CS200048B1 - Prípravok na prevenciu dyzentérie a rastových porúch u ošípaných a spSsob jeho výroby - Google Patents

Description

(54) Prípravok na prevenciu dyzentérie a rastových porúch u ošípaných a spSsob jeho výroby

Vynález sa týká zloženia a přípravy výrobku, určeného na prevenciu dyzentérie a rastových porúch u ošípanýoh v období mliečnej výživy a v predvýkrme, e pracovným názvom Lazol.

Dyzentérie ořípanýoh je ochořenie, k-toré vo všetkých krajinách s významným chovom ošípaných sposobuje značné problémy. Vehladom k tomu, že dyzentérie ošípaných sa vyskytuje predovšetkým ve velkochovooh a mortalita a morbidita je vysoká, je nutné věnoval· jej tlroeniu zvýšená pozornoal· /Harris D.L./tinyon J.M,: Swine disentery: History, recent discoverles and eondepts. ^rooeedings 23-rd Annual Pfizer Research Conference, áy 11, 9-25, 1975»

Urban V.P., Šnur V.I.» 20-th World Veterinary Congress Summaries, ^vol. 2, Thessaloniki, Oreece, 1975/.

Dyzentérie ošípaných sa najčaatejŠie vyskytuje vo váhovej kategorii 15 až 70 kg, ale mSže Sa objevil· aj u cicajúcioh prasiatok a výkrmových ošípaných. Přenos ochorenia sa deje najčastejšie ingesoiou fekálií, alebo prenosom z nosičov, ktoré nejavia klinické příznaky.

V prevádzkovýoh podmienkaoh je morbidita okolo 90 % a mortalita v závislosti od účinnosti liečby móže dosiahnul· až 30 %. Za experimentálnych podmienok, ak zvieratá nie sú liečená, mortalita dosahuje až 50 % /H_arris D.L., Qlock R.D.! Swine dysentery. Ins Diseaseseř swine. Fourth Edition, The lowa State University Press, 1975/.

Na prevenoiu a terapiu dyzentérie ošípaných bol do dnešnáho dna navrhnutý celý rad liečiv, ktoré sa v praxi používali s rSznym úapechom rožne dlhú dobu.

200 048

V tejto indikácii boli zo skupiny antibiotik vyskúšané streptomyoín, bacitracín, chloramfenikol, erytrémyoín, tylozín, gentamyoín, linkomyoín, neomyoín, spiramyoín a virginiamycín. Vzhladom na poměrně rýohlo narastujúcu rezietenoiu zárodkov na tieto antibiotiká, začala sa v rdznýoh krajinách upriamovat pozornost na aromatická arzénová zlúčeniny /kyselina «manilová, kyselina 3-nitro-4-íenylařzónová a pod./, karbadox a najma na deriváty 5-nitroimidazolu, z ktorýoh najSiřila uplatnenie naohádza v súčasnosti dimetridazol a ronidazol/ napr. Grifin R.M.t Therapeutie and prophylaotio aotivity of dimetridazole against experimentally transaitted swine dyeentery, fet.Reo. 91/5/,349-353,1972; Cottereau F.: Traitement du syndrome entéritique hémorhagique du pere par la dimetridazole.

Revue de médieine vétérinaire 122, 361-369, 1971$ Meeeersmith R.S.> Effect of lpronidpzol on awine dyeentery. Vet. Beá. email Anim. Clin. 68/9/,1021-1033, 1973$ Taylor D.J.» Ronidazol β in the treatment of experimental awine dyeentery. *et. Reo. 95/10/, 215-216, 1974$ Williams B.J., Shively J.E. í In vitro antitreponemal activitiea of carbaddx, virginiamycín, elaquindox and tylosln aa indieea of their effeotlveneaa for preventing awine dysentery. Vet. Med. email Anim. Clin. 73, 349-351, 1978/.

Ronidazol /l-methyl-2- C/karbamoyloxy/-methyl7 -5-nitroimidazol/ spolu s dalšími 1léčiv ami zo skupiny derivátov 5-nitroimidazolu, ako súi metronidazol, dimetridazol, ipronldazol, omidazol a tinidazol, patří k moderným vysokoúčinným chemoterapeutikám s rozsiahlou antiprotozoérnou aktivitou. Je účinný aj voči mykoplazmám. Popři účinku proti mykoplazmám a protozoám má ronidazol aj význačná antibakteriálne vlastnosti, ktoré boli demonštrované in vitro ale aj in vivo v experimente na myŠiaoh /Miller A.K.» Antibaoterial aotivity of ronidazole. Appl. Microbiol. 22/3/,480-481, 1971. In vitro je ronidazol najúčinnejší proti Treponema hyodysenteriae, Campylobaoter coli a Clostridlum perfringens. Vysoká účinnost ronldazolu voči zárodkem T. hyodysenteriae vysvětluje rýohle vymiznutle zérodkov z výkalov ošípanýoh llečených ronidazolom /Taylor D.J.t Ronidazole in the treatment and prophylaxis of experimental swine dyeentery. Vet. Reo. 99, 453-456, 1976/.

Na stimuláolu rastu ošípanýoh vo výkrme použil ronidazol Box J.R. a kol. /Performanoe of piga feed grade4 levels of ronidazole. J. Anim. Sol. 34/3/, 470-472, 1970/ a pri liečbe experimentálněj dyzentérie v roku 1974 Taylor D.J. /Ronidazole in the treatment of experi/ mental awine disentery. Vet.Rea. 95/10/, 215-216/. Od toho času aa a ronidazolom urobili viaoeré štúdie, ktoré aa anažili optimalizovat dávkovanie účinnej látky v pitnej vodě a v krmivé pri experimentálně vyvolanom oohoréní, ale aj v klinických podmienkaoh. Na základe dosiahnutých výaledkov autoři odporúčajú volit 0,006 % konoentráoiu, pretože a/ recidiva oohorenia je minimálna, b/ použité koncentráoia dokáže eliminovat najviae spirochet z kolonu praalat, o/ použije aa menej liečiva ako pri konoentráoii 0,012 %, i/ konoentráoia 0,006 % ronldazolu meznlžuje příjem vody u ošípanýoh.

V poslednýoh rokoch aa venuje značná pozornost aj tzv. mikrobiotiokým /problotiokým/ prípravkom, oveahujúcim stabilizované živé zárodky baktérií mliečneho kvaeenia, laktobaoil; a streptokoky. Ferorálna aplikacia týohto konštruktívnyoh dřevných zérodkov vyvolává primárné pozitivně kvalitativně změny črevnej bakteriálnej biocenozy / kvalitatívny pokles podmienečne patofcánnyeh a metabolioky deŠtruktívnyoh kmeňov/, ktorá aa sekundárné prejavla zlepšením celkového zdravotněho stavu, zvýšením odolnosti, zlepšením rastovej aktivity a výrazným zvýhodněním živin /Mičan P., Boudka J.: Výsledky pokusů s použitím mikrobiotík ve výživě hospodářských zvířat. Veterinářství 26/8/,363-367,1976/.

Hlavní idea tzv. laktobaeilovej terapie spočívá v tom, že laktohaoily a iné nepatogénne črevné zárodky rfiznych druhov/najma streptokoky/ p$sobia na patogénne druhy, hlavně E. coli, nepriaznivo. Tvorbou kyseliny mliečnej nestává posun pH zažívacieho traktu na kyslú stranu, a tým sa čiastočne inhibuje ioh rast a aj tvorba toxínov.

Prs potřeby humánnej medicíny sa v zahraničí vyrába celá paleta účinných mikrobiotickýoh prípravkov, ktoré aú indikované na liečbu gastronintestinálnyoh poruch a infekčných enteritíd u kojenoov. V oblasti veterinámej medicíny má využitie mikrobiotickýoh prípravkov kretěiu tradiolu. Prvé pokusy s mlkrobiotikami v terapii a výživě zvierat spadajú až do polovice šeeťdesiatych rokov predovšetkým na tlmenie enteritíd, liečbu kolibačilózy a stimul áciu rastu /Kohler E.lí., Bohl E.M.i Prophylaxis of diarrhea in newborn pigs. J. Am. med. Agg. 144, 1294-1297, 1964$ Redmond H.E., lloore R.W.: Biological effeot of introdueting Lbe. acidophllus into a large swine herd experiencing enteritia. Svést. Vet. 18, 287-288,1965$ King J.O.I.» Laotobacillua aoidophilús as growth stimulants for pigs. Veterinaria, London, 5/4/, 273-280, 1968$ Varga J., Mészáros J.: Kisérletek a szopos malaook és borjak bélfórajanak bsfolyásoláaá laktobacilusokat tartalmazó készítményel, Jjagy. Állatorv. Lap. 5,301303, 1974/.

Rozqiahlejšie zavedenie mikrobiotík do veterinárnej praxe bolo až do nedávná vlazané ns zavedenie moderných konzervačnýoh mikrobiologických technik, umožňujúclch výrobu stabilizovaných koncentrovaných mikrobiálnych kultúr. S novou technologiou výroby mikrobiotík pre veterinárske účely prichádza švédská firma Medipharm. Základnou zložkou přípravku Lactiferm tejto firmy je stabilizovaná kultúra zárodkov Streptocoocus faecium. V sxaktnýoh testoch, robenýoh e týmto prípravkom, sa zistilo výrazné zníženie frekvencis gastrointestinálnyoh porúoh, zlepšenie priemernýoh prírastkov hmotnosti, zvýhodnenie konverzie krmivá a zlepšenie adaptability na nové podmienky /Mičan P. a kol.: Použití mikrobiotík pri odchovu a výkrm prasat. Krmivářství 8, 180-183, 1976/.

Nevýhodou uvedeného spfisobu podávania mikrobiotík je, že v oblastiaoh s výskytom dyzentérle ošípaných nie je možné plné využívat stimulačný rastový efekt uvedeného mikrobiotlka, pretože samotný nepostačuje na terapiu ani na prevenciu dyzentérie. Preto predmet vynálezu navrhuje kombináciu mikroblotika Streptocoocus faecium s chemoterapeutikom l-methyl-2- [/karbamoyloxy/-methyll -5-nitroimidazol, voči ktorému je tento kmen odolný. Možnost kombinácie Streptooooous faecium s ronidazolom z hladiska prežívania a schopnosti rozmnožovanla zárodkov Streptococoue faecium sa laboratorně testovala. Ronldazol neinhibuje nnoženie zárodkov tohoto kmeňa. Schopnost rýchlej kolonizácis zárodkov Streptooooous faecium v zažívaoom trakte zostáva zachovaná pri súčasnej preventivnáj ochraně ošípaných proti dyzbntérli a iným gastrosntsritídam. Výhoáou kombinácie l-methyl-2-£/karbamoyloxy/-methylj -5-nltroimidazolu /ronidazolu/ β bakteriálnym kmeňom Streptocoocus faeelua v přípravku Lazol je velmi dobrá preventivná ochrana ožípaných proti dyzentérli za súčaanáj preukaznej rastovej stlmuláoli a zlepšenej konverzií krmivá.

Kmen Streptocoocus faeoium bol deponovaný do československej zbierky kultur pri Výskumnom ústave veterinárneho lekáretva v Brně pod číslom CCM 6142.

Prípravok podlá vynálezu obsahuje v 1 g 12 až 18 mg l-methyl-2- [’/karbamoyloxy/-methyí| -5-nitroimidazolu, minimálně 1.10 živých zárodkov kmene Streptoooccus faeoium a 6 až 10 mg kysličníka zinočnatého. Prípravok sa aplikuje v 0,5 % koncentrácii v príslušnej krmnéj zmeei, dobré homogenizovaný. Používá sa preventivné v krmných žtartérových mliečnyoh zmeslach a v predvýkrme nepretržite, alebo přerušováno v desaldňovýoh intervalech.

Příklad 1

Primárná bakterlálna kultúra kmeňa Streptoooocus faeoium, CClí 6142, ktorého rozletěnola na ronidazol bola získaná pasážovaním eez toto chemoterapeutikum, sa pomnožuje na sójovou živnom médiu v termostate pri teplote 37 °Č po dobu 16 hodin, p;ričom vytvára bohatý sediment Rozmnoženou bakteriálnou kultúrou sa očkuje připravená sterilně modifikovaná mliečne médium vo fermentori, obsahujúce 2θ hmotových percent sušeného odtučneného mlieka a 0,3 hmotových percent sušeného kvasnicového autolyzátu. Inokulované médium sa kultivuje za prevzdušňovania a miešania pri teplote 37 °C až 45 °C po dobu 16 až 16 hodin. Takto připravené bakteriélna kultúra, obsahujúca 10^^ až 10^ živých zárodkov na 1 ml sa fixuje sušením /lyofillzáoia, fluidná sfcšenie, rozprašovacle sušenie/.

a zvýšenie stability a odolnosti voči ostatným zložkám přípravku a vplyvom prostředí se sušená bakteriálně kultúra stabilizuje fluidnou obdukciou /napr. na fluidnom granulátori WSG Glatt/ 3%-ným vodným alebo etanolickým roztokom polyvinylpyrolidonu /Kollidon 30/. Fluidná obdukcia prebieha pri teplote 35 až 40 °C,

Stabilizovaná bakterlálna kultúra kmeňa Streptoooccus faecium, bíbsahujúoa minimálně

1.10 živých zárodkov /1 g sa zmieša s ronidazolom v takom pomere, aby hotový výrobok obsahoval v 1 grame 12 mg ronidazolu /l-methyl-2-f /karbamoyloxy/-methyl] -5-nitroimidazol/, *

minimálně 1.10 živých zárodkov kmene Streptoooocus faeoium a 8 mg kysličníka zinočnatého. Před homogenizáciou sa uvedené množství technologicky upravla a doplnia na 1 g mikrobiálně nezávadným vehikulum modifikovaným škroboa /tepelne a enzymatickyupravený Škrob, ktorý sa u nas vyrába pod nízvom Solvarin M 20, Amylia/. Ako vehikulum sá mdže použit aj sacharóza a kaolín.

Příklad 2 v

Primárná bakterlálna kultúra kmena Streptocoocus faeoium, rezistentního na ronidazol, sa pomnožuje na sojovom živnom médiu v termostate pri teplote 37 °G po dobu 16 hodin. Pomnoženú bakteriálnou kultúrou sa očkuje připravená vysterilizovená modifikovaná mliečná mádlům vo fermentori. kodifikované mliečná médium obsahuje 20 hmotových peroent sušeného odtučneného mlieka, 0,1 hmotových percent sušeného kvasnicového autolyzátu a 1 % síranu amonného. Inokulováné médium sa kultivuje zá prevzdušňovania a miešania pri teplote 37 až 45 °C po dobu 16 až 16 hodin, ^akto připravená bakterlálna kultúra sa fixuje sušením a stabilizuje fluidnou obdukoiou ako je uvedené v bode 1.

Stabilizovaná bakterlálna kultúra kmeňa Streptoooocus faecium sa zmieša s ronidazolom a kysličníkom zinočnatým v takom pomere aby hotový prípravok obsahoval v 1 grame 14 mg l-methyl-2 -f /karbamoyloxy/-methyl3 -5-nitroimidazolu /ronidazolu/ a 10 mg. kysličníka »

zinočnatého a minimálně 1.10 živých zárodkov Streptocoocue faecium. dalej ea spravuje tak ako bolo popíspaá v příklade 1.

Příklad 3

Primárná bakteriálně kultúra kmeňa Streptocoocue faeoium sa pomnožuje na masopeptonovom bujóne v termostate pri teplote 37 °C po dobu 16 hodin, ^alej sa spracuje ako je popíeaná v příklade 1 s výnimkou, že stabilizovaná bakteriálně kultúra kmeag Streptooocous faeoium sa zmieša s roniáazolom a kysličníkom zinočnatým v takóm pomere, aby hotový přípravek obsahoval v 1 grame 16 mg l-methyl-2G-/kaxbamoyloxy/-methyl3-5-nitroimidaaolu, mlal g v málne 1.10 živýoh zárodkov kmene Streptooooous faeoium a 6 mg kysličníka zinočnatého.

Účinnost přípravku na prevenoie dyzentárie a raatovýoh poruch ošípaných je dokumentovaná následovnými tabulkami:

Tabulka S. 1: Pokus v období skrmovania krmnéj zmesi ČOS 2 /Komplexně z*es pre skorý odchov oioiakov - štartár/.

Zloženie ČOS 2: rybia múčka, sušená torula, sušené odstr.mlieko, sušená zemiakové vločky, sojová pokrutiny, sladový kvet, technický cukor, obilné klíčky, pšenice, •jačmeň, lúpaný ovos, dikaloiumfosfát, krmná sol, minerálně krmná přísada, vitamínový antibiotický doplnók.

Pokusná Kontrolhá askupina skupina

Počet ošípaných v skupině /ks/	100	100
Priemerné živá hmotnost/ž.h./na kus na začiatku pokusu	17,82	18,96
Počet krmných dní	93	93
Úhyn počas pokusu /ks/	1	2
Počet ošípaných na konoi pokusu	99	98
Priemerné ž.h./ks na konoi pokusu /kg/	61,51	55,50
Absolútny prírastok ž.h. na kus /kg/	43,69	36,54
Priemerný prírastok ž.h./ks a den /kg/	0,473	0,393
Index zvýšeni· ž.h./ks a deň/ /%/	120,0	100,0
Spotřeba krmivá na kg ž.h. /kg/	3,8	4,0
Index spotřeby krmivá na kg ž.h. /%/	95,0	100,0

Poznámka: Kontrolná skupina bola pozitivna s medikáciou krmnej zmesi přípravkom Ridzol P,

t.j. prípravkom s obsahom 12 % ronidazolu. Pokusy boli realizovaná na ošípaných v dyzenteriokej lokalitě. 7 přiebehu pokusu sa dyzentária nepřejavila ani v jednej skupině.

Tabulka č. 2 : I. Pokus v období krmnej zmesi ČOS 2.

	Pokusná skupina	Kontrolně skupina
Počet ošípanýoh v skupině /ka/	321	321
Priemerná živá hmotnosť /ž.h./na kus na začiatku pokusu /kg/	9,0	7,0
Počet krmných dní	18	36
Úhyn počas pokusu /ks/	1	0
Počet ošípaných na konci pokusu /ks/	321	321
Priemerná ž.h.na nonci pokusu /kg/	20,90	19,96
Absolútny prírastok ž.h. na kus /kg/	11,50	12,96
Priemerný prírastok ž.h. na kus a deň /kg/	0,673	0,370
Index zvýšenie ž.h. ha kus a deň /%/	181,8	100,0
Spotřeba krmivá na kg ž.h. /kg/	1,36	1,44
Index spotřeby krmivá na kg ž.h. /%/	94,44	100,00

II. Pokus v období krmnej zmesi A 1/ Kompletně zmes pre ošípané do 35 kg/· Zloženie : bielkovlnový koncentrát, vitaminózna lucerková múčka, žemlekové vločky, plenice, jačmeň,

ovos, sol, minerálna krmná přísada.	Pokusná Kontrolně
skupina	skupina
Počet ošípaných v skupině /ks/	320	321
Priemerná živá hmotnosť na kus na začiatku pokusu /kg/	20,90	19,96
Počet krmných dní	91	92
Úhyn počas pokusu /ks/	1	*
Nutné porážky počas pokusu /ks/	1	17
Počet ošípaných na konci pokusu /ks/	318	300
Priemerná ž.h./ks na konci pokusu /kg/	63	59
Absolútny prírastok ž.h. na kus /kg/	42,10	39,04
Priemerný prírastok ž.h. na kus a deň /kg/	0,473	0,405
Index zvýšenia ž.h. na kus a deň /%/	116,79	100,00
Spotřeba krmivá na kg ž.h. /kg/	2,90	3,70
Index spotřeby krmivá na kg ž.h. /%/	- - - 76.38	100,00

Poznámka: Kontrolně skupina bola negativna, bez medikécie krmných zmeei, ale v případe výsky kllnlckýoh priznakov dyzentérie bola liečená prípravkom Vibriogal, t.j. přípravkom a obsahom 11 % dimetridazolu, 6,5 % furazolldónu a 2 % kysličníka zinočnatáho.

TabuJka δ. 3: Pokus v období krmnéj zmeei A 1/Kompletná zmes pre ošípané do 35 kg/.

Pokusná Kontrolní

	skupina	skupina
Počet ošípaných v skupině /ks/	447	455
Priememá ž.h. na kus na začiatku pokusu /kg/	20,91	20,91
Počet krmných dní	82	82
Úhyn počas pokusu /ks/	7	20
Peroento úhynu počas pokusu /%/	1,58	4,39
Počet ošípaných na konci pokusu /ks/	440	435
Priememá ž.h. na konoi pokusu /kg/	70,29	62,60
Absolútny prírastok ž.h. + ks /kg/	49,38	41,69
Priemerný prírastok ž.h. na kus a deň /kg/	0,519	0,441
Index zvýšenia ž.h. /ks a deň /%/	117,95	100,0
Spotřeba krmivá na kg ž.h. /kg/	3,08	3,21
Index spotřeby krmivá na kg ž.h. /%/	--.......	100.0

Poznámka: Pokusná skupina bola v tomto pokuse vyrovnaná a počas celého priebehu nebole zaznamenaná žiadná chořobnosí. Ošípané boli čulé, bez príznakov hnačky a aj u oelej ekuplny bol zaznamenaný znížený kašel. Příčiny úhynu v tejto skupině /1,58 %/ boli zvačša bronohopneumónie. Liečba ani žiadne zákroky sa v tejto skupině neprevádzali. V kontrolnej skupině uhynulo spolu 20 ks ošípaných. V tejto skupině přetrvávala Salmonellóza, dyzentéria a ochorenia respiratorného aparátu, ^ώβ 1léčbu sa použilo 76 kg přípravku Vibriogal, 1,5 1 červienkového séra a 500 ml Chronloinu, tj. přípravku s obsahem 15 % D-chloramfenikolu.

Claims (5)

1. PREDMET VYNÁLEZU

   1. Přípravek na prevenoiu dyzentérie a rastovýoh poruch ošípaných, vyznačujúci sa tým, že v 1 g obsahuje 12 až 18 mg l-methyl-2 G» /karbamoyloxy/-methyl 3 -5-nitroimidazolu, mini6 » málne 1.10 živých zárodkov mikrootganizmov kmene Střeptococcus faecium, 6 až 10 mg kysličníka zinočnatého a zvyšok do 1 g mikrobiálně nezávadné vehikulum.
2. 2. Přípravok na prevenoiu dyzentérie a rastovýoh porúoh podlá bodu 1, vyznačujúci sa tým, že mikroorganizmus kmeňa Streptocooous faecium představuje kmen Streptococcus faecium COM 6142.
3. 3. Spísob výroby přípravku podlá bodu 1, vyznačujúci sa tým, že sa pomnožená bakteriálně kultúra kmeňa Streptooocouš faecium kultivuje na mliečnom médiu modifikovanom kvasnicovým autolyzétom v množstvo 0,1 až 0,3 hmotovýoh peroent a síranom amonným v množstve 1 až 3 hmotovýoh percent pri teplote 37 °C až 45 °0 po dobu 16 až 18 hodin a získaná 15 bakteriálně kultúra, obaahujúea 10 až 10 * živých zárodkov sa fixuje sušením a potom sa «mieša s 1-methyl -2 C- /karbamoyloxy/-methyl} -5-nitroimidazolom, kysličníkem zinoČnatým a mikrobiálně nezávadným vehlkulom tak, aby 1 g přípravku obsahoval 12 až 18 mg l-methyl-2t /karbamoyloxy/-methyl^-5-nitroimidazolu, minimálně 1.10® živých zárodkov kmeňa Streptococcus faecium a 6 až 10 mg kysličníka zinočnatého.
4. 4. Spósob výroby přípravku podlá bodu 2, vyznačujúci aa tým, že mliečne médium js modifikované kvasnicovým autolyzétom v množstve 0,3 hmotových % a síranom amonným v množstve 1 hmotového peroenta, vztlahnuté na hmotnost mlléčného média*
5. 5. Spósob výroby podlá bodu 3, vyznačujúoi sa tým, že sa sušená bakteriálna kultúra stabilizuje fluidnou obdukciou vodným alebo etanoliokým roztokom polyvlnylpyrolidonu pri teplote 35 až 45 °C.