CS202636B1 - Způsob výroby kyseliny citrónové - Google Patents
Způsob výroby kyseliny citrónové Download PDFInfo
- Publication number
- CS202636B1 CS202636B1 CS556779A CS556779A CS202636B1 CS 202636 B1 CS202636 B1 CS 202636B1 CS 556779 A CS556779 A CS 556779A CS 556779 A CS556779 A CS 556779A CS 202636 B1 CS202636 B1 CS 202636B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- fermentation
- citric acid
- medium
- alkanes
- production
- Prior art date
Links
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 93
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 39
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 39
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 15
- 241000235015 Yarrowia lipolytica Species 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 7
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 7
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 4
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 26
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 9
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 8
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 229960004543 anhydrous citric acid Drugs 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 3
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- DCAYPVUWAIABOU-UHFFFAOYSA-N hexadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC DCAYPVUWAIABOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 229930186657 Lat Natural products 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 239000010408 film Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000002912 waste gas Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu výroby kyseliny citrónové.
Dosud se převážná část výroby kyseliny citrónové spotřebovávala ve farmaceutickém a potravinářském průmyslu. V poslední době se počalo používat kyseliny citrónové a jejích solí rovněž v chemickém průmyslu k výrobě povrchově aktivních látek a pracích prostředků. Nedávno bylo zjištěno, že je možno kyselinu citrónovou využít k odstraňování síry z odpadních plynů, a tím čistit prostředí od nečistot.
Jsou známy způsoby výrob kyseliny citrónové kultivací mikroorganismů různých taxonomických skupin na médiích s normálními parafiny, popsané například v britských patentech δ. 1 187 610 a 1 203 006 a ve francouzských patentech δ. 1 573 655, 2 029 689 a 2 078 979.
Nejčastěji se jako producentu používá kvasnic druhu Candida lipolytica, jak je uvedeno například ve francouzském patentu č. 2 003 199, v britských patentech č. 1 380 938 a 1 381 047 přihlašovatele Hitachi, ve francouzských patentech č. 2 207 187 přihlašovatele Mitsui Petrochemical Industry a 2 028 886 a 2 078 979 přihlašovatele Takeda Chemical Industry. Dále potom v britském patentu č. 1 353 480, americkém patentu č. 3 801 455 a v britských patentech S. 1 203 006 a 1 285 687 přihlašovatele Pfizera, v sovětských patentech č. 448 652 a 493 979 a ve francouzských patentech č. 2 208 980, 2 209 840,
249 950 a 2 271 287 přihlašovatelů ERAP a Inst. Franc, du Pétrole.
202 636
202 030 _
Největšího výtěžku kyseliny citrónové se dosáhlo podle sovětského patentu č. 448 652 u firmy Pfizer. Podle tohoto vynálezu se použilo kmene Candida lipóly tica ZTCC č. 20.228, produkujícího kyselinu citrónovou při kultivaci v živném médiu, které obsahovalo jako zdroj uhlíku n-elkany a rovněž zdroj dusíku a minerální solí.
Jako výtěžku fermentace se dosáhlo koncentrace kyseliny citrónové v množství 225 g na 10^ mm3 fermentačního bujónu, ροδίtáno na monohydrát. Výtěžek této kyseliny, počítáno na hmotnost vnesených n-alkanů, činil 125 Ž. Zpravidla se výtěžek vypočítával na bezvodou kyselinu citrónovou. V takovém případě činila koncentrace bezvodé kyseliny citrónové 205 g na 10^ mm3 média a výtěžek kyseliny citrónové Sinil 113,9 < hmotnostních. Přesto tento známý způsob výroby žádnou skutečně vynikající výtěžnost kyseliny neznamenal.
Úkolem vynálezu tylo vyvinout takový způsob výroby kyseliny citrónové, který by umožnil zvýšit současně koncentraci a výtěžek konečného produktu vhodným výběrem odpovídajícího producentu a jeho fermentaci za určitých stanovených podmínek.
Úkol tyl vyřešen a nedostatky dosavadních známých způsobů výroby byly odstraněny u způsobu výroby kyseliny citrónové fermentaci produkčních kmenů drobu Candida lipolytica na živném médiu, obsahujícím n-alkany jako zdroj oblíku, a za provzdušňování, podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že jako produkčního kmene se použije kmene Candida lipolytica, deponovaného pod číslem CKFM U-184, a fermentace probíhá při hodnotě pB nejvýše 8,0.
Výhodným je provádět fermentaci při koncentraci kyslíku v médiu v rozmezí od 50 do 90 % nasycení a když kultivace probíhá při hodnotě pH od 5,0 do 7,0. Rovněž je výhodné, když alespoň jeden z použitých n-alkaná má 12 až 19 atomů Uhlíku.
Použití daného kmene Candida lipolytica CKJV 0-184 a provádění fermentace za uvedené hodnoty pH umožňuje zvýěení výtěžku konečného produktu - kyseliny citrónové - o 33 % ve srovnání s výtěžkem, dosaženým způsobem podle sovětského patentu Č. 448 652.
Kmen používaný při způsobu podle vynálezu se liší od ostatních kmenů vyeokou stabilitou v tvorbě prakticky pouze kyseliny citrónové, nebol poměr citrátu k isočitrétu je 31 t : 1. Tím se významně usnadňuje izolace kyseliny citrónové z fermentačního roztoku.
Způsobem podle vynálezu se umožňuje nepoužívat jako výchozí látky pro výrobu kyseliny citrónové potravinářské suroviny, nýbrž n-alkany, a to a výtěžkem, předstihujícím známé výsledky. Rovněž výrobní náklady na výrobu kyseliny citrónové podle vynálezu jaou podstatně nižší, než například při výrobě z melasy.
Způsob podle vynálezu se provádí následovně. Kvasnice Candida lipolytica CMPtf U-184 se kultivovaly na živném médiu, obsahujícím zdroj dusíku, zdroj fosforu a další soli.
Jako zdroje uhlíku Se použilo alespoň jednoho alkanu s 12 až 19 atomy uhlíku. Do živného média byla přidána směs stopových prvků kvasnicový autolysét jako zdroj vitaminů. Kultivace se prováděla za provzdušňování při koncentrací kyslíku v médiu od 50 do 90 % nasycení
282 638 a při hodnotě pH nejvýěe 8,0 po dobu 84 až 144 hodin a při teplotě od 28 do 30
Očkovací látka byla připravena následujícím způsobem. Candida lipolytica CMPH U-184, množená po 3 dny na širokém agaru, byla ve formě suspenze přenesena do živného roztoku a po 48 hodinové inkubaci v kádích na třepačce β 200 ot/min a při teplotě 28 až 30 °C byla použita pro naočkování fermentačního média.
Jako výsledek fermentace bylo dosaženo koncentrace kyseliny citrónové v množství 237»3 g na 10 ram^ fermentačního bujónu, počítáno na monohydrát. Výtěžek kyseliny citrónové, počítáno na nasazené n-alkany, činil 158 % hmotnostních.
kmen Candida lipolytica CMPM U-184 byl získán působením nitrosomethylaočoviny na buňky Candida lipolytica IBFM U-160 (704) a následnou selekci. Mutační kmen byl deponován
1. února 1978 a je uchován v Muzeu kultur průmyslových mikroorganismů Institutu WNII Genetika.
Kmen Candida lipolytica CMPM U-184 má následující charakteristiku.
Mladá kultura má tekuté a agarisované mladině mé okrouhlé oválné a poněkud protáhlé buňky o velikosti 2,0 - 5,0 x 3,0 - 10,0^um a rovněž řetězce ze 3 až 4 buněk.
Při růstu na tekuté mladině při teplotě 25 °C se vytváří 8. dne na povrchu média tenký film a na dně zkumavky malá sraženina. 15. a 16. dne se tlouělka filmu zvětěuje a rovněž sraženina.
Kolonie na mladinovém agaru, starém 10 dnů, jsou bílokrémově zbarveny, v rovině, matné, vyklenuté, střed kolonie je mírně vyvýšen, okraje jsou hladké. Obří kolonie jsou krémové barvy, na okraji žlutozelené, trochu vrásčitá, plochá, střed je zvednut, okraje jeou mírně lopetovité.
čárový růst je plochý, rovný, matný, krémové barvy, okraje jsou hladké.
Kultura na skle na bramborovém agaru. Pseudomycelium je slabě vyvinuto, silně aerobní. Nezkvaeuje cukr, asimiluje glukózu, ethanol, acetát, glycerin. Na gnlaktóze byl zaznamenán slabý růst.
Neasimiluje laktózu, maltózu, sacharózu, rafinozu, arabinózu, xylózu a škrob.
Jako zdroje dusíku bylo použito (NH^Jg SO^ a NH^Cl. Neroste na nitrátech. Plně peptonizuje mléko.
Optimální teplota pro růst je 26 až 30 °C, maximální 33 °C.
Uchovává se na agarisovaném médiu podle Riedra a parafinem a ampulích v lyofilisovaném stavu.
Popsaný kmen Candida lipolytica CMPM U-184 ee vyznačuje schopností, že při růstu na živných s n-alkany produkuje především pouze samotnou kyselinu citrónovou a prakticky
202 OB žádnou kyselinu ieocitronovou.
Aby ee stabilita mutantu Candida lipolytica CMPM U-184 uchovala, přaočkovala sa během 4 měsíců na Seretvé médium a parafinem - kultovace v baňkách na třepáku celkem bylo provedeno 40 sa sebou následujících pasáží. Během větíiny oparaeí nepozbyla kultura schopnost produkovat zejména citrát· Naproti tomu aa poměr citrátu k isoeitrátu v médiu posunul jaětě více na atranu žádané tvorby Citrátu.
Uložení mutačního kmene po dobu 6 lat na agarisovanám mádlu rovněž nezhorěilo vlastnosti této kultury.
Při věech zkouškách zůstala stabilní a z praktického hlediska důležitá hlavní vlastnost mutačního kmene Candida lipolytica CMPM U-184, výhodná syntéza citrátu na médiích s n-alkany.
Vynález je dála blíže popsán ne konkrétních příkladech způaobu výroby kyseliny citrónové.
Příklad 1
Kvasnice Candida lipolytica CMPM U-184 byly udržovány konstantní na agariaovanám minerálním médiu podle Řeadera a normálními alkany a počtem uhlíků 12 až 19. Složení média v g na 10® mm^ Sinilo:
normální alkany C12 až C^ 10,0 (NH4>2 S04 3,0
MgSO4.7 H20 0,7
NaCl 0,5
Ca(N03)2 0,4 kh2po4 1,0
KgHP04 0,1 kvasný autolysát 2.1oA mm^ sada mikroprvků podle Burkholdera agar-agar 25,0.
Sada mikroprvků podle Burkholdera zahrnuje následující složky v mg na 10® nap média. KJ-0,1; B-0,01; lln2+-0,01; Zn2+-0,01; Cu2*-0,01; Mo®+-0,01; Pe2+-0,05·
Kvasnice ae kultivovaly na šikmém agaru po dobu 3 dnů při teplotě 28 až 30.°C. Suspenze buněk byla přenesena z agariaovaného média do buněk o objemu 250.10^ mm\. obsahujících 50.10^ mm^ očkovacího média.
Médium k získání očkovacího materiálu a k provedení farmentaee mělonásledující složení v hmotnostních procentech.
202 S3S
| n-hexadekan (Clg) | 0,8 |
| (nh4)2 so4 | 0,03 |
| MgS04.7 H20 | 0,07 ? |
| NaCl | 0,05.. |
| Ca(N03)g | 0,04 |
| KH^ | 0,1 |
| K2 HP04 | 0,01 |
| kvasný autolysát | 2.10^ mm' |
| směs mikroprvků podle Burkholdera. |
Baňky byly třepány v třepačce e 200 ot/min po dobu 48 hodin. Získaný očkovací materiál byl dán v množství 5 % do fermentačního média.
Fermentace mip média a při vána konstantní „ 11 1 se prováděla po dobu 5 dnů v bankách o objemu 250.10 mm-' vždy s 50.10J různých hodnotách pH média od 3,0 do 8,0. Potřebná hodnota pH byla udržopřidáváním sterilních roztoků NaOH a H^SO^.
Získané výsledky možno zhodnotit podle následující tabulky I.
Tabulka I
| Hodnota pH média | Kyselina citrónová g/10® mm^ | Kyselina isocitronová g/10^ mm^ | Výtažek kyseliny citrónové, vztaženo na hmotnost vnese- ného alkanu v % hmotnostních |
| 3.0 | stopy | 0 | - |
| 4,0 | 3,7 | 0,4 | 46,3 |
| 5,0 | 9,3 | 1,0 | 116,3 |
| 6,0 | 12,4 | 1,4 | 155,0 |
| 7,0 | 11,3 | 1,3 | 141,3 |
| 8,0 | 10,5 | 1,2 | 131,3 |
Příklad 2
Kvasnice ee pomnožovaly na Šikmém agaru, obdobně jak je uvedeno v příkladě 1.
» 3 1
Suspenze buněk se a agarieovaným médiem přenesla do banky o objemu 750.10 mm, kde bylo 50.10^ mm^ očkovacího média následujícího složení v g/10® miP normální alkany (C12 až C^) 24,0 (NH4)2 S04 1,2 llgSO4.7 H20 0,7 NaCl 0,5 Ca(NO3)2 0,4
202 038
ΚΗπΡΟ, , 2ťW4 1,0 κ2ηρο4 Ο,ί ktasný autolysát 2.1Ο3 mm3 eměe mikroprvků podle Burkholdere.
Kultivace aa prováděla po dobu 72 hodin v třepačce o 200 ot/min při teplotě 28 až 30 °C. Bo fe menta ční nádoby aa vpravilo 0,5.10® mm3 očkovací kultury.
Fermentace probíhala v přístroji o zdvihovém objemu 5.10® mm3, obsahujícím 4,5.10® mm3 hlavního média následujícího složení v g/10® mm3.
| normální alkany (C12 oá | 72,0 |
| (hh4)2so4 | 0,9 |
| HgSO4.7 HgO | 1,4 |
| MaCl | 0,5 |
| Oa(llO3)2 | 0,8 |
| 2,0 | |
| k2hpo4 | 0,2 |
| kvasný autolyaát | 2.1Ο3 mm3 |
| směs mikroprvků podle Burkholdere | dvojnásobné množství |
Hodnota pH média byla udržována konstantní na 5,5 až 6,5 přidáváním 10 Kniho roztoku
KaCH.
Koncentrace kyslíku - 25 K, 50 % a 75 al 90 % nasycení - ae udržovala konstantní na stálé úrovni od počátku až do konce fermentačního propasu, čehož ae dosáhlo směnou rychlosti otáček třepačky a objemu vzduohu, zaváděného do fermentačni nádoby za jednotku času.
V následující tabulce II jeou uvedeny výsledky maximálního obohacení kyselin podle nasycení média kyslíkem.
Tabulka II
| K nasycení média kyslíkem | Boba fermentace v hodináoh | Kyselina citrónová g/10® mm3 | Kyselina iaocitronová g/10® mm3 | Výtěžek kyseliny citrónové, vztaže- no na použitý parafin % hmot. |
| 25 | 106 | 40,6 | 3,0 | 56,4 |
| 50 | 108 | 48,0 | 4,0 | 66,6 |
| 75 až 90 | 84 | 81,0 | 7,5 | 112,5 |
τ
202 636
Příklad 3
Kvasnice byly množeny na šikmém agaru po dobu 3 dnů při teplotě 28 až 30 °C. Suspenze buněk byla přenesena do baňky o objemu 750.103 mm3 s 50.103 mm3 očkovacího média.
g *
Složení očkovacího média v g/10 mm·5:
| normální alkany (C12 až C^g) | 48,0 |
| (nh4)2so4 | 3,0 |
| MgSO4.7 HgO | 0,7 |
| NaCl | 0,5 |
| Ca(NO3)2 | 0,4 |
| kh2po4 | 1,0 |
| k2hpo4 | 0,1 |
| kvasný autolysát | 4,0.103 mm3 |
| aměa mikroprvků podle Burkholdera. | |
| Po 48 hodinové inkubaci v třepáku byla | získána očkovací kultura přenesena do nové |
| sady baněk 8 očkovacím médiem. Objem inokula | činil 6 %, počítáno na objem média. |
| Druhá sada baněk byla rovněž umístěna na třepák a kultivována při teplotě 28 až 30 °C | |
| po dobu 50 hodin. Hodnota pH média byla udržována konstantní na 6,0 až 6,5 přidáváním sta- | |
| rilního 10 %ního roztoku NaOH. | |
| 500.103 mm3 vzrostlé kultury bylo přeneseno do fermentačního média. Objem média činil | |
| 3,5.106 mm3. | |
| Složení fermentačního média v gramech: | |
| normální alkany (C^2 až C^g) | 600,0 |
| (nh4)2so4 | 20,0 |
| MgS04.7 H20 | 2,8 |
| NaCl | 1,5 |
| Ca(N03)2 | 1,6 |
| KH2P°4 | 4,0 |
| k2hpo4 | 0,4 |
| kvasný autolysát | 8,0.103 mm3 |
| směs mikroprvků podle Burkholdera. |
Fermentace se prováděla ve fermentačním aparátě o obsahu 106 mm3, při teplotě 29 až 30 °C, za intenzivního míchání a provzdušňování. Hodnota pH média, byla udržována konstantní na 6,0 až 6,5 přiváděním roztoku NaOH.
Po 144 hodinové kultivaci bylo dosaženo koncentrace kyseliny citrónové 217 g/106 mm3.
Současně se vytvořila v médiu kyselina isocitronová v koncentraci 6 g/106 mm3.
202 838
Celkový obsah bezvodé kyseliny citrónové v aparatuře Sinil 866 g nebo 949,2 monohydrátu. Výtěžek bezvodé kyseliny citrónové, počítáno hmotnostně, činil 145 % a monohydrá tu 158 %, vztaženo na nasazené n-alkany.
Příklad 4
| Očkovací materiál, připravený obdobně jako v příkladě 3, | byl pěstován postupně ve | |
| fermentačnfch tancích o objemu 63.10° mm3 a 400.10° mm3 na | médiu následujícího složení | |
| v gAO6 mm3. | ||
| normální alkany (C12 až C^) | 48,0 | |
| (nh4)2so4 | 6,0 | |
| MgS04.7 H20 | 0,7 | |
| NaCl | 0,5 | |
| Ca(NO3)2 | 0,4 | |
| KH2P°4 | 1,0 | |
| k2hpo4 | 0,1 | |
| kvasný autolyaát | 2,0.103 mm3 | |
| směs mikroprvků podle Burkholdera. | ||
| Doba fermentačního prooesu v každém taxíku činila 48 hodin při teplotě 28 až 30 °C | ||
| a při hodnotě pH od 5,0 do 5,5. | ||
| Hlavní fermentace potom proběhla v tanku o objemu 3,0 | m3. | Koeficient naplnění apará- |
| tu byl 0,6. Očkovací materiál byl vnesen do fermentačního tanku v množství 10 %, počítáno | ||
| na objem média. | ||
| Složení fermentačního média v gAO® mm3: | ||
| normální alkaxiy (C^2 až C^g) | 100,0 | |
| (ra4)2so4 | 5,0 | |
| MgS04.7 H20 | 1,4 | |
| NaCl | 0,5 | |
| Ca(NO3)2 | 0,8 | |
| kh2po4 | 2,0 | |
| K2HP°4 | 0,2 | |
| kvasný autolysát směs mikroprvků podle Burkholdera. | 4,0.103 mm3 |
Fermentace proběhla při teplotě 28 až 30 °C. Hodnota pH média byla udržována konstantní na 5,6 až 6,0 přidáváním sterilního 20 feního roztoku NaOH.
Koncentrace kyslíku ve fermentačním médiu byla udržována konstantní na 50 až 80 % nasycení , 202 631
Během fermentačního procesu tyly 2. a 4. dne v odstupu 24 hodin přidány do fermentač ního média normální álkany, přičemž každé část činila 2 %, počítáno na objem média.
Hlavní fermentaoe trvala 120 hodin. Na konci fermentaoe činil celkový obsah kyseliny citrónové v aparatuře 368 kg. Výtěžek fermentaoe na bezvodé kyselině citrónové byl 128 %, počítáno na hmotnost nasazených parafinů.
Claims (4)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU1. Způsob výroby kyseliny citrónové fermentací produkčních kmenů druhu Candida lipolytica na živném médiu, obsahujícím n-alkany jako zdroj uhlíku, a za provzdušňovéní, vyznačující se tím, že se jako produkčního kmene použije kmene Candida lipolytica, deponované ho pod číslem CMPM U-184, a fermentace probíhá při hodnotě pH nejvýše 8,0.
- 2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že fermentace probíhá při koncentraci kyslíku v médiu v rozmezí od 50 do 90 % nasycení.
- 3. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že kultivace probíhá při hodnotě pH od 5,0 do 7,0.
- 4. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se použije alespoň jeden z n-alkanů s počtem uhlíků od 12 do 19.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS556779A CS202636B1 (cs) | 1979-08-14 | 1979-08-14 | Způsob výroby kyseliny citrónové |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS556779A CS202636B1 (cs) | 1979-08-14 | 1979-08-14 | Způsob výroby kyseliny citrónové |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS202636B1 true CS202636B1 (cs) | 1981-01-30 |
Family
ID=5400816
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS556779A CS202636B1 (cs) | 1979-08-14 | 1979-08-14 | Způsob výroby kyseliny citrónové |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS202636B1 (cs) |
-
1979
- 1979-08-14 CS CS556779A patent/CS202636B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI301509B (en) | Enhanced production of lipids containing polyenoic fatty acids by very high density cultures of eukaryotic microbes in fermentors | |
| JP4666867B2 (ja) | 改良型発酵方法 | |
| CN110218745A (zh) | 发酵生产长链二元酸的方法及其得到的长链二元酸 | |
| CN101225411A (zh) | 生物合成生产混合长链二元酸的新方法 | |
| TW213953B (cs) | ||
| CN103305369A (zh) | 酱香生物培养液及其制作方法和使用方法 | |
| CS202636B1 (cs) | Způsob výroby kyseliny citrónové | |
| US4355109A (en) | Microbiological production of novel biosurfactants | |
| JPH0449396B2 (cs) | ||
| JPS5946598B2 (ja) | 微生物による長鎖脂肪酸類の製造法 | |
| US4353926A (en) | Soda crackers | |
| RU2096461C1 (ru) | Штамм дрожжей yarrowia lipolytica - продуцент лимонной кислоты и способ получения лимонной кислоты | |
| RU2745093C1 (ru) | Штамм метанокисляющих бактерий Methylococcus capsulatus BF19-07 - продуцент для получения микробной белковой массы | |
| CN1768146B (zh) | 用低浓度的含碳和含氮营养物来进行发酵的方法 | |
| US2544273A (en) | Fermentation activation | |
| DK171744B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af pyrodruesyre | |
| RU2796923C1 (ru) | Штамм дрожжей Ogataea parapolymorpha ВКПМ Y-5081 - продуцент белковой биомассы | |
| RU2487931C1 (ru) | ШТАММ ДРОЖЖЕЙ Yarrowia lipolytica ВКПМ Y-3753 - ПРОДУЦЕНТ ЯНТАРНОЙ КИСЛОТЫ | |
| de Becze | Reproduction of distillers' yeasts | |
| AU617103B2 (en) | Process for the preparation of fats usable as cacao butter substitute or as a component of a cacao butter substitute | |
| US2465338A (en) | Method for tyrothricin production | |
| SU1620478A1 (ru) | Способ получени биомассы кормовых дрожжей при комплексной переработке мелассы | |
| SU695230A1 (ru) | Способ получени лимонной кислоты | |
| US3997399A (en) | Fermentation process for the production of citric and isocitric acids | |
| JPS63177782A (ja) | 炭素源資化性好塩性酵母の発酵生産方法 |