 CS430179A CS430179A CS203818B1 CS 203818 B1 CS203818 B1 CS 203818B1 CS 430179 A CS430179 A CS 430179A CS 430179 A CS430179 A CS 430179A CS 203818 B1 CS203818 B1 CS 203818B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
chelaton
mercaptodeoxycellulose
thiol
cellulose
preparation
Prior art date
Application number
CS430179A
Other languages
English (en)
Slovak (sk)
Inventor
Peter Gemeiner
Original Assignee
Peter Gemeiner
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Peter Gemeiner filed Critical Peter Gemeiner
Priority to CS430179A priority Critical patent/CS203818B1/cs
Publication of CS203818B1 publication Critical patent/CS203818B1/cs

Links

Landscapes

  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Description

POPIS VYNÁLEZU
K AUTORSKÉMU OSVEDČENIU 203818 (Π) (Bl)
ČESKOSLOVENSKA SOCIALISTICKÁ
REPUBLIKA <1S)
/22/ Přihlášené 22 06 79/21/ /PV 4301-79/ (51) Int. Ci? C 08 B 15/02
ÚŘAD PRO VYNÁLEZY
A OBJEVY (40) Zverejnené 30 06 80(45) Vydané 15 11 82 (75)
Autor vynálezu
GEMEINER PETER ing. CSc., BRATISLAVA (54) Spdsob přípravy merkaptodeoxycelulózy > i ·.
Vynález sa týká spósobu přípravy merkaptodeoxycelulózy z chlorodeoxycelulózy.
Vodonerozpustne nosiče obsahujúce tiolové skupiny majú Široké možnosti uplatneniá v róz- nych oblastíach enzymového inžinierstva. Najčastejšie sa používajú v afinitnej chromatografiitiolových enzýmov /Methods in Enzymology 34 jAffinity Techniquesj 1974/ a pri imobilizácii „enzýmov/0. R. Zaborsky, Immobilized Enzymes, CRC Cleveland 1974/. Až na polyakrylamidovéhoprechodcu /Enzacryl Polythiol, Koch-Light/ sa dnes vyrábajú polytioly výlučné na báze póly-sacharidov, a to hlavně agarózy napr.: Activated Thiol-Sepharose 4B, Thiopropyl-Sephaťose 6B,či sietovanej agarózy napr.: příslušné polytioly série Sepharose CL, všetko Pharmacia FineChemicals, Uppsala. Příprava týchto polysacharidov obsahujúcich tiolové skupiny vychádza z aktivácie poly-sacharidu brómkyánom [Activated Thiol-Sepharose 4B, Upplands Grafíska AB /1974/; resp. z 0-al-kylácie agarózy bis-epoxidmi či A-halohydrínrai /R. Axén, H. Dřevin, J. Carlsson, Acta Chem.
Scand. B 29 / 1975/ 471 ; H. Nishikawa, P. Bailon, J. Solid-Phase Biochem. 1 33/. Uvede- • né postupy jednak používajú u nás netradičné polysachatidy /agaróza, dextrán/ ako aj devizovéchemikálie /napr.: brómkyán, glutathión, 2,2'-dipyridyldisulfid, bisepoxidy, dithiothreitol/.
Naviac u celulózy nedávajú tieto spósoby přípravy uspokojivé výsledky /J, Zemek, t. Kuniak, P. Gemeiner, PV - 7358/78/. Na druhej straně sa javí ako vhodný východiskový materiál pre pří-pravu tiol-polysacharidov chlórodeoxycelulóza /CD-celulóza/, lahko pripravitelná za miernychreakčných podmienok s poměrně vysokými stupčami substitúcie /DS 0,3/ /T. L. Vigo, C. W. Welch,Textile J. Res. 40 /1970/ 109/. Chlór v tejto CD-celulóze možno nahradit běžnými nukleofilný-mi substituentami, napr. -amino, -merkapto, -hydroxy a iné. Tak je v případe chlórodeoxydéx-tránu popísaná substitúcia za tiosíran za vzniku tiosíran-deoxydextránu /TSD-dextránu/ /A. F.
Kolová et al., Cell. Chem. Technol. 12 /1978/553/. Takýto TSD-dextrán sa potom prevedie alka-lickým štiepením v prostředí argonu na merkaptodeoxydextrán /MD-dextrán/. 203818 203818 2
Naše výsledky výskumu v tejto oblasti ukázali, že aj CD-celulózu je možiio uspokoj ivopreviest na tiosíran-deoxycelulózu. Jej redukcia tiolmi, ako sd napr.: kyselina tioglykolováalebo Z^merkaptoetanol v slabo alkalickom prostředí a v přítomnosti chelátotvorných činidiel,vedře ku tvorbě merkaptodeoxy-celulózy.
Podstata vynálezu spočívá v tom, že v prvom stupni sa prevedie CD-celulóza vo vodnomroztoku tipsíranu sodného pri teplote 90 až 105 °C po dobu 35 až 45 hodin pri mólovom pomereCD skupiny pólysacharidu : tiosíran 1:10 až 15 pri hydromodule ,0 až 15 na tiosíran-deoxy-ce-lulózu, načo v druhora stupni po premytí produktu do negatívnej reakcie na tiosírany a vysušísa přidá vodný tlmivý roztok kyseliny tioglykolovej resp, 2-merkaptoetanolu o pH 7,7 až 7,9obsahujáci 1 až 5 mM Chelaton 3 pri mólovom pomere tiosíranové skupiny polysacharidu : tiol1:15 až 20 a pri hydromodule 10 až 15 a nechá pSsobií 20 až 40 minut pri teplote 20 až 30 °C. CD-celulóza připravená podlá I, L. Vigo, C. M. Welch, Textile Res, J, 40 /1970/ 109s DS 0,3 až 0,6 je dostatočne vhodná pre přípravu MD-celulózy. Takáto CD-celulóza má výraznézvýšená tepelná odolnost.
Zavedeuie tiosíranovej skupiny sa mSže prevádzat s tiosíranom sodným pri teplote 90 až105 °C po dobu 35 až 45 hodin. Výsledný produkt obsahuje 0,4 až 0,6 mmólov tiosíranových sku-pin na 1 g suchého preparátu.
Redukcia tiosíranovej skupiny na tiolová sa prevádza pflsobením kyseliny tioglykolovejči 2-merkaptoetanolu vo vodných tlmivých roztokoch pH 7,7 až 7,9 obsahujácích Chelaton 3.
Po redukcn sa produkt rýchlo premyje pufrovaným vodným roztokom obsahujácim Chelaton 3, de-stilovanou vodou obsahujácou Chelaton 3 a aceton. Výsledný produkt obsahuje 0,25 až 0,5 mmó-lov tiolových skupin na 1 g suchého preparátu. Výhodou navrhovaného spSsobu přípravy merkaptodeoxy-celulózy je, že preparáty umožňujevyrábať z domácích lacných surovin poměrně jednoduchým technologickým postupom. Příklady prevedenia Přikladl 10 g chlorodeoxy-celulózy /CD-celulózy/ obsahujácej 1,8 mmóla Cl/g sa nechá napučatv 100 ml 2,1 M vodného roztoku tiosiranu sodného. Reakčná zmes sa potom udržiava 40 hodin pri100 °C za občasného premiešania. Produkt sa premyje vodou do negatívnej reakcie na tiosírano-vé ió-ny, acetónom a nechá sa vysušit pri 40 °C. Suchý produkt sa rozsuspenduje v 80 ml 0,1 Mvodného roztoku hydrouhličitanu sodného obsahujáceho 5 mM Chelaton 3. Za stálého miešania sapřidá 10 ml kyseliny tioglykolovej a pH sa upraví přidáním koncentrovaného hydroxidu sodnéhona 7,8. Suspenzia sa nechá miešat 30 minát pri laboratórnej teplote. Produkt sa rýchlo pre-myje na sklenom filtri 0,1 M vodným roztokom hydrouhličitanu sodného obsahujácim 5 mM Chela-ton 3, destilovanou vodou obsahujácou 1 mM Chelaton 3 a acetónom, vždy do negatívnej reakciena tioly. Produkt sa vysuší pri 40 °C.
Preparát obsahuje 2,4 Z síry a O',475 mmólov/g titrovatelných tiolových skupin.
Poznámka: +Chelaton 3 - sodná sol kyséliny etyléndiaminotetraoctovej Příklad 2
Postup podlá příkladu 1 s tým rozdielora, že pri redukcii tiosiranu CD-celulózy sa použi-je ,0 ml 2-merkaptoetanolu. Suchý produkt obsahuje 2,85 Z síry a 0,33; mmólov/g titrovatelnýchtiolových skupin.

Claims (1)

  1. 3 203818 Příklad 3 Postup podlá příkladu 1 stý» rozdielom, že ako východisková CD-celulóza sa použije pre-parát s obsahám 3,2 ramólov Cl/g a v 1. stupni 3,85 M vodný roztok tiosíranu sodného. Suchýprodukt obsahuje 2,5 Z síry a 0,25 mmólov/g titrovatelných skupin. Vynález má uplatnenie všade, kde je potřebné izolovat či čistit enzýmy a iné bielkovinyobsahujúce tiolové skupiny a kde je výhodné imobilizovaí enzýmy prostedníctvom ich cysteíno-vých zvyškov, a to či už v priemyselnej praxi alebo vo výskuma. PREDMEI VYNALEZU Sp8sob přípravy merkaptodeoxy-celulózy vyznačený tým, že chlorodeoxycelulóza sa v prvomstupni nechá reagovat s vodným roztokom tiosíranu sodného pri teplote 90 až 105 °C po dobu35 až 45 hodin pri mólovom požere chlorodeoxy CD skupiny polysacharidu : tiosíran 1:10 až 15pri hydromodule 10 až 15, načo v druhom stupni, po premytí produktu do negatívnej reakcie natiosírany a vysušení sa přidá vodný tlmivý roztok kyseliny tioglykolovej alebo 2-mcrkaptoeta-nolu o pH 7,7 až 7,9 obsahujúci 1 až 5 mM Chelaton 3 pri mólovom pomere tiosíranové skupinypolysacharidu : tiol 1:15 až 20 a pri hydromodule 8 až 12 a nechá pSsobit 20 až·40 minut priteplote 20 až 30 °C a nakoniec sa premýva rýchlo na filtri vodným tlmivým roztokom obsahujú-cim 1 až 5 mM Chelaton 3, destilovanou vodou obsahujucou 0,5 až 1 mM Chelaton 3 a. acetónom,vždy do negatívnej reakcie na tioly. Srvrroprafia. a· p- tí»oA 7. Moit
CS430179A 1979-06-22 1979-06-22 Spdsob přípravy merkaptodeoxycelulózy CS203818B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS430179A CS203818B1 (cs) 1979-06-22 1979-06-22 Spdsob přípravy merkaptodeoxycelulózy

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS430179A CS203818B1 (cs) 1979-06-22 1979-06-22 Spdsob přípravy merkaptodeoxycelulózy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS203818B1 true CS203818B1 (cs) 1981-03-31

Family

ID=5385417

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS430179A CS203818B1 (cs) 1979-06-22 1979-06-22 Spdsob přípravy merkaptodeoxycelulózy

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS203818B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4308254A (en) Material able to fix reversibly biologial macromolecules, its preparation and its application
CA1334042C (en) Process for the preparation of a material for affinity chromatography
US4111838A (en) Composition for chromatography
CA1040561A (en) Cyanogen halide activation of carbohydrates and protein binding thereto
Holleman et al. The thrombin-like enzyme from Bothrops atrox snake venom. Properties of the enzyme purified by affinity chromatography on p-aminobenzamidine-substituted agarose.
US4094743A (en) Enzymes immobilized on chitosan
Svenson et al. Coupling of acid labile Salmonella specific oligosaccharides to macromolecular carriers
ES8407516A1 (es) Procedimiento para la obtencion de pancreatina
JPS5841836B2 (ja) 可溶性肝臓ウリカ−ゼ、その製法及び尿酸の測定法
CA2225447A1 (en) Swollen starches as papermaking additives
SE8107868L (sv) Forfarande for framstellning av ett polysackaridderivat av fibrinolysin
NO174656C (no) Fremgangsmåte for fremstilling av et farmasöytisk preparat av en stabil vannsuspensjon av sucralfat
Ōtakara Studies on the Chitinolytic Enzymes of Black-koji Mold: Part I. Viscometric Determination of Chitinase Activity by Application of Glycol Chitin as a New SubstratePart II. Purification of Chitinase
CS203818B1 (cs) Spdsob přípravy merkaptodeoxycelulózy
Turková et al. Immbilization on cellulose in bead form after periodate oxidation and reductive alkylation
ES8802458A1 (es) Procedimiento para la preparacion de un componente activo inmovilizado destinado al diagnostico.
Oguntimein et al. Purification and immobilization of Aspergillus niger β‐xylosidase
Stults et al. Immobilization of proteins on partially hydrolyzed agarose beads
KR0131766B1 (ko) 티올 그룹을 함유한 종합체, 이의 제조방법 및 용도
US3833555A (en) Polysaccharide cyclic carbamate containing compounds
DE3060628D1 (en) Suspension of insulin crystals and process for its preparation
Marshall et al. Polysaccharide synthesis on immobilized phosphorylase
US3033758A (en) Preparation of levans
JPS61173778A (ja) 重合体担体の活性化方法
Svenson et al. The application of cyanide-metabolizing enzymes to environmental control: I. Preparation and characterization of rhodanese and β-cyanoalanine synthase, immobilized on solid supports