CS203818B1 - Process for preparing mercaptodeoxycellulose - Google Patents

Process for preparing mercaptodeoxycellulose Download PDF

Info

Publication number
CS203818B1
CS203818B1 CS430179A CS430179A CS203818B1 CS 203818 B1 CS203818 B1 CS 203818B1 CS 430179 A CS430179 A CS 430179A CS 430179 A CS430179 A CS 430179A CS 203818 B1 CS203818 B1 CS 203818B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
chelaton
mercaptodeoxycellulose
thiol
cellulose
preparation
Prior art date
Application number
CS430179A
Other languages
Czech (cs)
Slovak (sk)
Inventor
Peter Gemeiner
Original Assignee
Peter Gemeiner
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Peter Gemeiner filed Critical Peter Gemeiner
Priority to CS430179A priority Critical patent/CS203818B1/en
Publication of CS203818B1 publication Critical patent/CS203818B1/en

Links

Landscapes

  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Description

Vynález sa týká spósobu přípravy merkaptodeoxycelulózy z chlorodeoxycelulózy.The invention relates to a process for the preparation of mercaptodeoxycellulose from chlorodeoxycellulose.

Vodonerozpustne nosiče obsahujúce tiolové skupiny majú Široké možnosti uplatneniá v róznych oblastíach enzymového inžinierstva. Najčastejšie sa používajú v afinitnej chromatografii tiolových enzýmov /Methods in Enzymology 34 jAffinity Techniques] 1974/ a pri imobilizécii „ enzýmov/0. R. Zaborsky, Imtnobilized Enzymes, CRC Cleveland 1974/. Až na polyakrylamidového prechodcu /Enzacryl Polythiol, Koch-Light/ sa dnes vyrábajú polytioly výlučné na báze pólysacharidov, a to hlavně agarózy napr.: Activated Thiol-Sepharose 4B, Thiopropyl-Sephaťose 6B, či sietovanej agarózy napr.: příslušné polytioly série Sepharose CL, všetko Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala.Water-insoluble carriers containing thiol groups have a wide range of applications in various areas of enzymatic engineering. They are most commonly used in the Thiol Enzyme Affinity Chromatography (Methods in Enzymology 34, Affinity Techniques) 1974 and in the immobilization of "enzymes". R. Zaborsky, Immobilized Enzymes, CRC Cleveland 1974 /. Except for the polyacrylamide cross-linker (Enzacryl Polythiol, Koch-Light), polytioles exclusively based on polysaccharides are produced today, mainly agarose, e.g. , all Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala.

Příprava týchto polysacharidov obsahujúcich tiolové skupiny vychádza z aktivácie polysacharidu brómkyánom [Activated Thiol-Sepharose 4B, Upplands Grafíska AB /1974/,' resp. z 0-alkylácie agarózy bis-epoxidmi čicí, -halohydrínini /R. Axén, H. Dřevin, J. Carlsson, Acta Chem.The preparation of these thiol-containing polysaccharides is based on the activation of the polysaccharide by cyanogen bromide [Activated Thiol-Sepharose 4B, Upplands Grafiska AB (1974), respectively. from O-alkylation of agarose with bis-epoxides, -halohydrinini / R. Axen, H. Drevin, J. Carlsson, Acta Chem.

Scand. B 29 / 1975/ 471 ; H. Nishikawa, P. Bailon, J. Solid-Phase Biochem. 1 33/. Uvede• né postupy jednak používajú u nás netradičné polysachatidy /agaróza, dextrán/ ako aj devizové chemikálie /napr.: brómkyán, glutathión, 2,2*-dipyridyldisulfid, bisepoxidy, dithiothreitol/.Scand. B 29/1975/471; H. Nishikawa, P. Bailon, J. Solid-Phase Biochem. 1 33 /. These methods use unusual polysaccharides (agarose, dextran) and foreign exchange chemicals (eg: cyanogen bromide, glutathione, 2,2'-dipyridyldisulfide, bisepoxides, dithiothreitol).

Naviac u celulózy nedávajú tieto spósoby přípravy uspokojivé výsledky /J, Zemek, L. Kuniak,Moreover, in cellulose, these methods of preparation do not give satisfactory results [J, Zemek, L. Kuniak,

P. Gemeiner, PV - 7358/78/. Na druhej straně sa javí ako vhodný východiskový materiál pre přípravu tiol-polysacharidov chlórodeoxycelulóza /CD-celulóza/, lahko pripravitelná za miernych reakčných podmienok s poměrně vysokými stupftami substitúcie /DS 0,3/ /T. L. Vigo, C. W. Welch, Textile J. Res. 40 /1970/ 109/. Chlór v tejto CD-celulóze možno nahradit běžnými nukleofilnými substituentami, napr. -amino, -merkapto, -hydroxy a iné. Tak je v případe chlórodeoxydéxtránu popísaná substitúcia za tiosíran za vzniku tiosíran-deoxydextránu /TSD-dextránu/ /A. F.P. Gemeiner, PV-7358 (78). On the other hand, chlorodeoxycellulose (CD-cellulose), readily obtainable under mild reaction conditions with relatively high degrees of substitution (DS 0.3) (T), appears to be a suitable starting material for the preparation of thiol-polysaccharides. L. Vigo, C.W. Welch, Textile J. Res. 40 (1970) (109). The chlorine in this CD-cellulose can be replaced by conventional nucleophilic substituents, e.g. -amino, -mercapto, -hydroxy and others. Thus, in the case of chlorodeoxydextran, substitution with thiosulfate is described to form thiosulfate-deoxydextran (TSD-dextran) / A. F.

Kolová et al., Cell. Chem. Technol. 12 /1978/553/. Takýto TSD-dextrán sa potom prevedie alkalickým štiepením v prostředí argonu na merkaptodeoxydextrán /MD-dextrán/.Kolova et al., Cell. Chem. Technol. 12 (1978). Such TSD-dextran is then converted to mercaptodeoxydextran (MD-dextran) by alkaline cleavage under argon.

Naše výsledky výskumu v tejto oblasti ukázali, še aj CD-celulózu je možiio uspokoj ivo previest na tiosíran-deoxycelulózu. Jej redukcia tiolmi, ako sd napr.: kyselina tioglykolová alebo Z^merkaptoetanol v slabo alkalickom prostředí a v přítomnosti chelátotvorných činidiel, vedie ku tvorbě merkaptodeoxy-celulózy.Our research in this field has shown that CD-cellulose can also be converted to thiosulfate-deoxycellulose satisfactorily. Its reduction by thiols such as thioglycolic acid or 2-mercaptoethanol in weakly alkaline medium and in the presence of chelating agents leads to the formation of mercaptodeoxycellulose.

Podstata vynálezu spočívá v tom, že v prvom stupni sa prevedie CD-celulóza vo vodnom roztoku tipsíranu sodného pri teplote 90 až 105 °C po dobu 35 až 45 hodin pri mólovom pomere CD skupiny pólysacharidu : tiosíran 1:10 až 15 pri hydromodule ,0 až 15 na tiosíran-deoxy-celulózu, načo v druhora stupni po premytí produktu do negatívnej reakcie na tiosírany a vysuší sa přidá vodný tlmivý roztok kyseliny tioglykolovej resp. 2-merkaptoetanolu o pH 7,7 až 7,9 obsahujúci 1 až 5 mM Chelaton 3 pri mólovom pomere tiosiranové skupiny polysacharidu : tiol 1:15 až 20 a pri hydromodule 10 až 15 a nechá pSsobií 20 až 40 minút pri teplote 20 až 30 °C.SUMMARY OF THE INVENTION In the first step, the CD-cellulose is converted in an aqueous sodium tipulphate solution at a temperature of 90 to 105 ° C for 35 to 45 hours at a molar ratio of CD of the polysaccharide: thiosulfate of 1:10 to 15 for hydromodule. up to 15 to thiosulphate-deoxycellulose, then in the second step after washing the product to a negative reaction to the thiosulphates and drying, an aqueous thioglycolic acid buffer or a solution of sodium thiosulphate are added. 2-mercaptoethanol at pH 7.7 to 7.9 containing 1 to 5 mM Chelaton 3 at a molar ratio of the thiosiran group of the polysaccharide: thiol of 1:15 to 20 and a hydromodule of 10 to 15 and allowed to act for 20 to 40 minutes at a temperature of 20 to 30 C.

CD-celulóza připravená podlá I. L. Vigo, C. M. Welch, Textile Res, J, 40 /1970/ 109 s DS 0,3 až 0,6 je dostatočne vhodná pre přípravu MD-celulózy. Takáto CD-celulóza má výrazné zvýšenu tepelnú odolnost.CD-cellulose prepared according to I. L. Vigo, C.M. Welch, Textile Res, J, 40/1970/109 with a DS of 0.3 to 0.6 is sufficiently suitable for the preparation of MD-cellulose. Such CD-cellulose has a markedly increased heat resistance.

Zavedeuie tiosíranovej skupiny sa mňže prevádzat s tiosírsnom sodným pri teplote 90 až 105 °C po dobu 35 až 45 hodin. Výsledný produkt obsahuje 0,4 až 0,6 mmólov tiosíranových skupin na 1 g suchého preparátu.The introduction of the thiosulfate group can be carried out with sodium thiosulfate at a temperature of 90 to 105 ° C for 35 to 45 hours. The resulting product contains 0.4 to 0.6 mmol of thiosulfate groups per g dry formulation.

Redukcia tiosíranovej skupiny na tiolovú sa prevádza pflsobením kyseliny tioglykolovej či 2-merkaptoetanolu vo vodných tlmivých roztokoch pH 7,7 až 7,9 obsahujúcích Chelaton 3.The reduction of the thiosulfate group to thiol is accomplished by treatment of thioglycolic acid or 2-mercaptoethanol in aqueous buffers of pH 7.7-7.9 containing Chelaton 3.

Po redukcn sa produkt rýchlo premyje pufrovaným vodným roztokom obsahujúcim Chelaton 3, destilovanou vodou obsahujúcou Chelaton 3 a aceton. Výsledný produkt obsahuje 0,25 až 0,5 mmólov tiolových skupin na 1 g suchého preparátu.After reduction, the product is washed rapidly with a buffered aqueous solution containing Chelaton 3, distilled water containing Chelaton 3 and acetone. The resulting product contains 0.25 to 0.5 mmol of thiol groups per g dry formulation.

Výhodou navrhovaného spflsobu přípravy merkaptodeoxy-celulózy je, že preparáty umožňuje vyrábať z domácích lacných surovin poměrně jednoduchým technologickým postupom.The advantage of the proposed process for the preparation of mercaptodeoxycellulose is that the preparations make it possible to produce from domestic cheap raw materials by a relatively simple technological process.

Příklady prevedeniaExamples of design

Přikladl g chlorodeoxy-celulózy /CD-celulózy/ obsahujúcej 1,8 mmóla Cl/g sa nechá napučat v 100 ml 2,1 M vodného roztoku tiosiranu sodného. Reakčná zmes sa potom udržiava 40 hodin pri 100 °C za občasného premiešania. Produkt sa premyje vodou do negatívnej reakcie na tiosíranové ió-ny, acetónom a nechá sa vysušit pri 40 °C. Suchý produkt sa rozsuspenduje v 80 ml 0,1 M vodného roztoku hydrouhličitanu sodného obsahujúceho 5 mM Chelaton 3. Za stálého miešania sa přidá 10 ml kyseliny tioglykolovej a pH sa upraví přidáním koncentrovaného hydroxidu sodného na 7,8. Suspenzia sa nechá miešat 30 minút pri laboratórnej teplote. Produkt sa rýchlo premyje na sklenom filtri 0,1 M vodným roztokom hydrouhličitanu sodného obsahujúcim 5 mM Chelaton 3, destilovanou vodou obsahujúcou 1 mM Chelaton 3 a acetónom, vždy do negatívnej reakcie na tioly. Produkt sa vysuší pri 40 °C.Example 1 g of chlorodeoxycellulose (CD-cellulose) containing 1.8 mmol of Cl / g was swollen in 100 ml of a 2.1 M aqueous sodium thiosulfate solution. The reaction mixture is then held at 100 ° C for 40 hours with occasional stirring. The product was washed with water to a negative reaction to the thiosulfate ions, acetone and allowed to dry at 40 ° C. The dry product is suspended in 80 ml of a 0.1 M aqueous sodium bicarbonate solution containing 5 mM Chelaton 3. While stirring, 10 ml of thioglycolic acid are added and the pH is adjusted to 7.8 with concentrated sodium hydroxide. The suspension is allowed to stir for 30 minutes at room temperature. The product was quickly washed on a glass filter with 0.1 M aqueous sodium bicarbonate solution containing 5 mM Chelaton 3, distilled water containing 1 mM Chelaton 3 and acetone, each time to a negative reaction to the thiols. The product is dried at 40 ° C.

Preparát obsahuje 2,4 Z síry a O',475 mmólov/g titrovatelných tiolových skupin.The preparation contains 2.4 Z sulfur and 0.45 mmol / g titratable thiol groups.

E2SSÉS!S2: +Chelaton 3 - sodná sol kyséliny etyléndiaminotetraoctovejE2SSÉS! S2 : + Chelaton 3 - sodium salt of ethylenediaminotetraacetic acid

Příklad 2Example 2

Postup podlá příkladu 1 s tým rozdielora, že pri redukcii tiosiranu CD-celulózy sa použije 10 ml 2-merkaptoetanolu. Suchý produkt obsahuje 2,85 Z síry a 0,33; mmólov/g titrovatelných tiolových skupin.The procedure of Example 1, except that 10 ml of 2-mercaptoethanol is used in the reduction of CD-cellulose thiosiran. The dry product contains 2.85 Z sulfur and 0.33; mmol / g titratable thiol groups.

Příklad 3Example 3

Postup podlá příkladu 1 stý» rozdíelom, že ako východisková CD-celulóza sa použije preparát s obsahám 3,2 ramólov Cl/g a v 1. stupni 3,85 M vodný roztok tiosíranu sodného. Suchý produkt obsahuje 2,5 Z síry a 0,25 mmólov/g titrovatelných skupin.The process according to Example 1 is the difference that the starting CD-cellulose is a preparation containing 3.2 Ram of Cl / g and in the first stage 3.85 M aqueous sodium thiosulfate solution. The dry product contains 2.5 Z sulfur and 0.25 mmol / g titratable groups.

Vynález má uplatnenie všade, kde je potřebné izolovat či čistit enzýmy a iné bielkoviny obsahujúce tíolové skupiny a kde je výhodné imobilizovaí enzýmy prostedníctvom ich cysteínových zvyškov, a to či už v priemyselnej praxi alebo vo výskuma.The invention has application wherever it is necessary to isolate or purify thiol-group-containing enzymes and other proteins, and where it is preferable to immobilize the enzymes via their cysteine residues, whether in industrial practice or in research.

Claims (1)

Sposob přípravy merkaptodeoxy-celulózy vyznačený tým, že chlorodeoxycelulóza sa v prvon stupni nechá reagovat s vodným roztoko» tiosíranu sodného pri teplote 90 až 105 °C po dobu 35 až 45 hodin pri mólovom požere chlorodeoxy CD skupiny polysacharidu : tiosíran 1:10 až 15 pri hydromodule 10 až 15, načo v druhom stupni, po premytí produktu do negatívnej reakcie na tiosírany a vysušení sa přidá vodný tlmivý roztok kyseliny tioglykolovej alebo 2-merkaptoetanolu o pH 7,7 až 7,9 obsahujúci 1 až 5 mM Chelaton 3 pri mólovom pomere tiosíranové skupiny polysacharidu : tiol 1:15 až 20 a pri hydromodule 8 až 12 a nechá pSsobit 20 až-40 minut pri teplote 20 až 30 °C a nakoniec sa premýva rýchlo na filtri vodným tlmivým ro2tokom obsahujúcim 1 až 5 mM Chelaton 3, destilovanou vodou obsahujucou 0,5 až 1 mM Chelaton 3 a. acetónom, vždy do negatívnej reakcie na tioly.Process for the preparation of mercaptodeoxycellulose characterized in that in the first stage chlorodeoxycellulose is reacted with an aqueous solution of sodium thiosulphate at a temperature of 90 to 105 ° C for 35 to 45 hours at a molar intake of the chlorodeoxy CD of the polysaccharide group: thiosulphate 1:10 to 15 at hydromodule 10 to 15, then in the second step, after washing the product to a negative reaction to the thiosulfates and drying, an aqueous buffer of thioglycolic acid or 2-mercaptoethanol of pH 7.7 to 7.9 containing 1 to 5 mM Chelaton 3 at a molar ratio is added thiosulfate groups of the polysaccharide: thiol 1:15 to 20 and hydromodule 8 to 12 and allowed to act for 20 to 40 minutes at 20 to 30 ° C and finally washed quickly on the filter with an aqueous buffer containing 1 to 5 mM Chelaton 3, distilled water containing 0.5 to 1 mM Chelaton 3 and. acetone, always in a negative reaction to the thiols.
CS430179A 1979-06-22 1979-06-22 Process for preparing mercaptodeoxycellulose CS203818B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS430179A CS203818B1 (en) 1979-06-22 1979-06-22 Process for preparing mercaptodeoxycellulose

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS430179A CS203818B1 (en) 1979-06-22 1979-06-22 Process for preparing mercaptodeoxycellulose

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS203818B1 true CS203818B1 (en) 1981-03-31

Family

ID=5385417

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS430179A CS203818B1 (en) 1979-06-22 1979-06-22 Process for preparing mercaptodeoxycellulose

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS203818B1 (en)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4229537A (en) Preparation of trichloro-s-triazine activated supports for coupling ligands
US4308254A (en) Material able to fix reversibly biologial macromolecules, its preparation and its application
CA1334042C (en) Process for the preparation of a material for affinity chromatography
US4111838A (en) Composition for chromatography
CA1040561A (en) Cyanogen halide activation of carbohydrates and protein binding thereto
Holleman et al. The thrombin-like enzyme from Bothrops atrox snake venom. Properties of the enzyme purified by affinity chromatography on p-aminobenzamidine-substituted agarose.
US4094743A (en) Enzymes immobilized on chitosan
Svenson et al. Coupling of acid labile Salmonella specific oligosaccharides to macromolecular carriers
ES8407516A1 (en) Process for obtaining pancreatin.
SI9111886A (en) Heparosan-n,o-sulphates, process for preparing them and pharmaceutical compositions containing them
JPS5841836B2 (en) Soluble liver uricase, its production method and method for measuring uric acid
SE8107868L (en) PROCEDURE FOR PREPARING A POLYSACARIDE DERIVATIVE OF FIBRINOLYSIN
NO174656C (en) Process for Preparing a Pharmaceutical Preparation of a Stable Water Suspension of Sucralfate
Ōtakara Studies on the Chitinolytic Enzymes of Black-koji Mold: Part I. Viscometric Determination of Chitinase Activity by Application of Glycol Chitin as a New SubstratePart II. Purification of Chitinase
CS203818B1 (en) Process for preparing mercaptodeoxycellulose
Turková et al. Immbilization on cellulose in bead form after periodate oxidation and reductive alkylation
ES8802458A1 (en) Anti-bacterial composition.
Oguntimein et al. Purification and immobilization of Aspergillus niger β‐xylosidase
Stults et al. Immobilization of proteins on partially hydrolyzed agarose beads
KR0131766B1 (en) Synthesis containing thiol group, preparation method and use thereof
US3833555A (en) Polysaccharide cyclic carbamate containing compounds
DE3060628D1 (en) Suspension of insulin crystals and process for its preparation
Marshall et al. Polysaccharide synthesis on immobilized phosphorylase
US3033758A (en) Preparation of levans
Gavard et al. Purification and some properties of a ribonuclease from rat liver ribosomal fraction