CS202761B1 - Universal chromogenous testing tablet for determination of alpha-amylase - Google Patents

Universal chromogenous testing tablet for determination of alpha-amylase Download PDF

Info

Publication number
CS202761B1
CS202761B1 CS488678A CS488678A CS202761B1 CS 202761 B1 CS202761 B1 CS 202761B1 CS 488678 A CS488678 A CS 488678A CS 488678 A CS488678 A CS 488678A CS 202761 B1 CS202761 B1 CS 202761B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
amylase
determination
test
alpha
universal
Prior art date
Application number
CS488678A
Other languages
English (en)
Slovak (sk)
Inventor
Ludovit Kuniak
Juraj Zemek
Jozef Gergel
Original Assignee
Ludovit Kuniak
Juraj Zemek
Jozef Gergel
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ludovit Kuniak, Juraj Zemek, Jozef Gergel filed Critical Ludovit Kuniak
Priority to CS488678A priority Critical patent/CS202761B1/cs
Publication of CS202761B1 publication Critical patent/CS202761B1/cs

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Description

ČESKOSLOVENSKÁSOCIALISTICKÁREPUBLIKA( 19 )
POPIS VYNÁLEZU
K AUTORSKÉMU OSVEDČENIU 202 761 (11) (Bl)
(61) (23) Výstavná priorita(22) Přihlášené 21 07 78(21) PV 4886-78 (5I)IntCL3 G 01 N 33/00
ÚŘAD PRO VYNÁLEZY
A OBJEVY (40) Zverejnené 30 05 80(45) Vydané 01 Og g3
Autor vynálezu KUNIAK tUDOVÍT ing. CSc., BRATISLAVA, ZEMEK JURAJ ing. CSc., LEBNICA aGERGEL J0ZBP JÍUDr., BRATISLAVA (54) Univerzálně chromogénne testovacie tabletky pre stanovenie oL-amylázy 1
Vynález sa týká univerzálnych chromogénnych testovacích tabletiek pre kvantitativnéstanovenie ec-amylázy v biologických tekutinách, resp. kultivačných pfidach. Rýchle, jednoduché a spoTahlivé testy úrovně rdznych enzýmových aktivit v biologickýchtekutinách sa stali v modernej diagnostickéj praxi nepostrádateTné. Umožnujú totiž operativ-ně, jednoznačné potvrdit alebo vylúčiť niektoré druhy onemocnění, čo bez rýchlych testovenzýmových aktivit by si vyžadovalo nákladnéjšie a časové náročnéjšie vyšetrovacie diagnos-tické metody. K poměrně častým a rozšířeným nemociam, ktoré sa dajú identifikovat na zákla-de úrovně ot-amylázy v krnom sére, resp. moči pacienta patria mimo iných predovSetkým funkč-ně poruchy pankreasu. K najprogresívnějším metodám stanovenia úrovně enzýmovej aktivity polysacharid-hydro-láz je metoda kolorimetrická, založená na tom, že ako testovací substrát sa použije vhodnýpolysacharid s kovalentne viazaným farbivom. Chromogénny nerozpustný polysacharidový gélsa vplyvom enzýmovej hydrolázovej aktivity štěpí na rozpustné gragmenty, ktoré spolu s via-zaným farbivom prechádzajú do roztoku, pričom intenzita farby roztoku je úměrná koncentrá-cii produktov hydrolýzy a tým aj koncentrácii přítomného hydrolázového enzýmu. V případe testovania ct-amylázovej enzýmovej aktivity možno s výhodou použit ako sub-strát chromogénny škrob, t.j. farbený polysacharid s všzbami «Cíl—®»4), ktoré sa účinkomenzýmu «t-amylázy štiepia (J. Kennedy: Advances im carbohydrate chemistry and biochemistry, 202 761 2 202 701 2jš>, (1974), str. 350 až 357)· Natívny škrob sa však pre viazanie farbiva a následné použi-tie ako substrátu nehodí, nakolko nativně škrobové zrno představuje pře molekuly oC-amylázynevhodný substrát z hlediska velkosti a distribúcie pórov, ktoré sú vo vodnom prostředí premolekuly «,-amýlázy nedostatočne přístupné, v ddsledku čoho enzýmová hydrolýza prebiehavelmi pomaly. Z tohto dfivodu sa musí natívny škrob vhodné modifikovat sletováním, pričomškrobové zrno vo vodnom prostředí niekolkonásobne zvfíčší svoj napúčací objem a tým urýchlienzymatická hydrolýzu do takej miery, že spina praktické aspekty klinickej praxe.
Spdsob přípravy chromogénnych polysacheridových gélov vhodných ako substrát pre testo-vanie enzýmovej aktivity je rozpracovaný v autorskom osvědčení č, 192202,. Taktiež je zná-my spĎsob přípravy testovacích tabletiek pre stanovenie ot-amylázy v biologických tekuti-nách - čs. autorské osvedčenie S. 192210. Uvádzané přihlášky vynálezu riešia tak otázkuvhodnej modifikácie polysacharidu sieťovaním ako i kovalentné viazanie farbiva na Sletova-ný polysacharid, resp. přípravu testovacích tabletiek pre' stanovenie ot-amylázy v biologic-kých tekutinách.
Overovacie skúšky merania oi-amylázy v klinickej praxi ukázali, že připravené testova-cie tabletky podlá autorského osvedčenia č. 1092210 dávajú spolehlivé výsledky úrovně ou-amy-lázy len v krvnom sére, zatial čo naměřené hodnoty oc-amylázy v moči sú pravidelné podstat-né nižšie oproti skutočnej úrovni dl-amylázy stanovenéj sacharogénnou metodou (R. J. Henrya N. Chiamori: Clin. Chem., 6, (1960), str. 434). Příčinou nespolehlivosti testovacích tabletiek pre stanovenie úrovně ot-amylázy v močije známa skutočnosť, že riedením biologickej tekutiny dochádza k poklesu meratelnej aktivi-ty enzýmu. K tomuto javu dcchádza aj pri stanovení oo-amylázy v moči, kedy sa tento riedi20 až 50-krát, čo vedie k nesprávným hodnotám stanovenéj úrovně enzýmovej aktivity. U krvného séra sa tento nedoetatok nepřejavuje, nakolko krvné sérum obsahuje takmer7 % bielkovín, čo je dostatočné množstvo i při viacnásobnom zriedení séra pre ochranu en-zýmu proti strate aktivity. , Z hlediska klinickej praxe je preto potřebné připravit také testovacie tabletky sta-novenia «^.ramylázy, ktoré by dávali správné výsledky nielen u krvného séra ale i v moči.
Takéto univerzálně testovacie tabletky na, stanovenie di-amylázy riešia chromogénnetestovacie tabletky pre stanovenie ot-amylázy podlá vynálezu, ktorého podstata spočíváv tom, že tabletovací granulát obsahuje 25 až 35 % hmot. sletovaného chromogénneho škrobu, 45 až 65 % hmot. mikrokryštalickej celulózy, 3,5 až 5,5 % hmot. 12-hydrátu hydrofosforeč-nanu sodného, 1 až 1,5 % hmot. monohydrátu dihydrofosforečňanu sodného, 2 až 5 % hmot.chloridu sodného a 0,5 až 2 % hmot. rozpustnej bielkovinovej zložky s výhodou hovádzí lyo-filizovaný sérum albumin.
Testovacie tabletky s obsahom proteinu sú univerzálně tak pre stanovenie ot-amylázyv krvnom sére, ako i v moči. Obsah proteinu v testovacích tabletách sa má pohybovat v me-dziach 0,5 až 2 % a je závislý na riedení testovaného roztoku. Záaadne má jedna tabletkao váhe 0,2 g obsahovat tolko proteinu, aby jeho koncentrácia v testovacom biologickom roz-toku pri analýze bola 0,1 %. Takto upravený obsah proteinu v testovacích tabletkách zaruču- 3 202 701 je velmi dobrú zhodu najde.uých hodnót ««.-amylázy v moči s hodnotami získanými referečnousacharogénnou metodou· r Ί zásadě možno použiť aj iný protein ako hovgdzí. Musí však spínat základné dve pod-mienky: musí byť velmi dobré rozpustný, aby po rozpadnutí testovacej tabletky bol hne3 v roz-toku a mohol tak od začiatku reakčnej doby zamedziť poklesu aktivity et-amylázy a nesmie dávať pozitivny test na ^-amylázovú aktivitu. Z ekonomicky dostupnějších proteínov možno použiť napr. lyofilizovaný kazeín.
Teato-vacie tabletky na stanovenie ot-amylázy možno využívať nielen v klinickéj praxi,ale sú spolehlivé i v technickej kontrole výroby mikrobiálnej ot-amylázy.
Hlavnou výhodou univerzálnych testovacích tabletiek na stanovenie ot-amylázy je, že: zaručujú univerzálnost použitia vo všetkých biologických roztokoch bez ohledu na ob-sah proteinu v skúmanom roztoku, zaručujú velmi dobrú spolehlivost a přesnost merania úrovně «,-amylázy,nevyžadujú mimoriadne skladovanie s ohladom na obsah proteinu, svojimi kvalitatívnymi parametremi sa teatovacie tabletky prinajmenej vyrovnajú špič-kovým preparátom a v špecificite ich dokonca vysoko prevyšujú. Přiklad prevedenia 1100 g zemiakového škrobu o vlhkosti 10 % sa sietuje v 1900 ml n/10 hydroxidu sodné-ho, v ktorom sa rozpustilo předtým 6 ml epichlórhydrínu. Sieťovanie prebieha pri izbovejteplote po dobu 16 hodin, za stálého miešania reakčnej suapenzie. Po ukončení sieťovaniesa do reakčnej suspenzie přidá roztok 3 litrov destilovanej vody, v ktorej sa predtýmrozpustilo 800 g síranu sodného a 80 g hydroxidu sodného. Beakčná suspenzia sa mieša 30 mi-nút, načo sa přidá na 4-krát roztok 40 g dvojsodnej soli ,kyseliny 8-amino-5-[.3-(sulfoetyl-sulfonyl)anilinoJ-6-antrachinónsulfónovej v 2 litroch vody. Celý objem sa přidává po 1<>minútových intervaloch a reakčná suspenzia sa nechá reagovat ešte 60 minút od pridania po~sledného podielu farby. Po ukončení naviazania farbiva sa vyfarbený škrob odfiltruje a nafiltri sa premýva destilovanou vodou tak dlho, až je filtrát bezfarebný. Nakoniec sa vodazo škrobu vytěsní alkoholom (najprv 50 %-ným), potom bezvodým a alkohol sa zo škrobu od- .tiahne za zníženého tlaku při 50 až 60 °C alebo sa nechá volné na vzduchu cez noc odpařit.Takto připravený a vysušený chromogénny škrob obsahuje okolo 3,5$ viazaného farbiva, mánapúčací objem vo vodě 7,0 ml/g a je vhodný na tabletovanie.
Tabletovací granulát má následovně optimálně percentuálně zloženie: chromogénny škrob 30 % mikrokryštalická celulóza 59 % dodekahydrát hydrofosforečnan sodný 4,8 % hydrát dihydrofosforečnan sodný 1,2 %

Claims (1)

  1. 4 202 701chlorid sodný 2,0 « mastenec 2,0 % albumin hovfidzieho séra 1,0 % 100,0 % Tabletovacia zrněa sa musí před tabletováním dokonale homogenizovať najme z hlediskazložiek fosfátového pufru a bielkoviny. Zložky fosfátového pufru musia byť dávkované v zrnítosti 0,3 mesch. podobné aj chlorid sodný. Tým sa zabezpečí, že pH roztoku každej tabletkyvo vodě má hodnotu 7, do je optimálně pH pre pankreatickú ot-amylázu. Význam přihlašovaného vynálezu spočívá v tom, že testovacie tabletky na stanovenieot-amylázy mošno použiť pre potřeby tak klinickéj praxe ako i priemyslovej praxe. PB Ϊ D MSI VYNÁLEZU Univerzálně chromogénne testovacie tablety pre stanovenie ot-amylázy vyznačujúce satým, že testovací grariSlát obsahuje 25 až 35 % hmot. sieťovaného chromogénneho škrobu, 45 až 65 % hmot. mikrokryštalickej celulo'zy, 3,5 až 5,5 % hmot. dodekahydrátu hydrofosfo-rečnanu sodného, 1 až 1,5 % hmot. monohydrátu dihydrofosforečnanu sodného, 2 až 5 % hmot.chloridu sodného a 0,5 až 2 % hmot. rozpustnéj bielkovinovej zložky s výhodou hovfidzí lyo-filizovaný sérum albumin. Vytiskly Moravské tiskařské závody,provoz 12, Leninova 21, Olomouc Cena: 2,40 Kčs
CS488678A 1978-07-21 1978-07-21 Universal chromogenous testing tablet for determination of alpha-amylase CS202761B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS488678A CS202761B1 (en) 1978-07-21 1978-07-21 Universal chromogenous testing tablet for determination of alpha-amylase

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS488678A CS202761B1 (en) 1978-07-21 1978-07-21 Universal chromogenous testing tablet for determination of alpha-amylase

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS202761B1 true CS202761B1 (en) 1981-01-30

Family

ID=5392601

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS488678A CS202761B1 (en) 1978-07-21 1978-07-21 Universal chromogenous testing tablet for determination of alpha-amylase

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS202761B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4578361A (en) Creatinine antibody
JPS60230066A (ja) プロトロンビン時間測定用試薬
Song et al. Usefulness of serum lipase, esterase, and amylase estimation in the diagnosis of pancreatitis—a comparison
JP5466405B2 (ja) ヒアルロン酸の分子量の測定方法
US5948630A (en) Method and composition for reducing the effects of endogenous alkaline phosphatase
US3769173A (en) Determination of gamma-glutamyl transpeptidase in biological fluids
CA1079166A (en) Process for the quantitative determination of antithrombin iii
SU515471A3 (ru) Способ количественного определени энзимов гидролитического действи
CA1279242C (en) Fluorescence polarization assay for macromolecular hydrolases, reagents for use in the assay and method for making the reagents
CS202761B1 (en) Universal chromogenous testing tablet for determination of alpha-amylase
SU396036A1 (ru) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ сс-АМИЛАЗЫ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ
JP2681635B2 (ja) 分析感度及び分析精度を向上させる方法
US3694318A (en) Substrate and method for alpha-amylase assay
EP0262707B1 (en) Test reagent for amylase determination
WO1999006446A2 (de) Verfahren zum transglutaminase-katalysierten koppeln von protein oder peptid an einen träger
JPH0687798B2 (ja) 体液中のカルシウム測定方法
JP6320441B2 (ja) ライソゾーム病2疾患責任酵素の迅速マススクリーニング検査法
CS267157B1 (sk) Testovacie tablety na stanovenie mikrobiálnel alfa amylázy
JP2699147B2 (ja) 体液中のカルシウム測定方法
SU1285373A1 (ru) Способ определени активности амилазы
CS261525B1 (sk) Testovacie tablety na stanovenie Cx zložky celulázovej aktivity
SU1153669A1 (ru) Способ гетерогенного иммуноферментного анализа антигена
CN110951824A (zh) 一种复合缓冲体系在制备α-淀粉酶测定试剂盒中的应用
JPH11194A (ja) 測定用試薬及び測定方法
SU1273804A1 (ru) Способ определени активности комплексных соединений гепарина в плазме крови