JPS63177782A

JPS63177782A - 炭素源資化性好塩性酵母の発酵生産方法

Info

Publication number: JPS63177782A
Application number: JP1107987A
Authority: JP
Inventors: Kenji Suzuki; 健司鈴木
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1987-01-19
Filing date: 1987-01-19
Publication date: 1988-07-21
Also published as: JPH042229B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕この発明は海産油脂酵母類の発酵生産方法に関するもの
である。

〔従来の技術〕

古くから、油脂類または炭化水素類を資化する微生物は
数多く知られており、その応用として石油または天然ガ
ス等を原料とする微生物菌体の製造方法が近時盛んに提
唱されるようになった。しかし、従来公知の酵母菌株で
は原料である油脂類または炭化水素類の利用は全て淡水
を利用して工業化されるのが一般的であり、海水または
人工海水のような塩水を利用した工業化は皆無であると
言ってよい。一方海洋微生物も古くから知られてはいる
が、その工業的な生産または利用等については殆んど開
発されていない。

〔発明が解決しようとする問題点〕

このように従来の技術においては海洋微生物の工業的な
生産または利用は殆んど行なわれておらず、また油脂類
、炭化水素類を資化する微生物の塩水を使用する工業的
利用方法も開発されていないという問題点があった。

〔問題点を解決するための手段〕

上記の問題点を解決するために、この発明は海産油脂酵
母キャンディダ・マルトーサ−（Ｃａｎｄｉ−ｄａ　Ｍ
ａ’１ｔｏｓａ−ＮＯＶ−３Ｐ）　（微工研菌寄第９１
１２号〕類を、炭素源と天然もしくは人工の海水とを主
要成分とする栄養液中で好気的に培養し、海産油脂酵母
類菌体を高濃度、高収率で分離した後水洗し、高脂肪お
よび高蛋白の酵母菌体を採取するという手段を採用した
ものである。以下その詳細を述べる。

まず、この発明に用いる海産油脂酵母は各地の海洋生物
を広汎に亘って採集し、油脂および炭化水素類の資化性
を有し、しかも海水または人工海水を用いた栄養液中で
菌体蛋白質の含量、増殖速度の早い酵母として分離した
油脂類、炭化水素類等の炭素源資化性好塩性酵母であり
、この菌株は、分類学的諸性状からキャンデイダ（Ｃａ
ｎｄｉｄａ　）属に位置し、生育温度、澱粉の資化性、
発酵性と炭素化合物の資化性の点で比較するとキヤンデ
イダ・マルトーサー（ＣａｎｄｉｄａＭａｌｔｏｓａ−
（Ｃａｎｄｉｄａ　Ｍａｌｔｏｓａ　）　ＡＴＣＣ２０
１８４、ＡＴＣＣ２０２７５等とは分離源、好塩性の挙
動が異なること以外は非常によく一致していので、新菌
株というよりは変種であるとする方が妥当であると考え
られる。したがってこの発明に使用する海産油脂酵母の
菌株をキヤンデイダ・マルトーサー（ＣａｎｄｉｄａＭ
ａｌｔｏｓａ−・ツバ・ＳＰ　　（Ｃａｎｄｊｄａ　Ｍ
ａｌｔｏｓａ−ＮＯＶ−３Ｐ　）と命名し、工業技術院
微生物工業研究所にこれを寄託〔受託番号：微工研寄第
９１１２号〕した。

この発明の酵母の菌学的諸性質を示すとつぎのとおりで
ある。

■、栄養増殖と形態的性質（ａ）　　地培における生育状態：麦芽汁培地を使用して２８℃、３日間培養した場合の細
胞は球形または卵形で、大きさは（３〜６）μｍ×（３
〜８）μｍ程度であり、多極出芽により増殖する。

（ｂ）　　子嚢胞子の形成：石膏塊、ゴロドコワ寒天培地、酢酸ソーダ寒天培地のい
ずれの培地によっても形成されない。

（ｃ）菌糸（仮性菌糸）の形成ニブラストポアその他のバレイショ培地でのスライド培養
で、仮性菌糸が良く発達し、プラストポア、プラストコ
ニブイアも良く形成される。

（ｄ）　　コロニーの性状：１７℃、４週間培養後のコロニーの性状は全綴で台状に
隆起して乳白色を呈し、表面は平滑で光沢がある。

■、各生理的性質 ■　最適生育条件：ｐＨ５，５、温度３２℃、好気性、好塩性■　生育の範
囲：ｐＨ１，０〜９．０、温度１〜４１℃ ■　硝酸塩の同化：資化および還元をしない。

■　リドマスミルクによる反応：凝固せず、青変 ■　ゼラチンの液化：ある。

■　耐浸透圧性：ある。１０％ＮａＣ１培地 ■　ビタミンの要求性：ビオチンを要求する。

■　カロチノイドの生成：ない。

■　エタノールの利用性：ある。

［相］　アルブチンの分解：ある。

■　エステルの生成：ない。

０　澱粉様物質の生成：ない。

［相］　顕著な有機酸の生成：ない。

■　窒素源の利用：ペプトン、硫安、尿素、アスパラギ゛ンをいずれも利用
する。

［相］　皮膜の形成：麦芽汁培地、１７℃、４週間培養した場合、環状の皮膜
を形成する。

［相］　発酵性ニゲルコース（−１−）、ガラクトース（ト）、サッカロ
ース（（１）、マルトース（−１−）、ラクトース（→
、ラフィノース（→、 ■　炭素源の利用性ニゲルコース（→、マンノース（＋）、ガラクトース（−
１−）、フラクトース（→、ラクトース（−）、サッカ
ロース（（１）、マルトース（（１）、トレハロース（
４）、ラフィノース（−）　、エスクリン（（１）、α
−メチルグルコシド（＋）、デキストリン（→、デンプ
ン（−）、イヌリン（４）、メリビオース（→、キシロ
ース（ト）、アラビノース（→ ［相］　油脂の分解性：牛脂肪、炭酸カルシウムおよびゴロドコワからなる寒天
培地で２５℃、１週間培養すると油脂を分解してカルシ
ウム塩を生成する。

［相］　高浸透圧性ニブドウ糖、ペプトンおよび酵母エキスからなる培地に食
塩を１〜３％間隔で加え、２５℃、４週間培養すると食
塩１５％で生育する。

以上の栄養増殖と形態学的性質および生理学的諸性質六
をロツダー（Ｌｏｄｄｅｒ　）らの「酵母類９分類学的
研究Ｊ　（Ｔｈｅ　Ｙｅａｓｔｓ　、　ａ　ｔａｘｏｎ
ｏｍｉｃ　５ｔｕｄｙ）１９７０年版の内容と対比した
結果、既知のキヤンデイダ・マルトーサー（Ｃａｎｄｉ
ｄａＭａｌｔｏｓａ−の数種の菌種とは、最高生育温度
、耐浸透圧性、好塩性、耐塩性、油脂の分解性の強さ等
の点で相違している。

つぎにこの発明の海産油脂酵母を培養するための栄養液
（培地）中の主炭素源としては動植物性油脂類、ノルマ
ルパラフィンもしくはノルマルパラフィン含有の炭化水
素類、酢酸等の有機酸類、エタノール等のアルコール類
の一種または二種以上の混合物が好ましい。ここで動植
物性油脂類としては特に限定するものではないが、パー
ム油、大豆油、ナタネ油、ツバキ油等の植物油、牛脂、
乳製品を生産する際に副次的に産出されるホエイ、タラ
肝油、イカ肝油等の動物油またはこれらの改質油もしく
は混合油等を例として挙げることが出来る。そしてこれ
ら炭素源の基質の栄養液中の濃度は通常の場合０．０１
〜２．０％程度が適当である。

なお、栄養液中には上記炭素源のほかに、通常の培地の
場合と同様、微量栄養素および無機物質の添加が必要で
あるが、特に無機物質はたとえば塩化カリのようなカリ
源、硫酸苦土のようなマグネシウム源、硫酸亜鉛のよう
な亜鉛源、硫酸鉄のような鉄源などであって、これら栄
養素は天然の海水中には既にある程度台まれているから
、天然の海水を用いるときは不足量を補充する程度でよ
い。

その他通常の酵母の培養の際のようにアンモニア、硫安
、尿素等の窒素源または燐酸、燐酸ソーダ、燐酸カリ等
の燐源などを添加することも出来る。

また、微量栄養素としては、この発明の菌株はビオチン
要求性のものであるから、ビオチンまたはビオチンと同
様の生理活性を有する同族化合物たとえばデスチオビオ
チン等、さらにはビオチンを含む物質たとえば糖蜜、酵
母エキス、コーンスチープリカー等を例示することが出
来るが、これら微量栄養素の添加は０．０１〜０．４％
であればよい。

そしてこの発明における栄養液中の塩化ナトリウムの濃
度は０．５〜５．０％の範囲に調整しておくことが望ま
しく、培養温度は２５〜４１℃、好ましくは２７〜３５
℃、ｐＨ値は３．０〜６．５、好ましくは４．０〜５．
０であり、培養中は培養液に空気のような酸素を含む気
体を通気する。なお、培養の状態によっては消泡剤たと
えば大豆油、シリコーン系樹脂、脂肪酸誘導体系消泡剤
を添加することも出来る。

以上のように、この発明における培養条件そのものは特
殊なものではないが、菌体収率、菌体蛋白質の含量、脂
肪の含量、培養生産性等を向上させるために、酸素吸収
速度係数の高い培養装置を採用することが望ましい。な
お、天然海水の使用に際してはたとえば流水式紫外線殺
菌器、メンブレンフィルタ等を用いて滅菌処理を施すこ
とが望ましいことは言うまでもない。

〔実施例〕

実施例１：菌株としてキャンディダマルトーサー・ツバ・ＳＰ　（
Ｃａｎｄｉｄａ　Ｍａｌｔｏｓａ−ＮＯＶ−３Ｐ）　（
微工研菌寄第９１１２号〕、キヤンデイダ・マルトーサ
ー（ＣａｎｄｉｄａＭａｌｔｏｓａ−（Ｃａｎｄｉ−ｄ
ａ　Ｍａｌｔｏｓａ−ＮＯＶ−３Ｐ　）　（微工研菌寄
第９１１２号〕、キヤンデイダ・マルトーサー（Ｃａｎ
ｄｉｄａＭａｌｔｏｓａ−（Ｃａｎｄｉｄａ　Ｍａｌｔ
ｏｓａＡＴＣＣ２０１８４）およびピキア・ファリノー
サー（Ｐｉｃｈｉａ　Ｆａｒｉｎｏｓａ　ＩＦ○０１９
３　　）の三種を選んだ。

一方培地としてノルマルパラフィン（純度９８％）２％
（重量／培地重量、以下同じ）、尿素５％、燐酸０．３
％、ＫＣＩ　Ｏ，１％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，２％
、ＺｎＳＯ４・７７Ｈ２Ｏ３０ｐｐ、　ＦｅＳＯ４・７
Ｈ２０５ｐｐｍ、　ＣｕＳＯ４’５　Ｈ２Ｏｌｐｐｍ　
、　Ｍｎ５Ｏ＋　・（４〜６　）　Ｈ２Ｏ３ｐｐｍ１　
　ビオチン０．０３　ｐｐｍ　　および水道水からなる
培養液を調製し、これを内容積２リツトルの坂ロフラス
コ１８個にそれぞれ２００ｍ１ずつ分注し、加圧殺菌お
よび苛性ソーダによるｐＨ値（６，０）の調整を行ない
、それぞれのフラスコに上記の三種の菌株をそれぞれ６
個内に植菌し、３２°Ｃ１２４時間振盪培養し、各菌株
それぞれの種母を得た。

つぎに、前記の培養液組成から尿素を除いた組成のもの
を５０％天然海水（濾過海水）と１００％天然海水（濾
過海水）とにそれぞれ溶解した液２０リットルずつを内
容積３０リツトルのジャー・ファーメンタ−６個に分注
し、１２０℃、１５分間殺菌および苛性ソーダによるｐ
Ｈ値（６，０）の調整を行ない、５０％海水系および１
００％海水系のンヤー・ファーメンタ−のそれぞれに前
記三種類の菌株の種母培養液６００１Ｔ１］　を個別に
加えて植菌した。

さらに５％アンモニア水をそれぞれのフラスコに注加し
て、ｐＨ値を５．０に保ちながら、攪拌数７００　ｒｐ
ｍ、通気量毎分３０リツトル、温度３２℃の条件下で通
気攪拌培養を７２時間行ない、アンモニア消費停止後菌
体を分離水洗し、菌体収率、粗蛋白含量および増殖率を
測定し、その結果を第１表にまとめた。なお比較のため
海水の代わりに１００％淡水（水道水）を使用した以外
全く同じ操作を行なって培養したものについても測定し
、その結果も第１表に併記した。

第１表の結果から、三つの炭化水素資化性酵母ハイスれ
もノルマルパラフィンのような炭化水素類と天然海水培
地とから酵母菌体が増殖すること、キヤンデイダ・マル
トーサー（ＣａｎｄｉｄａＭａｌｔｏｓａ−・ツバ・Ｓ
Ｐ　　［微工第１表研菌寄第９１１２号〕は他の二つの
菌株より菌体収率、粗蛋白含量、増殖率、耐塩性のすべ
ての点で優れていること、さらにキャンディダ・マルト
ーサ−・ツバ・ＳＰ〔微工研菌寄第９１１２号〕は海水
濃度５０％以上、特に１００％濃度において顕著に他の
二つの菌株より酵母菌体を高収率で採取するという目的
によく適合する海産酵母であることが明らか第　　２　
　表となった。

実施例２：菌株をキャンディダマルトーザー・ツバ・ＳＰの１株と
し、Ｎａ　Ｃ］　２６．７５　ｇｌＫＣＩ　０．７５　
ｇ、　ＭｇＣｈ３．４２　ｇ、　ＭｇＳＯ４２，１０ｇ
、　ＣａＣ］ｚ　０．５１　ｇ、蒸溜水］、ＯＯＯｍｌ
で調製した人工海水にパーム油、大豆油、タラ肝油、牛
脂、エタノールを各２％（ｗ／ｖ）ずつ炭素源（殺菌済
）として加えた栄養液を使用したこと以外は実施例１と
全く同じ方法で培養および各種の測定を行なった。得ら
れた結果は第２表にまとめたとおりであり、キャンディ
ダ・マルト−サー・ツバ・ＳＰ　　［微工研菌寄第９１
１２号〕は炭素源として炭化水素類、アルコール類、動
植物浦類など非常に幅広い炭素源から高収率で高蛋白、
高脂肪の酵母菌体を生産すること、また人工海水を使用
してもその生産性は天然海水と同程度であることが明ら
かである。

実施例３：実施例２と同一の種母および本培養用栄養液を使用し、
この種母培養液をジャー・ファーメンタに植菌した後、
対数増殖期に連続培養して移行した。炭素源にパーム油
（−殺菌済）を用い天然海水（濾過海水）１００％で連
続用培地を作り、連続培養中菌濃度１．５〜１．９％、
パーム油基質濃度０、１〜０．４％の条件で炭素源のパ
ーム油を除いた栄養培地を連続注加し、パーム油（殺菌
済）を３２℃に保温して別に連続注加を行なった。

培養条件は攪拌数１００Ｏｒｐｍ、通気量毎分３０リツ
トル、ｐＨ値５．０１温度３２℃とし、それぞれ自動制
御を行なった。連続培養の連続状態は良好であり、連続
培養は２週間（３３６時間）で打切つ第３表たが、連続培養の結果は第３表のとおりである。

第３表からキヤンデイダ・マルトーサー（Ｃａｎｄｉｄ
ａＭａｌｔｏｓａ−・ツバ・ＳＰ　　［微工研菌寄第９
１１２号〕は植物油の一種であるパーム油を炭素源にし
て、天然海水１００％培地で連続培養３３６時間の準工
業的方法で蛋白質および脂肪を多量に含む酵母菌体を高
収率で生産することのできる海産油脂酵母であることが
明らかとなった。

〔効果〕

以上述べたことから明らかなように、この発明の海産油
脂酵母類の発酵生産方法によれば従来全く顧みられなか
った天然または人工の海水中においても酵母菌体を高濃
度・高収率で培養することが出来、高脂肪および高蛋白
の酵母菌体を工業的生産規模で利用することが可能とな
ったので、この発明の意義はきわめて大きいと言える。

特許出願人　　鈴　　木　　健　　旬日　　　　　　　ピテ

Claims

【特許請求の範囲】１、海産油脂酵母キヤンデイダ・マルトーサー（Ｃａｎ
ｄｉｄａ　Ｍａｌｔｏｓａ−ＮＯＶ−ＳＰ）〔微工研菌
寄第９１１２号〕類を、炭素源と天然もしくは人工の海
水とを主要成分とする栄養液中で好気的に培養し、海産
油脂酵母類菌体を高濃度、高収率で分離した後水洗し、
高脂肪および高蛋白の酵母菌体を採取することを特徴と
する海産油脂酵母類の発酵生産方法。２、栄養液中の炭素源が主として動植物性油脂類、ノル
マルパラフインもしくはノルマルパラフイン含有の炭化
水素類、酢酸等の有機酸類、エタノール等のアルコール
類の一種または二種以上の混合物である特許請求の範囲
第１項記載の海産油脂酵母類の発酵生産方法。