CS203159B2 - Process for preparing antibiotic l 13 365 - Google Patents

Process for preparing antibiotic l 13 365 Download PDF

Info

Publication number
CS203159B2
CS203159B2 CS774233A CS423377A CS203159B2 CS 203159 B2 CS203159 B2 CS 203159B2 CS 774233 A CS774233 A CS 774233A CS 423377 A CS423377 A CS 423377A CS 203159 B2 CS203159 B2 CS 203159B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
antibiotic
sharp
agar
culture medium
orange
Prior art date
Application number
CS774233A
Other languages
English (en)
Inventor
Hermes Pagani
Francesco Parenti
Carolina Coronelli
Giorgio Tamoni
Original Assignee
Lepetit Spa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lepetit Spa filed Critical Lepetit Spa
Publication of CS203159B2 publication Critical patent/CS203159B2/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/045—Actinoplanes
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/827—Actinoplanes

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Mushroom Cultivation (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Vynález se týká způsobu výroby nového antibiotika získaného fermentací kmene patřícího do rodů Actinoplanes jménem Actinoplanes sarveparensis. Nové antibiotikum, o němž se zde referuje jako o antibiotiku L 13 365, je světle žlutá krystalická látka, imajcí charakteristické vlastnosti jako teplotu tání, infračervená a ultrafialová absorpční maxima.
Jak byla svrchu uvedeno, antibiotikum L 13 365 se vyrábí fermentací kmene Actinoplaines sarveparensis. Tento kmen je identifikovaný sbírkovým číslem A/13 826 a byl izolován z půdního vzorku odebraného ve vesnici Servepar (Indie). Kmen byl uložen a stal se částí zásobní sbírky kultur CBS (Centrál Bureau Voor Schimmelcultures — Oosterstraat 1 — Baarn —- Nizozemí), kde byl označen číslem 350.76.
Při přípravě antibiotika L 13 365 se mikroorganismus kultivuje za aerobních podmínek ve vodém živném prostředí obsahujícím assmilovatelné zdroje uhlíku, asitmilovatelné zdroje dusíku a anorganické soli.
Obvykle je kmen vyrábějící antibiotikum nejprve kultivován v třepací láhvi, dokud není přítomna dostatečná antibiotická aktivita, potom je kultura užita k inokulaci průmyslových fermentorů obsahujících živné fermentační prostředí.
Předmětem vynálezu je způsob výroby antibiotika L 13 '365, vyznačující se tím, že se pěstuje kmen Actinoplanes serveparensis C. B. S. č. 305,76 v živném prostředí, obsahujícím využitelný zdroj uhlíku, využitelný zdroj dusíku a anorganické soli, v suibmerzní kultuře za aerobních podmínek při teplotě 25 až 35 QC, při pM 6 až 10, po dobu 72 až 96 hodin, do nahromadění uvedeného antibiotika v živném prcistředí, načež se antibiotikum ze zfiltrovaného živného prostředí izoluje organickým rozpouštědlem, a to alkanolem o 1 až 6 atomech uhlíku, alkylesterem nižších alifatických kyselin o 1 až 4 atomech uhlíku v alkylesterové Části nebo nižšími halogenovanými uhlovodíky. Během kultivace se provádějí mikrobiologické zkoušky metodou difúze na agaru, aby se zjistila· koncentrace vyrobeného antibiotika.
Po odstranění · mycelicivého kaláče fUtiací se z profitroovaného fermentačního roztoku získá antibiotikum obvyklými postupy, jako· je například extrakce organickým rozpouštědlem, ve kterém je antibiotikum rozpustné a jež je nemísitelné s vodným· prostředím. Extrakce· se provádí po úpravě pH filtrátu na 2 až 4. Vhodné organické rozpouštědla pro extrakci se s výhodou volí z alkanolů obsahu jících 1 až 6 atomů uhlíku, · (Ci — CJ-alkylesterů nižších alifatických kyselin, nebo ' nižších halogenovaných uhlovodíků. Rozpouštědlo se pak oddělí od fermentačního roztoku centrifugací s vysokou rychlostí, koncentruje se na 1/200 až 1/400 svého, původního objemu, chladí se a nechá se stát dokud se nevytvoří prepicitát, který se oddělí filtrací. Získaný precipitát sestává z poměrně čistého antibiotika L 13 365.
Matečné roztoky se shromáždí a vlijí se v přebytku do inertního nepolárního rozpouštědla jako je lehký petrolej a· poskytnou tak další množství surového antibiotika L 13 365. Takto získaný surový produkt se rozpustí ve směsi methanolu a acetonu a precipituje se z roztoku přidáním ' okyselené vody.
Dva díly se smísí a dále čistí sloupcovou chromatografií s použitím směsi chloroformu a methanolu jako eluční soustavy.
Antibiotikum L 13 365 je nakonec krystalizováno· ze směsi methanolu a ethylacetátu 1 : 1.
Antibiotikum L 13 365 vykazuje značnou antibákteriální účinnost jak in vitro, tak in vivo. Zejména antibiotikum L 13 365 vykazuje vynikající antimikrobiální působení· in vitro speciálně proti grampozitivním bakteriím, jak je uvedeno v následující tabulce:
Tabulka
Kmen Minimální inhibiční koncentrace [jg/ml)
Staphylococcus aureus
ATCC 65138 0,025
Staphylococus aurees Tour 0,005'
Stre,ptococcus haemolyticus
C 203 0,0062
Kmen Minimální inhibiční koncentrace (jíg/jnl)
Diplococcus pneumoniae
UC 41 0,00078
Clostridium perfringens
ISS 30543 0,012
Mycoplasma gallisepticum
H21 C.Z.B. 0,2
Nadto jak se svrchu uvádí, vykazuje antibiotikum L 13 365 také vynikající účinnost in vivo proti experimentálním infekcím u myší. V níže uvedené tabulce jsou uvedeny střední účinné dávky (EDsoj antibiotika L 13 365 proti experimentálním infekcím vyvolanými Staphylococcus aureus, Streptocoocu® haemolyticus a D^iplococcus pneumoniae.
Tabulka
Infekční kmen ED50 mg/kg s. c.
Streptococcus ιhaemuly't'i'Cus0,2
Stapihylococcus aureus10,0
Dljplococeus pneumuniae0,4
Nové antibiotikum je také účinné proti kmenům mikroorganismů, které jsou odolné proti běžně užívaným antibiotikům. Jako vybrané příklady jsou v následující tabulce I uvedeny minimální inhibiční koncentrace (Μ. I. C.J antibiotika· L 13 365 proti kmenům Staphyl^^^us aureus eesistentním k některým antibiotikům.
Tabulka I
Kmen Minimální inhibiční koncentrace jiných antibiotik Minimální inhibiční koncentrace antibiotika L 13 365
Staphyloeeueus aureus ATCC 6538 odolný vůči penicilinu penicilín > 100 0,4 .
Stiaph^ylococcus aureus Tour odolný vůči streptomycinu streptomycin > 100 0,078
Staphyloeoecss aureus ATCC 6538 odolný vůči teteaeykiins tetracyklin > 1-00 0,15
Staphylococcus aureus ATCC 6538 odolný vůči rifampicinu firampicin > 100 0?01
Staphyloeoecss aureus ATCC 6538 odolný vůči neomycinu neomycin > 100 0,005
Stapnylococcus aureus ATCC 6538 odolný vůči erythromycinu erythromycin > 100 0,04
Minimální inhibiční koncentrace antibiotika
L 13 365
Kmen
Minimální inhibiční koncentrace jiných antibiotik
Staphylococcus aureus ATCIC 6538 odolný vůči chlor amphe-nikolu
Staphylococcus aureus
ATOC 6538 odolný vůči cephalo!ridinu
Staphylococcus aureus
ATOC 6538 odolný vůči kanamycinu
Staphylococcus aureus
ATOC 6538 odolný vůči bacitracinu
Staphylococcus aureus ATOC 6538 odolný vůči lincomycinu chloramphenikol > 1000,02 ceiplialoridiin > 1000,078 kanamycin > 1000,04 ba-citiraioin > 1000,02 lincomycin > 1000,15
Toxicita antibiotika L 13 365 při perorální nebo intraperitoneální aplikaci u myší je velmi nízká, protože hodnoty střední smrtné dávky .(LDso) jsou výší než 1000 mg/kg.
Popis Actinoplanes sarveparensis ' A/13 826
Makroskopické vyšetření kolonií
Kmen roste dobře na různých živných agarech. Na agaru s ovesnou moukou mají kolonie průměr 3 až 4 mm, nepravidelné okiraje a drsný povrch. Vzdušné mycelium vždy chybí.
Mikroskopické vyšetření
Sporangia jsou vytvářena v několika, agarových živných prostředích. Mají pravidelný kulový tvar s průměrem od 13 do 20 μ. Zoospory, vysoce pohyblivé, jsou kulovité, ale občas lehce prodloužené o průměru
1,5 až 2 μ.
Na základě těchto vlastností je kmen A/13 826. přiřazován k rodu Actinoplanes a pojmenován Actionplanes sarveparensis C. B. S. 305.76. Tabulka ÍI udává kultur Actinoplanes serveparensis C. B. S. 305.76 kultivovaného na různých standardních prostředcích navržených Shirlingem a Gottliegem [Intern. J. Syst. Bact. 16, 313— 340, 1966) a v dalších prostředích navržených Waksmanem [The Actinomycetes, sv. II, The Williams and Wilkins Co, 1961). Vlastnosti kultur byly stanoveny po 6 až 14 dnech inkubace při 30 °C.
Tabulka III uvádí využití uhlíkových zdrojů vyšetřených podle metody Pridha.mia a G-ottlieiba (Intern. J. Syst. Bact., 56, 107, 1948).
Tabulka IV uvádí fyziologické vlastnosti kmene.
Actinoplanes sarveparensis C. B. S. 305.76
Kultivační prostředí
Živné prostředí č. 2 (kvasnicový extrakt— —maltózový agar)
Živné prostředí č. 3 (agar s ovesnou moukou)
Živné prostředí č. 4 (anorganické soli — — škrobový agar)
Živné prostředí č. 5 (glycerol — asparaginový agar)
Živné prostředí č. 6 (pepton-kvasnicový extrakt — agar se železem)
Živné prostředí č. 7 (tyrosinový agar)
Agar s ovesnou moukou (podle Waksmana)
Hyckneyův a· Tresnerův agar
Czapkův glukózový agar
Agar s glukózou a asparaginem
Živný agar
Bramborový agar
Bennetův agar
Agar s maleátem ' vápenatým
Skimův mléčný agar
Czapkův agar
Vaječný agar
Agar s peptonem a glukózou
Agar
Loefflerovo sérum
Brambory
Želatina
Celulóza
Tabulka II Vlastnosti kultur
Vlastnosti kultur
Bohatý vzrůst, zvrásněný povrch, oranžový až hnědý (centrální Část kolonie je hmavší).
Mírný vzrůst, tenké, sklovité až · světle oranžové. Produkce sporangií.
Střední vzrůst, škraloupovitý povrch, světle oranžový (9/G/7).
Bohatý vzrůst, škraloupovitý povrch, zářivě oranžová (9/1/11).
Mírný vzrůst, škraloupovitý povrch hnědý (13/C/7).
Střední vzrůst, škraloupovitý povrch, oranžový (ll/F/8).
Bohatý vzrůst, drsný povrch, oranžový (9/ /H/12), centrální . část kolonie je tmavší.
Střední vzrůst, zvrásněný povrch, hnědý (18/A/12).
Bohatý vzrůst, zvrásněný povrch, oranžový (11/G/H).
Bohatý vzrůst, drsný povrch, zářivě oranžový (9/1/11).
Střední vzrůst, drsný povrch, oranžový (ll/F/8).
Střední vzrůst, zvrásněný povrch, oranžový až hnědý, produkce sporangií.
Střední vzrůst, zvrásněný povrch, světle oranžový (9/D/9).
Mírný vzrůst, mírná sklovitý ' až světle oranžový, produkce sporangií.
Bohatý vzrůst, zvrásněný povrch, oranžový až světle hnědý, skvrnité stíny.
Bohatý vzrůst, zvrásněný povrch, oranžový (11/G/H).
Mírný vzrůst, drsný povrch, sklovitý.
Střední vzrůst, zvrásněný povrch, tmavě oranžový (11-/B/12).
Velmi mírný vzrůst, tenký, sklovitý.
Velmi- mírný vzrůst, oranžový.
Mírný vzrůst, zvrásněný povrch, tmavě oranžový.
Mírný vzrůst, světle oranžový.
Žádný růst.
Barvy byly určeny podle metody Maerze a Paula (Maerz A. a Paul M. R., 1950). A dictionary of color, 2nd ed. M. Grow—Hill Book Company, lne., New York).
Čísla některých živných prostředí odpovídají číslům uvedeným v práci Shirlinga a Gottlieba · (Intern. J. Syst. Bact., 16, 313— —340, 1966).
Tabulka III
Využívání uhlíkových sloučenin
Zdroj uhlíku
Využívání
C5 á'rabinčza +
xylóza +
c6 glukóza +
frúktóza +
mannóza +
mannitol
inositol
rhamnóza +
(C6)2 sacharóza +
laktóza +
' (Ce)3 rafinóza —
(C6)4 celulóza —
Speciální salicin
+ značí využívání — značí nevyužívání
Tabulka IV
Fyziologické vlastnosti
Test Výsledky
hydrolýza škrobu pozitivní
tvorba H2S pozitivní
vytváření melaninu negativní
tyrosinová reakce negativní
hydrolýza kaseinu pozitivní
hydrolýza maleinanu pozitivní
vápenatého
redukce dusičnanu pozitivní
koagulace lakmusového negativní
mléka
peptonizace lakmusového pozitivní
mléka
zkapalnění želatiny pozitivní
Výroba a izolace antibiotika
K výrobě antibiotika se kmen Actinoplanes sarveparensis C. B. S. 305.76 za aerobních podmínek překultivuje v živném prostředí dokud se nezjistí dostatečná antibiotická aktivita při hodnotách pH pohybujících se od 6 do 10. Například může mít kultura v třepací láhvi následující složení v g/litr:
masový extrakt3,0 trypton5,0 kvasnicový extrakt5,0 glukóza1,0 rozpustný škrob24,0 uhličitan· vápenatý4,0 destilovaná voda q. s. do 1000,0ml až 30 °C a prekultury (jeden litr) se užijí k inokulaci průmyslových fermentorů obsahujících 10 litrů následujícího· živného prostředí:
masový extrakt 40,0 0 pepton 40,0 ό kvasnicový extrakt 10,0 g chlorid sodný 25,5 0 sójová mouka 101,0 0 glukóza 500,0 0 uhličitan vápenatý 50,0 0 voda z vodovodu q. s. do· 10 litrů
Fermentační vsázky se inkubují za aerobních' podmínek a míchání při 28 až 30 stupních Celsia. V pravidelných intervalech se určuje antibiotická aktivita mikrobiologicky agarovou difúzí metodou s použitím jako testovního organismu Staphylococcus aureus. Maximální účinnost se dosáhne po 72 až 96 hodinách fermentace.
Izolace a čištění antibiotika L 13 365.
Obsah fermentačních tanků (80 litrů) se filtruje s použitím1 pomocného: filtračního prostředku „1 % (hmotnost/objem) clarcel”. Mycellový koláč se odstraní a profiltrovaný roztok okyselený na pH 2,5 10% HC1 se dvakrát extrahuje ethylacetátem v množství odpovídajícím 50 % svého objemu.
Organická fáze se oddělí od vodné s použitím vysokorychlostní centrifugace, pak se suší NazSOí, koncentruje při 45 až 50 stupních Celsia ve vakuu na 1/300 svého původního objemu a nakonec vychladí na až 10 °C. Vytvoří se surový precipitát, který se získá filtrací, promyje se malým
Láhve se třepají asi 24 hodin, při asi 28 množstvím ethylacetátu a suší při 45 °C ve vakuu. Získá se . 1,140 g antibiotika asi Í70 proč, čistoty určené spektrofotometricky.
Matečné likvory vznikájící za svrchu uvedené filtrace se vlijí do' 20 objemů lehkého petroleje a získá se další množství 2,250 g antibiotika o čistotě 20 až 25 % (určeno spektrofotometricky). Tato substance se suspenduje v malém množství směsi methanolu a acetonu · (9:1), odfiltruje od ' nerozpustného podílu a rozpustí ve vodě: roztok se uvede na hodnotu pH
2,5 pomocí 10% HC1 za míchání a získaný precipitát se shromáždí centrifugací a dále rozpustí v minimálním množství butanolu při 45 až 50 '°C. Roztok se koncentruje ve vakuu ha· 1/5 původního objemu a vychladí se na 4 °C; získaný precipitát se shromáždí a usuší ve vakuu a jde o antibiotikum L 13 365· (0,450 g) mající stupeň čistoty 80 proč, (určeno· spektrofotometricky). Získané výtěžky se pak podrobí obvyklým čisticím postupům. K tomuto účelu se rozpustí v minimálním množství směsi chloroformu a methanolu (85 : 15) a chromatografují na směsi kysličníku křemičitého a celitu v objemovém poměru 1 : 1. Sloupec se předem aktivuje· při 100 °C a promývá se svrchu uvedenou směsí chloroformu a methanolu.
Eluční a tenkovrstvená chromatografická kontrola frakcí se provádí se stejnou směsí. Frakce se shromažďují podle údajů tenkovrstevně chromatografické analýzy a koncentrují ve vakuu na malý objem. Po přidání diethyletheru se vytvoří precipitát sestávající z antibiotika L 13 365 se stupněm čistoty 95 % (stanoveno spektrofotometricky). Uvedený precipitát se rozpustí ve směsi methanolu a ethylacetátu (1 : 1), zahřeje na 45 °C, odfiltruje od nerozpustného! podílu, po chlazení n'a 4 °C a stání přes noc při této teplotě se získá čisté antibiotikum L 13 365 jako světle žluté jehličky.
Chemickofyzikální vlastnosti antibiotika L 13 365.
Antibiotikum L 13 365 je světle žlutý krystalický prášek kyselého charakteru. Analýzou kyselého hydrolyzátu antibiotika L 13 365 v 6 N kyselině chlorovodíkové v zatavené trubici při 110 °C se odhalí čtyři aminokyseliny. Tři z nich byly identifikovány přístrojem pro automatickou analýzu jakoi kyselina asparagová, threoninová a glycin. Nadto, je antibiotikum L 13 365 charakterizováno následujícími vlastnostmi:
1) Teplota tání 210 °C.
2) Elementární analýza:
51,35 %· C, 5,05 ·% H, 10,50 % N,
11,05 % S.
O (z rozdílu): 22,05
3) Ultrafialové a viditelné absorpční , spektrum rozpouštědlo Amax (nm) 1 %
E 1 cm
kyselina chlorovodíková 0,1 N 360 250 (hrb) 103
237 326
pufr 0,15 M 408 (hrb)
pH 7,5 378 67
250 (hrb) 237 326
pufr 0,15 M 408 5Θ
pH 8,8 250 (hrb) 238 336
Ultrafialová absorpční spektra byla určena ultrafialovým spektrofotometrem UNICAM Sp 800 s použitím roztoku L 13 365 v methylcellosolvových · (MCS)-pufrech při různém . pH v· poměru 1 : 1.
Kompletní průběh · spektra je uveden na obrázku č. 1.
4) · Fluorescenční spektrum
Antibiotikum obsahuje silně fluorescenční chromofor a roztok produktu v 0,1 N hydroxidu sodném vybuzený při 240 nm vykazuje emisní spektrum s maximy při 355 a ·490 nm.
Fluorescenční spektrum · ' bylo stanoveno s · fluorescenčním spektrofotometrem Perkin
Elmer Mod MPF—44.
5) Infračervené spektrum
Charakteristické absorpční svazky v nujolu byly pozorovány při následujících frekvencích (cm'1): 3400· (hrb), 3350 (ostrý), 3200 (hrb), 3100 (ostrý), 2930 a 2870 (nujol), 2800—2400, 2380 (atmosférický kysličník uhličitý), 1750 (ostrý), 1670 (ostrý), 1620 (ostrý), .1540 (ostrý) , 1480 (ostrý,,
1460 a 1380 (nujol), 1420 (ostrý), 1340 (ostrý), 1320 (ostrý), 1280 o^ísú^^.) , 1240
(.ostrý), 1195 (ostrý), 1170 (ostrý,, 1145 (ostrý), 1120 (.ostrý)» 1075 (široký), 1015 (ostrý), 550 (ostrý), 535 (ostrý), 520 (široký), 500 · (ostrý), 865 (ostrý), 840 (-ostrý),
800 (ostrý), 770 (ostrý), 755 (ostrý), 740 (ostrý), 720 (nujol).
Infračervené spektrum bylo stanoveno na spektrofotometru Perkin—Elmer Mod 157.
Kompletní obraz spektra je uveden na obrázku č. 2.
6) Specifická rotace [w]43625 — +125° (C — 0,8 % ve směsi methanolu a chloroformu 1:1]
7) Rozpustnost
Sloučenina je rozpustná v dimethylsulfoixidu, dimethylformiamid-, a v chloroform-methanolových směsích, lehce rozpustná v chloroformu, methanolu, methanol/ethylacetátových směsích, v roztocích hydrogenuhličitanu sodného a ledové kyselině octové, nerozpustné ve vodě a v ostatních běžných organických rozpouštědlech.
8) Charakteristické reakce
Fehling
Tollens
KMnO4 H2SO4 konc. ninhydrinová
FeC13
Milloinova
Schiffova
Anthroinová
Folin Ciocalteauova Elson Morganova pozitivní pozitivní pozitivní tmavě hnědá barva negativní pozitivní negativní negativní pozitivní negativní negativní
9) Kyselost
Ionizovatelná funkce s pKa 7,8 se prokáže při potenciometrické titraci s 0,1 N hydroxidem sodným antibiotika L 13 365 v roztoku methylcellosolvu : vodě 4 :1. Ekvivalentní určená odpovídajícím způsobem je 1400.
10) Chromatograf ické vlastnosti
Systém rozpouštědel
Pufr pH 6,0 nasycený n-butanolem 0,75 Voda nasycená n-butanolem a 2% p-toluensulfonová kyselina0,80
Voda nasycená n-butanolem a 2% koncentrovaný amoniak0,70
Chlorid amonný (20 °/o hmot/objem ve vodě0,0
Butanolový nasycený pufr pH 6,00,0 n-butanol: methanol: voda 40 :10 : 20 s obsahem 0,75 g methyloranže0,90 n-butanol: methanol: voda 40 :10 : 300,90 voda : aceton 1: :10,35 voda nasycená ethylacetátem 0,0—0,31 chloroform : methanol 85:15 (xx)0,51 <x> Papírová chromatografie na Whatmanově č. 1. Antibiotikum vizuallzována na agarových plotnách inokulovaných S. aureus.
(xx) Tenkovrstvená chromatografie na silikagelových plotnách MF/UV254. Fluorescenční skvrna pod ultrafialovým světlem.

Claims (1)

  1. PŘEDMĚT VYNALEZU
    Způsob výroby antibiotika L 13 365, vyznačující se tím, že se pěstuje kmen Actinoplanes serveparensis C. B.S. č. 305,76 v živném prostředí, obsahujícím využitelný zdroj uhlíku, využitelný zdroj dusíku a anorganické soli v submerzní kultuře za aerobních; podmínek při teplotě 25 až 35 °C při pM 6 až 10 po dobu 72 až 96 h do nahromadě ní uvedeného antibiotika v živném prostředí, načež se antibiotikum ze zfiltrovaného živného prostředí izoluje organickým rozpouštědlem, a to alkanolem o 1 až 6 atomech uhlíku, alkylesterem alifatických kyselin o 1 až 4 atomech uhlíku v alkylesterové části, nebo halogenovanými uhlovodíky.
CS774233A 1976-06-29 1977-06-27 Process for preparing antibiotic l 13 365 CS203159B2 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB26934/76A GB1533677A (en) 1976-06-29 1976-06-29 Antibiotic

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS203159B2 true CS203159B2 (en) 1981-02-27

Family

ID=10251519

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS774233A CS203159B2 (en) 1976-06-29 1977-06-27 Process for preparing antibiotic l 13 365

Country Status (32)

Country Link
US (2) US4100273A (cs)
JP (1) JPS532402A (cs)
AR (1) AR212652A1 (cs)
AT (1) AT352271B (cs)
AU (1) AU514594B2 (cs)
BE (1) BE856273A (cs)
CA (1) CA1086669A (cs)
CH (1) CH624992A5 (cs)
CS (1) CS203159B2 (cs)
DD (1) DD133573A5 (cs)
DE (1) DE2724090A1 (cs)
DK (1) DK278577A (cs)
ES (1) ES460248A1 (cs)
FI (1) FI56697C (cs)
FR (1) FR2356666A1 (cs)
GB (1) GB1533677A (cs)
GR (1) GR63764B (cs)
HK (1) HK39979A (cs)
HU (1) HU174186B (cs)
IE (1) IE45445B1 (cs)
IL (1) IL52063A (cs)
LU (1) LU77623A1 (cs)
NL (1) NL7705490A (cs)
NO (1) NO146873C (cs)
NZ (1) NZ184053A (cs)
PH (1) PH12811A (cs)
PL (1) PL105792B1 (cs)
PT (1) PT66730B (cs)
SE (1) SE7707467L (cs)
SU (1) SU680657A3 (cs)
YU (1) YU159277A (cs)
ZA (1) ZA772862B (cs)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6024717B2 (ja) * 1978-05-24 1985-06-14 三共株式会社 抗生物質マイコプラネシン
GB8624806D0 (en) * 1986-10-16 1986-11-19 Pfizer Ltd Glycopeptide antibiotic

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1455128A (en) * 1973-03-19 1976-11-10 Lepetit Spa Purpuromycin and its derivatives
GB1458512A (en) * 1973-11-22 1976-12-15 Lepetit Spa Antibiotic substance
DE2510160A1 (de) * 1975-03-08 1976-09-16 Bayer Ag Antibioticum, ein verfahren zu seiner herstellung sowie seine verwendung als arzneimittel
US4031206A (en) * 1976-02-04 1977-06-21 Pfizer Inc. Antibiotics produced by species of pseudonocardia
US4174390A (en) * 1977-02-07 1979-11-13 Eli Lilly And Company Antibiotic A-7413 and process for preparation thereof
US4169887A (en) * 1978-02-21 1979-10-02 Pfizer Inc. Antibiotics produced by species of actinoplanes

Also Published As

Publication number Publication date
FR2356666B1 (cs) 1981-01-16
FI771721A (cs) 1977-12-30
DK278577A (da) 1977-12-30
CA1086669A (en) 1980-09-30
NZ184053A (en) 1978-12-18
HK39979A (en) 1979-06-29
IE45445B1 (en) 1982-08-25
AU2499177A (en) 1978-11-16
AT352271B (de) 1979-09-10
SE7707467L (sv) 1977-12-30
FR2356666A1 (fr) 1978-01-27
JPS532402A (en) 1978-01-11
IL52063A (en) 1980-03-31
AU514594B2 (en) 1981-02-19
NO146873C (no) 1982-12-22
AR212652A1 (es) 1978-08-31
ATA458377A (de) 1979-02-15
ES460248A1 (es) 1978-10-01
LU77623A1 (cs) 1978-02-01
PT66730A (en) 1977-07-01
FI56697B (fi) 1979-11-30
PL105792B1 (pl) 1979-10-31
IE45445L (en) 1977-12-29
US4280001A (en) 1981-07-21
NO772225L (no) 1977-12-30
DD133573A5 (de) 1979-01-10
GR63764B (en) 1979-12-15
HU174186B (hu) 1979-11-28
NL7705490A (nl) 1978-01-02
DE2724090A1 (de) 1978-01-12
YU159277A (en) 1983-01-21
GB1533677A (en) 1978-11-29
PH12811A (en) 1979-08-23
IL52063A0 (en) 1977-07-31
NO146873B (no) 1982-09-13
CH624992A5 (cs) 1981-08-31
PT66730B (en) 1978-11-24
ZA772862B (en) 1978-04-26
BE856273A (fr) 1977-12-29
US4100273A (en) 1978-07-11
PL199238A1 (pl) 1978-03-13
FI56697C (fi) 1980-03-10
SU680657A3 (ru) 1979-08-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4918174A (en) Tiacumicin compounds
US4375464A (en) Antibiotic AY24,668 and process of preparation
PL98593B1 (pl) Sposob wytwarzania nowego antybiotyku teichomycyny 8327
US4148883A (en) Antibiotics produced by new species of nocardia
US4187292A (en) Antibiotics produced from the microorganism nocardice
KR960013432B1 (ko) 항균제 fr109615 및 이의 제조방법
HU182267B (en) Process for preparing the antibiotic c-15003 p-3
US4313935A (en) Antibiotic FR-900129 substance, a process for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing the same
US4384043A (en) Process for producing the antibiotic nosiheptide
CA1092999A (en) Method for producing maytansinol and its derivatives
US6395711B1 (en) Macrolides with antitumor activity
US4764602A (en) Antibiotics, and their production
CS203159B2 (en) Process for preparing antibiotic l 13 365
US4373028A (en) Culture of Nocardia ATCC 31309
US4550021A (en) Antitumor antibiotic 81-484 and process for its production
CA1152915A (en) Antibiotics c-14482 b.sub.1, b.sub.2 and b.sub.3
US4734492A (en) Macrolide antibiotic M 119
US4605624A (en) Nocardia species capable of producing nargenicin C1
CA1220746A (en) Luzopeptin e.sub.2
US6838268B2 (en) Process for the preparation of β-keto aliphatic acid ester
CA1104078A (en) Antibiotics c-14919 e-1 and e-2
JPH05310766A (ja) 新規抗生物質ｍｉ４８１−４２ｆ４−ａ及びその製造方法
US4612285A (en) Novel antitumor antibiotic awamycin and its production
US4276382A (en) Antibiotic substances
Higashide et al. Antibiotics C-14482 B 1, B 2 and B 3